Name: Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Öğrenin, retinal ven tıkanıklığı fare modelini optimize ederek damar yaralanması ve ödem mekanizmalarını invaziv olmayan şekilde araştırın. Bu yöntem, tedavi testlerini daha verimli hale getirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<div>Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı (NSF-GRFP) DGE - 1644869 (CCO'ya), Ulusal Göz Enstitüsü (NEI) 5T32EY013933 (AMP'ye) ve Ulusal Yaşlanma Enstitüsü (NIA) R21AG063012 (CMT'ye) tarafından desteklenmiştir.</div>

Bu protokol, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) oftalmik ve görme araştırmalarında hayvanların kullanımı için yaptığı açıklamayı takip eder. Kemirgen deneyleri, Columbia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve izlenmiştir.
NOT: Tüm deneylerde yaklaşık 20 g ağırlığında iki aylık erkek fareler kullanılmıştır.
1. Floks genlerinin indüklenebilir genetik ablasyonu için tamoksifenin hazırlanması ve uygulanması
NOT: Retinal damar çapı, hayvanın ağırlığından etkilenebilir. Bir deney için kullanılan tüm hayvanların benzer ağırlıklarda olduğundan emin olun.
<ol><li>Tamoksifeni mısır yağında 20 mg / mL'lik bir konsantrasyona kadar seyreltin. NOT: Tamoksifen bir toksiktir ve ışığa duyarlıdır. Işıktan, örneğin alüminyum folyo ile koruyun.</li>
	<li>Çözümü birkaç saniye boyunca vorteksleyin.</li>
	<li>Fırında 55 °C'de 15 dakika bekletin. NOT: Tamoksifenin tamamen çözündüğünden emin olun. Ek vorteks gerekli olabilir.</li>
	<li>Çözeltiyi 1 haftaya kadar 4 ° C'de saklayın.</li>
	<li>Tamoksifen enjeksiyonu için 26 G iğne ile donatılmış 1 mL'lik bir şırınga kullanın. Enjeksiyon alanını% 70 etanol ile temizleyin.  Spesifik indüklenebilir Cre hattına göre belirlenen süre boyunca günde bir kez intraperitoneal olarak 2 mg tamoksifen (100 μL 20 mg / mL) uygulayın.</li>
	<li>Deneylere başlamadan önce hayvanlar için iki gün dinlenmeye izin verin.</li>
</ol>2. Lazer fotokoagülasyon için reaktiflerin hazırlanması
<ol><li>Gül bengal NOT: Gül bengal ışığa duyarlıdır. Kullanana kadar karanlıkta saklayın ve en iyi sonuçlar için taze hazırlayın.<ol><li>Gül bengalini steril salin içinde 5 mg / mL'ye seyrelterek hazırlayın ve 0.2 μm şırınga filtresinden süzün.</li>
		<li>Gül bengalli 26 G'lik bir iğne ile donatılmış 1 mL'lik bir şırınga hazırlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ketamin/ksilazin<ol><li>Ketamin ve ksilazini steril salin içinde aşağıdaki konsantrasyonlara göre seyreltin: ketamin (80-100 mg / kg) ve ksilazin (5-10 mg / kg).</li>
	</ol></li>
	<li>Arjantin<ol><li>Karprofeni steril salin içinde 1 mg / mL'ye kadar seyreltin.</li>
		<li>Karprofenli 26 G iğne ile donatılmış 1 mL'lik bir şırınga hazırlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Steril salin<ol><li>Steril tuzlu su ile 26 G iğne ile donatılmış 5 mL'lik bir şırınga hazırlayın.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Lazer kurulumu
<ol><li>Fiber optik kabloyu nazikçe tutun ve lazer kontrol kutusuna ve retinal görüntüleme mikroskobunun lazer adaptörüne bağlayın.</li>
	<li>Retinal görüntüleme mikroskobu lamba kutusunu açın.</li>
