Name: İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-25T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin, hemoglobin enjeksiyonu kullanarak yenidoğan sıçanlarda intraventriküler kanama sonrası hidrosefalusu nasıl modelleyeceğinizi. Bu yöntem, ventrikül büyümesi ve beyaz cevher hasarını incelemek için güvenilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

JMS, NIH / NINDS R01 NS110793 ve K12'den (Beyin Cerrahı Araştırma Kariyer Geliştirme Programı) finansman aldı. BAM, NIH / NINDS K08 NS112580-01A1, Kentucky Üniversitesi Sinirbilim Araştırma Öncelikli Alan Ödülü ve bir Hidrosefali Derneği Yenilikçi Ödülü'nden fon aldı.

NOT: Tüm hayvan protokolleri, kurumların Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, reaktifler, ekipman ve yazılımlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosu'na bakın.
1. Hemoglobin ve BOS çözeltilerinin hazırlanması
<ol><li>1,5 mL'lik bir mikrotüpe 500 μL aCSF çözeltisi ekleyerek steril bir yapay CSF (aCSF) çözeltisi hazırlayın ve buz üzerinde saklayın.</li>
	<li>1.5 mL'lik bir mikrotüp içinde 500 μL aCSF'ye 75 mg hemoglobin ekleyerek steril bir 150 mg / mL hemoglobin çözeltisi hazırlayın ve buz üzerinde saklayın.</li>
</ol>2. Hayvanın enjeksiyon için hazırlanması
<ol><li>Sıçanın vücut sıcaklığını korumak için ısıtma yastığını orta ayara getirin.</li>
	<li>Doğum sonrası gün 4 (P4) sıçanları% 3 izofluran ile dolu bir indüksiyon odasında anestezi yapın. NOT: Her 15 dakikada bir ayak parmağı/kuyruk sıkışması yanıtını kullanarak yeterli anesteziyi onaylayın. Doku renginin, vücut ısısının ve solunum hızının görsel gözlemi ile anesteziyi izleyin.</li>
	<li>Anestezi uygulanan sıçana 5 mg/kg deri altı karprofen enjeksiyonu ile ağrı kesici uygulayın.</li>
	<li>Anestezi uygulanan sıçanı stereotaktik aparatın içine yerleştirin ve burnu anestezi adaptöründe %1,5 izofluran sabit bir akışla konumlandırılsın.</li>
	<li>Kafayı sabitlemek için dış işitsel meatus üzerindeki yırtılmayan kulak çubuklarını sıkın. NOT: Enjeksiyon çağında gözler açıksa gözleri nemli tutmak için veteriner merhemi uygulayın.</li>
	<li>Betadin ve% 70 etanol içine batırılmış steril pamuk uçlu aplikatörlerle dönüşümlü olarak kafayı temizleyin.<ol><li>Betadin ile ıslatılmış aplikatöre kafa derisinin merkezine dokunun ve betadini dışa doğru hareket ettirerek daireler halinde yayın.</li>
		<li>Adım 2.6.1.1'i etanolle ıslatılmış aplikatör ile tekrarlayın.</li>
		<li>Adım 2.6.1.1 ve adım 2.6.1.2 3x'i yineleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi alanı korumak için steril bir cerrahi örtü uygulayın.</li>
	<li>Steril bir neşter kullanarak, kafatasının bregmasını ortaya çıkarmak için başın ortasından dikey olarak 0,3 cm'lik bir kesi yapın. NOT: Lambdadan enjekte ediliyorsa, bregma yerine kafatasının lambdasını açığa çıkarın.</li>
	<li>Alanı kurutmak için steril pamuk uçlu bir aplikatör kullanın.</li>
</ol>3. Stereotaktik enjektörün kurulması
<ol><li>Adım 1.2'de hazırlanan hemoglobin çözeltisini 30G iğneli 0.3 mL'lik steril bir şırıngaya çekin ve şırıngayı stereotaktik enjektör sistemine yerleştirin. NOT: Kontrol koşulları oluşturuyorsanız, adım 1.1'de hazırlanan aCSF çözeltisini 0,3 mL'lik steril bir şırıngaya çekin ve protokole devam edin.</li>
	<li>Stereotaktik enjektör arayüzünü açın ve enjeksiyon ses seviyesi ve hızı ayarlarını girmek için Yapılandırma düğmesine tıklayın.<ol><li>Ses seviyesi'ne tıklayın ve ses seviyesini 20.000 nL'ye (20 μL) ayarlayın.</li>
		<li>İnfüzyon hızı'na tıklayın ve hızı 8.000 nL / dak (8 μL / dak) olarak ayarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Pos Sıfırla düğmesine tıklayarak Yapılandırmadan çıkın. </li>
	<li>İğne ucunda küçük bir hemoglobin çözeltisi boncuğu ortaya çıkana kadar Demle düğmesine tıklayarak iğne ucunu yıkayın.</li>
	<li>Hemoglobin çözeltisini iğne ucundan steril pamuk uçlu bir aplikatör ile yavaşça fitilleyin.</li>
</ol>4. Hayvan enjeksiyonu
<ol><li>Bregma'daki kafatasına hafifçe dokunmak için kızarmış şırınga iğnesinin ucunu indirmeden önce şırınganın mediolateral ve anteroposterior pozisyonlarını ayarlayarak stereotaktik enjektör sisteminde bregmayı sıfır olarak ayarlayın. NOT: Lambda'dan enjekte ediliyorsa, lambda'yı sıfır olarak ayarlayın.</li>
	<li>Seçtiğiniz koordinatları tanımlayın.<ol><li>Bregmadan enjekte ediliyorsa, burada tarif edilen P4 sıçanlarında , bregmadan 1.5 mm yanal, 0.4 mm ön ve 2.0 mm derinlikte kullanın.</li>
