Name: Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Keşfedin, farelerde perikardı koruyarak miyokard infarktüsü modellemesi yapma yöntemini. Bu teknik, kalp iyileşmesinde perikardial boşluğun rolünü değerlendirmeye ve yeni tedavi stratejileri geliştirmeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu deneyler için 8-14 haftalık erkek ve dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Bu protokol, Calgary Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi'nden etik onay almıştır ve tüm hayvan bakım kurallarına uymaktadır.
1. Fare hazırlığı ve ameliyatı
<ol><li>Cerrahi aletleri sterilize edin (boncuk sterilizatörü veya otoklav yoluyla).</li>
	<li>Ameliyat öncesi ağırlık ve analjezik doz için fareyi tartın.</li>
	<li>Fareyi% 4 izofluran ve 800 mL / dak oksijen içeren bir indüksiyon kutusuna yerleştirin. Ayak parmaklarını sıkıştırarak ve hayvanı refleks eksikliği açısından gözlemleyerek anestezi düzlemini onaylayın.</li>
	<li>Analjezik subkutan olarak enjekte edin (0.1 mg / kg Buprenorfin) (bakınız Malzeme Tablosu).</li>
	<li>Ameliyat sırasında fareyi ısıtılmış bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin ve burun konisi yoluyla verilen% 3 izofluran ile anesteziyi sürdürün. Her göze kuru gözlerden kaçınmak için oftalmik merhem uygulayın.</li>
	<li>Göğüs ve boyun cerrahi bölgelerindeki saçları tıraş edin.</li>
	<li>Farenin pençelerini kısıtlayın ve ameliyat masasına yerleştirin.</li>
	<li>Ağız ve farenks yoluyla trakeaya pürüzsüz uçlu 23 G kateter yerleştirerek fareyi entübe edin.<ol><li>Entübasyonu takiben fareyi, 110 nefes/dak hızında, 250 μL'lik bir gelgit hacminde ve 4 mmHg'lik pozitif ekspiratuar basınç (PEEP) olarak ayarlanmış ticari bir Vantilatör ( Malzeme Tablosuna bakınız) kullanarak taşıyıcı gaz olarak %2 izofluran ve %100 oksijen ile havalandırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ameliyat için göğsün sol tarafını konumlandırmak için fareyi% 30 sağ tarafına yuvarlayın.</li>
	<li>Cerrahi bölgeyi dairesel bir hareketle% 70 etanol ve betadin içeren 3 alternatif ovma ile temizleyin(bkz. Steril cerrahi örtüleri cerrahi alanın etrafına yerleştirin.</li>
	<li>Sol taraftaki pektoralis kaslarını görselleştirmek için göğüs derisinde 2-3 cm'lik bir yanal kesi yapın. Üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki interkostal kasları görselleştirmek için orta hattan dışa doğru 1 cm'lik bir kesi kullanarak pektoralis majör ve minörünü kesin. NOT: Kanayan damarların koterizasyonu yoluyla pektoralis kasından aşırı kanamayı önlemek için özen gösterilmelidir.</li>
	<li>Kalbin ve akciğerlerin cerrahi kesiden uzaklaşmasına izin vermek için göğüs boşluğuna hava (pasif hava hareketi ile) sokmak için sol interkostal kasta 2 cm'lik bir kesi yapın. Ayrıca, interkostal kesip kanamayı önlemek için bir koter cihazı yardımıyla açıklığı genişletin (bakınız Malzeme Tablosu) NOT: Oksijenle patlayıcı reaksiyonları önlemek için koterizasyon döneminde ventilatör geçici olarak durdurulmalıdır. Perikardiyal keseye zarar vermemeye özen gösterilir.</li>
	<li>Retraktörleri kullanarak, kalbi açığa çıkarmak için kaburgaları geri çekin.</li>
	<li>Perikardın ve altta yatan kalbin stereomikroskop altında gözlemlenmesini sağlayın. NOT: Fare perikardi, kalbin vaskülatürünü görselleştirmek için yeterince incedir.</li>
	<li>Hareketini ve altta yatan kalbin hareketini azaltmak için perikardın yüzeyine nazikçe forseps yerleştirin.</li>
	<li>Sol ön inen (LAD) koroner arteri, sol uzantının altından çıkışını izleyerek görsel olarak işaret eder.</li>
	<li>Mikro iğne sürücüsünü kullanarak, LAD ve perikardın diğer tarafında ortaya çıkan sütür ile LAD'nin altındaki perikard boyunca uygun bir sütürü ( Malzeme Tablosuna bakınız) yönlendirin. Koroner arterden kan akışını kısıtlamak için sütürü bağlayın ve fazla sütürü makas yardımıyla kesin (Şekil 1A). NOT: Koroner artere kan akışını kısıtladıktan sonra, sol ventrikülün ön kısmının ağartılması görünür olmalıdır. Bu prosedür kalıcı bir ligasyon modelini temsil eder. Ancak bu aşamada farklı iskemi dönemlerine sahip geçici bir ligasyon yaklaşımı da uygulanabilir.</li>
	<li>Steril bölgedeki kesi yerinin altında, göğsün içine perkütan olarak 24 G'lık bir kateter sürün (göğüs boşluğuna girdikten sonra kılavuz iğneyi çıkarın). Daha sonra, kaburgaları ve ardından kas katmanlarını ve cildi uygun bir dikiş (kas için konik bir iğne, cilt için geleneksel kesme iğnesi) kullanarak kapatın.</li>
	<li>Göğüs kapandıktan sonra, kalan havayı göğüs boşluğundan 24 G kateter aracılığıyla 3 mL'lik bir şırınga ve göğüs kompresyonları ile nazik bir emme kullanarak boşaltın. Hava çıkarıldıktan sonra, 24 G kateteri geri çekin.</li>
	<li>İzofluranı% 1'e düşürün.</li>
	<li>Farenin anesteziden kurtulmasını sağlamak için oksijenle havalandırmayı sürdürürken izofluranı kapatın. Hayvan bağımsız olarak nefes alma belirtileri gösterdiğinde, 23 G trakea tüpünü ağızdan çıkarın ve fareyi normal solunumun yeniden başlaması için izlenecek bir kurtarma kafesine yerleştirin.</li>
	<li>Harici bir ısı kaynağı sağlamak için kafesin bir kısmı bir ısıtma pedine yerleştirilerek farenin kafeste iyileşmesine izin verin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası 72 saat boyunca her 12 saatte bir analjezik (Buprenorfin 0.1 mg / kg, deri altından) bakım enjeksiyonları sağlayın.</li>
	<li>Farelerin sağlık durumunu 7 gün boyunca günlük olarak izleyin, bu da insizyonları ve hayvan rahatsızlıklarını değerlendirmeyi içerir. NOT: Bu prosedürün invazivliği nedeniyle (torakotomi), antibiyotik uygulaması gerekli olabilir.</li>
</ol>2. Ekokardiyografi (EKG) ile kardiyak fonksiyonun fonksiyonel değerlendirilmesi
<ol><li>Fareyi genel anestezi altında %1.5-2 izofluran ve 800 mL/dk oksijen ile indükleyin ve bakımını yapın.</li>