	<li>Bilgisayarı açın ve görüntüleme programını açın.</li>
	<li>Beyaz dengesini, bir parça beyaz kağıt kullanarak ve fare göz merceğinin önüne koyup görüntüleme programında Ayarla'ya tıklayarak ayarlayın .</li>
	<li>Anahtarı çevirerek ve lazer kontrol kutusunun ekranındaki talimatları izleyerek lazer kontrol kutusunu açın. NOT: Bu deneyde kullanılan lazer Sınıf 3B'dir ve göz hasarına neden olabilir. Lazeri çalıştırırken koruyucu gözlük takın.</li>
	<li>Temel lazer gücünü doğrulayın.<ol><li>Bir lazer güç ölçer kullanın.</li>
		<li>Lazer kontrol kutusunun ekranını aşağıdaki parametrelere ayarlayın: 50 mW ve 2.000 ms.</li>
		<li>Lazeri açın ve güç ölçeri göz merceğinin önüne yerleştirin. NOT: Temel lazer gücünü test ederken mikroskop ışığının kapalı olduğundan emin olun.</li>
		<li>Lazeri etkinleştirmek için ayak pedalına basın.</li>
		<li>Lazer güç okumasının 13-15 mW olmasını hedefleyin. NOT: Lazer güç okuması, retinal ven tıkanıklıklarının başarı oranını belirleyecektir. Lazer güç okuması çok düşükse, lazer pozlamanın gücüne ve süresine ayarlamalar yapılabilir. Öneriler için Tablo 1'e bakın.</li>
	</ol></li>
	<li>Lazer kontrol kutusunun ekranını aşağıdaki parametreler için ayarlayarak deneysel lazer gücünü ayarlayın: 100 mW, 1.000 ms.</li>
	<li>Lazeri kapatın. NOT: Güvenlik ve aşırı ısınmayı önlemek için, lazeri fareler arasında kapalı tutmak en iyisidir.</li>
</ol>4. Gül bengalinin fare kuyruğu damar enjeksiyonu
<ol><li>500 mL'lik bir beherin içine 300 mL su dökün.</li>
	<li>Beheri mikrodalga fırında 1 dakika ısıtın.</li>
	<li>Beherdeki ılık suya gazlı bez koyun.</li>
	<li>Fareyi bir kısıtlayıcıya koyun.</li>
	<li>Gazlı bezi fare kuyruğuna hafifçe bastırın ve genişlemiş damarları arayın. Ilık su dilatasyonundan sonra enjeksiyon bölgesini alkollü bir mendil kullanarak dezenfekte edin.</li>
	<li>İğneyi enjeksiyon bölgesine yerleştirin ve damarda olduğunuzdan emin olmak için şırıngayı çekin. Daha sonra, fare kuyruğu damarını enjekte edin, hayvanın ağırlığına göre doğru miktarı uygulayın (37.5 mg / kg). Hematom veya kanamayı önlemek için enjeksiyon bölgesine baskı uygulayın. Siteyi silin.</li>
	<li>Fareyi tutucudan çıkarın ve kafese geri koyun.</li>
	<li>Gül bengalinin anestezik enjeksiyonundan önce dolaşması için 8 dakika bekleyin. NOT: Bu, gül bengal enjeksiyonu ile lazer ışınlaması arasında toplam 10 dakika sağlayacaktır.</li>
</ol>5. Majör damarların tıkanması
<ol><li>Isıtmalı fare platformunu açın.</li>
	<li>Her göze bir damla fenilefrin ve tropikamidin ekleyin.</li>
	<li>150 μL anestezik, ketamin (80-100 mg / kg) ve ksilazin (5-10 mg / kg) IP enjekte edin. NOT: Bu prosedür sırasında, fareye iki IP enjeksiyonu yapıldı. Bu nedenle, taraflar değiştirildi. Anestezi için IP enjeksiyonu sağ alt abdominal kadrana verildi ve salin sol alt abdominal kadrana enjekte edildi. İğnenin herhangi bir organda değil, karın içinde olduğundan emin olmak için enjekte etmeden önce şırınganın çekilmesi önerilir.</li>
	<li>Anestezi derinliğini belirlemek için hayvanı parmağınızla sıkıştırın ve yanıt vermeyene kadar bekleyin.</li>
