Name: Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Öğrenin, VGAT-Cre farelerinde elektriksel kindling ile temporal lob epilepsisi modeli oluşturma ve elektrot implantasyonu yöntemlerini. Bu model, nöronal hasarı en aza indirerek epileptogenez mekanizmalarını ve yeni tedavileri değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu protokol hakkındaki yararlı tartışmalar için John Williamson'a teşekkür eder. Bu çalışma NIH / NINDS hibesi NS112549 tarafından desteklenmiştir.

Hayvan kullanımı ARRIVE12 yönergelerini izledi ve Virginia Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı.
1. İki bipolar elektrotlu kulaklıklar yapmak (Şekil 1)
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62929/62929fig01.jpg"> Şekil 1: EEG kulaklık üretiminde temel adımlar. (A) Elektrotların protokoldeki çeşitli adımlarda görünmesi (sol eşleşme adımındaki sayılar). (B) Stereotaksik çerçeveye uyan ev yapımı bir tutucuya monte edilmiş nihai ürünün resmi. Tutucunun, kulaklık kaidesine uyan bir yaka pimi tertibatı ile bittiğini unutmayın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62929/62929fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol><li>3,5 cm paslanmaz politetrafloroetilen kaplı paslanmaz çelik tel kesin.</li>
	<li>İzolasyon katının yaklaşık 1 mm'sini her iki uçtaki telden çıkarın. Telin çok fazla sıyrılmasını sağlamayın.</li>
	<li>Pimin alt kısmı aşağı bakacak şekilde daha uzun bir yarığa sahip olan bir mengene tutucuya iki pim yerleştirin.</li>
	<li>Telin soyulmuş uçlarına ve pimlerin üst kısımlarına akı uygulayın.</li>
	<li>Telin soyulmuş kısmını, kaplamak için yeterli lehimle kalın.</li>
	<li>Yanlara taşmadan pimin üstüne minimum miktarda lehim ekleyin.</li>
	<li>Telin soyulmuş uçlarının bir ucunu, lehim eritirken izin verdiği kadar derin bir pime yerleştirin. NOT: Telin çıkabileceği bir yan delik vardır - telin pimden çıkmasına izin vermeyin. Soyulmuş telin tümü pim içinde kalmalıdır.</li>
	<li>İkinci pim için 1.6-1.7 arasındaki adımları tekrarlayın, şimdi telin diğer soyulmuş uçlarıyla.</li>
	<li>Pimlerin ayarlanması için 30 sn bekletin, mengene tutucusundan çıkarın ve ardından tel ile pimler arasındaki bağlantının güçlü olduğundan ve tuttuğundan emin olmak için üzerlerine çekin.</li>
	<li>Pimleri soğuk suda durulayın ve sonra kurutun.</li>
	<li>Bir ohmmetre kullanarak pim 1 ve pim 2 arasındaki iletkenliği doğrulayın.</li>
	<li>Telin uçlarındaki pimleri bir araya getirin; Onları paralel ve yakın tutun. Bir hemostatı telin merkezine kelepçeleyin. Ardından, hemostatı döndürün, böylece tel kendi etrafında oldukça sıkı bir şekilde bükülür. Hemostatı çıkarın.</li>
	<li>Pimlerin 2 mm altındaki bükülmüş tel üzerine bir forseps kelepçeleyin ve teli 90°'de bükün.</li>
	<li>Aynı teli forsepslerin üzerine tekrar 90 ° geri itin ve ilkinden 1 mm daha fazla kıvrım oluşturun.</li>
	<li>Bükülmüş teli küçük keskin makasla 3,5 mm'de virajın altında 45°'lik bir açıyla kesin.</li>
	<li>Her kulaklık için bu bipolar (çift pimli bükümlü) elektrotlardan ikisini hazırlayın (isteğe bağlı, ikincisi birincisiyle ilgili elektrik sorunları durumunda yedeklemedir).</li>
	<li>Her iki ucunda lehimlenmiş pimler bulunan bir teli ikiye bölerek tek bir referans elektrodu hazırlayın (adım 1.1-1.17, Şekil 1A).</li>
	<li>Teli 7 mm'de kesin.</li>
	<li>Ucu ucun 1 mm altına bükün.</li>
	<li>Ardından, telin bükülmüş 1 mm ucunu forseps ile örtün ve küçük bir halka (1 mm çapında) oluşturmak için teli forsepslerin etrafında sıkıca döndürün.</li>
	<li>Tel ucunun tekrar dışa bakmasını sağlamak için ilmeği telin düz kısmına dik olarak bükün.</li>
	<li>İki bipolar elektrodu ve tek referans elektrodunu, bipolar elektrotlar aralarında 6 mm mesafe olacak şekilde yan yana olacak ve referans elektrodu orta dış deliğe yerleştirilecek şekilde altı pimli kaideye monte edin (Şekil 1B). NOT: Alternatif bir yöntem, elektrotları implante etmek, yerlerine çimentolamak ve daha sonra pimlerini kaideye yerleştirmektir.</li>
</ol>2. Stereotaksik elektrot implantasyonu
<ol><li>Ameliyattan önce tüm cerrahi aletleri ve altı pimli elektrot düzeneğini otoklavlayarak sterilize edin. Ameliyat sırasında steril bir cerrahi alan bulundurulmalı ve steril cerrahi eldivenler kullanılmalıdır. Steril örtüler (örneğin, Press n' Seal) cerrahi alan dışında hayvanı örtmek için tavsiye edilir.</li>
