Name: Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Keşfedin yetişkin Danio rerio'ya kısmi hepatotomi uygulayarak karaciğer rejenerasyonunun moleküler ve hücresel mekanizmalarını inceleme yöntemini. Bu protokol, insan karaciğer hastalıklarına yönelik tedavi geliştirmede kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

I.M.O. NIAAA (F32AA027135) tarafından desteklenir. W.G., R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 ve Claudia Adams Barr Kanser Araştırmalarında Mükemmellik Programı tarafından desteklenmektedir. W.G. Biyomedikal Bilimler alanında bir Pew Bursiyeridir.

Zebra balıkları standart prosedürlere göre yetiştirildi ve yetiştirildi. Deneyler Brigham ve Kadın Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (2016N000405) tarafından onaylandı. Yetişkin zebra balıkları, protokolün başlamasından önce 24 saat boyunca oruç tuttu. Sistem suyu, su tesisindeki zebra balığı muhafaza tanklarındaki suyu ifade eder.
1. Hazırlık ve anestezi
<ol><li>Sistem suyunda %0,016 Trikain çözeltisi hazırlayın. DİkKAT: Trikain gözlere, cilde veya solunum yollarına temas ederse tahriş edicidir.</li>
	<li>Diseksiyon protokolü sırasında uyuşturulma zebra balıklarını tutmak için bir sünger hazırlayın. Tam bir süngeri çeyrekliklere kesin. Jilet kullanarak, sünger çeyreğinin uzun eksenine paralel çalışan ince bir sünger kamasını çıkarın.<ol>
<li>Yarık yetişkin bir balığı barındıracak kadar uzun olmalıdır (bu farklı balık boyutları arasında değişecektir). Örneğin, 35 mm uzunluğundaki yetişkin bir balık için yarık uzunluğu 20 mm olmalıdır. Baş ve vücut süngerde sıkıca tutulur, ancak kuyruk süngerin kenarından geçer (Şekil 1B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Süngeri% 0.016 Tricaine çözeltisinde bekletin.</li>
	<li>Yetişkin zebra balıklarını (erkek veya dişi) % 0.016 Trikain çözeltisinin 625 mL'sine yerleştirin.</li>
	<li>6 dakika boyunca veya balık dokunmaya tepkisiz olana kadar kuluçkaya yatırın.</li>
	<li>Yaban arılarını kullanarak, balıkları Tricaine tankından dikkatlice çıkarın ve balık ventral tarafını süngerin oluğuna yerleştirin (Şekil 1A - B).</li>
	<li>Süngeri yukarıdan aşağıya aydınlatmalı bir kesme mikroskobu altına yerleştirin.</li>
</ol>2. Cerrahi
<ol><li>İnce tokmaklar kullanarak, cildi çimdikleyin ve kalbe sadece arka olarak orta derecede ölçeklendirin (Şekil 1B).</li>
	<li>Yaylı makas kullanarak, vücut boşluğunda bir delik oluşturmak için önpslerin altında bir kesim yapın (Şekil 1C - D). Kalbi veya büyük bir kan damarını yaralamamaya dikkat edin, çünkü bu ölüm oranının artmasına neden olacaktır.</li>
	<li>Yaylı makas kullanarak, karın boyunca 3-4 mm'lik bir kesi yapın, kesi pelvik yüzgeçlere ulaşana kadar arka arkaya işleyin (Şekil 1D - E). Bu noktada, karaciğerin ventral lob kesi yoluyla görülebilir.</li>
	<li>Visseral organları vücut boşluğundan çıkarmak için süngerin kenarlarını bir elinizle sıkın. Karaciğerin ventral lobları bağırsağın üstünde görülebilir (Şekil 1F, 2A-B). Karaciğer, altın-kahverengi bağırsağın üzerine yayılmış pembe veya turuncu bir yapı olarak görünecektir. Sahte kontrol olarak belirlenen hayvanlar bu noktada kurtarılır.</li>
	<li>İnce kaleleri iki tine dokunarak olacak şekilde sıkın. Sünger üzerinde baskı tutarken, ince kümeslerin tinelerini karaciğer ve bağırsak arasına kaydırın (Şekil 1G). Bağırsakları delmemeye dikkat edin, çünkü bu ölüm oranının artmasına neden olacaktır.</li>
	<li>Tinelerin birbirlerinden uzaklaşması için esinler üzerindeki basıncı yavaşça gevşetin (Şekil 1H). Bu kayar etki, ventral lob ve bağırsak arasındaki çok sayıda portal damar ekini keser (Şekil 2B) ve ventral lobu temiz bir şekilde çıkarmak için gereklidir. Karaciğer ve bağırsak arasındaki tüm portal bağlantıları kopana kadar bu işlemi tekrarlayın.</li>
	<li>İnce önseçimler kullanarak bağırsak lobunun bağırsaktan geri soyun ve ventral lobun karaciğerin geri kalanından arındırın(Şekil 1I).</li>
	<li>Bu prosedür üçte bir kısmi hepatektomi ile sonuçlanır (Şekil 1J).</li>
</ol>3. kurtarma
<ol><li>Balıkları süngerden dikkatlice çıkarın ve bir sistem suyu tankına yerleştirin.</li>
	<li>Pipet sistemi, balık kendi kendine yüzene kadar birkaç dakika solungaçların üzerinde su sağlar (Şekil 1K).</li>
	<li>Balıkları sisteme geri yerleştirmeden önce 2-4 saat izleyin. Ameliyattan sonra balığı tam 24 saat beslemeyin.</li>
	<li>Deney süresince balıkları günlük olarak izleyin.</li>
	<li>Zamanla, vücut duvarındaki kesi dikişe gerek kalmadan doğal olarak iyileşir (Şekil 1L, 2C).</li>