	<li>Fareyi ısıtılmış bir sahne platformunda sırtüstü konuma getirin ve pençeleri EKG uçlarına takın.</li>
	<li>Farenin göğsünü tıraş edin.</li>
	<li>40 MHz lineer transdüser probu ve temas jeli kullanarak ekokardiyografi görüntüleri elde edin ve uygun yazılımla analiz edin (bkz.</li>
	<li>İzofluranı kapatın ve kafesi aktif bir duruma döndürmeden önce farenin ısıtma platformunda iyileşmesine izin verin. NOT: Ekokardiyografi değerlendirmesi non-invazivdir ve bu nedenle koroner ligasyon öncesi ve sonrası değişiklikleri belirlemek için deney boyunca uzunlamasına yapılabilir.</li>
</ol>3. Fibroz boyama için kalp dokusu toplama
<ol><li>Fareleri% 100 CO2 soluyarak feda edin ve kalbi dikkatlice diseke edin. NOT: Makas ve forseps kullanılarak bu, torasik boşluktaki dolaşım sisteminden serbest bırakmak için kalbe giren (vena kava, pulmoner ven) ve çıkan (pulmoner arter, aort) büyük damarların kesilmesiyle elde edilir.</li>
	<li>Kalbi en az 24 saat boyunca% 10 formalin'de sabitleyin.</li>
	<li>Sağ ventrikül, interventriküler septum ve sol ventrikülden düz bir tıraş bıçağı kullanarak örnekleri kesin ve insizyonun enfarktüs bölgesinin merkezinden geçmesini sağlayın. Numuneler daha sonra parafin gömme için çekirdek tesise gönderilir.</li>
	<li>5 μm kalınlığındaki doku kesitlerini bir mikrotomla kesin ve boyama için cam slaytlara yerleştirin.</li>
	<li>Ticari ksilen ve derecelendirilmiş alkol kullanarak deparafinize deparinize deiyonize su ile yıkayın (2x 99%, 1x95%, 1x 70%) ve daha sonra rehidrat.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 2 saat boyunca pikrik asit içinde% 0.1 Sirius kırmızısı ile leke.</li>
	<li>Bölümleri 3 dakika boyunca %0,5 asetik asitle yıkayın ve 1 dakika boyunca %70 etanol ile durulayın.</li>
	<li>3.4'te belirtilen ters yıkama sırasını kullanarak bölümleri kurutun, artan ve derecelendirilmiş etanol konsantrasyonları ve ardından ksilen.</li>
	<li>Mikroskobik değerlendirme için doku kesitlerini bir montaj çözeltisi ile monte edin (bkz.</li>
</ol>4. Kalp ve perikardiyal kavite lavajının akış sitometrisi
<ol><li>Fareleri% 100 CO2 inhalasyonu ile feda edin.</li>
	<li>Fareyi sırtına yerleştirin ve kolları ve bacakları bant kullanarak bir cerrahi tahtaya sabitleyin.</li>
	<li>Göğüs boşluğunun sol tarafını (deneyci görüşünden sağ taraf) dikkatlice açın, diyaframı yaklaşık orta noktaya kadar keserek başlayın ve daha sonra dış kaburgaları sternuma doğru kesin. NOT: Büyük kan damarlarını, özellikle sternuma paralel olarak çalışanları çentiklemekten kaçının.</li>
	<li>Altta yatan kalbi ve perikardı açığa çıkarmak için bir hemostat kullanarak kaburgaları geri çekin. NOT: Perikard çok kırılgandır, bu nedenle kesim sırasında makasla yakalamadığınızdan emin olun.</li>
	<li>Sol atriyum ve sol ventrikülün birleşme noktasına yakın perikardiyal boşluğa yerleştirilen bir PE-10 tüp ( bakınız Malzeme Tablosu) kateter kullanarak, perikardiyal boşluğa 100 μL steril salin enjekte edin.<ol><li>Tuzlu suyun kalbin arka tarafından birikmesine ve toplanmasına izin verin, işlem sırasında perikardın delinmemesine veya yırtılmamasına dikkat edin. Bu adımı iki kez tekrarlayın ve kalbi işlerken lavaj sıvısını buzun üzerine yerleştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Kalbe giren ve çıkan ana damarları (aort, pulmoner arter, ven ve vena kava) keserek kalbi tüketin. Sağ ve sol atriyumu çıkarın ve ventriküler kalp dokusunu tartın.</li>
	<li>Makas kullanarak dokuyu küçük 1mm2 parçalar halinde doğrayın ve 450 U/mL kollajenaz I, 125 U/mL kollajenaz XI, 60 U/mL DNaz I ve PBS'de 60 U/mL hyaluronidaz içeren 10 mL sindirim tamponuna orbital çalkalayıcı üzerinde 37 °C'de 1 saat boyunca yerleştirin.</li>
	<li>Kalp dokusu homojenlerini 70 μm'lik bir hücre süzgecinden geçirin (Malzeme Tablosuna bakınız) ve kardiyak parankimal hücreleri çıkarmak için 4 ° C'de 5 dakika boyunca 60 x g'de aşağı doğru döndürün.</li>
	<li>Süper natantı toplayın, tek bir hücre süspansiyonu için 40 μm'lik bir hücre süzgecinden (Malzeme Tablosuna bakınız) geçin ve hücreleri peletlemek için 4 ° C'de 5 dakika boyunca 400 x g'de aşağı doğru döndürün.</li>
	<li>Daha önce tarif edildiği gibi perikardiyal ve kardiyak hücreler üzerinde hücresel belirteçlerin fragman kristalize edilebilir (Fc) reseptör blokajını ve boyanmasını gerçekleştirin8.</li>
	<li>Örnekleri bir akış sitometresinde çalıştırın.</li>
</ol>5. Perikard makrofajının plevral boşluğa interkostal yaklaşım (ICAPS) yöntemi kullanılarak etiketlenmesi9
<ol><li>Cerrahi aletleri sterilize edin (boncuk sterilizatörü veya otoklav yoluyla) ve başlamadan önce% 70 etanol püskürtün.</li>
	<li>Fareyi genel anestezi altında %1.5-2 izofluran ve 800 mL/dk oksijen ile indükleyin ve bakımını yapın. Ayak parmaklarını sıkıştırarak ve hayvanı refleks eksikliği açısından gözlemleyerek anestezi düzlemini onaylayın.</li>
	<li>Analjezik subkutan olarak enjekte edilir (Buprenorfin 0.1 mg / Kg).</li>
	<li>Ameliyat sırasında fareyi ısıtılmış bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Sağ anterolateral torasik bölgeyi tıraş edin.</li>
	<li>Cerrahi bölgeyi etanol ve betadin ile temizleyin.</li>
	<li>Deride 3 cm uzunluğunda bir kesi yapın ve forseps ile göğüs kafesini açığa çıkarın.</li>
	<li>5 μL floresan boncuk (ticari olarak temin edilebilen floresan mikrosferler, 1 μm, bakınız Malzeme Tablosu) ve 45 μL salin, eğimli uçlu bir PE-10 tüp şırınga kateterine yükleyin.</li>
	<li>Kateteri daha önce tarif edildiği gibi interkostal boşluğa yönlendirin9, boncuk çözeltisini yavaşça enjekte edin ve kateteri tek bir hareketle çıkarın.</li>
	<li>Zımbaları kullanarak cildi kapatın. NOT: Kesinin potansiyel olarak yeniden açılmasını en aza indirmek için dikiş yerine zımbalar kullanılır.</li>
	<li>İzofluranı kapatın, fareyi kurtarma kafesine yerleştirin ve ilk 24 saat boyunca komplikasyonları izleyin.</li>
</ol>

