Name: Nöral Kök Hücre Aktivasyon Durumunun İn Vitro Otofloresan Kullanılarak Sınıflandırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Öğrenin, yetişkin fare nöral kök hücrelerinin aktivasyon durumlarını otofloresan görüntüleme ve FACS ile canlı hücrelerde etiketsiz olarak nasıl sınıflandırılacağını. Bu yöntem, yetişkin nörogenez mekanizmalarını anlamak için güçlü bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Goncalves, J. T., Schafer, S. T., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+in+the+hippocampus%3A+From+stem+cells+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis in the hippocampus: From stem cells to behavior.</a> Cell. 167 (4), 897-914 (2016).</li>
<li>Kuhn, H. G., Dickinson-Anson, H., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+dentate+gyrus+of+the+adult+rat%3A+age-related+decrease+of+neuronal+progenitor+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult rat: age-related decrease of neuronal progenitor proliferation.</a> J Neurosci. 16 (6), 2027-2033 (1996).</li>
<li>Silva-Vargas, V., Maldonado-Soto, A. R., Mizrak, D., Codega, P., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+niche+signals+from+the+choroid+plexus+regulate+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Age-dependent niche signals from the choroid plexus regulate adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 19 (5), 643-652 (2016).</li>
<li>Urban, N., Blomfield, I. M., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+of+adult+mammalian+neural+stem+cells%3A+A+highly+regulated+rest%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Quiescence of adult mammalian neural stem cells: A highly regulated rest.</a> Neuron. 104 (5), 834-848 (2019).</li>
<li>Urban, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+to+quiescence+of+mouse+neural+stem+cells+by+degradation+of+a+proactivation+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Return to quiescence of mouse neural stem cells by degradation of a proactivation protein.</a> Science. 353 (6296), 292-295 (2016).</li>
<li>Kalamakis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+modulates+stem+cell+maintenance+and+regenerative+capacity+in+the+aging+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quiescence modulates stem cell maintenance and regenerative capacity in the aging brain.</a> Cell. 176 (6), 1407-1419 (2019).</li>
<li>Walsh, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+T-cell+activation+via+autofluorescence+lifetime+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Classification of T-cell activation via autofluorescence lifetime imaging.</a> Nat Biomed Eng. 5 (1), 77-88 (2021).</li>
<li>Sagar, M. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+activation+visualization+via+fluorescence+lifetime+imaging+microscopy+of+intrinsically+fluorescent+metabolic+cofactors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Microglia activation visualization via fluorescence lifetime imaging microscopy of intrinsically fluorescent metabolic cofactors.</a> Neurophotonics. 7 (3), 035003(2020).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+control+of+adult+neural+stem+cell+activity+by+Fasn-dependent+lipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Metabolic control of adult neural stem cell activity by Fasn-dependent lipogenesis.</a> Nature. 493 (7431), 226-230 (2013).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fatty+acid+oxidation-dependent+metabolic+shift+regulates+adult+neural+stem+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A fatty acid oxidation-dependent metabolic shift regulates adult neural stem cell activity.</a> Cell Rep. 20 (9), 2144-2155 (2017).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPOT14-positive+neural+stem%2Fprogenitor+cells+in+the+hippocampus+respond+dynamically+to+neurogenic+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">SPOT14-positive neural stem/progenitor cells in the hippocampus respond dynamically to neurogenic regulators.</a> Stem Cell Reports. 3 (5), 735-742 (2014).</li>
<li>Shin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA-Seq+with+waterfall+reveals+molecular+cascades+underlying+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA-Seq with waterfall reveals molecular cascades underlying adult neurogenesis.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 360-372 (2015).</li>
<li>Leeman, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+activation+clears+aggregates+and+enhances+quiescent+neural+stem+cell+activation+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosome activation clears aggregates and enhances quiescent neural stem cell activation during aging.</a> Science. 359 (6381), 1277-1283 (2018).</li>
<li>Beckervordersandforth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism-mediated+regulation+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Plast%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism-mediated regulation of adult neurogenesis.</a> Brain Plast. 3 (1), 73-87 (2017).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+is+a+biomarker+of+neural+stem+cell+activation+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence is a biomarker of neural stem cell activation state.</a> Cell Stem Cell. , (2024).</li>
<li>Kolenc, O. I., Quinn, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cell+metabolism+through+autofluorescence+imaging+of+NAD%28P%29H+and+FAD%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Evaluating cell metabolism through autofluorescence imaging of NAD(P)H and FAD.</a> Antioxid Redox Signal. 30 (6), 875-889 (2019).</li>
<li>Mira, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+BMPR-IA+regulates+quiescence+and+long-term+activity+of+neural+stem+cells+in+the+adult+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Signaling through BMPR-IA regulates quiescence and long-term activity of neural stem cells in the adult hippocampus.</a> Cell Stem Cell. 7 (1), 78-89 (2010).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vimentin+coordinates+protein+turnover+at+the+aggresome+during+neural+stem+cell+quiescence+exit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Vimentin coordinates protein turnover at the aggresome during neural stem cell quiescence exit.</a> Cell Stem Cell. 26 (4), 558-568 (2020).</li>