</ol>4. Ventral lobdan bağırsak uzunluğu analizine
<ol><li>Tüm opera hareketleri sona erene kadar buzlu suda analize yönelik tüm hayvanları 10 dakika ötenazi yapın.</li>
	<li>Balıkları buzlu sudan çıkarın ve ventral tarafı bir süngerin oluğuna yerleştirin.</li>
	<li>Yaylı makas kullanarak, kalbin ön-arka konumundaki ventral vücut duvarında bir kesi yapın. Daha sonra ilk kesiden pelvik yüzgeçlere kadar ön-arka eksen boyunca uzanan iki kesi daha yapın. (Şekil 2A).</li>
	<li>Viseral organları ortaya çıkarmak için cildi ve kası soyun (Şekil 2A).</li>
	<li>Epifluoresans mikroskobu kullanarak viseral organların parlak alan ve floresan görüntülerini elde edin. Bu görüş alanı, ventral lobun reseksiyon edildiği alanı içerecektir. Hayvanlar analizden önce ötenaziye tabi olduğundan, bu tür bir analiz aynı balığın uzun süreli görüntülenmesini önler.</li>
</ol>5. Karaciğerden vücut ağırlığına oran analizi
<ol><li>Tüm opera hareketleri sona erene kadar buzlu suda analize yönelik tüm hayvanları 10 dakika ötenazi yapın.</li>
	<li>Balıkları 50 mL konik bir tüpe yerleştirin.</li>
	<li>1x PBS'de %4 paraformaldehitin 25 mL'sini ve tüpe %0,3 Arasını ekleyin. DİkKAT: Formaldehit toksiktir ve formaldehit içeren çözeltiler her zaman kimyasal bir başlıkta işlenmelidir.</li>
	<li>4 °C'de 48 saat fındık.</li>
	<li>1x PBS ve %0,3 Ara ile dört 10 dakikalık yıkama gerçekleştirin.</li>
	<li>Balıkları tokslarla alın ve bir kağıt havlu üzerinde kurutun.</li>
	<li>Tüm balığın ağırlığını kaydedin.</li>
	<li>Yaylı makas kullanarak, kalbin ön-arka konumundaki ventral vücut duvarında bir kesi yapın. Daha sonra, ilk kesiden pelvik yüzgeçlere kadar ön-arka eksen boyunca uzanan iki kesi daha yapın. (Şekil 2A).</li>
	<li>Viseral organları ortaya çıkarmak için cildi ve kası soyun (Şekil 2A).</li>
	<li>Epifluoresans mikroskobu kullanarak karaciğerin parlak alan görüntülerini elde edin.</li>
	<li>Karaciğeri parçalara ayırın, karaciğer parçalarını bir tartım teknesine yerleştirin.</li>
	<li>Karaciğerin ağırlığını kaydedin.</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+liver+regeneration+and+growth+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Principles of liver regeneration and growth homeostasis.</a> Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).</li>
<li>Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+it+new+again%3A+insight+into+liver+development%2C+regeneration%2C+and+disease+from+zebrafish+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+growth+in+the+embryo+and+during+liver+regeneration+in+zebrafish+requires+the+cell+cycle+regulator+uhrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APC+mutant+zebrafish+uncover+a+changing+temporal+requirement+for+wnt+signaling+in+liver+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development.</a> Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).</li>
<li>Dovey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II+is+required+for+embryonic+development+and+liver+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Def+activates+p53-dependent+TGF%CE%B2+signalling+and+causes+scar+formation+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy.</a> PLoS One. 9, (2014).</li>
<li>Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+characterization+of+the+dorsal+lobes+after+hepatectomy+of+the+ventral+lobe+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish.</a> BMC Genomics. 16, 979(2015).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Journal of Cellular Physiology. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Grisham, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+principles+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22The+Liver%3A+Biology+and+Pathobiology%3A+Fifth+Edition%22%5BJournal%5D)">Organizational principles of the liver.</a> The Liver: Biology and Pathobiology: Fifth Edition. , 1-15 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Karaciğer yenilenmesi için zebra balığı ve memeli modelleri arasındaki anatomik farklılıklar karaciğer rezeksiyonu için benzersiz zorluklar ortaya koyuyor. Zebra balıklarındaki karaciğer kalbe ve bağırsaya yakındır; yanlışlıkla her iki organa da zarar vermek mortalitenin artmasına neden olur. Zebra balığı karaciğeri kapsüllenmemiştir, bu da bağırsaktan ayrılmasını zorlaştırır. Karaciğer, portal damarlardan bağırsaktan besin bakımından zengin kan alır. Memelilerde, bağırsaktan ayrılan damarlar, karaciğere girerken bölünen...