	<li>Sütten kesildikten 4 hafta sonra ameliyatlar için 8 haftalık VGAT-Cre fareleri (yaşa uygun, hem erkek hem de dişi) kullanın. Ameliyat sonrası kilo kaybının ölçülmesine izin vermek için ameliyattan önce hayvanın ağırlığını kaydedin.</li>
	<li>Sertifikalı bir izofluran buharlaştırıcı veya hassas bir şırınga pompası, entegre dijital buharlaştırıcı ve geri beslemeli ısı yastığı ile donatılmış düşük akışlı bir anestezi sistemi kullanın. NOT: Düşük akışlı sistemler, anesteziyi, hayvanın büyüklüğüyle orantılı düşük akış hızlarında bir indüksiyon odasına veya stereotaksik çerçevedeki bir burun konisinden geçirebilir (70 mL / dak, havadaki izofluran konsantrasyonu indüksiyon için% 4 ve ameliyat için% 2'dir). Daha az anestezi kullanmak sadece ameliyatlar sırasında hayvana fayda sağlamakla kalmaz, aynı zamanda laboratuvar personelinin izoflurana maruz kalma riskini de azaltır.</li>
	<li>Anestezi uygulanan hayvanı, ameliyat sırasında sıcak tutmak için 37 ° C'ye ısıtılmış ısıtılmış bir ped üzerine yerleştirin. Geri besleme kontrollü bir sıcaklık sistemi kullanıyorsanız, hafifçe yağlanmış sıcaklık probunu ameliyat sırasında sıcaklık izleme için hayvanın rektumuna yerleştirin.</li>
	<li>Kulak çubuklarını kulaklara ve ön üst dişleri kesici uca yavaşça yerleştirerek hayvanı stereotaksik çerçeveye monte edin. Doğru anestezi uygulaması için burun konisini burnun üzerine yerleştirin. Başın düzleştirilmiş ve ortalanmış olduğundan ve hafifçe incelendiğinde hareket ettirilemediğinden emin olun.</li>
	<li>Hidrasyon için deri altından 0.5 mL normosol enjekte edin.</li>
	<li>Kornea kurumasını önlemek için oküler kayganlaştırıcı uygulayın.</li>
	<li>Bir arka bacak parmağını sıkıştırdıktan sonra yoksunluk refleksinin yokluğu ile anestezi derinliğini izleyin ve daha sonra ameliyat sırasında izofluran% 1.5 -% 2.0'a düşürün.</li>
	<li>Kesme makineleri (tıraş) veya tüy dökücü krem kopararak veya kullanarak cerrahi bölgedeki ve çevresindeki saçları çıkarın ve cildi iyotla bitirerek üç döngü dönüşümlü iyot ve etanol uygulamasıyla dezenfekte edin. Saçların cerrahi bölgeden uzaklaştırılması, yalnızca o yerde anesteziyi sürdürmenin yolları varsa önerilir. Gerekirse, saçları başın hemen çevresindeki bölgeden çıkarmak için alkole batırılmış pamuklu uç aplikatörleri kullanın. Deri altından 0.05 mL lokal analjezik bupivakain (% 0.25) enjekte edin.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak kafatası üzerinde bir kesi yapın ve ardından cildin bir kısmını keskin cerrahi makasla keserek kafatasını açığa çıkarın. Cildi bir kenara iterek, pamuklu çubuk kullanarak, kafatasını görüşü engelleyen tüm kaslardan ve altta yatan dokulardan temizleyin. NOT: Kazara kanamayı durdurmak için, kanama bölgesine durana kadar steril bir pamuklu çubukla basınç uygulayın.</li>
	<li>Kafatası dikişlerini ve hem bregma hem de lambda'yı görünür hale getirmek için steril pamuklu çubuklar kullanarak kafatasını hidrojen peroksit ile temizleyin.</li>
	<li>Kafatasını iyice kurutun ve ardından aplikatörünü kullanarak bir damla kendinden aşındırıcı diş yapıştırıcısı uygulayın. Kafatasına fırçalayın, 60 saniye bekleyin ve 40 saniye boyunca diş UV ışığı ile tedavi edin. Parlak bir yüzey, yapıştırıcının kafatası ile etkili bir şekilde çapraz bağlandığını gösterir. NOT: Bu adım, kulaklığın güvenli bir şekilde takılması için kritik öneme sahiptir.</li>
	<li>Hipokampal derinlik elektrotlarının implantasyonu için iki çapak deliğini iki taraflı olarak delmek üzere 0,031" matkap ucu (0,79 mm) kullanın (yaklaşık 5.000 rpm). Lambdanın arkasındaki beyinciğin üzerindeki referans elektrodu için fazladan bir çapak deliği açın. NOT: Delme yaparken, matkabı yavaşça indirmeye ve beyne delmekten kaçınmaya özen gösterin.</li>
	<li>Elektrotların koordinatları aşağıdaki gibidir (mm cinsinden bregma'dan): 3 mm posterior, 3 mm lateral ve 3 mm derinlikte hipokampal elektrotlar; ve 6 mm posterior, 0 mm lateral ve 0 mm derinlikte (subdural) serebellar referans elektrodu.</li>
	<li>Doğruluğu artırmak için, stereotaksik olarak monte edilmiş bir matkap kullanın, bregma'ya dokunurken stereotaksik manipülatör X / Y eksenini sıfırlayın - bu, koordinatlar için referans noktasıdır.</li>