	<li>Göz başına bir damla proparakain hidroklorür ekleyin (analjezik).</li>
	<li>Her iki göze jel merhem ekleyin.</li>
	<li>Kulakların arasına deri altından 150 μL karprofen enjekte edin.</li>
	<li>Fareyi platforma yerleştirin.</li>
	<li>Retinal fundusun görünümü netleşene ve odaklanana kadar platformu ayarlayın.</li>
	<li>Retina damarlarını sayın ve fundusun görüntüsünü alın. NOT: Retinal venler arterlerden daha koyu ve geniştir. Damarlar ve arterler dönüşümlüdür; Bununla birlikte, bazen optik sinire yakın dallanmış bir arter ve dolayısıyla iki bitişik arter olabilir.</li>
	<li>Lazeri açın ve optik diskten yaklaşık 375 μm'de retinal bir damara doğru nişan alın.</li>
	<li>Ayak pedalına basarak ve lazer ışınını 100 μm'ye kadar hafifçe hareket ettirerek kabı ışınlayın. Bu adımı üç kez tekrarlayın ve her darbeden sonra lazer ışınını hareket ettirin, böylece ışınlama tek bir noktaya odaklanmaz.</li>
	<li>2-3 tıkanıklık elde etmek için diğer büyük damarlarda ışınlamayı tekrarlayın.</li>
</ol>6. 0. günde tıkanan damar sayısının belirlenmesi
<ol><li>Kapları ışınladıktan sonra lambayı kapatın ve 10 dakika bekleyin. NOT: Işığa maruz kalmak retina hasarına ve iltihaplanmaya neden olabilir; pozlamayı en aza indirmek için bekleme süresi boyunca lambayı kapatın7.</li>
	<li>Lambayı tekrar açın ve tıkanmış damar sayısını sayın.</li>
	<li>Fundusun bir görüntüsünü alın.</li>
</ol>7. Bakım Sonrası
<ol><li>1 mL steril salin IP enjekte edin. NOT: Bölüm 5, adım 3'teki IP ekleme ayrıntılarına bakın.</li>
	<li>Her iki göze de kayganlaştırıcı göz damlası ekleyin.</li>
	<li>Her iki göze jel merhem ekleyin.</li>
	<li>Fareyi anesteziden kurtulurken izleyin ve tamamen iyileşene kadar diğer hayvanlarla birlikte kafese geri döndürmeyin. Karprofen (5 mg / kg) işlemden 2 gün sonrasına kadar günlük olarak verilebilir. İnsanlara uygulanırsa, ağrı RVO'nun bir belirtisi değildir. NOT: Anesteziden tamamen kurtulana kadar hayvanları gözetimsiz bırakmayın.</li>
</ol>8. Retina ödeminin optik koherens tomografi ile değerlendirilmesi (OKT)
NOT: Bu adım, araştırmacının ilgilendiği zaman noktasında yapılabilir. Bir C57BL / 6J fare için retinal ödemin zirvesi, RVO prosedüründen 1 gün sonradır. Bu zaman noktası, farenin arka planına bağlı olarak değişebilir.
<ol><li>Retinal görüntüleme mikroskobu ışık kutusunu, OCT makinesini ve ısıtmalı fare platformunu açın.</li>
	<li>Tıkanmadan sonraki gün, hayvanı hazırlamak için 5.2 ila 5.7 arasındaki adımları izleyin.</li>
	<li>Görüntüleme ve OCT yazılım programlarını açın.</li>
	<li>OCT programında, dürtmeyi 5 olarak ayarlayın.</li>
	<li>OCT'yi yanıktan 75 μm distal veya 4 tıklama ile alın.</li>
	<li>Retinanın dört kadranında OCT görüntüleri alın.</li>
	<li>İzleme yazılımını kullanarak OCT görüntülerini analiz edin.</li>
	<li>Önceden ışınlanmış ölçümlerin retinal kalınlığını RVO'dan 1 gün sonra veya ilgilenilen zaman noktasında karşılaştırın. NOT: Verileri analiz ederken, retinal ödem gelişimini etkileyebileceğinden, ışınlanan damarların sayısını dikkate alın. Hayvanlar daha sonra anestezi uygulanarak ötenazi yapılır ve ardından perfüzyon sağkalım dışı cerrahi uygulanır.</li>
</ol>