İnsanlardaki katı organlar arasında karaciğer yenilenebilen tek organdır1. Karaciğer, temel metabolik fonksiyonlardan, enerji depolamadan, kan detoksifikasyonundan, plazma proteinlerinin salgılanmasından ve safra üretiminden sorumlu temel bir organ olduğu için bu kritiktir2. Toksik veya enflamatuar hasar nedeniyle kaybedilen hepatositler öncelikle kalan hepatositlerin bölünmesi ile değiştirilir1. Karaciğer yenilenmesini incelemek için klasik deneysel modellerden biri, karaciğerin bireysel loblarının çıkarıldığı ve kalan lobların sağlam kaldığı kısmi hepatektomidir3. Bu prosedür başlangıçta karaciğer kütlesinin yaklaşık üçte ikisinin çıkarıldığı sıçanlarda geliştirilmiştir. Memelilerde kısmi hepatektomiden sonra, karaciğer ilk kütlesini geri alana kadar kalan loblarda telafi edici rejenerasyon meydana gelir. Özellikle, memeli karaciğeri eksik lobların yerini almaz.
Zebra balığı (Danio rerio) yetişkin organ rejenerasyonunu incelemek için çekişli bir modeli temsil eder4. Zebra balığı karaciğeri, yapısal olarak memeli karaciğerinden farklı olsa da, aynı hücre türlerinden oluşur ve memelilerde olduğu gibi aynı işleve hizmet eder2. İki sırt lob ve bağırsak boyunca düzleştirilmiş tek bir ventral lob ile üç lobdan oluşur. Kısmi hepatektomi daha önce zebra balıklarında, kesin rejenerasyon modu ile çelişen hesaplarla gerçeklenmiştir. Tipik olarak, tüm ventral lobun çıkarılmasıyla üçte bir kısmi hepatektomi yapılır. İlk raporlar, ventral lobun çıkarılmasından sonra,5, 6,7hafta içinde tamamen yenilendiğini vememelikaraciğerinin aksine zebra balığı karaciğerinin epimorfik rejenerasyon yapabileceğini göstermektedir. Daha sonraki çalışmalar, ventral lobun çıkarılmasının, eksik ventral lobun yenilenmesi yerine sırt loblarında telafi edici yenilenme ile sonuçlendiğini ve sonuçta karaciğer kütlesinin bir hafta içinde iyileşmesine neden olduğunu göstermiştir8,9. Ventral lobun rezeksiyonunu takiben sırt loblarının transkriptomik profillemesi, kompanzasyon rejenerasyonu ile ilişkili önemli değişiklikler ortaya koydu10. Karaciğer rejenerasyon modunun yaralanmanın boyutuna göre değişebileceği göz önüne alındığında8, sonuçlardaki tutarsızlıkların araştırma grupları arasındaki kısmi hepatektomi protokolündeki teknik varyasyondan kaynaklanabileceğini tahmin ettik.
Bu protokol, ventral lobun çıkarılmasıyla yetişkin zebra balıklarında üçte bir kısmi hepatektomi yapılması için bir prosedür açıklanmaktadır. Bu teknik karaciğer yenilenme mekanizmalarının değerlendirilmesi için değerli olacaktır.

