Dörtlü Dama Tahtası: İlaç Kombinasyonlarını İncelemek için Üç Boyutlu Dama Tahtasının Modifikasyonu

Dörtlü dama tahtası, dört ilacın birleştirilmesiyle elde edilebilecek tüm olası kombinasyonları inceleyen bir tekniktir ve başta MDR'ler veya çoklu ilaca dirençli mikroorganizmalar olarak da bilinen dirençli mikroorganizmalar için bir tedavi bulmak önemlidir. Bu teknik emek yoğun değildir ve sonuçlar ertesi gün veya kuluçka süresi bittikten sonra elde edilebilir. Buna ek olarak, bu dört ilacın ve hepsinin tek bir deneyde birleştirilmesiyle elde edilebilecek sadece spesifik ve çok sınırlı kombinasyonları değil, tüm olası kombinasyonları inceleyebilir.

Bunun yanı sıra, bu teknik sadece mikrobiyolojide değil, hatta mikrobiyolojide bile birden fazla disiplinde kullanılabilir. Sadece antibakteriyel ajanlar değil, farklı antimikrobiyal ajanlar arasındaki tüm olası kombinasyonları inceleyebilir. Mikrobiyoloji kısmına ek olarak, anti-kanser ilaçları arasındaki, bitki özleri ve ilaçlar arasındaki ve hatta moleküler etkili moleküler tedavi panelleri arasındaki kombinasyonları incelemek için kullanılabilir.

Hazırlık yeri 4 96, bir bant kullanarak bir kare oluşturmak için yan yana iyi plakalar, alt kısımlarını birbirine bantlayın. Her biri dört plaka içeren dört panel elde etmek için bu adımı tekrarlayın ve bunları bir, iki, üç ve dört olarak adlandırın. 50 mikrolitre Mueller ekleyin.

1696'da ikinci sütun ile sütun 11 arasındaki kuyulara ipucu ve et suyu, dört Panelin kuyu plakaları, negatif kontrol görevi gören H 12 kuyusuna 200 mikrolitre Mueller Hinton suyu ekler. Dört panelin 1696 kuyulu plakalarında, bir adet 50 mikrolitre Mueller Hinton suyu ekleyin, biri A ve H kuyucuklarına, biri pozitif kontrol kuyusu görevi görür, dört panelin 1696 kuyu plakasında, bir sefotaksim serisi, 15 ml'de konik bir tüpe seyreltme. Steril damıtılmış su.

İlacın stok çözeltisinden çıkarılacak hacmi hesaplayın, C bir V bir, C iki V iki formülüne eşittir. Hesaplanan hacmi 15 ml steril damıtılmış sudan çıkarın ve aynı hacimde ilaç stok çözeltisi ekleyin Konik tüp pipetine, hazırlanan ilaç çözeltisinin 50 Mikrolitresini H 12 kuyusu hariç, sütun 11 ve sütun 12'deki her bir kuyucuğa pipetleyin, sütun 11'den 50 mikrolitre çıkararak ve sütun 10'daki ilgili kuyucuklara koyarak seri seyreltmeyi başlatın, ve sonra 10'dan ikinci sütuna ulaşana kadar, ikinci sütundan alınan 50 mikrolitre atılacaktır. Dört panelin 1696 kuyulu plakalarının her biri için seri seyreltmeyi tekrarlayın.

İlaç iki amika seri seyreltme 10 ml'de konik bir tüpe. Steril damıtılmış su. İlacın stok çözeltisinden çıkarılacak hacmi hesaplayın.

Hesaplanan hacmi 10 ml steril damıtılmış sudan çıkarın ve aynı hacimde ilaç stoğu çözeltisini konik tüpe ekleyin. Ayrı bir 96 oyuklu plaka alın, gül G arasındaki kuyucuklara yüz mikrolitre steril Mueller Hinton suyu ekleyin ve bu plakayı B.In, önceden hazırlanmış ilacın yüz mikrolitresini ekleyin. İki, G satırının kuyularına çözelti G. RO G'deki her bir kuyudan yüz mikrolitre alarak G satırından B sırasına seri olarak seyreltin. Ve son olarak yüz mikrolitreyi B sırasının kuyularından atın. Sekiz ayrı 96 kuyu plakası hazırlamak için bu adımları tekrarlayın, ilacın iki dört panele aktarılması, 50 mikrolitre ilacın iki tanesini G ve B sıraları arasındaki kuyulardan pipetleyin. Dört panelde her bir plakada karşılık gelen kuyucuklar, hazırlanan bir 96 oyuklu plaka iki yüz mikrolitre ilaç içerir.

Bu, bir panel ilacında iki plaka için yeterlidir. 14 ml steril damıtılmış suda dört farklı konik tüpe ek olarak üç canlı fileto. İlacın stok çözeltisinden çıkarılacak hacmi hesaplayın.