		<li>Lambda'dan enjekte ediliyorsa, P4 sıçanları için aşağıdaki koordinatları kullanın: 1.1 mm yanal, 4.6 mm ön ve lambda'dan 3.3 mm derinlik.</li>
	</ol></li>
	<li>Kafa derisini temizlemek için şırınga iğnesini kafatasının 1 cm yukarısına kaldırın. Şırınga kaldırıldığında, mediolateral ve anteroposterior koordinatları ayarlamaya devam edin.</li>
	<li>Kafatasına hafifçe dokunmak için şırınga iğnesini indirin. İğnenin kafatasına dokunup dokunmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Dorsoventral koordinatı 30 s'lik bir periyot boyunca ayarlayın. NOT: Dorsoventral koordinatı ayarlarken, iğne kafatasını delecektir. Şırınganın kafatasını deforme etmeden kafatasından geçmesini sağlamak için özen gösterilmelidir. Deformasyon meydana gelirse, iğneyi dorsoventral koordinat boyunca yavaşça çekerek, ardından iğneyi aynı yörünge boyunca geri yerleştirerek kafatası deformasyonu önlenir. Bu, iğnenin kafatasındaki delikten daha az kuvvetle ve deformasyon olmadan geçmesini sağlar.</li>
	<li>Stereotaktik enjektör arayüzünde, enjeksiyona başlamak için Çalıştır düğmesine tıklayın.</li>
	<li>Enjeksiyon bittikten sonra, çözeltinin geri akışını en aza indirmek için şırınga iğnesini 2 dakika yerinde bırakın.</li>
	<li>Şırıngayı, iğne ucu kafa derisinin 2 cm yukarısında olana kadar 2 dakika boyunca dorsoventral koordinat boyunca yavaşça çekin.</li>
	<li>Stereotaktik enjektör kolunu ameliyat alanından uzağa döndürün.</li>
</ol>5. Postoperatif bakım
<ol><li>Kafa derisini 6-0 monofilament dikişle kapatın. 0.3 cm'lik insizyonun merkezinde basit bir kesilmiş dikiş yapın.</li>
	<li>Yavruyu anesteziden çıkarın ve ısıtma yastığı üzerindeki güvenli bir alana yerleştirin.</li>
	<li>Barajının bakımı altındaki anesteziden kurtulmak için kemirgeni ev kafesine geri getirin. NOT: Barajın bakımına zamanında geri dönülmesi, ameliyat sonrası erken mortaliteyi azaltır.</li>
	<li>Ameliyat sonrası saatte 3 saat boyunca doğru refleksi kaybederek hayvanları anestezi için izleyin.</li>
	<li>Normal aktivite, yiyecek alımı ve kilo alımı için hayvanları 7 gün boyunca günlük olarak izleyin. Yara iyileşmesi, kapanması ve ameliyat yerinde kürkün yeniden ortaya çıkması için insizyon bölgesini izleyin. NOT: İzleme sırasında nöbetler, merkezi depresyon veya iştah azalması gibi nörolojik değişikliklerin gözlendiği nadir durumlarda, anestezi altında intravasküler perfüzyon veya servikal çıkık kullanarak hayvanı ötenazi yapın.</li>
	<li>Dikiş kapatıldıktan ve yara iyileştikten sonra enfeksiyonu önlemek için, insizyon bölgesine topikal üçlü antibiyotik uygulayın.</li>
</ol>6. MRG edinimi ve nicelleştirme
<ol><li>MRG'yi 4.7T veya 9.4T küçük hayvan tarayıcıda gerçekleştirin.</li>
	<li>Sıçanın vücut sıcaklığını korumak için ısıtma yastığını orta ayara getirin.</li>
	<li>% 3 izofluran kullanarak bir odada anestezi indükleyin. NOT: Her 15 dakikada bir ayak parmağı/kuyruk sıkışması yanıtını kullanarak yeterli anesteziyi onaylayın. Doku renginin, vücut ısısının ve solunum hızının görsel gözlemi ile anesteziyi izleyin.</li>
	<li>Anestezi uygulanan sıçanı MRG'ye yerleştirin, burun anestezi adaptöründe konumlandırılmış% 1.5 izofluran sabit bir akışla yerleştirilmiştir.</li>
	<li>T2 ağırlıklı hızlı dönüş yankı dizisi seçerek T2 ağırlıklı görüntüleme gerçekleştirin.<ol><li>4.7T MRI tarayıcı kullanıyorsanız, MRI yazılımına aşağıdaki parametreleri girin: tekrarlama süresi = 3.000 ms, yankı süresi = 27.50 ms, ortalama sayısı = 3, görüş alanı = 18.0 mm x 18.0 mm, matris = 128 x 128, eksenel dilim sayısı = 24, kalınlık = 0.50 mm.</li>
		<li>9.4T MRI tarayıcı kullanıyorsanız, MRI yazılımına aşağıdaki parametreleri girin: tekrarlama süresi = 5.000 ms, yankı süresi = 66.00 ms, yankı aralığı = 16.50 ms, ortalama sayısı = 2, tekrarlar = 1, nadir faktör = 8, görüş alanı = 16.0 mm x 16.0 mm, matris = 256 x 256, eksenel dilim sayısı = 32, kalınlık = 0.50 mm.</li>
	</ol></li>
	<li>Diziyi başlatmak için Devam düğmesine tıklayın.</li>
</ol>7. Görüntü işleme ve analizi
<ol><li>Beyin hacmini analiz etmek için yerel T2 ağırlıklı verileri kullanın. Lateral ventrikülleri manuel olarak tanımlamak için segmentasyon yazılımı kullanın6. Boya Fırçası Modu'na tıklayın ve kare fırça stilini seçin. Fırça boyutunu 1 olarak ayarlayın. Düzen denetçisi'ni tıklatın ve eksenel görünümü seçin. Sığdırmak için yakınlaştır'ı tıklayın. İmleci görüntünün üzerine getirin; lateral ventrikül boşluğunu izleyin ve doldurun.</li>
	<li>Araç çubuğunda Segmentasyon'a tıklayın | Bölümlere ayrılmış birimleri görüntülemek için Hacim ve İstatistikler.</li>
</ol>