	<li>Tüm elektrotları altı pimli kaideye yerleştirerek bir kulaklık takın ve pimlerin kaidenin içine kadar itildiğinden emin olun. Kaideyi stereotaksik bir çerçeve üzerinde elektrot tutucuya monte edin (Şekil 1B).</li>
	<li>Elektrotları ilgili çapak deliklerinin üzerine hizalayın. Stereotaksik olarak sağ ve sol hipokampusa bükülmüş bipolar paslanmaz çelik tel elektrotları implante edin ve kulaklığı yavaşça indirerek ve elektrotları çapak deliklerine yönlendirerek beyincik içine referans elektrodu yerleştirin.</li>
	<li>Hipokampal büküm elektrodu deliğin hemen üzerindeyken, Z eksenini sıfırlayın ve yavaşça -3.0 mm'ye düşürün.</li>
	<li>Kafatası yüzeyini ve elektrotları diş çimentosu ile örtün ve kafatası yüzeyi ile kaidenin tabanı arasındaki boşluğu doldurun. Cilt kenarları diş çimentosuna bitişik olacaktır, böylece altta yatan doku açıkta kalmayacaktır. Çimentonun kurumasını ve sertleşmesini bekleyin. Daha sonra elektrot tutucuyu stereotaksik koldan ayırın ve tutucuyu kaideden çıkarın.</li>
	<li>Analjezi için 0.1 mL ketoprofen (1 mg / mL, SC) ve hidrasyon için ikinci bir doz 0.5 mL normosol (SC) enjekte edin ve hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın.</li>
	<li>37 ° C'ye önceden ısıtılmış bir izotermal pedi, kağıt havluyla kaplı boş bir vivaryum kafesinin içine yerleştirin. Tamamen uyanık olduğunda, hayvanı yatak takımları ve yumuşak yiyeceklerle temiz bir kafese yerleştirin ve vivaryuma geri koyun. Hayvanlar, birbirlerinin kulaklıklarını çiğnemeyi önlemek için bu noktadan itibaren tek başlarına barındırılır. Kulaklıkların sıkışmasını önlemek için tel çubuk hazneleri kullanılmaz ve bunun yerine, su şişeleri kafes üstlerinin alt tarafına bağlanır ve yataklarda chow bulunur.</li>
	<li>Ameliyattan sonra 72 saat boyunca hayvana biraz yumuşak yiyecek verin ve kilo kaybı ve vücut kondisyon skorunu izleyin. Susuz kalmış hayvanlara, susuz bırakılırsa deri altından 0.5 mL normosol uygulanabilir (kilo kaybı, artmış cilt turgoru, batık gözler). Ketoprofen, ameliyattan sonraki 2 gün boyunca günde bir kez deri altından verilebilir (yerel IACUC kılavuzlarına göre analjezi rejimini takip edin). EEG kayıt sistemine aktarılmadan önce hayvanların kafeslerinde 4-7 gün boyunca tamamen iyileşmelerine izin verin.</li>
</ol>3. Elektrik çıra protokolü
<ol><li>Fare kafasındaki ve komütatördeki soketlere uyan esnek bir kablo kullanarak fareleri EEG kayıt sistemine bağlayın ( Malzeme Tablosu listesine bakın). Aşağıdaki elektriksel stimülasyon protokolüne devam etmeden önce hayvanların bir gün boyunca alışmasına izin verin. Genel sağlıklarını ve alışmalarını günlük olarak izleyin ve% 25'i aşan hastalık, sıkıntı ve / veya sürekli vücut ağırlığı kaybı belirtileri olduğunda bunları sistemden çıkarın</li>
	<li>Her iki ucu da uyarıcı elektrottan sabit akım stimülatörünün çıkışına bağlayın. NOT: Bu elektrotları EEG kaydediciden ve uyarıcıdan uzaklaştıran bir devre kartına sahip olmak çok yararlıdır.</li>
	<li>Stimülatörü 2 s tren süresi boyunca 50 Hz'de 1 ms darbe verecek şekilde ayarlayın.</li>
	<li>Stimülatörün çıkışını 20 mikroampere (μA) ayarlayın ve 1. darbeyi iletin.</li>
	<li>EEG'yi, elektriksel stimülasyon darbesinden daha uzun süre dayanan yüksek frekanslı sivri uçların deşarjından sonra karakteristik bir şekilde izleyin.</li>
	<li>Deşarj gözlenmezse, bir deşarj sonrası tetiklenene kadar enjekte edilen akım miktarını 20 μA'lık artışlarla artırın. Gerekli akım miktarı Deşarj Sonrası Eşiğidir (ADT).</li>
	<li>Tipik ADT'ler 20-50 μA'dır. 200 μA'ya yükseldikten sonra bile deşarj gözlenmezse, elektrik bağlantılarında ve kulaklık kablolarında yüksek hassasiyetli ohmmetre ile sorun giderme gerekir. Sorun uyarıcı elektrottaysa, diğer derinlik elektrotlarıyla uyarmayı deneyin.</li>
	<li>Hayvanlar, o fare için ADT değerinin 1.5 katı olan bir akım kullanılarak günde 2x veya 6x uyarılarak yakılır.</li>
	<li>Durumun değişmesinden düşme ile bilateral tonik-klonik nöbetlere yükselen stimülasyona davranışsal tepkiyi izleyin. Değiştirilmiş bir Racine sınıf sistemi kullanarak puan11. Uyarılmış ölümcül tonik nöbetlerden kaçınmak için, ardışık uyaranlar modifiye edilmiş Racine skoru 6'ya (koşma ve atlama) kadar nöbetlerin şiddetini ve uzunluğunu arttırmaya yol açarsa çıra duraklatılmalıdır</li>
</ol>

