Name: Nöroblastom Metastaz Zebra Balığı Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Keşfedin, MYCN ve LMO1 genlerinin aşırı ifadesiyle geliştirilen zebra balığı modelinde nöroblastom metastazının canlı görüntülenmesini. Bu yöntem, tümör yayılımını gerçek zamanlı izleyerek metastaz mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü'nden R01 CA240323 (S.Z.) hibesi ile desteklendi; Amerika Birleşik Devletleri Savunma Bakanlığı'ndan (DoD) W81XWH-17-1-0498 (S.Z.) hibesi; V Kanser Araştırmaları Vakfı'ndan (S.Z.) V Scholar ödülü ve Mayo Biyomedikal Keşif Merkezi'nden (S.Z.) platform hibesi; ve Mayo Clinic Kanser Merkezi ve Bireyselleştirilmiş Tıp Merkezi'nden (S.Z.) destek almaktadır.

<ol><li>Veldman, M., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+developmental+model+organism+for+pediatric+research%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a developmental model organism for pediatric research.</a> Pediatric Research. 64, 470-476 (2008).</li>
<li>Feitsma, H., Cuppen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a cancer model.</a> Molecular Cancer Research. 6 (5), 694(2008).</li>
<li>Ethcin, J., Kanki, J. P., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods in Cell Biology. 105, 309-337 (2010).</li>
<li>Benjamin, D. C., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastasis+in+adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastasis in adult Zebrafish.</a> BMC Cancer. 17 (1), 660(2017).</li>
<li>Kim, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-derived+factors+driving+metastatic+plasticity+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-derived factors driving metastatic plasticity in melanoma.</a> Nature Communications. 8, 14343(2017).</li>
<li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+ALK+collaborates+with+MYCN+in+neuroblastoma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Activated ALK collaborates with MYCN in neuroblastoma pathogenesis.</a> Cancer Cell. 21 (3), 362-373 (2012).</li>
<li>Maris, J. M., Hogarty, M. D., Bagatell, R., Cohn, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma.</a> Lancet. 369 (9579), London, England. 2106-2120 (2007).</li>
<li>Park, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Children%27s+oncology+group%27s+2013+blueprint+for+research%3A+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Blood+and+Cancer%22%5BJournal%5D)">Children's oncology group's 2013 blueprint for research: neuroblastoma.</a> Pediatric Blood and Cancer. 60 (6), 985-993 (2013).</li>
<li>Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+developmental+model+of+neuroblastoma%3A+differentiating+stroma-poor+tumors%27+progress+along+an+extra-adrenal+chromaffin+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%3A+A+Journal+of+Technical+Methods+and+Pathology%22%5BJournal%5D)">A developmental model of neuroblastoma: differentiating stroma-poor tumors' progress along an extra-adrenal chromaffin lineage.</a> Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 75 (5), 659-675 (1996).</li>
<li>Tsubota, S., Kadomatsu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+initiation+mechanisms+of+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Origin and initiation mechanisms of neuroblastoma.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 211-221 (2018).</li>
<li>Tolbert, V. P., Matthay, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma%3A+Clinical+and+biological+approach+to+risk+stratification+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma: Clinical and biological approach to risk stratification and treatment.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 195-209 (2018).</li>
<li>Maris, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recent advances in neuroblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 362 (23), 2202-2211 (2010).</li>
<li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LMO1+Synergizes+with+MYCN+to+promote+neuroblastoma+initiation+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">LMO1 Synergizes with MYCN to promote neuroblastoma initiation and metastasis.</a> Cancer Cell. 32, 310-323 (2017).</li>
<li>Patton, E. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+art+and+design+of+genetic+screens%3A+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">The art and design of genetic screens: zebrafish.</a> Nature Reviews Genetics. 2 (12), 956-966 (2001).</li>
<li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li>
<li>Tao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIN28B+regulates+transcription+and+potentiates+MYCN-induced+neuroblastoma+through+binding+to+ZNF143+at+target+gene+promotors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">LIN28B regulates transcription and potentiates MYCN-induced neuroblastoma through binding to ZNF143 at target gene promotors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (28), 16516-16526 (2020).</li>
<li>Ung, C. Y., Guo, F., Zhang, X., Zhu, Z., Zhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+zebrafish+transgenesis+for+functional+genomic+analysis+of+candidate+cooperative+genes+in+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mosaic zebrafish transgenesis for functional genomic analysis of candidate cooperative genes in tumor pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52567(2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+GAB2+in+neuroblastoma+pathogenesis+through+the+promotion+of+SHP2%2FMYCN+cooperation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Critical role for GAB2 in neuroblastoma pathogenesis through the promotion of SHP2/MYCN cooperation.</a> Cell Reports. 18 (12), 2932-2942 (2017).</li>
<li>Zimmerman, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MYC+drives+a+subset+of+high-risk+pediatric+neuroblastomas+and+is+activated+through+mechanisms+including+enhancer+hijacking+and+focal+enhancer+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">MYC drives a subset of high-risk pediatric neuroblastomas and is activated through mechanisms including enhancer hijacking and focal enhancer amplification.</a> Cancer Discovery. 8 (3), 320-335 (2018).</li>