<ol><li>Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+posthemorrhagic+hydrocephalus+from+prematurity%3A+Pathophysiology+and+current+treatment+concepts%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%3A+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Neonatal posthemorrhagic hydrocephalus from prematurity: Pathophysiology and current treatment concepts: A review.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 9 (3), (2012).</li>
<li>Hasselager, A. B., Børch, K., Pryds, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+perinatal+care+for+extremely+premature+infants+in+Denmark+from%5BTitle%5D)+AND+%22Danish+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Improvement in perinatal care for extremely premature infants in Denmark from.</a> Danish Medical Journal. 63 (1), to (1994).</li>
<li>Johnston, P. G., Gillam-Krakauer, M., Fuller, M. P., Reese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-Based+Use+of+Indomethacin+and+Ibuprofen+in+the+Neonatal+Intensive+Care+Unit%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Evidence-Based Use of Indomethacin and Ibuprofen in the Neonatal Intensive Care Unit.</a> Clinics in Perinatology. 39 (1), (2012).</li>
<li>Mahaney, K. B., Buddhala, C., Paturu, M., Morales, D., Limbrick, D. D., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+Hemorrhage+Clearance+in+Human+Neonatal+Cerebrospinal+Fluid%3A+Associations+with+Hydrocephalus%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Intraventricular Hemorrhage Clearance in Human Neonatal Cerebrospinal Fluid: Associations with Hydrocephalus.</a> Stroke. , (2020).</li>
<li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+CSF+Iron+Pathway+Proteins+in+Posthemorrhagic+Hydrocephalus%3A+Associations+with+Ventricle+Size+and+Neurodevelopmental+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal CSF Iron Pathway Proteins in Posthemorrhagic Hydrocephalus: Associations with Ventricle Size and Neurodevelopmental Outcomes.</a> Annals of Neurology. 90 (2), (2021).</li>
<li>Strahle, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Hemoglobin+and+Iron+in+hydrocephalus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Role of Hemoglobin and Iron in hydrocephalus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Neurosurgery. 75 (6), (2014).</li>
<li>Garton, T. P., He, Y., Garton, H. J. L., Keep, R. F., Xi, G., Strahle, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemoglobin-induced+neuronal+degeneration+in+the+hippocampus+after+neonatal+intraventricular+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hemoglobin-induced neuronal degeneration in the hippocampus after neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1635, (2016).</li>
<li>SNAP Tutorial and User’s Manual. , Medtext, Inc.. Hinsdale (IL). Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.itksnap.org/docs/fullmanual.php">http://www.itksnap.org/docs/fullmanual.php</a> (2022).</li>
<li>Goulding, D. S., Caleb Vogel,, Gensel, R., Morganti, J. C., Stromberg, J. M., Miller, A. J., A, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+brain+inflammation%2C+white+matter+oxidative+stress%2C+and+myelin+deficiency+in+a+model+of+neonatal+intraventricular+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%3A+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Acute brain inflammation, white matter oxidative stress, and myelin deficiency in a model of neonatal intraventricular hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 26 (6), (2020).</li>
<li>Strahle, J., Garton, H. J. L., Maher, C. O., Muraszko, K. M., Keep, R. F., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Hydrocephalus+After+Neonatal+and+Adult+Intraventricular+Hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Hydrocephalus After Neonatal and Adult Intraventricular Hemorrhage.</a> Translational Stroke Research. 3, (2012).</li>
<li>Jinnai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Model+of+Germinal+Matrix+Hemorrhage+in+Preterm+Rat+Pups%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Model of Germinal Matrix Hemorrhage in Preterm Rat Pups.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, (2020).</li>
<li>Georgiadis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+acute+brain+injuries+and+neurobehavioral+profiles+in+a+rabbit+model+of+germinal+matrix+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Characterization of acute brain injuries and neurobehavioral profiles in a rabbit model of germinal matrix hemorrhage.</a> Stroke. 39 (12), (2008).</li>
<li>Cherian, S. S., Love, S., Silver, I. A., Porter, H. J., Whitelaw, A. G. L., Thoresen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posthemorrhagic+ventricular+dilation+in+the+neonate%3A+Development+and+characterization+of+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuropathology+and+Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Posthemorrhagic ventricular dilation in the neonate: Development and characterization of a rat model.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 62 (3), (2003).</li>
<li>Balasubramaniam, J., Xue, M., Buist, R. J., Ivanco, T. L., Natuik, S., del Bigio,, R, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+motor+deficit+following+infusion+of+autologous+blood+into+the+periventricular+region+of+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Persistent motor deficit following infusion of autologous blood into the periventricular region of neonatal rats.</a> Experimental Neurology. (1), (2006).</li>
<li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+injury+in+premature+infants%3A+a+complex+amalgam+of+destructive+and+developmental+disturbances%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Brain injury in premature infants: a complex amalgam of destructive and developmental disturbances.</a> The Lancet Neurology. 8 (1), (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 3 (1), (1979).</li>
<li>Craig, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Experimental Neurology. 181 (2), (2003).</li>
<li>Lodygensky, G. A., Vasung, L., Sv Sizonenko,, Hüppi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimaging+of+cortical+development+and+brain+connectivity+in+human+newborns+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Neuroimaging of cortical development and brain connectivity in human newborns and animal models.</a> Journal of Anatomy. 217 (4), (2010).</li>
<li>Dean, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+differences+in+perinatal+rodent+oligodendrocyte+lineage+progression+and+its+correlation+with+human%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human.</a> Developmental Neuroscience. 33 (34), (2011).</li>
<li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Development of the blood-brain barrier.</a> Cell and Tissue Research. 314 (1), (2003).</li>
<li>Daneman, R., Zhou, L., Kebede, A. A., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+are+required+for+blood%C4%9D%E2%82%AC%26%2334%3Bbrain+barrier+integrity+during+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pericytes are required for bloodĝ€&#34;brain barrier integrity during embryogenesis.</a> Nature. 468 (7323), (2010).</li>
<li>Alles, Y. C. J., Greggio, S., Alles, R. M., Azevedo, P. N., Xavier, L. L., DaCosta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+preclinical+rodent+model+of+collagenase-induced+germinal+matrix%2Fintraventricular+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">A novel preclinical rodent model of collagenase-induced germinal matrix/intraventricular hemorrhage.</a> Brain Research. 1356, (2010).</li>
<li>Christian, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+hospitalization+of+preterm+infants+with+intraventricular+hemorrhage+and+hydrocephalus+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%3A+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Trends in hospitalization of preterm infants with intraventricular hemorrhage and hydrocephalus in the United States.</a> Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 17 (3), 2000-2010 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Hemoglobin enjeksiyonunu kullanan bu IVH modeli, özellikle hemoglobinin aracılık ettiği IVH patolojisinin incelenmesine izin verir. Tamamlayıcı çalışmalar için, hemoglobin in vitro olarak da kolayca verilebilir ve tam kanda bulunan mikroglia / makrofajlar tarafından yapılan proteinler için biyokimyasal tahlilleri karıştırmaz.
IVH-PHH'nin önde gelen teorileri arasında BOS dolaşımının mekanik olarak tıkanması, ependimal duvarları kaplayan kirpiklerin bozulması, inflamasyon, fibroz ve de...