<ol><li>Lekoubou, A., Bishu, K. G., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nationwide+trends+in+medical+expenditures+among+adults+with+epilepsy%3A+2003-2014%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Nationwide trends in medical expenditures among adults with epilepsy: 2003-2014.</a> Journal of the Neurological Sciences. 384, 113-120 (2018).</li>
<li>Hauser, W. A., Hesdorffer, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epilepsy%3A+Frequency%2C+Causes%2C+and+Consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Foundation+of+America%22%5BJournal%5D)">Epilepsy: Frequency, Causes, and Consequences.</a> Epilepsy Foundation of America. , (1990).</li>
<li>Galanopoulou, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+new+epilepsy+treatments%3A+issues+in+preclinical+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Identification of new epilepsy treatments: issues in preclinical methodology.</a> Epilepsia. 53 (3), 571-582 (2012).</li>
<li>Kehne, J. H., Klein, B. D., Raeissi, S., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+%28NINDS%29+Epilepsy+Therapy+Screening+Program+%28ETSP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) Epilepsy Therapy Screening Program (ETSP).</a> Neurochemical Research. 42 (7), 1894-1903 (2017).</li>
<li>Buckmaster, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+animal+models+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Laboratory animal models of temporal lobe epilepsy.</a> Comparative Medicine. 54 (5), 473-485 (2004).</li>
<li>Levesque, M., Avoli, M., Bernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+temporal+lobe+epilepsy+following+systemic+chemoconvulsant+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Animal models of temporal lobe epilepsy following systemic chemoconvulsant administration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, 45-52 (2016).</li>
<li>Loscher, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+review+of+current+animal+models+of+seizures+and+epilepsy+used+in+the+discovery+and+development+of+new+antiepileptic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Seizure%22%5BJournal%5D)">Critical review of current animal models of seizures and epilepsy used in the discovery and development of new antiepileptic drugs.</a> Seizure. 20 (5), 359-368 (2011).</li>
<li>Buckmaster, P. S., Haney, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+outcomes+of+pilocarpine+treatment+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Research%22%5BJournal%5D)">Factors affecting outcomes of pilocarpine treatment in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Epilepsy Research. 102 (3), 153-159 (2012).</li>
<li>Wang, L., Liu, Y. H., Huang, Y. G., Chen, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-course+of+neuronal+death+in+the+mouse+pilocarpine+model+of+chronic+epilepsy+using+Fluoro-Jade+C+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Time-course of neuronal death in the mouse pilocarpine model of chronic epilepsy using Fluoro-Jade C staining.</a> Brain Research. 1241, 157-167 (2008).</li>
<li>Dey, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+potassium+leak+channel+silences+hyperactive+neurons+and+ameliorates+status+epilepticus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">A potassium leak channel silences hyperactive neurons and ameliorates status epilepticus.</a> Epilepsia. 55 (2), 203-213 (2014).</li>
<li>Straub, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+kindled+VGAT-Cre+mice+as+a+new+animal+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Characterization of kindled VGAT-Cre mice as a new animal model of temporal lobe epilepsy.</a> Epilepsia. 61 (10), 11(2020).</li>
<li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+bioscience+research+reporting%3A+the+ARRIVE+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research.</a> PLoS Biology. 8 (6), 1000412(2010).</li>
<li>Vong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptin+action+on+GABAergic+neurons+prevents+obesity+and+reduces+inhibitory+tone+to+POMC+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Leptin action on GABAergic neurons prevents obesity and reduces inhibitory tone to POMC neurons.</a> Neuron. 71 (1), 142-154 (2011).</li>
<li>Vora, S. R., Camci, E. D., Cox, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+ontogeny+of+the+cranial+base+and+craniofacial+skeleton+in+male+C57BL%2F6J+mice%3A+A+reference+standard+for+quantitative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Postnatal ontogeny of the cranial base and craniofacial skeleton in male C57BL/6J mice: A reference standard for quantitative analysis.</a> Frontiers in Physiology. 6, (2016).</li>
<li>Lothman, E. W., Bertram, E. H., Bekenstein, J. W., Perlin, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-sustaining+limbic+status+epilepticus+induced+by+%27continuous%27+hippocampal+stimulation%3A+electrographic+and+behavioral+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Research%22%5BJournal%5D)">Self-sustaining limbic status epilepticus induced by 'continuous' hippocampal stimulation: electrographic and behavioral characteristics.</a> Epilepsy Research. 3 (2), 107-119 (1989).</li>
<li>Lothman, E. W., Williamson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+electrical+stimulus+parameters+on+afterdischarge+thresholds+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+Research%22%5BJournal%5D)">Influence of electrical stimulus parameters on afterdischarge thresholds in the rat hippocampus.</a> Epilepsy Research. 13 (3), 205-213 (1992).</li>
<li>Lewczuk, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroencephalography+and+behavior+patterns+during+experimental+status+epilepticus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Electroencephalography and behavior patterns during experimental status epilepticus.</a> Epilepsia. 59 (2), 369-380 (2018).</li>
<li>Wenker, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postictal+death+is+associated+with+tonic+phase+apnea+in+a+mouse+model+of+sudden+unexpected+death+in+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Postictal death is associated with tonic phase apnea in a mouse model of sudden unexpected death in epilepsy.</a> Annals of Neurology. 89 (5), 1023-1035 (2021).</li>
<li>Morimoto, K., Fahnestock, M., Racine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kindling+and+status+epilepticus+models+of+epilepsy%3A+rewiring+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Kindling and status epilepticus models of epilepsy: rewiring the brain.</a> Progress in Neurobiology. 73 (1), 1-60 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir çatışması yoktur.