<ol><li>Song, P., Xu, Y., Zha, M., Zhang, Y., Rudan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+of+retinal+vein+occlusion%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+prevalence%2C+incidence%2C+and+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology of retinal vein occlusion: a systematic review and meta-analysis of prevalence, incidence, and risk factors.</a> Journal of Global Health. 9 (1), 010427(2019).</li>
<li>Ehlers, J. P., Fekrat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vein+occlusion%3A+beyond+the+acute+event%5BTitle%5D)+AND+%22Survey+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Retinal vein occlusion: beyond the acute event.</a> Survey of Ophthalmology. 56 (4), 281-299 (2011).</li>
<li>Iftikhar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+peak+vision+in+retinal+vein+occlusion+patients+treated+for+macular+edema%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Loss of peak vision in retinal vein occlusion patients treated for macular edema.</a> American Journal of Ophthalmology. 205, 17-26 (2019).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+mouse+model+of+branch+retinal+vein+occlusion+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Development of a new mouse model of branch retinal vein occlusion and retinal neovascularization.</a> Japanese Journal of Ophthalmology. 51 (4), 251-257 (2007).</li>
<li>Ebneter, A., Agca, C., Dysli, C., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+retinal+morphology+alterations+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+mouse+model+of+retinal+branch+and+central+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Investigation of retinal morphology alterations using spectral domain optical coherence tomography in a mouse model of retinal branch and central retinal vein occlusion.</a> PLoS One. 10 (3), 0119046(2015).</li>
<li>Fuma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacological+approach+in+newly+established+retinal+vein+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A pharmacological approach in newly established retinal vein occlusion model.</a> Scientific Reports. 7, 43509(2017).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+microglia+and+chemokines+in+light-induced+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Vision%22%5BJournal%5D)">Activation of microglia and chemokines in light-induced retinal degeneration.</a> Molecular Vision. 11, 887-895 (2005).</li>
<li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173(2020).</li>
<li>Nicholson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+accuracy+of+disorganization+of+the+retinal+inner+layers+in+detecting+macular+capillary+non-perfusion+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Diagnostic accuracy of disorganization of the retinal inner layers in detecting macular capillary non-perfusion in diabetic retinopathy.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 43 (8), 735-741 (2015).</li>
<li>Moein, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+to+detect+macular+capillary+ischemia+in+patients+with+inner+retinal+changes+after+resolved+diabetic+macular+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography to detect macular capillary ischemia in patients with inner retinal changes after resolved diabetic macular edema.</a> Retina. 38 (12), 2277-2284 (2018).</li>
<li>Hirabayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+model+of+central+retinal+vascular+occlusion+and+the+therapeutic+potential+of+the+adrenomedullin-receptor+activity-modifying+protein+2+system%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Development of a novel model of central retinal vascular occlusion and the therapeutic potential of the adrenomedullin-receptor activity-modifying protein 2 system.</a> American Journal of Pathology. 189 (2), 449-466 (2019).</li>
<li>Martin, G., Conrad, D., Cakir, B., Schlunck, G., Agostini, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+in+a+mouse+model+of+retinal+vein+occlusion+induced+by+laser+treatment+reveals+a+predominant+inflammatory+and+tissue+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling in a mouse model of retinal vein occlusion induced by laser treatment reveals a predominant inflammatory and tissue damage response.</a> PLoS One. 13 (3), 0191338(2018).</li>
<li>Drechsler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intravitreal+anti-vascular+endothelial+growth+factor+treatment+on+the+retinal+gene+expression+in+acute+experimental+central+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of intravitreal anti-vascular endothelial growth factor treatment on the retinal gene expression in acute experimental central retinal vein occlusion.</a> Ophthalmic Research. 47 (3), 157-162 (2012).</li>
<li>Genevois, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+remodeling+after+occlusion-recanalization+of+a+branch+retinal+vein+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Microvascular remodeling after occlusion-recanalization of a branch retinal vein in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (2), 594-600 (2004).</li>
<li>Khayat, M., Lois, N., Williams, M., Stitt, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Animal models of retinal vein occlusion.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (14), 6175-6192 (2017).</li>
<li>Nguyen, V. P., Li, Y., Zhang, W., Wang, X., Paulus, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+multimodal+photoacoustic+microscopy+and+optical+coherence+tomography+image-guided+laser+induced+branch+retinal+vein+occlusion+in+living+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">High-resolution multimodal photoacoustic microscopy and optical coherence tomography image-guided laser induced branch retinal vein occlusion in living rabbits.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10560(2019).</li>
<li>Sayyed, S. A. A. R., Beedri, N. I., Kadam, V. S., Pathan, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rose+Bengal+sensitized+bilayered+photoanode+of+nano-crystalline+TiO2-CeO2+for+dye-sensitized+solar+cell+application%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Nanoscience%22%5BJournal%5D)">Rose Bengal sensitized bilayered photoanode of nano-crystalline TiO2-CeO2 for dye-sensitized solar cell application.</a> Applied Nanoscience. 6 (6), 875-881 (2015).</li>
<li>Emmart, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+absorption+spectra+of+fluorescein%2C+fluorescein+derivatives+and+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Observations on the absorption spectra of fluorescein, fluorescein derivatives and conjugates.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 73 (1), 1-8 (1958).</li>
<li>Yu, L., Liu, Z., Liu, S., Hu, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fading+spectrophotometric+method+for+the+determination+of+polyvinylpyrrolidone+with+eosin+Y%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fading spectrophotometric method for the determination of polyvinylpyrrolidone with eosin Y.</a> Chinese Journal of Chemistry. 27 (8), 1505-1509 (2009).</li>
<li>MacDonald, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ABCs+of+RVO%3A+a+review+of+retinal+venous+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Optometry%22%5BJournal%5D)">The ABCs of RVO: a review of retinal venous occlusion.</a> Clinical & Experimental Optometry. 97 (4), 311-323 (2014).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+weight+gain+modifies+severity+and+functional+outcome+of+oxygen-induced+proliferative+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Postnatal weight gain modifies severity and functional outcome of oxygen-induced proliferative retinopathy.</a> American Journal of Pathology. 177 (6), 2715-2723 (2010).</li>
<li>LaVail, M. M., Gorrin, G. M., Repaci, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+differences+in+sensitivity+to+light-induced+photoreceptor+degeneration+in+albino+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Strain differences in sensitivity to light-induced photoreceptor degeneration in albino mice.</a> Current Eye Research. 6 (6), 825-834 (1987).</li>
<li>Jeffery, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+albino+retina%3A+an+abnormality+that+provides+insight+into+normal+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">The albino retina: an abnormality that provides insight into normal retinal development.</a> Trends in Neurosciences. 20 (4), 165-169 (1997).</li>
<li>Kinnear, P. E., Jay, B., Witkop, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Albinism%5BTitle%5D)+AND+%22Survey+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Albinism.</a> Survey of Ophthalmology. 30 (2), 75-101 (1985).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+weight+gain+modifies+severity+and+functional+outcome+of+oxygen-induced+proliferative+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Postnatal weight gain modifies severity and functional outcome of oxygen-induced proliferative retinopathy.</a> American Journal of Pathology. 177 (6), 2715-2723 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Fare RVO modeli, RVO patolojisini daha iyi anlamak ve potansiyel terapötikleri test etmek için bir yol sağlar. Fare RVO modeli sahada yaygın olarak kullanılsa da, değişkenliğini ele alan ve modelin optimizasyonunu açıklayan modelin mevcut ayrıntılı bir protokolüne ihtiyaç vardır. Burada, bir deney hayvanları kohortunda en tutarlı sonuçları elde etmek ve güvenilir veriler sağlamak için nelerin değiştirilebileceğine dair deneyimlerden örnekler içeren bir kılavuz sunuyoruz.
RVO fare modelinin en ...