Yenidoğan IVH, gelişmekte olan beynin lateral ventriküllerine bitişik olan hızlı hücre bölünmesi bölgesi olan germinal matriksten kaynaklanır. Bu yüksek vasküler yapı, erken doğuma bağlı hemodinamik instabiliteye karşı savunmasızdır. Germinal matriks kanamasında (GMH)-IVH'de germinal matriks rüptürü içindeki kırılgan kan damarları olduğunda lateral ventriküllere kan salınır. Derece IV IVH durumunda, periventriküler hemorajik enfarktüs de beyindeki kan ürünlerinin salınımına katkıda bulunabilir. 1 GMH-IVH kombinasyonu, özellikle yüksek dereceli kanamadan sonra (derece III ve IV) PHH'ye neden olabilir1. PHH, ventriküloperitoneal şantın yerleştirilmesiyle tedavi edilebilir, ancak şant yerleşimi IVH'den kaynaklanabilecek beyin hasarını tersine çevirmez. Modern yenidoğan yoğun bakımı IVH2, 3 oranlarını düşürmüş olsa da, IVH'nin neden olduğu beyin hasarı veya hidrosefali için spesifik bir tedavi yoktur. IVH kaynaklı beyin hasarı ve PHH için önleyici tedavilerin geliştirilmesinde önemli bir sınırlama, IVH patofizyolojisinin tam olarak anlaşılamamasıdır.
Son zamanlarda, anahtar kan parçalanma ürünü hemoglobinin erken BOS seviyelerinin, yüksek dereceli IVH4'lü yenidoğanlarda daha sonra PHH gelişimi ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Ayrıca, demir işleme yolu proteinlerinin BOS seviyeleri - hemoglobin, ferritin ve bilirubin - yenidoğan IVH'de ventrikül boyutu ile ilişkilidir. Bu aynı zamanda, daha yüksek ventriküler BOS ferritin düzeylerinin daha büyük ventrikül boyutu5 ile ilişkili olduğu preterm PHH'li bebeklerin çok merkezli bir kohortunda da gösterilmiştir.
Bu çalışmada, beyin hasarı ve PHH'nin nicelleştirilmesine ve yeni terapötik stratejilerin test edilmesine olanak tanıyan beyin ventriküllerine hemoglobin enjeksiyonunu kullanarak IVH kaynaklı beyin hasarı ve hidrosefalinin klinik olarak ilgili bir modelini geliştirdik (Şekil 1) 6, 7. Bu IVH modeli, prosedür süresince genel anestezi altına alınan yenidoğan sıçan yavrularını kullanır. Kafa derisinde bir orta hat insizyonu yapılır ve kafatası işaretlerinden (bregma veya lambda) türetilen koordinatlar, enjeksiyon için lateral ventrikülleri hedeflemek için kullanılır. Bir infüzyon pompası kullanılarak yapılan yavaş enjeksiyon, hemoglobini ventriküle iletir. Bu protokolün kullanımı kolaydır, çok yönlüdür ve IVH'nin PHH ile sonuçlanan farklı bileşenlerini modelleyebilir.