<li>Koach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+MYCN+oncogenic+signaling+through+the+MYCN-PA2G4+binding+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Drugging MYCN oncogenic signaling through the MYCN-PA2G4 binding interface.</a> Cancer Research. 79 (21), 5652-5667 (2019).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>DuBois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+sites+in+stage+IV+and+IVS+neuroblastoma+correlate+with+age%2C+tumor+biology%2C+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pediatric+hematology%2Foncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic sites in stage IV and IVS neuroblastoma correlate with age, tumor biology, and survival.</a> Journal of pediatric hematology/oncology. 21 (3), 181-189 (1999).</li>
<li>Wattrus, S. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+safe+harbor%3A+The+hematopoietic+stem+cell+niche+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Stem cell safe harbor: The hematopoietic stem cell niche in zebrafish.</a> Blood Advances. 2 (21), 3063-3069 (2018).</li>
<li>Menke, A. L., Spitsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+anatomy+and+histology+of+the+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Normal anatomy and histology of the adult zebrafish.</a> Toxicologic Pathology. 39 (5), 759-775 (2011).</li>
<li>Renshaw, S. A., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+450+million+years+in+the+making%3A+Zebrafish+and+vertebrate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+and+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">A model 450 million years in the making: Zebrafish and vertebrate immunity.</a> Disease Models and Mechanisms. 5 (1), 38-47 (2012).</li>
<li>Junqueira, L. C., Cossermelli, W., Brentani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+of+collagens+type+I%2C+II+and+III+by+Sirius+Red+and+polarization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Archivum+histologicum+Japonicum+%28Nihon+Soshikigaku+Kiroku%29%22%5BJournal%5D)">Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy.</a> Archivum histologicum Japonicum (Nihon Soshikigaku Kiroku). 41 (3), 267-274 (1978).</li>
<li>Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirius+red+F3BA+as+a+stain+for+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Sirius red F3BA as a stain for connective tissue.</a> Archives of Pathology. 78, 69-72 (1964).</li>
<li>Ignatius, M. S., Hayes, M., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+cancer+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of cancer in zebrafish.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 219-237 (2016).</li>
<li>Howe, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Fazio, M., Ablain, J., Chuan, Y., Langenau, D. M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+patient+avatars+in+cancer+biology+and+precision+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Zebrafish patient avatars in cancer biology and precision cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 20 (5), 263-273 (2020).</li>
<li>Yoganantharjah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Use+of+the+zebrafish+model+to+aid+in+drug+discovery+and+target+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The Use of the zebrafish model to aid in drug discovery and target validation.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 17 (18), 2041-2055 (2018).</li>
<li>Ignatius, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+tumor-propagating+cells%2C+regional+tumor+heterogeneity%2C+and+dynamic+cell+movements+in+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of tumor-propagating cells, regional tumor heterogeneity, and dynamic cell movements in embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 21 (5), 680-693 (2012).</li>
<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
<li>Ahmed, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+with+orbital+metastasis%3A+ophthalmic+presentation+and+role+of+ophthalmologists%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma with orbital metastasis: ophthalmic presentation and role of ophthalmologists.</a> Eye. 20 (4), London, England. 466-470 (2006).</li>
<li>Papaioannou, G., McHugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+in+childhood%3A+review+and+radiological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Imaging+Society%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma in childhood: review and radiological findings.</a> Cancer Imaging Society. 5 (1), 116-127 (2005).</li>
<li>Langenau, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-injection+strategies+to+modify+radiation+sensitivity+and+tumor+initiation+in+transgenic+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Co-injection strategies to modify radiation sensitivity and tumor initiation in transgenic Zebrafish.</a> Oncogene. 27 (30), 4242-4248 (2008).</li>
<li>Amores, A., et al. Zebrafish hox clusters and vertebrate genome evolution. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmores%2C+A+%22Science%22">Science</a>. 282 (5394), New York, N.Y. 1711-1714 (1998).</li>
<li>Postlethwait, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+genome+evolution+and+the+zebrafish+gene+map%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Vertebrate genome evolution and the zebrafish gene map.</a> Nature Genetics. 18 (4), 345-349 (1998).</li>
<li>Opazo, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-genome+duplication+and+the+functional+diversification+of+teleost+fish+hemoglobins%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Whole-genome duplication and the functional diversification of teleost fish hemoglobins.</a> Molecular Biology and Evolution. 30 (1), 140-153 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Zebra balığı, son birkaç on yıldır, özellikle kanser araştırmalarında, bakım kolaylığı, sağlam üremesi ve in vivo görüntüleme için açık avantajları gibi bariz nedenlerden dolayı yaygın olarak kullanılmaktadır1,28. Zebra balığı modeli, büyük ölçekli genetik çalışmalar için sıçanlar ve fareler gibi memeli model organizmaları iyi tamamlayan dış döllenmeleri ve gelişimleri nedeniyle embriyonik olarak kolayca manipüle edilebilir1,2,3<s...