<table><tbody><tr><td>% 16 Paraformaldehit Sulu Çözelti, EM Sınıfı Elektron</td><td>Mikroskobu Sciences</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Santrifüj Tüpleri, Polipropilen, Steril</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>AS 82/220.R2 PLUS Analitik Terazi</td> Bay <td>State Scale & Sistemler, A.Ş.</td><td>WL-104-1051</td><td></td></tr><tr><td>Dumont # 55 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>EMS Kuehne Kapak Camı/Numune Forseps Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>72997-07</td><td></td></tr><tr><td>Epifloresan mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>Mastertop Selüloz Temizleme Ovma Süngeri</td><td>Amazon</td><td>B07CBSM53Z</td><td></td></tr><tr><td>PBS10X Sıvı Conc 4L</td><td>EMD Millipore</td><td>6505-4L</td><td></td></tr><tr><td>Süper İnce Mikro Makas, 3 1/4" düz</td><td>Biyomedikal Araştırma Aletleri</td><td>11-1020</td><td></td></tr><tr><td>Trikain metansülfonat</td><td>Syndel</td><td>TRIC-M-GR-0010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20, Fisher BioReagents</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin zebra balıklarında kısmi hepatektomi

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

Karaciğer yetmezliği dünya çapında önde gelen ölüm nedenlerinden biridir ve Amerika Birleşik Devletleri'nde kronik karaciğer hastalığından ölüm oranı keskin bir şekilde artmaktadır. Sağlıklı karaciğerler toksik hasardan yenilenebilir, ancak ileri karaciğer hastalığında karaciğerin doğal yenilenme yeteneği bozulur. Zebra balığı, yenilenmeyi incelemek için güçlü bir deneysel sistem olarak ortaya çıkmıştır. Karaciğerin bir kısmının cerrahi olarak çıkarıldığı, geri kalanının sağlam bıraktığı doğrudan klinik alaka düzeyine sahip bir prosedür olan kısmi hepatektomiden karaciğer yenilenmesini incelemek için ideal bir modeldir. Kısmi hepatektomi için standart bir protokol yoktur; bu modeli kullanan önceki çalışmalar biraz farklı protokoller kullanmış ve farklı sonuçlar bildirmiştir. Burada açıklanan, yetişkin zebra balıklarında kısmi hepatektomi yapmak için verimli, tekrarlanabilir bir protokoldür. Zebra balıklarının resected lobun epimorfik rejenerasyonunu yapabildiğini göstermek için bu tekniği kullanıyoruz. Bu protokol zebra balıklarında karaciğer yenilenmesi için gerekli mekanizmaları daha fazla sorgulamak için kullanılabilir.