<ol><li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update%3A+A+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141, 139(2020).</li>
<li>Iismaa, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+regenerative+mechanisms+across+different+mammalian+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues.</a> NPJ Regenerative Medicine. 3 (6), eCollection 2018 (2018).</li>
<li>Bayat, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+heart+failure+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Progressive heart failure after myocardial infarction in mice.</a> Basic Research in Cardiology. 97 (3), 206-213 (2002).</li>
<li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. 52, 2581(2011).</li>
<li>De Villiers, C., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+myocardial+infarction%3A+comparing+permanent+ligation+and+ischaemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mouse models of myocardial infarction: comparing permanent ligation and ischaemia-reperfusion.</a> Disease Models & Mechanisms. 13 (11), (2020).</li>
<li>Borlaug, B. A., Reddy, Y. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+pericardium+in+heart+failure%3A+Implications+for+pathophysiology+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">The role of the pericardium in heart failure: Implications for pathophysiology and treatment.</a> JACC Heart Failure. 7 (7), 574-585 (2019).</li>
<li>Pfaller, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+pericardium+for+cardiac+biomechanics%3A+from+physiology+to+computational+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">The importance of the pericardium for cardiac biomechanics: from physiology to computational modeling.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 18 (2), 503-529 (2019).</li>
<li>Deniset, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gata6%28%2B%29+Pericardial+Cavity+Macrophages+Relocate+to+the+Injured+Heart+and+Prevent+Cardiac+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Gata6(+) Pericardial Cavity Macrophages Relocate to the Injured Heart and Prevent Cardiac Fibrosis.</a> Immunity. 51 (1), 131-140 (2019).</li>
<li>Weber, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+targeting+of+the+pleural+space+by+intercostal+approach%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pulmonary+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune targeting of the pleural space by intercostal approach.</a> BMC Pulmonary Medicine. 15, 14(2015).</li>
<li>Nakatani, T., Shinohara, H., Fukuo, Y., Morisawa, S., Matsuda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardium+of+rodents%3A+pores+connect+the+pericardial+and+pleural+cavities%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Pericardium of rodents: pores connect the pericardial and pleural cavities.</a> The Anatomical Record. 220, 132-137 (1988).</li>
<li>Tyberg, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+pericardial+pressure+and+right+atrial+pressure%3A+an+intraoperative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The relationship between pericardial pressure and right atrial pressure: an intraoperative study.</a> Circulation. 73, 428-432 (1986).</li>
<li>Hamilton, D. R., Sas, R., Semlacher, R. A., Kieser Prieur, T. M., Tyberg, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+left+and+right+pericardial+pressures+in+humans%3A+an+intraoperative+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Canadian+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The relationship between left and right pericardial pressures in humans: an intraoperative study.</a> The Canadian Journal of Cardiology. 27, 346-350 (2011).</li>
<li>Park, D. S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pericardial+proteoglycan+4+%28lubricin%29%3A+Implications+for+postcardiotomy+intrathoracic+adhesion+formation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Human pericardial proteoglycan 4 (lubricin): Implications for postcardiotomy intrathoracic adhesion formation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 156 (4), 1598-1608 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklanacak herhangi bir çatışması yoktur.