Retinal ven tıkanıklığı (RVO), 2015 yılında dünya çapında yaklaşık 28 milyon insanı etkileyen yaygın bir retinal vasküler hastalıktır1. RVO, çalışan yaşlı yetişkinlerde ve yaşlılarda görme azalmasına ve kaybına yol açarak, yakın on yılda artacağı tahmin edilen, görmeyi tehdit eden devam eden bir hastalığı temsil eder. RVO'nun belirgin patolojilerinden bazıları hipoksik-iskemik hasar, retina ödemi, inflamasyon ve nöronalkayıptır 2. Şu anda, bu bozukluğun ilk tedavi hattı vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) inhibitörlerinin uygulanmasıdır. Anti-VEGF tedavisi retina ödemini iyileştirmeye yardımcı olurken, birçok hasta hala görme azalmasıyla karşıkarşıyadır 3. Bu hastalığın patofizyolojisini daha iyi anlamak ve potansiyel yeni tedavi hatlarını test etmek için, farklı fare suşları için fonksiyonel ve ayrıntılı bir RVO fare modeli protokolü oluşturmaya ihtiyaç vardır.
Fare modelleri, insan hastalarda kullanılan aynı lazer cihazını uygulayarak, bir fare için doğru boyuta ölçeklendirilmiş bir görüntüleme sistemi ile eşleştirilerek geliştirilmiştir. RVO'nun bu fare modeli ilk olarak 2007 yılında rapor edildi 4 ve daha sonra Ebneter ve diğerleri 4,5 tarafından kuruldu. Sonunda, model Fuma ve ark. tarafından retinal ödem6 gibi RVO'nun önemli klinik belirtilerini çoğaltmak için optimize edildi. Model ilk bildirildiğinden beri, birçok çalışma onu bir fotosensitizör boyanın uygulanmasını ve ardından büyük retinal damarların bir lazerle fotokoagülasyonunu kullanarak kullanmıştır. Bununla birlikte, uygulanan boyanın miktarı ve türü, lazer gücü ve maruz kalma süresi, bu yöntemi kullanan çalışmalarda önemli ölçüde farklılık gösterir. Bu farklılıklar genellikle modelde değişkenliğin artmasına neden olabilir ve bu da çoğaltılmasını zorlaştırır. Bugüne kadar, optimizasyonu için potansiyel yollar hakkında belirli ayrıntılara sahip yayınlanmış bir çalışma yoktur.
Bu rapor, C57BL/6J suşundaki RVO fare modelinin ayrıntılı bir metodolojisini ve C57BL/6J arka planına sahip tamoksifen kaynaklı endotelyal kaspaz-9 nakavt (iEC Casp9KO) suşunu ve genetiği değiştirilmiş bir fare için referans suş olarak RVO patolojisi ile ilgili bir metodolojiyi sunmaktadır. Daha önce yapılan bir çalışmada, endotel kaspaz-9'un apoptotik olmayan aktivasyonunun retinal ödemi indüklediği ve nöronal ölümü desteklediği gösterilmiştir8. Bu suşu kullanma deneyimi, diğer genetiği değiştirilmiş suşlara uygulanabilen RVO fare modelini uyarlamak için potansiyel değişikliklerin belirlenmesine ve bunlara ilişkin içgörü sağlanmasına yardımcı oldu.

