İntraventriküler Hemoglobin Enjeksiyonu ile Yenidoğan İntraventriküler Kanamasının Modellenmesi

Bu protokol önemlidir, çünkü IVH ile indüklenen beyin hasarı ve hidrosefalinin klinik olarak ilgili bir modelini geliştiriyoruz, ventriküllere hemoglobin enjeksiyonunu kullanıyoruz, bu da uygulamada ventrikül hacimlerinin daha sonra ölçülmesine izin veriyor, yeni terapötik stratejileri test etmek için. Bu tekniğin temel avantajı, özellikle hemoglobin ve demir yolu kan parçalanma ürünlerinin aracılık ettiği IVH patolojisinin incelenmesine izin vermesidir. Bu tekniğin kullanımı da kolaydır ve çok yönlüdür.

Bu tekniğin etkileri, IVH patofizyolojisinin daha iyi anlaşılmasına ve IVH sonrası nörolojik sekellerin önlenmesi için klinik olarak ilgili tedavi stratejilerinin değerlendirilmesine olanak tanıdığından, hemorajik hidrosefali için tedavilerin geliştirilmesine doğru uzanmaktadır. Prosedürü gösteren, Avustralya Laboratuvarı'ndan bir Yardımcı Post-doc olan Sruthi Ramagiri olacak. Anestezi uygulanan sıçanı, burnu anestezi adaptöründe konumlandırılmış olarak stereotaktik aparata eğilimli olarak yerleştirmeye başlamak için.

Ardından, dış işitsel meatus üzerindeki yırtılmayan kulak çubuklarını sıkarak kafayı sabitleyin. Kafayı temizlemek için, önce başın ortasındaki Betadine'e batırılmış steril pamuklu uçlu bir aplikatöre dokunun ve Betadine'i daireler halinde yaymak için dışa doğru hareket edin. Daha sonra işlemi% 70 etanol içine batırılmış bir aplikatör ile tekrarlayın.

Daha sonra, bir neşter kullanarak, kafatasının bregmasını ortaya çıkarmak için başın ortasından dikey olarak aşağı doğru 0.3 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra pamuklu uçlu bir aplikatör kullanarak alanı kurulayın. Stereotaktik enjektörü kurmak için, önceden hazırlanmış hemoglobin çözeltisini 0.3 veya 0.5 mililitrelik bir şırıngaya çekin ve şırıngayı stereotaktik enjektör sistemine yerleştirin.

Ardından, stereotaktik enjektör arayüzünü açın ve enjeksiyon hacmini ve hız ayarlarını girmek için yapılandırma düğmesine tıklayın. Ses seviyesine tıklayın ve hacmi 20.000 nanolitre olarak ayarlayın. Ardından infüzyon hızına tıklayın ve hızı dakikada 8.000 nanolitre olarak ayarlayın.

Yapılandırmadan çıkmak için konumu sıfırla düğmesine tıklayın. İğne ucunda küçük bir hemoglobin boncuğu görünene kadar demleme düğmesine tıklayarak iğne ucunu yıkayın, ardından boncuğu nazikçe çıkarmak için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Hayvan enjeksiyonuna başlamak için, şırınganın mediolateral ve anteroposterior pozisyonlarını ayarlayarak stereotaktik enjeksiyon sisteminde bregmayı sıfır olarak ayarlayın.

Daha sonra bregmadaki kafatasına hafifçe dokunmak için şırınga iğnesini indirin. Seçilen koordinatları belirledikten sonra, kafa derisini temizlemek için şırınga iğnesini kafatasının bir santimetre yukarısına kaldırın. Mediolateral ve anteroposterior koordinatları ayarlayın.

Ardından, iğnenin kafatasına hafifçe dokunması için şırıngayı indirin ve dorsoventral koordinatı 30 saniyenin üzerine ayarlayın. Koordinatlar ayarlandıktan sonra, stereotaktik enjektör arayüzündeki çalıştır düğmesine tıklayarak enjeksiyona başlayın. Enjeksiyon bittikten sonra, çözeltinin geri akışını en aza indirmek için iğneyi iki dakika yerinde bırakın.

Daha sonra, iğne ucu kafa derisinin iki santimetre yukarısında olana kadar şırıngayı dorsoventral koordinat boyunca iki dakika boyunca yavaşça çekin. Daha sonra stereotaktik enjektör kolunu ameliyat alanından uzağa döndürün ve kafa derisini 6-O monofilament sütür ile kapatın. MRG için, T2 ağırlıklı hızlı spin yankı dizisi seçerek T2 ağırlıklı görüntüleme gerçekleştirin.

MRI parametrelerini metinde açıklandığı gibi ayarladıktan sonra, diziyi başlatmak için devam düğmesine tıklayın. Görüntü işleme ve beyin hacmi analizi için, segmentasyon yazılımında yerel T2 ağırlıklı verileri açın. Yanal ventrikülleri manuel olarak tanımlamak için boya fırçası moduna tıklayın ve kare fırça stilini seçin, ardından fırça boyutunu bir olarak ayarlayın.

Ardından, düzen denetçisi'ne tıklayın, eksenel görünümü seçin ve sığdırmak için yakınlaştır'a tıklayın. Ardından imleci görüntünün üzerine yerleştirin ve lateral ventrikül boşluğunu izleyin ve doldurun. Son olarak, araç çubuğundaki segmentasyona tıklayın, ardından segmentlere ayrılmış hacimleri görüntülemek için hacim ve istatistiklere tıklayın.

Hemoglobin enjeksiyonu yapılan hayvanlar, MRG ile değerlendirildiğinde orta derecede ventrikülomegali geliştirdi. ACSF enjekte edilen hayvanlara kıyasla, 24 saatte ve hemoglobin enjeksiyonundan 72 saat sonra önemli ölçüde daha büyük lateral ventriküllerle. İki sıçan grubu arasındaki lateral ventrikül hacmindeki fark 38 gün sonra anlamlı olmamasına rağmen, MRI taramaları hemoglobin alan sıçanların% 44'ünün hala çözülmemiş ventrikülomegali olduğunu göstermiştir.

Ayrıca, ACSF ile karşılaştırıldığında, hemoglobin enjeksiyonu 38 gün sonra beyaz cevher hacminde önemli bir azalmaya neden olmuştur. Hemoglobin ayrıca, hemoglobin enjekte edildikten sonra pro-inflamatuar sitokin tümör nekroz faktörü alfanın önemli ölçüde daha yüksek seviyesinden açıkça görüldüğü gibi, in vivo bir enflamatuar yanıtı teşvik etti, ancak salin veya tam kan değil. Ayrıca, glial fibriller asidik proteinin immünohistokimyasal boyanması, hemoglobin enjeksiyonundan sonra, ACSF enjeksiyonundan sonra astrositlerin aktivasyonunun önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ortaya koymuştur.

Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, lateral ventriküllere hemoglobin verilmesini sağlamak için doğru enjeksiyon koordinatlarını ayarlamaktır. Bu prosedürü takiben, BOS izleyicileri, BOS dolaşımındaki değişiklikleri ve IVH'yi takip eden efflux modellerini değerlendirmek için BOS boşluğuna teslim edilebilir. Bu ek yöntem, IVH PHH'de BOS akışının nasıl değiştirildiğini ele almaktadır.