Yetişkin zebra balığı karaciğerinin rejeneratif potansiyelini incelemek için yetişkin zebra balıklarında kısmi hepatektomi (PHX) yaptık. Genel olarak, 1,5-2,5 yaş arasında değişen büyük yetişkinler (30-40 mm uzunluğunda) seçildi. Bireysel deneylerde, hayvanlar aynı tanktan seçildi ve yaş ve boyutla eşleşti. Uygun bir kontrol olarak, hayvanın hem uyuşturulduğu hem de ventral vücut duvarında büyük bir kesi aldığı ancak herhangi bir doku çıkarılmadan kurtarıldığı sahte ameliyatlardan yararlandık. Sahte kontroller için hayat...

Bu protokol, karaciğer yenilenmesinin incelenmesini sağlamak için yetişkin zebra balıklarında karaciğerin ventral lobunun çıkarılması prosedürünü açıklar.

Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

Bu protokol, araştırmacıların zebra balıklarındaki karaciğer yenilenme mekanizmalarını incelemek için mevcut kimyasal ve genetik araçlardan yararlanmalarını sağlayacaktır. Kısmi hepatektomi, toksik karaciğer hasarının vücut çapındaki etkilerine gerek kalmadan karaciğer yenilenmesini teşvik etmek için dokunun kesin olarak çıkarılmasını sağlar. Ancak karaciğer yenilenmesinin moleküler ve hücresel mekanizmalarını anlayarak ileri karaciğer hastalığı olan hastaları tedavi etmek için yeni tedaviler tasarlayabiliriz.Başlamak için, balıkları tokaları kullanarak Tricaine tankından çıkarın ve ventral tarafı yukarı olacak şekilde Tricaine ıslatılmış bir süngerin oluğuna gömün. Daha sonra süngeri yukarıdan aşağıya aydınlatmalı bir kesme mikroskobu altına yerleştirin. İnce önps ile cildi ve pulları kalbe hemen arka olarak sıkıştırın ve yaylı makasla tokaların altında bir kesim yaparak vücut boşluğunda bir delik oluşturun.Süngeri döndürün ve pelvik yüzgeçlere doğru arka arka keserek karın boyunca üç ila dört milimetrelik bir kesi yapın. Sonra süngeri geri döndürün. Visseral organları vücut boşluğundan çıkarmak için süngerin kenarlarını bir elinizle sıkın.Karaciğerin ventral lobu bağırsağın üstünde bulunur ve karaciğer altın kahverengi bağırsağa yayılmış pembe veya turuncu bir yapıdır ve CFP floresan ile açıkça görselleştirilebilir. İnce kaleleri, tinelerin birbirine değmesi için sıkın ve tineleri karaciğer ve bağırsak arasında kaydırın. Daha sonra karaciğer ve bağırsak arasındaki portal damar bağlantılarını kırmak için tenekeleri yavaşça ayırın.Karaciğer ve bağırsak arasındaki tüm portal bağlantıları kopana kadar bu işlemi tekrarlayın ve ince tokparlamalar kullanarak ventral lobunu bağırsaktan çekin. Ventral lobun karaciğerin geri kalanından arındırın. Hayvanın CFP floresan ile incelenmesi, ventral lobun çıkarıldığını göstermektedir.Bittiğinde, balıkları süngerden sistem suyu içeren tanka dikkatlice aktarın ve balık kendi kendine iyileşene ve yüzene kadar sistem suyunu birkaç dakika solungaçların üzerinden akar. Balıkları ötenazi ettikten sonra buzlu sudan çıkarın. Ventral tarafı yukarıda olan bir süngerin oluğuna yerleştirin ve kalbin ön arka pozisyonunda ventral vücut duvarının bir kesisini yapın.Daha sonra ön arka eksen boyunca pelvik yüzgeçlere kadar uzanan ilk kesinin kenarlarından iki kesi daha yapın ve visseral organları ortaya çıkarmak için cildi ve kası soyun. Viseral organlar artık hem parlak alan hem de floresan mikroskopi ile görselleştirilebiliyor. Kısmi hepatektomi sonrası karaciğer iyileşmesi, erkeklerde %1,8, kadınlarda %3,3 olan karaciğerin vücut ağırlığı oranı hesaplanarak tahmin edildi.Her iki cinsiyetin karaciğer-vücut ağırlığı oranı ameliyat sonrası sıfır, kısmi hepatektomi ve sham kontrollerinde yedinci günde belirlendi. Ameliyat sonrası sıfır gününde, sham hayvanların görünür bir ventral lobları vardır, ancak kısmi hepatektomi hayvanlarında, ventral lob tamamen yoktu, bu da erkeklerde% 30 azalmaya ve karaciğer kadınlarının vücut ağırlığı oranlarına% 20 azalmasına neden oldu. Kısmi hepatektomi hayvanlarında yedinci ameliyat sonrası günde, ventral lob yenilenmedi ve kısmi hepatektomi ve sham kontrollerinde karaciğerden vücut ağırlığı oranları karşılaştırılabilirdi, bu da kısmi hepatektomi sonrası karaciğer kütlesinin geri kazanıldığını gösteriyordu.Zamanın ventral lob rejenerasyonuna etkisi tam 1/3 kısmi hepatektomi yapılarak ve ventral lobun bağırsak uzunluğu oranına ölçülmesi ile belirlendi. Ventral lob, sham kontrollerinde bağırsak uzunluğunun% 50 ila 100'ünü işgal etti, ancak 1/3 kısmi hepatektomi hayvanlarında ciddi şekilde azaldı. Ameliyat sonrası 36. günde kısmi hepatektomi hayvanlarında ilk gün ameliyat sonrası ile karşılaştırıldığında ventral lobdan bağırsak oranına kadar artış gözlendi.Ameliyat sonrası 36. günde kısmi hepatektomiden iyileşen hayvanlarda ilk güne göre istatistiksel olarak anlamlı bir artmış ventral lob büyüklüğü gözlenmiştir, ancak sahte kontrollerde gözlenmemiştir. Bazı hayvanlar ventral lobu yenilemiş, ancak bazıları değil, ameliyat tepkisinde değişim olduğunu gösterir. Bu protokolün en kritik kısmı, ventral lobun tamamen çıkarılabilmesi için karaciğeri ve bağırsağı temiz bir şekilde ayırmaktır.Zebra balıklarında kısmi hepatektomi, karaciğer yenilenmesi için genetik gereksinimleri test etmek için mutant veya transgenik çizgilerde yapılabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yetişkin Zebra balığı Tüm Böbrek İliği Nakli