Bu raporda, farelerin elektriksel çıralarının epilepsiye yol açtığı bir protokol açıklanmaktadır. Uyarıcı elektrot hipokampusa yerleştirildiğinden, bu hastalarda temporal lob epilepsisini (TLE) modelleyen fokal limbik bir epilepsidir. Bu protokoldeki kritik bir adım, Vgat genine bir IRES-Cre rekombinaz kasetinin yerleştirilmesi nedeniyle, bozulmuş inhibitör GABA akımları11'i gösteren VGAT-Cre farelerini kullanmaktır. C57BL / 6, bu protokolle tutuşturulduktan sonra epilepsi geliştirmez, an...

Epilepsi, önemli ekonomik ve beşeri yükleri olan majör bir nörolojik hastalıktır. NINDS, epilepsili 3 milyon Amerikalı olduğunu tahmin ediyor. Bu hastaların yaklaşık 0,6 milyonunda temporal lob epilepsisi (TLE) vardır1. Ne yazık ki, TLE'nin tıbbi tedavisi hastaların üçte birinde etkisizlik, ilaç direnci gelişimi veya yan etkilere karşı toleranssızlık nedeniyle başarısız olmaktadır2. Açıkçası, Amerikan Epilepsi Derneği Temel Bilim Komitesi, Preklinik Epilepsi İlaç Keşfi için Uluslararası Epilepsiye Karşı Birlik Çalışma Grubu ve Ulusal Danışma Nörolojik Bozukluklar ve İnme Konseyi 3,4 tarafından paylaşılan bir sonuç olan TLE için yeni tedaviler geliştirmeye önemli bir ihtiyaç vardır.
Temporal lob epilepsisinin mevcut hayvan modelleri, uzun süreli status epileptikusu indüklemek için kemokonvülzanlar (örneğin, kainat, pilokarpin) veya uzun süreli elektriksel stimülasyon kullanır 5,6,7. İşlem sırasında birçok hayvan ölür (sıçanlarda% 10-30, farelerde% 90'a kadar8). Hayatta kalan ve epilepsi geliştiren hayvanlar, beyin boyunca yaygın nöronal ölüm gösterir 9,10. Bu ölüm, mikroglia, astrositler ve sızan monositlerin aktivasyonu ile başlayan bir dizi yanıtı tetikler. Nöronal yanıtlar arasında devre reorganizasyonu (örneğin, yosunlu lif filizlenmesi), devrelere düzgün bir şekilde entegre olamayan yeni nöronların doğumu (örneğin, ektopik granül hücreleri) ve hipereksitabiliteye yol açan içsel değişiklikler (örneğin, Na + kanallarının yukarı regülasyonu) bulunur. Önemli nöronal ölümü olmayan bir epilepsi modeli, yeni antiepileptik ilaçların araştırılmasını kolaylaştıracaktır.
Epilepsinin GABA hipotezini test ederken, VGAT-Cre farelerinin hafif bir elektriksel çıra protokolü ile tedavi edilmesinin spontan motor ve elektrografik nöbetlere yol açtığı keşfedilmiştir11. Genel olarak, kemirgenlerin elektriksel çıralanması, epilepsiyi tanımlayan spontan nöbetlere yol açmaz, ancak aşırı çıra11 vakalarında olabilir. VGAT-Cre fareleri, özellikle GABAerjik inhibitör nöronlarda eksprese edilen veziküler GABA taşıyıcı (VGAT) geninin kontrolü altında Cre rekombinazını eksprese eder. Cre yerleştirilmesinin mRNA ve protein seviyelerinde VGAT ekspresyonunu bozduğu, böylece hipokampusta GABAerjik sinaptik iletimi bozduğu bulundu. Yakılmış VGAT-Cre farelerinin epileptogenezde rol oynayan mekanizmaları incelemek ve yeni terapötikleri taramak için yararlı olabileceği sonucuna varılmıştır11. Bu rapor, modelin oluşturulmasında kullanılan yöntemleri ayrıntılı olarak sağlar.

<table><tbody><tr><td>16 Kanal Hücre Dışı Diferansiyel AC Amplifikatör (115V/60Hz)</td><td>AD Instruments</td><td>AM3500-115-60</td><td>Alternatif EEG amplifikatörü</td></tr><tr><td>363/CP FIŞ BILEZIĞI, PIM KOVANI</td><td>P1 Teknolojileri</td><td>363SLEEVPIN0NL</td><td>Elektrot tutucu Kablosu için</td></tr><tr><td>, 363-363 5CM - 100CM W/MESH 6TCM</td><td>P1 Teknolojileri</td><td>363363XXXXCM004</td><td>fareden komütatör kablosuna</td></tr><tr><td>CCTV kameralar Qcwox HD Sony IR LED</td><td>Sony</td><td>QC-SP316</td><td></td></tr><tr><td>Komütatör SL6C/SB (tek fırça)</td><td>P1 Teknolojileri</td><td>8BSL6CSBC0MT</td><td>eski adıyla Plastics One, Inc.</td></tr><tr><td>Akım amplifikatörü</td><td>A-M Sistemleri</td><td>Model 2100</td><td></td></tr><tr><td>Diş çimentosu</td><td>Çalma</td><td>51459</td><td></td></tr><tr><td>Matkap uçları, # 75, OD ve nbsp; 0.310 "LOC 130 PT</td><td>Kyocera</td><td>105-0210.310</td><td></td></tr><tr><td>E363 / 0 SOKET İLETİŞİM EĞİK</td><td>P1 Teknolojileri</td><td>8IE3630XXXXE</td><td>konektör için pimler</td></tr><tr><td>iBond Kendinden Aşındırma tutkalı</td><td>Kulzer</td><td>CE0197</td><td></td></tr><tr><td>MS363 KAIDE 2298 6 PIN BEYAZ</td><td>P1 Teknolojileri</td><td>8K000229801F</td><td>EEG kulaklık konektörü</td></tr><tr><td>Ohmeter</td><td>Simpson</td><td>260</td><td>Yüksek hassasiyetli</td></tr><tr><td>PowerLab 16/35 ve LabChart Pro</td><td>AD Instruments</td><td>PL3516/P</td><td>Alternatif EEG yazılımı</td></tr><tr><td>SomnoSuite</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>SS-01</td><td>anestezi ünitesi & RightTemp izleme</td></tr><tr><td>Stereotaktik matkap ve mikromotor kiti</td><td>Foredom Electric Co.</td><td>K.1070</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik çerçeve</td><td>David Kopf Instruments</td><td>Model 940</td><td></td></tr><tr><td>Derinlik elektrodu için Teflon kaplı tel, OD 0.008'A-M</td> <td>Systems</td><td>791400</td><td></td></tr><tr><td>VGAT-Cre fareler konjenik C57BL/6J arka plan üzerinde</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>000664</td><td></td></tr></tbody></table>

temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan vgat-cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

VGAT-Cre farelerinin elektriksel çıralarının spontan motor ve elektrografik nöbetlere yol açtığı keşfedildi. Yakın tarihli bir makale, benzersiz VGAT-Cre farelerinin çıralamadan sonra spontan tekrarlayan nöbetler (SRS) geliştirmede nasıl kullanıldığına ve olası bir mekanizmanın - Cre'nin VGAT genine yerleştirilmesi - ekspresyonunu bozdu ve GABAerjik tonu azalttı. Bu çalışma, bu gözlemleri daha büyük bir fare kohortuna genişleterek, SRS'nin çıralamadan sonra ne kadar süre devam ettiği ve hayvanın cinsiyetinin ve yaşının etkisi gibi kilit konulara odaklanmaktadır. Bu raporda aşağıdaki önemli adımlar için protokoller açıklanmaktadır: elektriksel stimülasyon ve elektroensefalogramı okumak için hipokampal derinlik elektrotlarına sahip kulaklıklar yapmak; kulaklığı farenin kafatasına güvenli bir şekilde yapıştırmak için ameliyat, böylece düşmez; ve darbenin süresi, trenin sıklığı, trenin süresi ve enjekte edilen akım miktarı gibi elektrik çıra protokolünün önemli ayrıntıları. Çıra protokolü, çoğu VGAT-Cre faresinde güvenilir bir şekilde epilepsiye yol açması ve yeni antiepileptojenik ilaçları test etmek için yeni bir model sağlaması bakımından sağlamdır.