Zebra balığı, özellikle kanserde çeşitli araştırma alanlarına yaygın olarak kullanılmış ve uygulanmıştır. Bu model, sağlam üremesi, uygun maliyetli bakımı ve tümör büyümesi ve metastazının çok yönlü görselleştirilmesi gibi birçok avantaj sağlar- bunların hepsi zebra balığını tümöregenez ve metastazın hücresel ve moleküler bazlarını incelemek ve araştırmak için güçlü bir araç haline getirir. Büyük ölçekli genom haritalama, transgenez, genlerin aşırı ifade edilmesi veya nakavt edilmesi, hücre nakli ve kimyasal ekranlar için yeni teknikler zebra balığı modelinin gücünü son derece artırmıştır1. Son birkaç yıl içinde, lösemi, melanom, rabdomyosarkom ve hepatosellüler karsinom2,3,4,5 dahil ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere çeşitli insan kanserlerinin tümörjenezi ve metastazını incelemek için birçok zebra balığı hattı geliştirilmiştir. Ek olarak, nöroblastom (NB) ilk zebra balığı modeli, dopamin-beta-hidroksilaz (dβh) promotörünün kontrolü altındaki periferik sempatik sinir sisteminde (PSNS) bir onkogen olan MYCN'nin aşırı ifade edilmesiyle üretildi. Bu model ile aktif ALK'nın tümör başlangıcını hızlandırmak ve in vivo6'daki tümör penetrance'ını artırmak için MYCN ile sinerjiye sahip olabileceği daha da gösterilmiştir.
NB, nöral kret hücrelerinin sympathoadrenal soyundan türetilmiştir ve çocuklarda oldukça metastatik bir kanserdir7. Pediatrik kansere bağlı ölümlerin %10'undan sorumludur8. Tanıda yaygın olarak metastaz yapılan NB, klinik olarak öncelikle sempatik gangliyon zinciri ve PSNS9,10'un adrenal medullası boyunca ortaya çıkan tümörler olarak sunulabilir. MYCN amplifikasyonu genellikle NB hastalarında kötü sonuçlarla ilişkilidir11,12. Ayrıca LMO1, yüksek riskli olgularda kritik NB duyarlılık geni olarak tanımlanmıştır13,14. Çalışmalar, zebra balığı modelinin PSNS'sinde MYCN ve LMO1'in transgenik koexpressasyonunun sadece NB'nin daha erken başlamasını teşvik etmekle kalmayıp, aynı zamanda yüksek riskli NB13 hastalarında yaygın olarak görülen bölgelere benzeyen doku ve organlara yaygın metastaz yaptığını buldu. Çok yakın zamanda, bir RNA bağlayıcı proteini kodlayan MYCN ve Lin28B'nin dβh promotörü16'nın kontrolü altında aşırı ifade edildiği daha yeni bir zebra balığı NB modelinde NB'nin başka bir metastatik fenotipi de gözlenmiştir.
Zebra balıklarındaki kararlı transgenik yaklaşım genellikle ilgi çekici bir genin aşırı ekspresyonunun normal gelişime ve hastalık patogenezine katkıda bulunup bulunamayacağını incelemek için kullanılır14,15. Bu teknik, NB tümörjenezis6,16,17,18,19,20'ye giden birden fazla gen ve yolun önemini göstermek için başarıyla kullanılmıştır. Bu makale, PSNS'de hem MYCN hem de LMO1'i aşırı ifade eden transgenik balık hattının nasıl oluşturulduğunu ve bu iki onkogenin işbirliğinin NB tümörjenezi ve metastaz13'ün başlangıcını nasıl hızlandırdığının nasıl gösterildiğini tanıtacaktır. İlk olarak, dβh promotörünün (mycn hattı olarak belirlenmiş) kontrolü altındaki EGFP-MYCN'yi aşırı ifade eden transgenik hat, dβh-EGFP-MYCN yapısı daha önce açıklandığı gibi vahşi tip (WT) AB embriyolarının tek hücreli aşamasına enjekte ederek geliştirilmiştir6,17. PSNS'de LMO1'i (LMO1 hattı olarak belirlenmiş) aşırı ifade eden ayrı bir transgenik hat, dβh-LMO1 ve dβh-mCherry olmak üzere iki DNA yapısı tek hücreli aşamada WT embriyolarına dönüştürülerek geliştirilmiştir13. Daha önce, sikkelenmiş çift DNA yapılarının balık genomuna kazınabileceği gösterilmiştir; bu nedenle, LMO1 ve mCherry transgenik hayvanların PSNS hücrelerinde birlikte ifade edilir. Enjekte edilen F0 embriyoları cinsel olgunluğa ulaştığında, transgene(ler) entegrasyonu ile pozitif balıkların tanımlanması için WT balıklarıyla aşıldılar. Kısaca, F1 yavruları ilk olarak PSNS hücrelerinde mCherry ekspresyolü için floresan mikroskopi ile tarandı. LMO1'in mCherry pozitif balıklara germline entegrasyonu genomik PCR ve dizileme ile daha da doğrulandı. Her transgenik hattın başarılı bir şekilde tanımlanmasından sonra, heterozipöz MYCN ve LMO1 transgenik balıklarının soyu, hem MYCN hem de LMO1'i ifade eden bileşik bir balık hattı oluşturmak için iç içe geçti (MYCN olarak belirlenmiştir; LMO1 hattı). Tümör taşıyan MYCN; LMO1 balıkları, birincil bölgeye uzak bölgelerde metastatik tümörlerin, interrenal bez bölgesinin (IRG, insan adrenal bezine eşdeğer zebra balığı eşdeğeri) kanıtı için iki haftada bir floresan mikroskopi ile izlendi 13. MYCN'deki tümörlerin metastazını doğrulamak için; LMO1 balıkları, histolojik ve immünohistokimyasal analizler uygulandı.