<table><tbody><tr><td>0.3 mL insülin şırıngası</td><td>BD Microfine + İnsülin Şırıngası</td><td>230-4533</td><td>0.3-0.5 mL sinringeler çalışacaktır</td></tr><tr><td>1.5 mL mikrotüp</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td>Parti No. K194642H -3 511</td></tr><tr><td>4.7T MRG</td><td>Agilent/Varian</td><td>4.7T/33 cm</td><td>Agilent/Varian DirectDrive 4.7-T (200-MHz) MRI sistemi</td></tr><tr><td>6-0 monofilament sütür</td><td>ETHICON</td><td>667G</td><td></td></tr><tr><td>9.4T MRI</td><td>Bruker</td><td>BioSpec 94/20</td><td>Bu protokolde kriyoprob olmadan kullanılır</td></tr><tr><td>Analitik terazi</td><td>CCURIS Instruments</td><td>W3200-320</td><td></td></tr><tr><td>Yapay BOS (aCSF)</td><td>Tocris Bioscience</td><td>3525</td><td>Parti No: 72A</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Products LP</td><td>301005-00</td><td>NDC 67618-150-09</td></tr><tr><td>Carprofen (enjekte edilebilir)</td> <td>Zoetis Inc.&nbsp;</td><td>PI 4019448</td><td>Rimadil</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Laboratuvarları</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Güneş Işını</td><td>E12107-819</td><td>UL 612A, Z-1228-001</td></tr><tr><td>Hemoglobin</td><td>MP Biyomedikal</td><td>100714</td><td>LOT NO. SR02321</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal Kritik Bakım</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran buharlaştırıcı</td><td>VETEQUIP</td><td>911103</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik kurulum için ışık</td><td>Dolan-Jenner endüstrileri</td><td>Fiber-Lite MI-150</td><td></td></tr><tr><td>Mikroenjeksiyon şırınga pompası</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>MICRO21</td><td>Seri 184034 T08K</td></tr><tr><td>MRI yazılımı</td><td>Bruker BioSpin</td><td>Paravision 360 3.2</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen</td><td>Airgas Sağlık</td><td>UN1072</td><td>LOT NUMARASI S1432080XA02</td></tr><tr><td>Sprague Dawley sıçanları</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Suş kodu: 001</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik alet</td><td>KOPF Instuments</td><td>Model 900LS Tembel Susan</td><td></td></tr><tr><td>Steril pamuk uçlu aplikatör</td><td>Fischerbrand</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bıçak</td><td>covetrus</td> <td># 10</td><td></td></tr><tr><td>Topikal üçlü antibiyotik</td><td>Üçlü Antibiyotik Merhem</td><td>NDC 51672-2120-1</td><td></td></tr><tr><td>Ventrikül hacmi ölçüm yazılımı</td><td>ITK-SNAP</td><td>ITK-SNAP 4.0.0 beta</td><td></td></tr></tbody></table>

İntraventriküler hemoglobin enjeksiyonu ile yenidoğan İntraventriküler kanamasının modellenmesi