Hayvan Model başlangıçta karışık bir arka plan üzerinde VGAT-Cre fareleri (Slc32a1tm2 (cre)Lowl / J)13 kullanılarak geliştirilmiştir. Bununla birlikte, C57BL / 6J ile konjenik olan VGAT-Cre suşuna da uygulanmıştır. Suşlar arasında gelişen epilepside fark gözlenmemiştir. Her iki suş da veziküler GABA taşıyıcı promotörünün kontrolü altında Cre rekombinazını eksprese eder. Bu fareler, Vgat genindeki durdurma kodonundan sonra bir IRES-Cre kasetine vurularak üret...

Bu yazıda, transgenik VGAT-Cre farelerinin elektriksel çıralarına dayanan temporal lob epilepsi modeli oluşturma yöntemleri açıklanmaktadır. Kindled VGAT-Cre fareleri, epilepsiye neyin neden olduğunu belirlemede ve yeni tedavileri taramada yararlı olabilir.

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Bu protokol, farelerin spontan nöbetler geliştirdiği temporal lob epilepsisi için yeni bir model oluşturur ve epileptogenez mekanizmalarını araştırmak ve ayrıca yeni tedavileri taramak için çok yararlı olmuştur. VGAT-Cre farelerinde bu prosedür, kemokonvülzanlar veya sürekli elektriksel stimülasyon ile tetiklenen status epileptikustan sonra sıklıkla görülen yaygın hipokampal hücre ölümüne neden olmadan spontan tekrarlayan elektrografik ve motor ve motor kompozit nöbetlere güvenilir bir şekilde yol açar. Kulaklık üretmeye başlamak için, 3,5 santimetre uzunluğundaki politetrafloroetilen kaplı paslanmaz çelik teli kesin ve yalıtım kaplamasının yaklaşık bir milimetresini telin her iki ucundan çıkarın.Bir mengene tutucusuna iki pim yerleştirin, pimin alt kısmı aşağı bakacak şekilde daha uzun bir yarığa sahiptir. Ardından, telin soyulmuş uçlarına ve pimlerin üst kısımlarına akı uygulayın. Telin soyulmuş kısmını ve pimlerin üst kısmını, yanlara taşmadan kaplamak için yeterli lehimle kalın.Telin soyulmuş uçlarından birini, lehim erirken mümkün olduğunca derin bir pime yerleştirin. İkinci pim için işlemi, telin diğer soyulmuş ucuyla tekrarlayın. Pimleri soğuttuktan ve lehimledikten 10 saniye sonra, pimleri mengene tutucusundan çıkarın ve ardından tel ile pimler arasındaki bağlantının güçlü olduğundan ve tuttuğundan emin olmak için pimlerin üzerine çekin.Pimleri soğuk suda durulayın, ardından kurutun. Daha sonra, bir pim ile ikinci pim arasındaki iletkenliği doğrulamak için bir ohmmetre kullanın. Telin ucundaki pimleri paralel ve yakın tutmak için bir araya getirin.Bir hemostatı telin ortasına sıkıştırın ve teli sıkıca döndürmek için hemostatı döndürün. Hemostatı çıkardıktan sonra, teli 90 derecede bükmek için forsepsleri pimlerin iki milimetre altındaki bükülmüş tel üzerine sıkıştırın. Teli forsepslerin üzerinden 90 derece geriye doğru itin ve ilkinden bir milimetrede bir bükme daha oluşturun.Bükülmüş teli virajın 45 derece ve 3,5 milimetre altında kesmek için küçük, keskin makas kullanın. Her kulaklık için iki adet bipolar veya çift pimli bükümlü elektrot hazırlayın. Bir referans elektrodu hazırlamak için, her iki ucunda lehimlenmiş pimli bir teli ikiye bölün.Ardından, teli yedi milimetrede kesin ve telin ucunu ucun bir milimetre altında bükün. Telin bükülmüş bir milimetrelik ucunu forseps ile örtün ve bir milimetre çapında küçük bir halka oluşturmak için teli forsepslerin etrafında sıkıca döndürün. Ardından, tel ucunun tekrar dışa bakmasını sağlamak için halkayı telin düz kısmına dik olarak bükün.Tüm elektrotları, iki bipolar elektrot arasında altı milimetrelik bir mesafe ile altı pimli kaideye yan yana monte edin. Referans elektrotunu orta dış deliğe yerleştirin. Ameliyata devam etmeden önce, sekiz haftalık VGAT-Cre farelerinin ağırlığını kaydedin.Ardından, anesteziyi indüklemek için hayvanı bir indüksiyon odasına yerleştirin. Anestezi uygulanan fareyi 37 santigrat derecede bir ısıtma yastığına yerleştirin. Geri bildirim kontrollü bir sıcaklık sistemi kullanıyorsanız, ameliyat sırasında sıcaklık izlemesi için sıcaklık probunu hayvanın rektumuna yerleştirin.Ameliyata başlamak için, inhalan anestezi akışını burun konisine yönlendirin ve ön üst dişleri kesici uca yavaşça yerleştirerek ve koniyi burnuna hareket ettirerek hayvanı stereotaksik çerçeveye monte edin. Ardından, kulak çubuklarını kulaklara yerleştirin ve stereotaksik çerçeveye yapıştırın. Hayvanın başının düzleştirildiğinden ve ortalandığından ve hafifçe incelendiğinde hareket ettirilemediğinden emin olun.Hayvan monte edildikten sonra, hidrasyon için farelere 0,5 mililitre Normosol enjekte edin ve kornea kurumasını önlemek için oküler yağlayıcı uygulayın. Bir arka bacak pençesini sıkıştırarak anestezi derinliğini izleyin. Geri çekilme refleksi hayvanda yoksa, farenin