Kemirgenlerde kapalı bir perikardda bir MI'yi indüklemek benzersizdir ve potansiyel olarak önemli uygulamalara sahip olabilir. Prosedür, cerrahın kemirgen modeline ve kemirgen kalp anatomisine aşinalığına büyük ölçüde dayanır. Başarı aynı zamanda üç kritik adımda verilen bakıma da bağlıdır: interkostal kas insizyonu ve kaburga retraksiyonu (Adım 1.11-1.13), enfarktüsün oluşturulması (Adım 1.17) ve hayvan iyileşmesi (Adım 1.22-1.24).
Torakotomi, perikardın delinmesini veya yırtılmasını önlemek ...

Bugüne kadar, kardiyovasküler hastalık (KVH) dünya çapında önde gelen ölüm nedeni olarak kabul edilmekte ve bu da önemli bir mali yüke ve hastanın yaşam kalitesinde azalmaya neden olmaktadır1. Koroner arter hastalığı (KAH), KVH'nin bir alt tipidir ve mortaliteye başlıca katkıda bulunan miyokard enfarktüsünün (MI) gelişiminde önemli bir rol oynar. Tanım olarak, MI, uzun süreli iskemi ve hipoksi koşullarına bağlı olarak miyokard dokusunda geri dönüşümsüz yaralanmadan kaynaklanır. Miyokard dokusu rejenerasyon kapasitesinden yoksundur, bu nedenle yaralanmalar kalıcıdır ve kalp kasının başlangıçta koruyucu olabilen fibrotik bir yara izi ile değiştirilmesine neden olur, ancak sonuçta olumsuz kardiyak yeniden yapılanmaya ve nihai kalp yetmezliğine katkıda bulunur2.
KAH hastalarının yönetimi son birkaç on yılda dramatik bir şekilde iyileşmiş olsa da, iskemiye sekonder kronik kalp yetmezliği (CHF) dünya çapında birçok hastayı etkilemektedir. Bu salgının önlenmesi ve yönetilmesi için altta yatan mekanizmaların daha kapsamlı anlaşılması ve yeni tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesi gerekmektedir. Ayrıca, geçmiş bulgular sistemik tedavinin sınırlılıklarını ve kesin alternatiflerin geliştirilmesinin gerekliliğini vurgulamaktadır. İnsanlarda MI'nin moleküler sekellerinin araştırılmasının enfarktüs dokusuna erişme yeteneğinden etkilendiği göz önüne alındığında, insan MI ve CHF'nin KVH ile ilgili özelliklerini ve gelişimini özetleyen hayvan modelleri vazgeçilmezdir.
İdeal hayvan modelleri, yapısal ve fonksiyonel özellikler açısından bir insan bozukluğuna çok benzediğinden, hastalık etiyolojisi anlayışlarına rehberlik etmelidir. KAH'da koroner arterlerin kronik aterosklerotik darlığı veya akut trombotik tıkanıklıktır. Koroner arter daralması veya tıkanmasını indüklemek için çeşitli laboratuvar hayvanı türlerinde farklı yöntemler geliştirilmiş ve uygulanmıştır. Bu tür stratejiler genel olarak iki gruba ayrılabilir: (1) bir MI'yi indüklemek için bir koroner arterin mekanik manipülasyonu ve (2) bir MI'ye yol açan koroner daralmayı kolaylaştırmak için aterosklerozun hızlandırılması. İlk strateji genellikle bir koroner arterin bağlanmasını veya arter içine bir stent yerleştirilmesini içerir. İkinci yaklaşım, hayvanın diyetini yüksek yağlı / kolesterollü yiyecekleri içerecek şekilde değiştirmeye dayanma eğilimindedir. Bu ikinci yaklaşımın sınırlamalarından bazıları, koroner oklüzyonların zamanlaması ve yeri üzerinde kontrol eksikliğini içerir.
Buna karşılık, bir hayvan modelinde MI veya iskeminin cerrahi indüksiyonu, daha tekrarlanabilir sonuçlara yol açan konum, kesin zamanlama ve koroner olayın kapsamı gibi çeşitli avantajlara sahiptir. En sık kullanılan yöntem sol ön inen koroner arterin (LAD) cerrahi ligasyonudur. Bu tür modeller, akut iskemik hasara karşı insan tepkilerini ve CHF3'e ilerlemeyi özetlemektedir. Başlangıçta daha büyük hayvanlarda geliştirilen LAD ameliyatı, kemirgenler gibi küçük hayvanlar üzerinde teknolojideki ilerlemelerle daha uygulanabilir hale gelmiştir4. Bu tür modellerin oluşturulmasında, fareler göreceli mevcudiyetleri, konuttaki düşük masrafları ve genetik manipülasyon kapasiteleri de dahil olmak üzere çeşitli nedenlerle tercih edilmiştir.
LAD oklüzyonu kullanan iskemik kalp hastalığının çağdaş cerrahi modelleri, araştırmacının arteri geçici veya kalıcı olarak bağlamak için perikardın açılmasını gerektirir5. Bu tür stratejiler, uygun kalp fonksiyonunu sağlamak için esasen mekanik ve yağlama fonksiyonu oynayan perikardiyal boşluğun bozulmasına neden olur. Perikardın açılmasının bir diğer dezavantajı, hayvanın doğal perikardiyal sıvısını çeşitli hücresel ve protein bileşenleri ile kaybetmektir 6,7. Buna cevaben, perikardı sağlam tutarken MI'yi indüklemek için bir yöntem tarafımızdan geliştirilmiştir. Bu homeostatik ortamın bozulmasını en aza indirmenin yanı sıra, bu yaklaşım bir MI'ye neden olduktan sonra belirli hücrelerin etiketlenmesine ve izlenmesine izin verir. Ek olarak, bu yaklaşım insan ortamında miyokard iskemik hasarını daha iyi temsil eder.