<li>Martynoga, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenomic+enhancer+annotation+reveals+a+key+role+for+NFIX+in+neural+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Epigenomic enhancer annotation reveals a key role for NFIX in neural stem cell quiescence.</a> Genes Dev. 27 (16), 1769-1786 (2013).</li>
<li>Bin Imtiaz, M. K., Jessberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+mouse+hippocampal+neural+stem+cells+for+fluorescence+loss+in+photobleaching+assays%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult mouse hippocampal neural stem cells for fluorescence loss in photobleaching assays.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100695(2021).</li>
<li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nat Protoc. 7 (11), 2005-2012 (2012).</li>
<li>Lakowicz, J. R., Szmacinski, H., Nowaczyk, K., Johnson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+of+free+and+protein-bound+NADH%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging of free and protein-bound NADH.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (4), 1271-1275 (1992).</li>
<li>Blacker, T. S., Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+mitochondrial+redox+state+using+NADH+and+NADPH+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence.</a> Free Radic Biol Med. 100, 53-65 (2016).</li>
<li>Datta, R., Heaster, T. M., Sharick, J. T., Gillette, A. A., Skala, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+microscopy%3A+fundamentals+and+advances+in+instrumentation%2C+analysis%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging microscopy: fundamentals and advances in instrumentation, analysis, and applications.</a> J Biomed Opt. 25 (7), 1-43 (2020).</li>
<li>ImageJ. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2021).</li>
<li>Becker & Hichl Handbooks. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2024).</li>
<li>GitHub Materials. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/">https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/</a> (2024).</li>
<li>Codega, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+and+purification+of+quiescent+adult+neural+stem+cells+from+their+in+vivo+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Prospective identification and purification of quiescent adult neural stem cells from their in vivo niche.</a> Neuron. 82 (3), 545-559 (2014).</li>
<li>Llorens-Bobadilla, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+reveals+a+population+of+dormant+neural+stem+cells+that+become+activated+upon+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics reveals a population of dormant neural stem cells that become activated upon brain injury.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 329-340 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>40x Su objektif lensi</td><td>Nikon</td><td>MRD77410</td><td>Bölüm 3'te çoklu foton mikroskobunda kullanılan objektif lens</td></tr><tr><td>8 kuyulu küvet</td><td>Ibidi</td><td>80826-90</td><td>aNSC'leri/qNSC'leri görüntülemek için</td></tr><tr><td>Analog güç ölçer</td><td>Thorlabs</td><td>PM100A</td><td>Bölüm 3'te çoklu foton mikroskobunda kullanılır</td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik (100X) (PSF)</td><td>Thermo Fisher</td><td>15240062</td><td>NSC ortamı için antibiyotik</td></tr><tr><td>B-27</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td>NSC ortamı için besin takviyesi</td></tr><tr><td>BMP4</td><td>Fisher Scientific</td><td>5020BP010</td><td>Sessizliği indüklemek için faktör</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma</td><td>A4919-25G</td><td>BMP4</td></tr><tr><td>Bukalemun ultra hızlı lazer</td> yapmak için Bölüm <td>3'te çoklu foton mikroskobunda kullanılan</td><td>Tutarlı</td><td>N / A</td> Lazer</tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td></td> Bölüm 1 için kullanılan Nikon <td>C2</td><td>Mikroskobu</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (GlutaMAX olmadan)</td><td>NSC'ler için</td>canlandırıcı <td></td><td>11320033</td> Temel ortam</tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5025-15KU</td><td>Tripsin inhibitörü</td></tr><tr><td>EdU test kitine</td> eklendi <td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Hücre kültürü için proliferasyon testi</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15-500UG</td><td>NSC ortamı için büyüme faktörü</td></tr><tr><td>NSC ortamı için</td> <td>FGF</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td> Büyüme faktörü</tr><tr><td>Floresan aktif hücre sıralayıcı</td><td>BD</td><td>FACSAria</td><td>Bölüm 2 için kullanılan Floresan Aktif Hücre Sıralayıcı</td></tr><tr><td>NSC ortamı için</td><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3149-50KU</td> Katkı</tr> maddesi <tr><td>Tripsin inhibitörü çözeltisi hazırlamak için</td><td>L-15</td><td>Invitrogen</td><td>21083027</td> Laminin</tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>L2020-1MG</td><td>Cam eşyaların kaplanması için</td></tr><tr><td>Nikon TiE ters mikroskop</td><td>Nikon</td><td>N/A</td> Bölüm 3 PLO Sigma P3655-100MG <td>için kullanılan mikroskop çerçevesi</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Cam eşyaların kaplanması için</td></tr><tr><td>SPC-150 Tek foton sayma elektroniği</td><td>Becker ve Hickl</td><td>N/A</td><td>Bölüm 3'te çoklu foton mikroskobunda kullanılır</td></tr><tr><td>Tripsin (küreler veya tek tabakalar olarak büyüyen aNSC'lerin peletlerini tripsinlemek için)</td><td>Gibco</td><td>15090046</td><td>Nörosferleri veya yapışık aNSC'leri tripsinlemek için</td></tr><tr><td>Tripsin (qNSC'leri tripsinlemek için)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td>Yapışan qNSC'leri tripsinlemek için</td></tr><tr><td>Tripsin inhibitörü</td><td>Sigma</td><td>T6522-100MG</td><td>aNSC'lerin tripsinizasyonunu inhibe etmek için</td></tr><tr><td>Üre kristalleri</td><td>Sigma</td><td>U5128-5G</td><td>Bir IRF</td></tr><tr><td>Versene</td><td>Thermo Fisher</td> <td>toplamak için kullanılır15040066</td><td>Tripsin hazırlamak için</td></tr></tbody></table>