<table><tbody><tr><td>Carprofen</td><td>Rimadyl</td><td>NADA # 141-199</td><td>4 & °C'de tutun; C</td></tr><tr><td>Mısır Yağı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>Fiber Bağlantı Kablosu</td><td>Thor Labs</td><td>M14L02</td><td></td></tr><tr><td>GenTeal</td><td>Alcon</td><td>00658 06401</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür</td><td>Henry Schein</td><td>NDC: 11695-0702-1</td><td></td></tr><tr><td>Lasercheck</td><td>Tutarlı</td><td>1098293</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrin</td><td>Akorn</td><td>NDCL174478-201-15</td><td></td></tr><tr><td>Meridyen ile Phoneix Micron IV,&nbsp; StreamPix ve OCT modülleri</td><td>Phoenix Technology Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride</td><td>Akorn</td><td>NDC: 17478-263-12</td><td>4 & derece'de tutun; C</td></tr><tr><td>Yenileme</td><td>Alergan</td><td>94170</td><td></td></tr><tr><td>Gül Bengal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330000-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tamoksifen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5648-5G</td><td>ışığa duyarlı</td></tr><tr><td>Tropicamide</td><td>Akorn</td><td>NDC: 174478-102-12</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Akorn</td><td>NDCL 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

değişkenliği sınırlamak için retinal ven tıkanıklığı fare modelinin optimizasyonu