kafa derisi kıllarını cerrahi alanın etrafına çıkarmaya devam edin.Tamamlandığında, temiz cilt bölgesini alternatif bir etanol ve iyot uygulamasıyla üç kez dezenfekte edin, iyotla bitirin ve deri altından% 0.25 0.25 bupivakain 0.05 mililitre enjekte edin. Bir neşter kullanarak kafatası üzerinde bir kesi yapın ve ardından kafatasını açığa çıkararak cildin bir kısmını cerrahi makasla kesin. Kafatasını pamuklu çubukla altta yatan tüm dokulardan temizlemeden önce cildi bir kenara itin.Steril pamuklu çubuklar kullanarak kafatasını hidrojen peroksit ile temizleyin ve kafatası dikişlerini, bregma'yı ve lambda'yı görünür hale getirin. Stereotaksik olarak monte edilmiş matkapla, matkap ucunu sıfır X, Y ve Z koordinatlarında bregma üzerine hareket ettirin. Ardından, kafanın düz olup olmadığını belirlemek üzere koordinatlarını belirlemek için matkabı kaldırıp lambda'ya taşıyın.Kafatasını iyice kuruttuktan sonra, aplikatör ile bir damla kendinden aşındırmalı diş yapıştırıcısı uygulayın. Diş yapıştırıcısını 40 saniye boyunca diş UV ışığı ile kürlemeden önce 60 saniye bekleyin. Parlak bir yüzey, yapıştırıcının kafatası ile etkili bir şekilde çapraz bağlandığını gösterir.0,031 inçlik bir matkap ucunun yardımıyla, kafatasına dakikada 5.000 rotasyonda veya RPM'de iki taraflı olarak iki çapak deliğini dikkatlice delin ve beyne delinmekten kaçının. Çapak deliklerinin delinmesini arttırmak için tuzlu su damlası uygulayın. Hipokampal derinlikteki elektrotların implantasyonu için, bregma'dan üç milimetre posterior ve üç milimetre yanal olarak delin.Lambda'nın arkasındaki beyincik üzerindeki referans elektrodu için bregma'dan altı milimetre posterior ve sıfır milimetre yanal olarak bir çapak deliği açın. Daha sonra, altı pimli kaideyi monte edilmiş elektrotlarla stereotaksik çerçevedeki elektrot tutucuya monte edin. Elektrotları karşılık gelen çapak deliklerinin üzerine hizalayarak, iki bipolar elektrot ucunu sol ve sağ hipokampal çapak deliklerinin hemen üstüne yerleştirmek için kulaklığı yavaşça indirin ve gezinin ve gerekirse referans elektrodunu beyincik üzerindeki deliğin üzerinde duracak şekilde ayarlayın.Hipokampal büküm elektrotları deliklerin hemen üzerinde olduğunda, Z eksenini sıfırlayın ve elektrodu yavaşça sağ ve sol hipokampusa eksi üç milimetreye indirin ve referans elektrotunu beyinciğin üzerindeki deliğe yönlendirin. Toz ve sıvıyı bir karıştırma kabında karıştırarak diş çimentosunu hazırlayın. Ardından, kafatası yüzeyini, elektrotları ve kafatası yüzeyi ile kaidenin tabanı arasındaki boşluğu diş çimentosu ile örtün.Çimento kuruduktan ve sertleştikten sonra, elektrot tutucuyu stereotaksik koldan ayırın, kolu kaldırın ve tutucuyu kaideden çıkarın. Fareyi deri altından ketoprofen ve Normosol ile uyguladıktan sonra, hayvanı vivaryum kafesindeki ısıtılmış pedin üzerine taşımak için hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın. Tamamen uyandıktan sonra, tek hayvanı vivaryum kafesine geri getirin, hayvanı yumuşak yiyeceklerle besleyin ve ameliyattan 72 saat sonrasına kadar günlük kilo kaybını izleyin.Temsili keman arsasında, farelerin yakılmış durum kriterine ihtiyaç duyduğu stimülasyonların sayısı gösterilmiştir. Fareler tipik olarak kindled duruma ulaştı veya 15 stimülasyondan sonra beş bilateral tonik-klonik motor nöbeti geçirdi. Spontan tekrarlayan nöbetlerin veya SRS'nin gecikmesi 10.7 olarak bulundu ve nöbetlerin ortalama sıklığı günde 1.3 nöbet idi.Güvenilir SRS dağılımı, farelerin yaklaşık 23 gün boyunca epileptik olduğunu gösterdi. Temsili görüntülerde, hipokampus ve entorinal korteksin çeşitli alt alanlarında anti-NeuN pozitif nöronların veya nöronal ölümlerin sayısı görülebilir. İki bipolar elektrotun iki çapak deliğine sorunsuz bir şekilde girmesi önemlidir, bu nedenle çapak deliklerinin hemen üzerinde olmaları gerekir.Ayrıca, diş çimentosunu dikkatlice uygulamak ve elektrot tutucuyu çıkarmadan önce tamamen sertleşmesine izin vermek önemlidir. Bu teknik, epileptik fareler üretmemizi ve bunları EEG kaydı ve aynı zamanda video kaydı ile sürekli izlememizi sağlar. Ve yaptığımız deneylerle, nöbetlerin sıklığını, süresini ve şiddetini azaltmak için gen terapisi gibi yeni tedavi stratejilerini test edebiliriz.

preparation-implantation-electrodes-for-electrically-kindling-vgat

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kısmen izole korteks ("alttan"), travma sonrası epileptogenezisin verimli bir hayvan modeli. Burada nasıl bir roman cerrahi cihaz yapmak ve bu model oluşturmak için daha kesin ve tutarlı lezyonlar yapmak için kullanabilirsiniz göstermektedir.