<table><tbody><tr><td>3,3'-Diaminobenzidin (DAB) Vektör Kiti</td><td>Vektör</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>Asetik Asit</td><td>Fisher Scientific / Acros Organik</td><td>64-19-7</td><td></td></tr><tr><td>Agaroz GP2</td><td>Midwest Scientific</td><td>009012-36-6</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Tirozin Hidroksilaz (TH) Antikoru</td><td>Pel-Freez</td><td>P40101</td><td></td></tr><tr><td>Avidin / Biotin Engelleme Kiti</td><td>Vektör</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>BOND Yoğun R Tespiti</td><td>Leica Biosystems</td><td>DS9263</td><td></td></tr><tr><td>BOND birincil antikor seyreltici</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td>AR9352</td><td></td></tr><tr><td>BOND-MAX IHC cihazı</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td>N/A</td><td>tam otomatik IHC boyama sistemi</td></tr><tr><td>CH211-270H11 BAC klonu</td><td>BACPAC kaynak merkezi (BRFC)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DP71 kamera ile donatılmış bileşik mikroskop</td><td>Olympus</td><td>AX70</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL (ksilen bazlı montaj ortamı)</td><td>Richard-Allan Scientific</td><td>8312-4</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>kullanıma hazır (hazırlık gerekmez)</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carolina</td><td>86-1263</td><td></td></tr><tr><td>Uzun Şablon PCR Sistemini Genişletin</td><td>Roche Uygulamalı Bilim, IN</td><td>11681834001</td><td></td></tr><tr><td>Ağ Geçidi BP Klonaz II enzim karışımı</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11789-020</td><td></td></tr><tr><td>Ağ Geçidi LR Klonaz II enzim karışımı</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11791-100</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Rb ikincil antikoru (Biyotinillenmiş)</td> <td>Dako</td><td>E0432</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen Çözeltisi, Harris Modifiye</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>HHS-32-1L</td><td></td></tr><tr><td>HRP Avidin D</td><td>Vektör</td><td>A-2004</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Aqua Çözeltileri</td><td>4360-1L</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit, %3</td> <td>Fisher Scientific</td><td>H324-500</td><td></td></tr><tr><td>I-SceI enzimi</td><td>New England Biolabs, MA</td><td>R0694L</td><td></td></tr><tr><td>Kanamisin sülfat</td><td>Teknova, Inc.</td><td>K2150</td><td></td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>34133</td><td></td></tr><tr><td>Lityum Karbonat</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Leica</td><td>Biosystems</td><td>RM2255</td><td></td></tr><tr><td>Tek Atış TOP10 Kimyasal Olarak Yetkin&nbsp;E. coli</td><td>Invitrogen</td><td>C404006</td><td></td></tr><tr><td>p3E-polyA&</td><td>nbsp;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. of Utah</td><td>N/A</td><td>cömert bir hediye (Açıklandığı gibi serbestçe taranmış materyali elde etmek için lütfen http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page sayfasına bakın.)</td></tr><tr><td>Parafin mumu</td><td>Surgipath Paraplast</td><td>39603002</td><td>Parafin'den parafin'e</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11313</td><td></td></tr><tr><td>pDEST vektörü (I-SceI tanıma bölgelerini içeren değiştirilmiş hedef vektör)</td><td>Dr. C. Grabher, Karlsruhe Teknoloji Enstitüsü, Karlsruhe, Almanya</td><td>N/A</td><td>cömert bir hediye</td></tr><tr><td>pDONR 221 ağ geçidi donör vektörü</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12536-017</td><td></td></tr><tr><td>pDONRP4-P1R donör vektörü</td><td>&nbsp;Dr. Chi-Bin Chien, Utah Üniversitesi</td><td>N/A</td><td>cömert bir hediye</td></tr><tr><td>Fenol kırmızısı, %0.5</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; P0290</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS), 10X</td><td>BioRad</td><td>1610780</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirrius kırmızı leke kiti</td><td>Polysciences</td><td>24901-250</td><td></td></tr><tr><td>pME-mCherry</td><td>Addgene</td><td>26028</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K, rekombinant, PCR Sınıfı</td><td>Roche</td><td>21712520</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin MiniPrep Kiti</td><td>Qiagen</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>RDO Hızlı Kireç Çözücü</td><td>Apex Enginerring</td><td>RDO04</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azid (NaN3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>26628-22-8</td><td></td></tr><tr><td>Stereo floresan mikroskobu</td><td>Leica</td><td>MZ10F</td><td></td></tr><tr><td>Görüntüleme için dijital görüş DS-U1 kamera ile donatılmış stereoskopik floresan mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>SMZ-1500</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA Polimeraz</td><td>New England Biolabs, MA</td><td>M0273L</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP&reg; &nbsp; 6 AI Vakum Sızma İşlemcisi</td><td>Sakura</td><td>N/A</td><td>Model #: VIP-6-A1</td></tr><tr><td>Trikain-S</td><td>Western Chemical Incorporated</td><td>20513</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>X3P1GAL</td><td></td></tr></tbody></table>