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

Yenidoğan intraventriküler kanaması (IVH) erken doğumun yaygın bir sonucudur ve beyin hasarına, posthemorajik hidrosefaliye (PHH) ve yaşam boyu nörolojik defisitlere yol açar. PHH geçici ve kalıcı beyin omurilik sıvısı (BOS) saptırma prosedürleri (sırasıyla ventriküler rezervuar ve ventriküloperitoneal şant) ile tedavi edilebilirken, IVH kaynaklı beyin hasarı ve hidrosefaliyi önlemek veya tedavi etmek için farmakolojik stratejiler yoktur. IVH'nin patofizyolojisini daha iyi anlamak ve farmakolojik tedavileri test etmek için hayvan modellerine ihtiyaç vardır. Mevcut yenidoğan IVH modelleri olsa da, güvenilir bir şekilde hidrosefali ile sonuçlananlar genellikle patolojinin modellenmesini zorlaştırabilecek veya gözlemlenen klinik fenotipte değişkenlik yaratabilecek büyük hacimli enjeksiyonların gerekliliği ile sınırlıdır.
Son klinik çalışmalar, hemoglobin ve ferritinin IVH sonrası ventrikül genişlemesine neden olduğunu göstermiştir. Burada, kan parçalanma ürünü hemoglobinin küçük hacimli intraventriküler enjeksiyonlarını kullanarak PHH'nin klinik fenotipini taklit eden basit bir hayvan modeli geliştiriyoruz. Ventriküler genişleme ve hidrosefaliyi güvenilir bir şekilde indüklemenin yanı sıra, bu model periventriküler ve beyaz cevher bölgelerinde beyaz cevher hasarı, inflamasyon ve immün hücre infiltrasyonu ile sonuçlanır. Bu yazıda, intraventriküler enjeksiyon kullanılarak yenidoğan sıçanlarda IVH-PHH modellemesi için klinik olarak alakalı, basit bir yöntem açıklanmakta ve enjeksiyon sonrası ventrikül boyutunun ölçülmesi için yöntemler sunulmaktadır.

Enjeksiyonun başarısı radyolojik ve immünohistokimyasal yollarla doğrulandı. Hemoglobin enjeksiyonu yapılan hayvanlar, MRG ile değerlendirildiğinde orta derecede akut ventrikülomegali geliştirdi (Şekil 2A), aCSF enjekte edilen hayvanlara kıyasla hemoglobin enjeksiyonundan 24 saat ve 72 saat sonra anlamlı derecede daha büyük lateral ventriküller ile (Şekil 2B, C). Enjeksiyondan 38 gün sonra hemoglobin enjekte edilen ve aCSF enjekte edilen hayvanl...

Bu yazıda, insanlarda görülen patolojiyi taklit eden sıçan yavrularının kullanıldığı bir yenidoğan intraventriküler kanama modeli sunulmuştur.

İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...