<table><tbody><tr><td>Steri-350 Boncuk Sterilizatörü</td><td>Inotech</td><td>NC9449759</td><td></td></tr><tr><td>%10 Formalin</td><td>Millipore Sigma</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>40 & mikro; m Hücre süzgeci</td><td>VWR</td><td>CA21008-949</td><td>Falcon, 352340</td></tr><tr><td>70 & mikro; m Hücre süzgeci</td><td>VWR</td><td>CA21008-952</td><td>Falcon, 352350</td></tr><tr><td>ACK Lizis Tamponu</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-W Kateter İğnesi 24 G X 3/4 "</td><td>CDMV Inc</td><td>108778</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (% 10 povidon-iyot topikal çözeltisi)</td><td>CDMV Inc</td><td>104826</td><td></td></tr><tr><td>Künt Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 11000-12</td><td></td></tr><tr><td>BNP Oftalmik Merhem</td><td>CDMV Inc</td><td>17909</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo İğne Sürücüsü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 12061-01</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625101</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz I</td><td>Millipore Sigma</td><td>SCR103</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz XI</td><td>Millipore Sigma</td><td>C7657</td><td></td></tr><tr><td>Covidien 5-0 Polisorb Sütür - CV-11 konik iğne</td><td>Medtronic Canada</td><td>GL-890</td><td></td></tr><tr><td>Covidien 5-0 Polisorb Sütür - PC-13 kesme iğnesi</td><td>Medtronic Canada</td><td>SL-1659</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Künt Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 11009-13</td><td></td></tr><tr><td>Dako Montaj Ortamı</td><td>Agilen</td><td>CS70330-2</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Milipore Sigma</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, %100</td> <td>Millipor Sigma</td><td>MFCD00003568</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon 8-0 Ethilon Sütür - BV-130-4 konik iğne</td><td>Johnson & Johnson Inc.</td><td>2815G</td><td></td></tr><tr><td>Fiber Optik Işık</td><td>Nikon</td><td>2208502</td><td></td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 11150-10</td><td></td></tr><tr><td>Floresbrit&reg; YG Karboksilat Mikro Küreler 1.00 ve mikro; m</td><td>Polibilimler A.Ş.</td><td>15702</td><td></td></tr><tr><td>Geiger Termal Koter Ünitesi</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501293</td><td>Model 150-ST</td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Millipore Sigma</td><td>H4272</td><td></td></tr><tr><td>İzofloran Buharlaştırıcı</td><td>Harvard Cihazı</td><td>75-0951</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran USP, 250 mL</td><td>CDMV Inc</td><td>108737</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Fiksatör Geri Çekme Sistemi</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>MX550D- 40 MHz prob</td><td>Fujifilm- Görsel Sonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İğne Sürücüsü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 12002-12</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 Boru</td><td>Braintree Scienctific, Inc.</td><td>PE10 50 FT</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>FST 14184-09</td><td></td></tr><tr><td>SMZ-1B Stereo Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ1-PS</td><td></td></tr><tr><td>VentElite Küçük Hayvan Vantilatörü</td><td>Harvard Aparatı</td><td>55-7040</td><td></td></tr><tr><td>Veterjezik (10 mL, 0.3mg/mL buprenorfin))</td><td>CDMV Inc</td><td>124918</td><td>kontrollü ilaç</td></tr><tr><td>Vevo 2100 Yazılım</td><td>Fujifilm-Visual Sonics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bozulmamış bir perikard İskemik kemirgen modeli