nöroblastom metastaz zebra balığı modeli

Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

Zebra balığı, başta kanser olmak üzere insan hastalıklarını incelemek için önemli bir hayvan modeli olarak ortaya çıkmıştır. Zebra balığı modellemesinde uygulanan sağlam transgenik ve genom düzenleme teknolojilerinin yanı sıra, bakım kolaylığı, yüksek verimli üretkenlik ve güçlü canlı görüntüleme, zebra balığını metastaz ve bu sürecin altında bulunan hücresel ve moleküler temelleri vivo olarak incelemek için değerli bir model sistemi haline getirir. Metastazın ilk zebra balığı nöroblastom (NB) modeli, dopamin-beta-hidroksilyaz (dβh) promotörünün kontrolü altında iki onkogen, MYCN ve LMO1 aşırı ifade ederek geliştirilmiştir. Birlikte ifade edilen MYCN ve LMO1, nöroblastomagenezisin gecikmesinin azalmasına ve penetrancesinin artmasına ve tümör hücrelerinin uzak metastazlarının hızlanmasına yol açtı. Bu yeni model, klinik olarak ilgili ve metastazla ilişkili genetik değişikliklerin katılımı da dahil olmak üzere insan metastatik NB'nin birçok temel özelliklerini güvenilir bir şekilde yineler; metastaz in vivo doğal ve spontan gelişimi; ve metastaz sitelerini korumuş. Bu nedenle, zebra balığı modeli, tümör metastazının karmaşık sürecini in vivo olarak parçalamak için benzersiz avantajlara sahiptir.

LMO1'in NB patogenezini etkilemek için MYCN ile sinerji oluşturup oluşturmadığını belirlemek için, dβh promotörünün kontrolündeki PSNS hücrelerinde LMO1 (dβh:LMO1 ve dβh:mCherry) veya MYCN (dβh:EGFP-MYCN) ekspresyonunun yönlendirici transgenik yapıları zebra balığı embriyolarına enjekte edildi13. Şekil 1A'da gösterildiği gibi, kararlı transgenik çizgilerin geliştirilmesinden ve genotiplerinin doğr...

Bu makale, nöroblastom zebra balığı modelinde, özellikle kendiliğinden metastaz geliştiren MYCN ve LMO1'in aşırı ifade edilmesiyle transgenik zebra balığı hattında tümör metastazını gerçek zamanlı olarak geliştirme, karakterize etme ve izleme yöntemini tanıtır.