Bu protokol önemlidir, çünkü IVH ile indüklenen beyin hasarı ve hidrosefalinin klinik olarak ilgili bir modelini geliştiriyoruz, ventriküllere hemoglobin enjeksiyonunu kullanıyoruz, bu da uygulamada ventrikül hacimlerinin daha sonra ölçülmesine izin veriyor, yeni terapötik stratejileri test etmek için. Bu tekniğin temel avantajı, özellikle hemoglobin ve demir yolu kan parçalanma ürünlerinin aracılık ettiği IVH patolojisinin incelenmesine izin vermesidir. Bu tekniğin kullanımı da kolaydır ve çok yönlüdür.Bu tekniğin etkileri, IVH patofizyolojisinin daha iyi anlaşılmasına ve IVH sonrası nörolojik sekellerin önlenmesi için klinik olarak ilgili tedavi stratejilerinin değerlendirilmesine olanak tanıdığından, hemorajik hidrosefali için tedavilerin geliştirilmesine doğru uzanmaktadır. Prosedürü gösteren, Avustralya Laboratuvarı'ndan bir Yardımcı Post-doc olan Sruthi Ramagiri olacak. Anestezi uygulanan sıçanı, burnu anestezi adaptöründe konumlandırılmış olarak stereotaktik aparata eğilimli olarak yerleştirmeye başlamak için.Ardından, dış işitsel meatus üzerindeki yırtılmayan kulak çubuklarını sıkarak kafayı sabitleyin. Kafayı temizlemek için, önce başın ortasındaki Betadine'e batırılmış steril pamuklu uçlu bir aplikatöre dokunun ve Betadine'i daireler halinde yaymak için dışa doğru hareket edin. Daha sonra işlemi% 70 etanol içine batırılmış bir aplikatör ile tekrarlayın.Daha sonra, bir neşter kullanarak, kafatasının bregmasını ortaya çıkarmak için başın ortasından dikey olarak aşağı doğru 0.3 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra pamuklu uçlu bir aplikatör kullanarak alanı kurulayın. Stereotaktik enjektörü kurmak için, önceden hazırlanmış hemoglobin çözeltisini 0.3 veya 0.5 mililitrelik bir şırıngaya çekin ve şırıngayı stereotaktik enjektör sistemine yerleştirin.Ardından, stereotaktik enjektör arayüzünü açın ve enjeksiyon hacmini ve hız ayarlarını girmek için yapılandırma düğmesine tıklayın. Ses seviyesine tıklayın ve hacmi 20.000 nanolitre olarak ayarlayın. Ardından infüzyon hızına tıklayın ve hızı dakikada 8.000 nanolitre olarak ayarlayın.Yapılandırmadan çıkmak için konumu sıfırla düğmesine tıklayın. İğne ucunda küçük bir hemoglobin boncuğu görünene kadar demleme düğmesine tıklayarak iğne ucunu yıkayın, ardından boncuğu nazikçe çıkarmak için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Hayvan enjeksiyonuna başlamak için, şırınganın mediolateral ve anteroposterior pozisyonlarını ayarlayarak stereotaktik enjeksiyon sisteminde bregmayı sıfır olarak ayarlayın.Daha sonra bregmadaki kafatasına hafifçe dokunmak için şırınga iğnesini indirin. Seçilen koordinatları belirledikten sonra, kafa derisini temizlemek için şırınga iğnesini kafatasının bir santimetre yukarısına kaldırın. Mediolateral ve anteroposterior koordinatları ayarlayın.Ardından, iğnenin kafatasına hafifçe dokunması için şırıngayı indirin ve dorsoventral koordinatı 30 saniyenin üzerine ayarlayın. Koordinatlar ayarlandıktan sonra, stereotaktik enjektör arayüzündeki çalıştır düğmesine tıklayarak enjeksiyona başlayın. Enjeksiyon bittikten sonra, çözeltinin geri akışını en aza indirmek için iğneyi iki dakika yerinde bırakın.Daha sonra, iğne ucu kafa derisinin iki santimetre yukarısında olana kadar şırıngayı dorsoventral koordinat boyunca iki dakika boyunca yavaşça çekin. Daha sonra stereotaktik enjektör kolunu ameliyat alanından uzağa döndürün ve kafa derisini 6-O monofilament sütür ile kapatın. MRG için, T2 ağırlıklı hızlı spin yankı dizisi seçerek T2 ağırlıklı görüntüleme gerçekleştirin.MRI parametrelerini metinde açıklandığı gibi ayarladıktan sonra, diziyi başlatmak için devam düğmesine tıklayın. Görüntü işleme ve beyin hacmi analizi için, segmentasyon yazılımında yerel T2 ağırlıklı verileri açın. Yanal ventrikülleri manuel olarak tanımlamak için boya fırçası moduna tıklayın ve kare fırça stilini seçin, ardından fırça boyutunu bir olarak ayarlayın.Ardından, düzen denetçisi'ne tıklayın, eksenel görünümü seçin ve sığdırmak için yakınlaştır'a tıklayın. Ardından imleci görüntünün üzerine yerleştirin ve lateral ventrikül boşluğunu izleyin ve doldurun. Son olarak, araç çubuğundaki segmentasyona tıklayın, ardından segmentlere ayrılmış hacimleri görüntülemek için hacim ve istatistiklere tıklayın.Hemoglobin enjeksiyonu yapılan hayvanlar, MRG ile değerlendirildiğinde orta derecede ventrikülomegali geliştirdi. ACSF enjekte edilen hayvanlara kıyasla, 24 saatte ve hemoglobin enjeksiyonundan 72 saat sonra önemli ölçüde daha büyük lateral ventriküllerle. İki sıçan grubu arasındaki lateral ventrikül hacmindeki fark 38 gün sonra anlamlı olmamasına rağmen, MRI taramaları hemoglobin alan sıçanların% 44'ünün hala çözülmemiş ventrikülomegali olduğunu göstermiştir.Ayrıca, ACSF ile karşılaştırıldığında, hemoglobin enjeksiyonu 38 gün sonra beyaz cevher hacminde önemli bir azalmaya neden olmuştur. Hemoglobin ayrıca, hemoglobin enjekte edildikten sonra pro-inflamatuar sitokin tümör nekroz faktörü alfanın önemli ölçüde daha yüksek seviyesinden açıkça görüldüğü gibi, in vivo bir enflamatuar yanıtı teşvik etti, ancak salin veya tam kan değil. Ayrıca, glial fibriller asidik proteinin immünohistokimyasal boyanması, hemoglobin enjeksiyonundan sonra, ACSF enjeksiyonundan sonra astrositlerin aktivasyonunun önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur.Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, lateral ventriküllere hemoglobin verilmesini sağlamak için doğru enjeksiyon koordinatlarını ayarlamaktır. Bu prosedürü takiben, BOS izleyicileri, BOS dolaşımındaki değişiklikleri ve IVH'yi takip eden efflux modellerini değerlendirmek için BOS boşluğuna teslim edilebilir. Bu ek yöntem, IVH PHH'de BOS akışının nasıl değiştirildiğini ele almaktadır.

modeling-neonatal-intraventricular-hemorrhage-through

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokolü açıklanan farelerde intraserebral kanama otolog kan enjeksiyonu modeli, iğne izi kadar kan reflü, pompa sistemi hiçbir antikoagülanlar riskini en aza indirmek için çift enjeksiyon tekniği kullanır ve sistemdeki tüm ölü boşluk ve genişletilebilir boru ortadan kaldırır.