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

Bu protokol, perikardın ve içeriğinin iskemik kemirgen modelinde (miyokard hasarını indüklemek için koroner ligasyon) önemli bir anti-fibrotik rol oynadığını göstermiştir. Klinik öncesi miyokard enfarktüsü modellerinin çoğu, homeostatik hücresel ortamın kaybıyla perikardiyal bütünlüğün bozulmasını gerektirir. Bununla birlikte, son zamanlarda, perikardiyal hasarı en aza indiren ve kalbin yerleşik bağışıklık hücresi popülasyonunu koruyan miyokard enfarktüsünü indüklemek için tarafımızdan bir metodoloji geliştirilmiştir. Koroner ligasyonu takiben sağlam bir perikardiyal boşluğa sahip farelerde iyileşmiş bir kardiyak fonksiyonel iyileşme gözlenmiştir. Bu yöntem, miyokard enfarktüsünü takiben perikardiyal boşluktaki enflamatuar yanıtları incelemek için bir fırsat sağlar. Etiketleme tekniklerinin daha da geliştirilmesi, fibroz da dahil olmak üzere kalpte yeniden şekillenmeyi sağlayan enflamatuar mekanizmaların düzenlenmesinde perikardiyal bağışıklık hücrelerinin kaderini ve işlevini anlamak için bu modelle birleştirilebilir.

Bu modifiye koroner ligasyon modeli, tekrarlanabilirlik ve hayvan hayatta kalma sağlamak için optimize edilmiştir. Bununla birlikte, kalpte indüklenen önemli yaralanma nedeniyle, beklenen bazı intraoperatif ve postoperatif mortalite prosedürle ilişkilidir. Standart mortalite tipik olarak erkeklerde (~% 25-35) kadınlardan (~% 10-15) daha yüksektir.
Bir MI'nin modifiye koroner ligasyon ile başarılı bir şekilde indüklenmesi, kalbin fonksiyonel parametrelerindeki ve yapısal özelliklerindeki değişi...

Bu protokol, perikard ve içeriğini korurken farelerde miyokard enfarktüsünü indükleme adımlarını özetlemektedir.