Nöroblastom Metastaz Zebra Balığı Modeli

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

Bu yöntemler nöroblastom metastazının ilk zebra balığı modelini geliştirmek için kullanılmıştır. Ve bu modelin nöroblastom riski yüksek hastalarda görülen metastazın birçok özelliğine sadık bir şekilde yeniden sahip olabileceğini göstermek için. Bu metastatik zebra balığı modelinin ana avantajı, metastazın ne zaman ve muhtemelen nasıl oluştuğunu daha iyi anlamak için tümör yayılımının gerçek zamanlı in vivo görüntülemesidir.Bu teknik nöroblastom için özel değil. Tümör hücreleri tanımlanabildiği ve bir dizi olasılığa yol açan izlenebildiği sürece çeşitli kanser türlerinin zebra balığı modellerine uygulanabilir. Başlamak için, MYCN ve LMO1 transgenik çizgilerini melezleyerek hem MYCN hem de LMO1'i aşırı ifade eden heterozipöz transgenik bir balık hattı geliştirin.Döllenmeden sonra bir günde, EGFP pozitif noktaları olarak sunulan EGFP ekspresyasyonu için outcross soyunu sıralamak için stereoskopik bir floresan mikroskobu kullanın. Sıraladıktan sonra, taranmış embriyoları ayrı Petri kaplarına izole edin ve bulaşıkları MYCN pozitif veya MYCN negatif olarak etiketlendir. Döllenmeden üç ila dört gün sonra LMO1 ekspresyasyonu için her iki grubun embriyolarını görselleştirin ve sıralayın.Özellikle arka beynin oblongata medullasında hem üstün servikal ganglion hem de PSNS olmayan dopaminerjik nöronal hücrelerde kırmızı floresan lekeler arayın. Embriyolar döllenmeden beş gün sonrasına ulaşmadan önce taramayı gerçekleştirin. Daha sonra sıralanmış balıkları farklı genotiplerden oluşan dört gruba ayırın ve etiket yalnızca MYCN, yalnızca LMO1, MYCN ve LMO1 hem de vahşi tip olarak etiketlendirilir.Standart protokollere göre aynı koşullarda yükseltin. Tümörü görüntülemek için her iki yan tarafında metal bir spatula ile balıkları hafifçe çevirerek stereoskopik floresan mikroskopla tümörleri görselleştirin. Olası tümör taşıyan balıkların tanımlanmasından sonra, onları doğum tarihini, tümörün tarandığı tarihi ve genotipi içeren uygun etiketlerle ayrı bir tankta izole edin.Döllenmeden altı hafta sonra, daha önce taranmış balıklar için tümörlerin varlığını doğrulamak veya yeni olası tümör taşıyan balıkları tanımlamak için tümör taşıyan balıkları ve tümör olmayan balıkları taramak için önceki adımları tekrarlayın. Floresan pozitif kütlenin ve onaylanmış tümör taşıyan balıkların sürekli veya artan boyutunu arayın. Tümör taşıyan balıkları tanımladıktan sonra, tümör genesis birincil bölgesinden uzakta küçük EGFP veya mCherry pozitif tümör kitleleri olarak ortaya çıkan tümör hücre göçü kanıtı için onları iki haftada bir izleyin.Bu balıkları gerektiğinde ayrı tanklara izole edin ve