nöral kök hücre aktivasyon durumunun İn vitro otofloresan kullanılarak sınıflandırılması

Classification of Neural Stem Cell Activation State In Vitro Using Autofluorescence

NSC hücre durumunu ayırmak için konfokal otofloresan görüntüleme (Şekil 1) NSC aktivasyon durumunu çözmek için konfokal mikroskopi kullanmak için, qNSC'ler ve aNSC'ler, daha önce tarif edildiği gibi bir aktivasyon ortamı veya sessizlik ortamı kullanılarak in vitro olarak üretildi 10,13,17,18. NSC'lerde PAF'ı tespit etmek için, canlı qNSC'ler ve aNSC'ler konfokal mikroskopta aynı pozlama kullanılarak görüntülendi (Örn: 405 nm, Em: 580-620 nm). qNSC'ler, aNSC'lere kıyasla daha yüksek sayıda PAF sergilemiştir (Şekil 1A,B). Bu bulgu, otofloresan özelliklerinin qNSC'lerin ve aNSC'lerin hücre durumunu tanımlamak için belirteçler olarak nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.
Otofloresan kullanılarak NSC hücre durumunun FACS zenginleştirilmesi (Şekil 2) FACS kullanarak hücre döngüsü durumunu zenginleştirmek için, qNSC'ler ve aNSC'ler, bu protokolde tarif edildiği gibi in vitro 10,13,17,18,19 olarak üretildi ve S-fazı boyunca ilerleyen hücreleri etiketlemek için akış sitometresinde tripsinizasyon ve analizden önce 1 saat boyunca EdU ile önceden etiketlendi. qNSC'ler ve aNSC'ler daha sonra akış sitometrisi ile ayrı ayrı veya 1 qNSC:1 aNSC oranında karışık olarak analiz edildi (Şekil 2 <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig03large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%201%20-%20Solution%20Recipes.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%202%20-%20Example%20Data.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%201.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%202.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%203.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%204.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%205.zip" target="_blank"></a>

Nöral Kök Hücre Aktivasyon Durumunun İn Vitro Otofloresan Kullanılarak Sınıflandırılması

Neural stem cells (NSCs) divide and produce newborn neurons in the adult brain through a process called adult neurogenesis. Adult NSCs are primarily ...

classification-neural-stem-cell-activation-state-vitro-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video floresan boya ile insan embriyonik kök hücreler ve mezenkimal kök hücreler etiketleme teknikleri gösterir. Bu teknik, in vivo olarak bir optik görüntüleme ile nakledilen kök hücrelerin izleme ve floresan mikroskobu ile histopatolojik korelasyon kullanılabilir.

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Giderek artan bir ilgi ile kök hücre tedavileri, moleküler görüntüleme teknikleri transplantasyonu sonrası izleme kök hücre davranışı için idealdir. Lusiferaz muhabiri genler hücre sağkalım, konumu ve in vivo çoğalması non-invaziv, tekrarlayan değerlendirme sağladı. Bu video izlemek için yaşayan bir fare hESC çoğalması gösterecektir.