Hesaplanan hacmi her tüpten 14 ml steril damıtılmış sudan çıkarın ve ilacın karşılık gelen hacmini ekleyin. Üçüncü ilacın gerekli konsantrasyonlarını hazırladıktan sonra, 50 mikrolitre alın ve ilgili plakadaki B ve G sıraları ile iki ve 12 numaralı sütunlar arasındaki karşılık gelen kuyucuklara ekleyin. Her panelde, C biri dört P'ye, bir plakaya ve dört panele, C ikisi dört P'ye, iki plakaya karşılık gelir ve dört panel C3, dört P'ye, üç plakaya ve dört panele karşılık gelir ve C, dördü dört P'ye, dört plakaya karşılık gelir ve dört panel, ilaç, dört trimetoprim, sülfametoksazol, konik bir tüpe 14 ml ekleyin.

Damıtılmış su deneyin. İlacın stok çözeltisinden çıkarılacak hacmi hesaplayın. Hesaplanan hacmi her tüpün 14 ml steril damıtılmış suyundan çıkarın ve ilacın gerekli hacmini ekleyin.

Dördüncü ilacın gerekli konsantrasyonlarını hazırladıktan sonra, 50 mikrolitre alın ve B ve G sıraları ile iki ve 12 sütunları arasındaki karşılık gelen kuyucuklara ekleyin. Karşılık gelen paneldeki dört plakada, C biri panele karşılık gelir, C ikisi panele karşılık gelir, ikinci panele karşılık gelir, C3 panele karşılık gelir ve C dördü panel dördüne karşılık gelir. Bakteriyel inokulumun hazırlanması ve eklenmesi, steril bir döngü transferi kullanılarak I-E-S-B-L'ye eşittir.

Bakteri izolatının bir kolonisi, daha önce bir plaka üzerinde iki ml steril Mueller Hinton suyu ve girdaba kültürlenmiştir, 0.5 McFarland olması gereken bulanıklığı kontrol edin, bir yoğunluk kullanarak, steril idrar kabına bir TML steril Mueller Hinton suyu ekleyin, steril idrar kabına bir TML steril Mueller Hinton suyu ekleyin, 0.5 McFarland aşısından idrar kabına bakteri aşısı ekleyin, C formülünü takip edin: bir, V, bir, C'ye eşittir, iki, V, iki, burada V, biri 800 mikrolitreye eşittir boru pipeti 50 mikrolitre aşı çözeltisi ve sterilite kontrolü olan H 12 hariç her bir oyuğa, panelleri gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Bu şekil A panelini temsil etmektedir. Renkli konutlar, bakteri üremesini içeren kuyulardır ve siyah oklar, büyüme üzerindeki kuyuları temsil eder.

Birinci plakada, ikinci plakada ve üçüncü plakada büyüme arayüzü yok. D satırında, dördüncü plakada sekizden fazla MIC Trimetoprim sülfametoksazolün sekizden fazla MIC'ye ek olarak birkaç sefotaksim ve Levofloksasin alt mikrobuna ek olarak sekizden fazla MIC içeren bir inhibisyon olduğunu görebiliriz. Kombinasyonu içeren kadranda bakteri üremesinin görülmediğini fark ediyoruz.

Bunun nedeni, bu plakada büyümeyi tamamen engelleyecek olan Levofloksasin MIC'ine sahip olmamızdır. Şekil bir B, ikinci paneli temsil eder. Bu panelde, sekizden fazla MIC'ye ek olarak sefotaksim ve Levofloksasin alt iklerini içeren RD'de de bakteri üremesinin inhibisyonunun görüldüğünü görebiliriz, ayrıca dörtten fazla MIC trimetoprim sülfametoksazol Şekil bir C, panel A'yı temsil eder, üç.

Bu şekilde, bakteri üremesinin inhibisyonunun birkaç sefotaksim ve Levofloksasin alt mic'i içeren C ve D satırında görüldüğünü ve trimetoprim sülfametoksazolün yarısına ek olarak ve C satırında dörtten fazla Amikasin ve D satırında ikiden fazla MIC Amikasin olduğunu görebiliriz, şekil 1D, panel A dörtünü temsil eder. Bu panelde, çeşitli konsantrasyonlarda Sefotaksim, amikasin ve Levofloksasin ile kombinasyon halinde bir Trimetoprim sülfametoksazol MIC var. Bu şekilde, bakteri büyümesinin, bu inhibisyonun, tümü Excel dosyasında, levha FIC'deki bir Trimetoprim sülfametoksazol MIC'sinin etkisi olduğu kombinasyonu içeren kadranda tamamen inhibe edildiğini görebiliriz.

Tablo, elde edilen değerin yorumlanmasıyla birlikte son ses FIC'ini gösterecektir. Sonuç olarak, Q dama tahtası tekniği, tek bir deneyde dört ilaç arasındaki tüm olası kombinasyonları inceler. Sonuçlar ertesi gün elde edilir ve bir Excel şablonu kullanılarak kolay ve hızlı bir şekilde yorumlanır.