olası metastazları belirtmek için uygun şekilde etiketlenin. LMO1 balıklarında heterozipöz MYCN'yi yorumladıktan ve soylarını sıralarken, EGFP MYCN ekspresyumu, Döllenme sonrası bir günde PSNS olmayan dopaminerjik nöronal hücrelerde belirgindi. Buna karşılık, LMO1 ekspresyolü hem PSNS hücrelerinde hem de PSNS olmayan dopaminerjik nöronal hücrelerde belirgindi.Organlardaki dokularda floresan pozitif tümör kitleleri, bileşik transgenik balıklarda primer tümör bölgesinden uzak, hem MYCN hem de LMO1'in aşırı ekspresyonu ile tespit edildi, ancak sadece MYCN ekspresyonu ile transgenik balıklarda saptanmamıştır. Cerrahi bölümlerin H&E lekesi, primer tümörün nöroblastom hastasında primer hastalığın en yaygın yeri olan insan böbrek üstü bezinin zebra balığı eşdeğeri olan interrenal bez bölgesinden ortaya çıktığını göstermektedir. Böbrekler arası bezden uzak tümör kitleleri, böbreğin distal kısmı, yörüngesi, solungaç, dalak ve kalbin atriyal odasının iç duvarı dahil olmak üzere birden fazla bölgede tespit edildi.Primer tümördeki tümör hücrelerinin PSNS nöroblast soyu ve tüm metastatik bölgeler doğrulandı. MYCN LMO1 tümörlerinde sadece MYCN'yi ifade eden tümörlere kıyasla önemli ölçüde artmış miktarlar ve PSR lekeli kollajen liflerinin kalınlığında artış saptanmıştır. Bu prosedürden sonra, metastatik kanserleri önlemek ve tedavi etmek için alternatif ajanların geliştirilmesine yol açabilecek yeni kanser tedavileri ilaç taraması ve test edilebilir.

zebrafish-model-of-neuroblastoma-metastasis

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, transgenik zebra balığı embriyolarının perivitellin boşluğuna meme kanseri hücresi verilmesi için bir mikroenjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır. Kuluçkadan sonra, kanser hücresi istilasını, yayılmasını ve metastazı gözlemlemek için embriyoyu floresan mikroskop altında görselleştiriyoruz.

zPDX-İnvazivlik Analizi: Zebra Balığı Embriyo Ksenogreftlerinde Metastatik Kanser Hücrelerinin İnvaziv Davranışının Araştırılması

Bir zebrafish otokton tümör modeli kullanılarak melanoma düzenleyiciler için ekran için hızlı bir şekilde sunulmaktadır. Bu melanosit aday melanom genlerin ifadesi için izin miniCoopR vektör yararlanır. Melanom sağkalım eğrileri, bir işgal testi, ölçek melanosit antikor boyama için bir protokol ve bir melanom nakli tahlil elde bir yöntem tarif edilmiştir.

Bir Zebra balığı Otokton Tümör Modeli kullanılarak Melanom Değiştiricileri için Tarama

Bu çalışmanın amacı, mozaik transgenez stratejisinin, in vivo olarak tümör başlangıcı ve ilerlemesinde çoklu onkogenlerin göreceli katkılarını hızlı ve verimli bir şekilde değerlendirmek için zebra balıklarında nasıl kullanılabileceğini göstermektir.