Kemirgenler Travma Sonrası epileptogenezisin Alt kesilme Model hazırlanması

Bir prosedür elektroansefalogram, elektromiyogram ve serebral laktat konsantrasyon takip edilir iken optogenetically kortikal piramidal nöronların etkinlik işlenmesi için tarif edilmektedir. Onlar kendiliğinden uyku / uyanıklık döngüsü geçmesi ise Deneysel kayıtları kablo-tethered fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Optogenetic cihaz laboratuar monte edilmiştir; kayıt ekipman ticari olarak temin edilebilmektedir.

Eşzamanlı Elektroensefalografi, Kemirgen Serebral Korteks Laktat Konsantrasyonu ve Nöronal Faaliyet Optogenetic Manipülasyon Gerçek zamanlı ölçüm

Bu videoda, bir fare beynine bir elektrot düzeneği yerleştirme tekniği gösterilmektedir. Düzenek, hipokampustan aktiviteyi kaydetmek için bipolar elektrotlar ve beyincikten temel aktivite elde etmek için bir referans elektrot içerir. Anestezi uygulanmış bir fare stereotaksik bir çerçeve üzerine yerleştirilir ve elektrot düzeneği hedef beyin bölgesine implante edilir. Daha sonra elektrofizyolojik kayıt yapılmadan önce hayvanın iyileşmesine izin verilir.

Elektrofizyolojik Kayıt için Bir Fare Beynine Bir Elektrot Düzeneğinin İmplantasyonu

Çalışmalar, katodal transkraniyal doğru akım stimülasyonunun ilaca dirençli nöbetler üzerinde baskılayıcı etkiler yaratabileceğini göstermiştir. Bu çalışmada, farelerin beyin dilimi hazırlığında nöbet benzeri aktivitenin doğru akım stimülasyonu ve çoklu elektrot dizisi kaydının değerlendirildiği bir in vitro deney düzeneği tasarlanmıştır. Doğru akım stimülasyon parametreleri değerlendirildi.

Fare Beyin Dilim Hazırlık içinde nöbet benzeri Faaliyet doğrudan akım Stimülasyon ve Multi-elektrot Dizi Kaydı

Bu makale, akupunktur, epilepsi modelleri ve kemirgenlerde uyku analizinin performansını göstermektedir. Akupunktur prosedürü ve akupunktur noktalarının tanımlanması anlatılmaktadır. Epilepsiyi indüklemek için pilokarpin veya pentilentetrazol (PTZ) kullanılır. Uyku analizi için elektrokortikogram (ECoG), elektromiyogram (EMG), beyin sıcaklığı ve lokomotor aktivite kayıtları kullanılır.

Akupunktur ile Sıçan ve Farelerde Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) Manipülasyon ve Uyku

Bu ayrıntılı protokolünü transkranyal uyarım elektrot yerleştirme temporal kemik üzerinde kısa ve uzun vadeli etkileri Transkraniyal elektriksel stimülasyon fareler serbestçe hareket araştırmak için açıklar.

Kronik Transkraniyal elektriksel stimülasyon ve Sıçanlarda Intracortical kayıt

Bu el yazması sistemik Pilokarpin enjeksiyonu ile durum Epileptikus inducing ve canlı hayvan bir radyo telemetri video ve electroencephalogram sistemi kullanarak tekrarlayan spontan ele geçirme vakaları izleme yöntemi açıklanır. Bu iletişim kuralı kronik epilepsi, epileptogenesis ve akut nöbetleri Etyopatogenezi mekanizmaları eğitim için yararlı olabilir.

Temporal LOB epilepsi ve EEG farelerde Radiotelemetry sistemini kullanarak izleme Pilokarpin modeli

4 aminopyridine uyarılan epileptiform aktivite kayıt ve elektrik modülasyon elektrot dizileri kullanma kemirgen beyin dilimler halinde gerçekleştirme göstermektedir. Özel kayıt odası doku canlılığı uzun süreli deneysel oturumları boyunca korur. Elektrot eşleme yaşamak ve uyarıcı çiftlerinin seçimi özel bir grafik kullanıcı arabirimi tarafından yapılmaktadır.

Kayıt ve modülasyon Epileptiform aktivite elektrot dizilerin birleştiğinde kemirgen beyin dilimleri içinde

Akut kriz modelleri epileptiform olaylar altında yatan mekanizmaları eğitim için önemlidir. Ayrıca, epileptiform olaylar üstünde-istek oluşturma yeteneği kendi başlatma altında yatan olay tam sırası çalışmaya son derece verimli bir yöntem sağlar. Burada, fare ve insan dokusu içinde kurulan akut 4-aminopyridine kortikal nöbet modelleri açıklar.

Akut Ictal faaliyet kemirgen ve insan dokusu üretimi ve isteğe bağlı başlatma

Epilepsi araştırmalarının zorluk klasik tedavinin yetersiz kaldığı hastalarda yeni tedaviler geliştirmektir. Yeni bir protokol kullanarak-implante edilmiş bir ilaç teslim sistemi yardımıyla-epileptik odak içine GABA elektroforetik teslim tarafından anestezik fareler nöbetleri kontrol edebiliyoruz.

, Γ-aminobutirik asit elektroforetik teslim (GABA) epileptik odaklama içine fareler nöbetleri önler

Amigdala, bu yapıdan kaynaklanan ve yayılan temporal lob epilepsisinde önemli bir rol oynar. Bu makale, hem kayıt hem de uyarıcı işlevlere sahip derin beyin elektrotlarının üretiminin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Amigdala kaynaklı medial temporal lob epilepsisinin bir modelini sunar.

Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

Öğrenin, VGAT-Cre farelerinde elektriksel kindling ile temporal lob epilepsisi modeli oluşturma ve elektrot implantasyonu yöntemlerini. Bu model, nöronal hasarı en aza indirerek epileptogenez mekanizmalarını ve yeni tedavileri değerlendirmeyi sağlar.

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu (Video) | JoVE Journal

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

Daha fazla video keşfet