Zebrafish böbrek, her iki böbrek ve hematopoetik yetişkin kök / progenitör hücrelerin ev ve bu omurgalı bir model organizmadaki hücre tipleri ve onların soyu incelemek için olağanüstü bir fırsat teşkil etmektedir. Burada, yetişkin zebrafish böbrek hücre izolasyonu, nakli, böbrek ve / veya kan hücre popülasyonlarının ifade çalışmaları gibi uygulamalar için de kullanılabilir belirlemek ve cerrahi kaldırmak için araştırmacı sağlayan ayrıntılı bir diseksiyon prosedürü göstermektedir.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek diseksiyonu

Makale, transgenik zebra balığı larvalarında metronidazol ile hepatosit ölümünü indüklemek için bir yöntem olan hedeflenen karaciğer ablasyonunu açıklamaktadır. Örnek protokol, zebra balıklarında hedeflenen karaciğer ablasyonunun oluşturulması, manipüle edilmesi ve değerlendirilmesi sürecini açıklar.

Hedeflenen Karaciğer Ablasyonu: Transgenik Zebra Balığı Larvalarında Metronidazol ile Hepatosit Ölümünün İndüklenmesi

Kardiyovasküler araştırmalar için zebra balığının kullanımı, yetişkin kalpleri üzerinde yapılan araştırmalara doğru genişliyor. Bu uygulamalar için, kalp dokularının hızlı ve basit bir şekilde izole edilmesi, ölüm sonrası değişikliklerden kaçınmak ve yeterli sayıda numune elde etmek için anahtardır. Burada, yetişkin zebra balığı kalplerini incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem açıklıyoruz.