Optimization of the Retinal Vein Occlusion Mouse Model to Limit Variability

Retinal ven tıkanıklığının (RVO) fare modelleri, oftalmolojide nöral retinadaki hipoksik-iskemik hasarı incelemek için sıklıkla kullanılır. Bu raporda, kritik adımlara işaret eden ayrıntılı bir yöntem, genetiği değiştirilmiş farklı fare suşlarında tutarlı bir şekilde başarılı oklüzyon oranları elde etmek için optimizasyon önerileri ile birlikte sunulmuştur. RVO fare modeli, öncelikle bir fotosensitizör boyanın intravenöz olarak uygulanmasından ve ardından oftalmik kılavuzlu lazere bağlı retinal görüntüleme mikroskobu kullanılarak lazer fotokoagülasyonundan oluşur. Oklüzyon tutarlılığının belirleyicileri olarak üç değişken tanımlanmıştır. Gül bengal uygulamasından sonraki bekleme süresini ayarlayarak ve taban çizgisini ve deneysel lazer çıktısını dengeleyerek, deneyler arasındaki değişkenlik sınırlandırılabilir ve tıkanmaların daha yüksek bir başarı oranı elde edilebilir. Bu yöntem, retina ödemi ve hipoksik-iskemik yaralanma ile karakterize retina hastalıklarını incelemek için kullanılabilir. Ek olarak, bu model vasküler hasarı indüklediğinden, nörovaskülatür, nöronal ölüm ve inflamasyonu incelemek için de uygulanabilir.

RVO fare modeli, retina damarlarında hipoksik-iskemik hasara, kan retina bariyerinin bozulmasına, nöronal ölüme ve retinal ödem8'e yol açan tıkanıklıkları başarılı bir şekilde elde etmeyi amaçlamaktadır. Şekil 1 , tekrarlanabilirliği sağlamak için adımların zaman çizelgesini, deneysel tasarımın bir şemasını gösterir ve deneysel sorulara bağlı olarak daha da optimize edilebilecek adımları özetler. Değiştirilebilecek üç ana adım, gül bengal uygulamasından sonraki beklem...

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a ...