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

Bu yöntem, miyokard enfarktüsünü takiben kalbi çevreleyen perikardiyal boşluğun ve içeriğinin kardiyak onarımdaki rolünü değerlendirmemizi sağlayacaktır. Miyokard enfarktüsünün modellenmesi için geleneksel koroner ligasyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, yöntemimiz sağlam bir perikardiyal boşluğu koruyarak içeriğin belirlenmesine izin verir ve kardiyak iskemik hasarı takiben rollerini izler. Perikard boşluğunun ve kalbin yaralanma yanıtının katkısını anlamak, kalp iyileşmesini iyileştirmek için perikardı hedef alan terapötik stratejiler hakkında önemli bilgiler sağlayacaktır.Anestezi sonrası başlamak için, farenin pençelerini kısıtlayın ve ameliyat masasına yerleştirin. Fareyi makalede açıklandığı gibi ameliyat için hazırladıktan sonra, ticari bir ventilatör kullanarak fareyi% 2 izofluran ve% 100 oksijen taşıyıcı gaz olarak havalandırın. Daha sonra dakikada 110 nefeslik bir hız, 250 mikrolitrelik bir gelgit hacmi ve dört milimetre cıva pozitif bir ekspiratuar basınç ayarlayın.Ameliyat için göğsün sol tarafını konumlandırmak için fareyi sağ tarafında% 30 yuvarlayın. Daha sonra sol taraftaki pektoralis kaslarını görselleştirmek için göğüs derisinde iki ila üç santimetrelik bir yanal kesi yapın. Pektoralis majör ve minör kesmek için orta hattan dışa doğru bir santimetre kesi yapın.Kanayan damarların koterizasyonu boyunca aşırı kanamadan kaçının. Üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki interkostal kasları görselleştirin. Göğüs boşluğuna hava vermek ve kalbin ve akciğerlerin insizyondan düşmesine izin vermek için sol interkostal kasta iki santimetrelik bir kesi yapın.İnterkostalı kanamadan kesmek için, ventilatörü geçici olarak durdurun ve bir koter cihazı kullanarak açıklığı genişletin. Retraktörleri kullanarak, kalbi açığa çıkarmak için kaburgaları geri çekin. Daha sonra perikardi ve altta yatan kalbi stereo mikroskop altında gözlemleyin.Perikardın ve altta yatan kalp hareketini azaltmak için forsepsleri perikard yüzeyine yavaşça yerleştirin. Sol uzantının altındaki ortaya çıkışını izleyerek LAD koroner arterini görsel olarak işaretleyin. Mikroiğne sürücüsünü kullanarak, LAD altındaki perikarddan uygun bir sütür geçirin.LAD ve perikardın diğer tarafında ortaya çıkan dikişi gözlemleyin. Kalıcı ligasyon modelini temsil ederek, koroner arterden kan akışını kısıtlamak için dikişi bağlayın ve sol ventrikülün ön kısmının beyazlatılmasını görünür hale getirin. Daha sonra fazla sütürü makas yardımıyla kesin.Ameliyat sonrası 72 saat boyunca her 12 saatte bir deri altından analjezik bakım enjeksiyonları sağlayın. İzofluranı% 1'e indirgedikten sonra, havalandırmayı oksijenle korurken izofluranı kapatın. Hayvan nefes alma belirtileri gösterdiğinde, 23 gauge trakea tüpünü ağızdan çıkarın ve solunumun yeniden başlamasını izlemek için fareyi bir kurtarma kafesine yerleştirin.Harici bir ısı kaynağı sağlamak için kafesin bir kısmı bir ısıtma pedine yerleştirilerek farenin kafeste iyileşmesine izin verin. Kesiler ve hayvan rahatsızlıklarını değerlendirerek farenin sağlık durumunu yedi gün boyunca günlük olarak izleyin. Gerekirse, invaziv cerrahiyi takiben başarılı bir iyileşme için antibiyotik uygulayın.Fareyi genel anestezi altında oksijenle tuttuktan sonra, fareyi ısıtılmış bir sahne platformunda sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve pençeleri EKG uçlarına takın. Sonra göğsü kovalayın. Transdüser probu ve temas jeli kullanarak EKG görüntüleri elde edin ve uygun yazılımla analiz edin.Noninvaziv EKG değerlendirmesinden sonra, izofluranı kapatın ve fareyi kafese geri getirin. Kalbi en az 24 saat boyunca% 10 formalin içinde sabitleyin. Numuneyi sağ ventrikül, interventriküler septum ve sol ventrikülden düz bir tıraş bıçağı kullanarak kesin ve insizyonun enfarktüs bölgesinin merkezinden geçmesini sağlayın.Ve sonra parafin doku örneklerini gömer. Kesilen bölümler daha sonra daha fazla parafin gömmek ve daha sonra beş mikrometre kalınlığında bölümlere ayırmak için montaj kasetine yerleştirilir. Doku kesitlerinin slaytlara yerleştirilmesini takiben, toluen ve derecelendirilmiş alkol kullanarak deparafinize deiyonize su ile yıkanır.Sonra rehidratlayın. Daha sonra, bölümü oda sıcaklığında iki saat boyunca pikrik asitte% 0.1sirius kırmızısı ile lekeleyin. Bölümü üç dakika boyunca% 0.5 asetik asit ile yıkayın, ardından bir dakika boyunca% 70 etanol ile durulayın.Mikroskobik değerlendirme için monte edilmeden önce artan ve derecelendirilmiş etanol konsantrasyonlarına sahip yıkamaların ters sırasını kullanarak bölümü kurutun. Modifiye koroner ligasyon ile başarılı miyokard infarktüsü indüksiyonu, kalbin fonksiyonel parametreleri ve yapısal özellikleri incelenerek değerlendirildi. Fonksiyon açısından, azalmış sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonu, miyokard enfarktüsünden sonraki üç ila dört hafta içinde ekokardiyografi ile değerlendirildi.Histolojik boyama, fonksiyonel değişikliklere sol ventrikül duvarının belirgin fibrozisinin eşlik ettiğini gösterdi; bunlar, enfarktüsten dört hafta sonra kalbin enine kesitlerindeki pikrosirius kırmızı boyalı fibrozisin bozulmuş veya bozulmamış perikardiyal koroner ligasyon modelleriyle nicelleştirilmesiyle daha da doğrulandı. Floresan boncuk etiketleme yönteminin akış sitometrisi analizi ile birleştirilmesi, yerleşik Gata6 pozitif perikardiyal makrofajların izlenmesi için bir yaklaşım sağlamıştır. Daha da önemlisi, kalpte veya kanda çok az veya hiç etiketleme tespit edilmedi.Miyokard enfarktüsünü takiben, hücrelerin yer değiştirmesi akım sitometrisi ve görüntüleme ile izlenebilir. Miyokard enfarktüsü olan veya olmayan perikardiyal miyeloid hücrelerin floresan boncuk etiketli miktarının belirlenmesi gösterilmiştir. İşlem sırasında ince perikardın yanlışlıkla bozulmasını veya yırtılmasını önlemek için özen gösterilmelidir.Bu yöntem, perikardiyal bileşenin enfarktüslü kalpteki iyileşme yanıtı üzerindeki etkisinin izlenmesine ve belirlenmesine izin verecek olan hücresel veya efektör blokajı izleyen soy izleme ile birleştirilebilir. Perikard boşluğunun, kısmen yerleşik perikardiyal makrofajların aracılık ettiği yaralanma sonrası kalbi koruduğunu belirledik. Bu yaklaşım, kardiyovasküler hastalıklar için yeni bir araştırma alanı açmaktadır.