Tümör Patogenezinde Aday Kooperatif Genlerin Fonksiyonel Genomik Analizi Mozaik Zebra balığı Transgenesis

Bu yöntem etkili bir kanser hücrelerinin damar invaziv yeteneğini test etmek zebrafish embriyolar kullanır. Floresan kanser hücrelerinin gelişmekte olan embriyo precardiac sinüs ve yumurta sarısı kesesinin içine enjekte edilir. Kanser hücresi vasküler invazyon ve damar dışına 24-96 saat sonra kuyruk bölgenin floresan mikroskobu ile değerlendirilir.

Zebra balığı Kanser Hücrelerinin Vasküler İnvaziv Yetenek (Test<em&gt; Danio rerio</em&gt;)

Burada, invaziv davranış araştırmak ve sırasıyla insan meme kanseri hücrelerinin içeri geçiş ve ekstravazasyondur potansiyelini değerlendirmek için, iki farklı enjeksiyon yerlerini, yani perivitelline alan ve Cuvier ait kanal kullanılarak ksenogreft Zebra balığı modellerini açıklar.

Embriyonik Zebra balığı İnsan Kanser Hücrelerinin İnvazif Davranış

Kanser hücrelerinin transplantasyonu, kanser mekanizmalarının ve terapötik tepkilerin tanımlanması için önemli bir araçtır. Mevcut teknikler, bağışıklık yetersiz hayvanlara bağımlıdır. Burada, tümör hücresi davranışının ve in vivo ilaç yanıtlarının uzun vadeli analizi için immün yetkin embriyolara zebra balığı tümör hücrelerini nakletmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Zebra balığı Pediatrik Beyin Tümörlerinin Tümör Hücre Davranışının ve İlaç Yanıtının Uzun Vadeli İncelenmesi için Bağışıklık Yetenekli Ev Sahibi Olarak Transplantasyonu

Burada, bir hücresel elektrik voltaj muhabir Zebra balığı çizgi embriyonik gelişim, hareket, görselleştirmek için oluşturma sürecini göstermek ve in vivobalık tümör hücreleri.

Zebra balığı erken embriyo ve tümör hücresel elektrik aktivitesinin görselleştirme

Burada, ksnograftlar ve tümör davranış analizi, tam montajlı immünofluoresans ve konfokal görüntüleme nicelemesi için yönergeler oluşturmak için ipuçları içeren adım adım bir protokol sunuyoruz.

Zebra Balığı Larva Xenografts ve Tümör Davranış AnaliziNin Üretimi

Omurgalı beyin dokusunu invaze eden glioblastoma (GBM) hücrelerinde mikrotübül dinamiklerinin canlı görüntülenmesine izin veren bir teknik sunuyoruz. Floresan etiketli GBM hücrelerinin ortotopik enjeksiyonunun, yüksek çözünürlüklü intravital görüntüleme ile şeffaf bir zebra balığı beynine bağlanması, in situ kanser invazyonu sırasında sitoiskelet dinamiklerinin ölçülmesini sağlar.

Zebra Balığı Beynini İstila Eden Glioblastoma Hücrelerinde Mikrotübül Dinamiğinin Canlı Görüntülenmesi

Şeffaf zebra balığı embriyolarının yumurta sarısına ksenotransplantasyon için basit, hızlı bir evreleme yöntemi ile optimize edilmiş bir protokol tarif ediyoruz. Enjeksiyon sonrası analizler, akış sitometrisi ile ksenotransplante edilen hücrelerin sağkalımını ve hastalık yükünün değerlendirilmesini içerir.

Şeffaf Zebra Balığı Embriyolarında Tümör Ksenotransplantasyon Analizi için Basit, Hızlı ve Etkili Bir Yöntem

Keşfedin, MYCN ve LMO1 genlerinin aşırı ifadesiyle geliştirilen zebra balığı modelinde nöroblastom metastazının canlı görüntülenmesini. Bu yöntem, tümör yayılımını gerçek zamanlı izleyerek metastaz mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Nöroblastom Metastaz Zebra Balığı Modeli

Daha fazla video keşfet