Yüksek verim Uygulamaları Yetişkin Zebra Hearts Kurtarma

Zebra balığı safra güdümlü karaciğer rejenerasyonunun altında yatan moleküler mekanizmaları değerlendirmeye yardımcı olmak için, nitroredüktaz eksprese eden hepatositlerin metronidazol tedavisi üzerine genetik olarak ablasyon edildiği bir karaciğer hasarı modeli oluşturduk.  Bu protokolde, hepatosit ablasyonunun ve biliyer güdümlü karaciğer rejenerasyonunun nasıl ustaca manipüle edileceğini, izleneceğini ve analiz edileceğini açıklıyoruz.

Biliyer odaklı Karaciğer Rejenerasyon Eğitim Zebra balığı hepatosite özgü Ablasyon

Aşırı ekstraselüler matriks proteinlerinin birikmesi ile sürekli fibroz siroza yol açar. Alkol kötüye kullanımı, ciddi karaciğer hastalığının ana nedenlerinden biridir. Alkolün neden olduğu yaralanma üzerine hepatosit rejenerasyonunu teşvik etme mekanizmalarını ve stratejilerini incelemek için etanolün neden olduğu bir zebra balığı fibrotik karaciğer modeli oluşturduk.

Zebra balığı bir Etanol kaynaklı Fibrotik Karaciğer Modelinin Geliştirilmesi progenitör hücre-aracılı Hepatosit Rejenerasyon Eğitim

Bu protokol 24 saat boyunca% 2 etanol ile işlenmiş zebrafish larva karaciğerlerinin histolojik analizlerini tanımlamaktadır. Böyle akut etanol tedavisi hepatik steatoz ve hepatik vaskülatürün şişmesi ile sonuçlanır.

Zebra balığıda Akut Alkollü Karaciğer Hasarının Histolojik Analizi

Koşullu gen-nakavt veya etkili gen-nakavt yetişkin zebra balığı organlarında geliştirmek için büyük bir meydan okuma olarak kalır. Burada performans gösteren nanopartikül aracılı siRNA gen-yetişkin zebra balığı kalbinde susturmak, böylece yetişkin organlarda zebra balığı ve diğer canlılar çalışmak için yeni bir işlev kaybı yöntemi sağlayan bir protokol raporu.

Nanopartikül aracılı siRNA Gene susturmak yetişkin zebra balığı kalbinde

Burada larva zebra balığında karaciğer boyutunu ölçmek için bir yöntem göstermek, karaciğer büyümesi ve gelişimi üzerinde genetik ve farmakolojik manipülasyonetkilerini değerlendirmek için bir yol sağlar.

Brightfield Mikroskobu Kullanan Larva Zebrabalığında Karaciğer Boyutunun Ölçülmesi

Burada, kolesterol fazlasının karaciğer mikroçevresi ve bağışıklık hücresi manzarası üzerindeki etkisini incelemek için alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) ile ilişkili Hepatosellüler Karsinom (HCC) zebra balığı modelinin nasıl üretileceğini sunuyoruz.

Zebra Balığında Alkolsüz Yağlı Karaciğer Hastalığına Bağlı Hepatosellüler Karsinomun Erken İlerlemesi Sırasında Karaciğer Mikroçevresinin Analizi

Yetişkin zebra balıklarında yeni bir intraperitoneal (IP) enjeksiyon yöntemi tanımlanmıştır. Doksorubisin gibi toksik bileşiklerle çalışırken, bu prosedür daha önce bildirilen iki IP yönteminden daha etkilidir. Teknik, zebra balığı modelinde sınırlı deneyime sahip araştırmacılar tarafından kolayca benimsenecek şekilde tasarlanmıştır.

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Keşfedin yetişkin Danio rerio'ya kısmi hepatotomi uygulayarak karaciğer rejenerasyonunun moleküler ve hücresel mekanizmalarını inceleme yöntemini. Bu protokol, insan karaciğer hastalıklarına yönelik tedavi geliştirmede kullanılabilir.

Yetişkin Zebra Balıklarında Kısmi Hepatektomi

Daha fazla video keşfet