In vitro ve in vivo Biyoparlaklık Reporter Gen Görüntüleme İnsan Embriyonik Kök Hücreleri

Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC'lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Bu video, EdU dahil edilmesi kullanılarak beyin dokusu kesitlerinde yeni çoğalan nöral kök hücrelerin boyanması prosedürünü ve ardından spesifik proteinleri görselleştirmek için immünofloresan ile hücre dinamiklerinin ve proliferasyonunun anlaşılmasını geliştirme prosedürünü göstermektedir.

Fare Beyin Bölümlerinde Prolifere Nöral Kök Hücreleri Görselleştirmek için İmmünofloresan Boyama

Kaynak: Daynac, M., et. al. Yetişkin Fare Subventriküler Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücrelerin Hücre Sınıflandırması ve Hücre Döngü Dinamiklerinin Canlı Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, transgenik bir fare beyninden alınan nöral kök hücrelerin (NSC'ler) konfokal lazer tarama mikroskobu kullanılarak hızlandırılmış görüntülemesini göstermektedir. NSC'ler G1 fazı sırasında kırmızı floresan verir ve diğer hücre döngüsü fazlarında floresan değildir. Yapıştırılmış bir NSC kültürü...

Konfokal mikroskopi kullanılarak fare nöral kök hücre bölünmesinin hızlandırılmış görüntülenmesi

Kaynak: Sharma, A. D., et.al. Nöroprotektif stratejiler için terapötik faktörlerin sağlanması için tasarlanmış yetişkin kök hücrelerin yüksek verimli karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, terapötik nörotrofik faktörleri eksprese etmek için tasarlanmış transgenik mezenkimal kök hücreleri karakterize etme sürecini göstermektedir. Bir hücre proliferasyon markörünü hedefleyen birincil ve ikincil antikorlarla hücrelerin sabitlenmesi, geçirgenleştirilmesi ve boyanması ile ilgili adımları ana...

Nöroterapötik Uygulamalar için Genetik Olarak Tasarlanmış Mezenkimal Kök Hücrelerin Karakterizasyonu

Bu protokol, geliştirme, genişleme ve hESC ve iPSCs türetilen NK hücreleri, in vivo görüntüleme açıklar.

Geliştirme, Genişleme ve<em&gt; In vivo</em&gt; İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) den İnsan NK Hücrelerinin İzleme ve ve Bağlı Pluripotent Kök Hücre (iPSCs)

Nöral hücre tiplerinde yüzey antijenlerinin ve/veya hücre içi antijenlerin akış sitometrik analizi için bir protokolün ayrıntılı bir tanımını sunuyoruz. Nörobiyologların bu güçlü teknolojiden yararlanmalarını sağlamak için deneysel planlamanın kritik yönleri, adım adım metodolojik prosedürler ve akış sitometrisinin temel ilkeleri açıklanmaktadır.

Sinir Hücresi Tipleri Yüzey Akış Sitometri Protokolleri ve Hücre içi Antijen Analizleri

Nöral kök hücreleri (NSC'ler) ve soylarını yetişkin fare beyninin subventriküler bölgesinden (SVZ) izole etmek için Floresan Aktif Hücre Sıralama (FACS) tabanlı bir yöntem bildiriyoruz. Floresan Ubikitinasyon Hücre Döngüsü Göstergesi (FUCCI) transgenik farelere uygulandığında, canlı görüntüleme ile hücre döngüsü ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

Nöral kök hücreler (NSC'lerde) kendini yenilemek ve üç sinir soy içine ayırt edebilirsiniz hücrelere bakın. Burada, klonal koşullarda neurosphere oluşumu ve farklılaşmayı kullanarak belirli bir hücre popülasyonu MGK sıklığını belirlemek için bir protokol açıklar.

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

İndüklenebilir bir transgenik soy izleme fare çizgisi kullanarak kök hücreleri ve soylarını bir florofor ile kalıcı olarak işaretleme yeteneği, in vivo aktivasyon, proliferasyon, göç ve / veya farklılaşmanın mekansal ve zamansal analizine izin verir. Soy izleme, soy bağlılığı, müdahaleye yanıt ve çok potansiyelli hakkında yeni bilgiler ortaya çıkarabilir.

Yetişkin Fare Beynindeki İndüklenebilir Floresan Etiketli Kök Hücrelerin Soy İzi

Öğrenin, yetişkin fare nöral kök hücrelerinin aktivasyon durumlarını otofloresan görüntüleme ve FACS ile canlı hücrelerde etiketsiz olarak nasıl sınıflandırılacağını. Bu yöntem, yetişkin nörogenez mekanizmalarını anlamak için güçlü bir araç sunar.

Nöral Kök Hücre Aktivasyon Durumunun İn Vitro Otofloresan Kullanılarak Sınıflandırılması

Daha fazla video keşfet