Protokol, vasküler yaralanma mekanizmalarını ve müteakip ödem gelişimini non-invaziv bir şekilde araştırmak için bir model sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, cerrahi müdahale olmadan yaralanmayı zaman içinde canlı olarak takip edebilmenizdir. Bu, tedavileri daha verimli bir şekilde test etmek için yollar sağlar.Uygun kuyruk damarının nasıl yapılacağını ve hayvanın platforma doğru şekilde yerleştirilmesini öğrenmek zor olabilir. Her iki teknik için de sabırlı olmanızı ve işleri ağırdan almanızı öneririm. Başlamak için, fiber optik kabloyu yavaşça tutun ve lazer kontrol kutusuna ve retinal görüntüleme mikroskobunun lazer adaptörüne bağlayın, ardından retinal görüntüleme mikroskobu lamba kutusunu açın.Bilgisayarı açın ve görüntüleme programını açın. Mikroskop göz merceğinin önüne bir parça beyaz kağıt yerleştirin ve görüntüleme programında Ayarla'ya tıklayarak beyaz dengesini ayarlayın. Anahtarı çevirerek ve lazer kontrol kutusunun ekranındaki talimatları izleyerek lazer kontrol kutusunu açın.Temel lazer gücünü doğrulamak için, lazer kontrol kutusunu 50 miliwatt ve 2.000 milisaniyeye ayarlayın. Ardından lazeri açın ve güç ölçeri göz merceğinin önüne yerleştirin. Lazeri etkinleştir

optimization-retinal-vein-occlusion-mouse-model-to-limit

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kemirgen retina uzun beyin için erişilebilir bir pencere olarak kabul edilmiştir. Bu teknik yazıda iskemik yaralanma sonrası, merkezi sinir sistemi içinde, vasküler rejenerasyon başarısız olmasına yol mekanizmaları incelemek için oksijen kaynaklı retinopatinin fare modeli kullanan bir protokol sağlar. Anlatılan sistem, aynı zamanda, retina ve CNS içindeki fonksiyonel kan damarlarının büyümesini teşvik etmek için stratejiler keşfetmek için dönüştüğü edilebilir.

Fare Retina kullanma CNS&#39;deki Vasküler Rejenerasyon Değerlendirilmesi

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.

Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Oksijen kaynaklı retinopati (OIR), prematürite retinopatisi ve proliferatif diyabetik retinopati gibi iskemik retina hastalıklarını modellemek ve neovasküler hastalıklar için antianjiyojenik ilaçların değerlendirilmesinde kavram kanıtı çalışmaları için bir model görevi görmek için kullanılabilir. OIR, retinada ölçülebilen sağlam ve tekrarlanabilir neovaskülarizasyona neden olur.

Kemirgenlerde İskemik Retina Hastalıkları için Oksijen Kaynaklı Retinopati Modeli

Bu protokol, farelerin retinal düz montajlarının hazırlanması ve immünofloresan boyanması ve analizi için ayrıntılı bir yöntemi açıklamaktadır. Floresein fundus anjiyografinin (FFA) fare yavruları ve görüntü işleme için kullanımı da ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Oksijene Bağlı Retinopati Fare Modelinde Retina Damarlarının Dinamik Büyümesinin İzlenmesi

Bu makalede, tüm mount retinal preparatları için iyi kurulmuş ve tekrarlanabilir bir lektin lekesi testi ve proliferatif ve proliferatif olmayan retinopatilerde sıklıkla değiştirilen vasküler parametrelerin nicel ölçümü için gerekli protokoller açıklanmaktadır.

Proliferatif Olmayan ve Proliferatif Retinopatilerle Farelerin Tüm Mount Retinalarında Vasküler Parametrelerin Nicelemesi

Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Burada, Retinal Ven Tıkanıklığı (RVO) çalışmasında floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografi (OCT) görüntüleri için üç veri analizi protokolü sunulmuştur.

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Subretinal enjeksiyonlar, fotoreseptör ve RPE hastalıkları için terapötiklerin klinik öncesi gelişimi için vazgeçilmez bir tekniktir. Farelerde intraoperatif başarı oranlarını artıran ve retina hasarını en aza indiren optimize edilmiş bir transskleral subretinal enjeksiyon tekniğini tanımladık.

Farede Optimize Edilmiş Minimal İnvaziv Transskleral Subretinal Enjeksiyon Tekniği

Öğrenin, retinal ven tıkanıklığı fare modelini optimize ederek damar yaralanması ve ödem mekanizmalarını invaziv olmayan şekilde araştırın. Bu yöntem, tedavi testlerini daha verimli hale getirir.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Daha fazla video keşfet