an-intact-pericardium-ischemic-rodent-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Akut miyokard infarktüsü (AMI) sıçan modelinde kalp patofizyolojik ve fizyolojik fonksiyonu MI sonucu incelemek için yararlıdır.

Sıçanlarda Akut Miyokard Enfarktüsü

Cerrahi travma inflamatuvar yanıt indükler. Sitokinler ve endojen ligand iskemi ve reperfüzyon sonrası miyokard infarkt modüle bilinmektedir. Biz torakotomi etkilerini en aza indirmek için asılı ağırlıklar kullanılarak murin iskemi ve reperfüzyon değiştirilmiş bir kapalı göğüs modeli sunuyoruz.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Bu protokolün amacı, kemirgenlerde iskemik kardiyoplejik arresti takiben miyokardiyal sersemlemeyi değerlendirmektir.

Kardiyoplejik Tutuklanma ile Miyokard Çarpıcı İlişkili sıçan İzole Kalp Modeli

İzole çalışan kalp modelleri, yükleme koşullarının, kalp atış hızının ve ilaçların miyokard performansı ve oksijen tüketimi üzerindeki etkisini ölçmek için kullanılabilir. Çeşitli koşullar altında sistolik ve diyastolik performans ve oksijen tüketiminin incelenmesine izin veren bir kemirgen sol kalp çalışma modelinin hazırlanması için yöntemleri açıklıyoruz.

Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Murin miyokard iskemisi/reperfüzyon cerrahisi sırasında, tıkayıcı ligatür doğru yerleşimi tipik olarak miyokardiyal solgunluğun gözle görülür şekilde izlenmesi ile doğrulanır. Burada, gözlenen miyokardiyal solgunluğu desteklemek için iskemi ve reperfüzyonu elektrokardiyografik olarak doğrulayan bir yöntem, erkek C57Bl / 6 farelerinde gösterilmiştir.

Yüzey Pad Elektrokardiyografi kullanılması Farelerde Miyokard İskemi ve Reperfüzyon Hasarı Onayı

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu makalede, minimal invaziv bir yaklaşım kullanarak sıçanlarda miyokardiyal iskemi ve sonraki kronik reperfüzyon gerçekleştirmek için etkili bir yöntem sunar. Ayrıca sıçanların sol ventrikül hemodinamik fonksiyonu ekokardiyografi ve izole çalışma kalp yöntemleri ile değerlendirilmektedir.

Sıçanlarda Miyokard İnfarktüsü İndükleyen Yarı-Minimal İnvaziv Yöntem ve İzole Çalışan Kalp Sistemi Ile Kardiyak Fonksiyonun Değerlendirilmesi

Sıçan kalbinin miyokard iskemi-reperfüzyon modeli, kendi kendine yapılan bir retraktör, polivinil klorür tüpü ve benzersiz bir düğümleme yöntemi kullanılarak geliştirilmiştir. Elektrokardiyogram, trifeniltetrazolyum klorür ve histolojik boyama ve yüzde sağkalım analizi sonuçları, geliştirilmiş model grubunun mevcut model grubundan daha yüksek başarı ve sağkalım oranlarına sahip olduğunu göstermiştir.

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Bu çalışma, sağkalım vakaları için sol mini torakotomi veya sağkalım dışı vakalar için orta hat sternotomi kullanan tavşanlarda akut bölgesel miyokardiyal iskemi ve reperfüzyon hasarının yüksek oranda tekrarlanabilir bir hayvan modelini göstermektedir.

Tavşanlarda İskemi ve Reperfüzyon Hasarı Modeli

Iskemik kalp yetmezliği tedavisi için gen transferi yöntemi miyokard infarktüsü domuz modeli kullanılarak açıklanmıştır. Basit ve tekrarlanabilir bir yöntem bize kolayca çeşitli gen transferlerinin etkinliğini değerlendirmek için çok basit ve tekrarlanabilir bir yol sağlar.

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Keşfedin, farelerde perikardı koruyarak miyokard infarktüsü modellemesi yapma yöntemini. Bu teknik, kalp iyileşmesinde perikardial boşluğun rolünü değerlendirmeye ve yeni tedavi stratejileri geliştirmeye olanak tanır.

Bozulmamış Bir Perikard İskemik Kemirgen Modeli

Daha fazla video keşfet