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Intraserebral kanama (İSK) ve Klinik ilgili hayvan modelleri hemorajik inme bilgimizi genişletmek ve yeni tedavi stratejileri incelemek gereklidir. Bu çalışmada, biz tanımlamak ve farelerin bazal ganglion (korpus striatum) içine otolog tam kan ya da bakteriyel kollajenaz ya tek taraflı enjeksiyon uygulamak iki ICH modelleri değerlendirir.

Farelerde Modelleme İntraserebral Kanama: Otolog Kan veya bakteriyel kollajenaz Enjeksiyon

Bu video, yenidoğan intraventriküler kanamasının bir sıçan modelini oluşturmak için bir yöntemi göstermektedir. Bu prosedürde, anestezi uygulanmış bir sıçan yavrusu beynin lateral ventrikülüne hemoglobin enjekte edilir. Hemoglobin oksidatif strese neden olur ve intraventriküler kanamayı simüle ederek heme serbest bırakır. Reaktif oksijen türleri ve enflamatuar sitokinler tarafından yönlendirilen beyin dokularında ortaya çıkan hasar, intraventriküler kanamanın yaygın bir sonucu olan ventriküler...

Hemoglobinin İntraventriküler Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

İntraserebral kanamanın klinik öncesi modelleri, klinik hastalığın belirli yönlerini taklit etmek için kullanılır. Bu nedenle, yaralanma mekanizmaları ve potansiyel terapötik stratejiler araştırılabilir. Bu protokolde, intrastriatal (bazal gangliyonlar) otolog kan veya kollajenaz enjeksiyonları olmak üzere iki intraserebral kanama modeli tanımlanmıştır.

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Pediatrik hastalığın hayvan modelleri erken başlangıçlı ve agresif hastalığın ilerlemesini yaşayabilirsiniz. Klinik genç fare modelleri ile ilgili tedavi teslimat teknik olarak zor olabilir. Bu protokol, yaşamın ilk iki doğum sonrası gün içinde yeni doğmuş fareler için invazif olmayan bir damar içi enjeksiyon yöntemi tarif etmektedir.

Yenidoğan Farelerde intravenöz enjeksiyonlar

Burada, viral partiküllerin veya floresan mikroboncukların yenidoğan fare beynine intraserebroventriküler ve intravasküler enjeksiyonu için basit bir yöntemi açıklıyoruz. Virüs ve nanopartiküllerin lokalizasyon paterni, mikroskobik değerlendirme veya in situ hibridizasyon ile tespit edilebilir.

Yenidoğan Beyin içine Viral Parçacıklar ve Floresan mikro boncuklar intraserebroventriküler ve İntravasküler Enjeksiyon

Otolog kanın çift enjeksiyonu yoluyla bir sıçanda büyük bir pontin kanama modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Otolog Kanın Çift Enjeksiyonu ile Masif Pontine Kanaması

Travmatik olmayan intraventriküler kanamanın kemirgen modellerinde kafa içi basıncının izlenmesi güncel literatürde yaygın değildir. Burada, bir sıçan hayvan modelinde intraventriküler kanama sırasında kafa içi basıncı, ortalama arteriyel basıncı ve serebral perfüzyon basıncını ölçmek için bir teknik gösterilmektedir.

Nontravmatik İntraventriküler Kanama Kemirgen Modelinde İntrakraniyal Basınç İzleme

Bu makale, araştırmacılara hemorajik şokun bir bebek domuz modeli oluşturmak için ayrıntılı ve erişilebilir bir rehber sağlamayı amaçlamaktadır.

Hacim Kontrollü Hemorajik Şokun Domuz Bebek Modelinin Tanımı

Bu protokol, yenidoğan dönemi boyunca sıçanlarda ve farelerde kullanılabilecek tekrarlanabilir bir venöz uygulama yolunu göstermeyi amaçlamaktadır. Bu prosedür, öncelikle intravenöz uygulama kullanarak yenidoğan bakım ünitelerinde ilaç uygulamasını yansıtmak isteyen klinik öncesi kemirgen çalışmaları için önemlidir.

Retroorbital Ven Enjeksiyonunun Yenidoğan Kemirgen Modeli

Posthemorajik prematüre hidrosefali (PHHP), koryoamniyonit ve intraventriküler kanama kombine edilerek neonatal sıçanlarda modellenebilir. Bu doğum öncesi ve doğum sonrası olayların kombinasyonu, yaşam boyu makrosefali, ventrikülomegali ve yüksek kafa içi basınç dahil olmak üzere PHHP'nin klinik özelliklerini doğru bir şekilde özetler.

Sıçanlarda Prematüre Posthemorajik Hidrosefalisinin Modellenmesi

Öğrenin, hemoglobin enjeksiyonu kullanarak yenidoğan sıçanlarda intraventriküler kanama sonrası hidrosefalusu nasıl modelleyeceğinizi. Bu yöntem, ventrikül büyümesi ve beyaz cevher hasarını incelemek için güvenilir bir platform sunar.

İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

Daha fazla video keşfet