Name: 6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Keşfedin 6-hidroksidopamin ile yetişkin zebra balığında Parkinson modeli oluşturma ve lokomotor değerlendirme yöntemlerini. Video takip yazılımı ile yüzme davranışı analizi yaparak nörorejenerasyon mekanizmalarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Malezya Yüksek Öğretim Bakanlığı tarafından Temel Araştırma Hibe Programı [600-IRMI / FRGS 5/3 (033/2019)] kapsamında desteklenmiştir.

Bu çalışma, Hayvan Araştırma ve Etiği Komitesi (CARE), Universiti Technologi MARA (UiTM) [Referans No: UiTM CARE 346/2021, 7 Mayıs 2021 tarihli] tarafından onaylanmıştır.
NOT: Standart hayvancılık ve 6-OHDA lezyonlu yetişkin zebra balığı PD modelinin bakımı için yayınlanmış protokoller22,25,26 kullanılmıştır. Deneyler, standart uzunluğu 3.2-3.7 cm olan beş aylıktan daha eski yetişkin erkek zebra balığı (Danio rerio) ile yapılmıştır.
1. Zebra balığı bakımı ve ICV öncesi mikroenjeksiyon preparatları
<ol><li>Balıkları havalandırılmış bir su tankında 28 ± 1.0 ° C kontrollü bir sıcaklık altında tutun. Zebra balığı yetiştiriciliği ve bakımı için, deney boyunca ticari deniz tuzu (1 g / L) ile mineralize edilmiş damıtılmış su kullanın27.</li>
	<li>45 L tank başına maksimum 25 balık veya 1.8 L su başına bir balık barındırın ve bunları 14 saat ışık ve 10 saat karanlık fotoperiyot programına maruz bırakın. Balıkları günde en az iki kez, dondurularak kurutulmuş solucanlarla desteklenmiş yiyecek topaklarıyla besleyin.</li>
	<li>250 mL damıtılmış suda 2.5 g MS-222 ve 5 g sodyum bikarbonatı çözerek konsantre bir trikain metansülfonat (MS-222) stok çözeltisi hazırlayın. 200 mL çalışma anestezi çözeltisi üretmek için 2 mL stok çözeltisini seyreltin.</li>
	<li>İlk önce 0.2 mg askorbik asidi 1 mL% 0.9 w / v steril filtrelenmiş NaCl içinde çözerek 99.96 mM 6-OHDA hazırlayın. Çözeltiye toz halinde 25 mg 6-OHDA eklemeden önce çözeltiyi 0.2 mikron filtre ile filtreleyin. Her enjeksiyondan önce çözeltiyi taze olarak hazırlayın ve 4 ° C'de karanlıkta saklayın. DİKKAT: Uygun kişisel koruyucu ekipman (eldiven, laboratuvar önlüğü ve yüz maskesi) giyin ve kimyasalları kullanırken iyi laboratuvar uygulamalarını uygulayın. Kimyasalların tüm elleçlemesi bir biyogüvenlik kabini içinde yapılmalıdır.</li>
</ol>2. Zebra balıklarının anestezi ve ICV enjeksiyonu
<ol><li>Anestezi sırasında yetersizliği önlemek için balıkları 24 saat boyunca hızlandırın. Balığı, yaklaşık 1 dakika boyunca veya tüm görünür kas hareketleri durana kadar% 0.01 w / v MS-222 çözeltisi içeren bir kaba batırarak anestezi yapın.</li>
	<li>Anestezi uygulanan balıkları, stereomikroskop altına yerleştirilmiş suya batırılmış bir sünger üzerine yerleştirin ve balıkları düzenli olarak ıslatın.</li>
	<li>Zebra balığı beyninin frontal ve parietal kafatasını birbirine bağlayan metopik sütür (MS), koronal sütür (CS) ve sagital sütür (SS) arasındaki kesişime dayanarak enjeksiyon pozisyonunu tanımlayın.</li>
	<li>Zebra balığı kafatası üzerindeki spesifik anatomik pozisyon tarafından yönlendirilen kafatasında keskin bir 27 G iğne kullanarak 1,0 mm2 alanda küçük bir delik açın (Şekil 1A,B).</li>
	<li>Zebra balığı kafatasının kafatası çatısından 1.200 μm derinliğe ulaşana kadar mikrokapiler enjektörü 60° açıyla indirin (Şekil 1C). Konumu düzeltmek için Z sınırına basın.</li>
	<li>İlk enjeksiyon basıncını 4000 hPa'ya ve kompanzasyon basıncını 10 hPa'ya ayarlayın. Enjeksiyon süresini 0,3 sn'ye ayarlayın. Sonraki her enjeksiyonda enjeksiyon yoğunluğunu azaltın.</li>
	<li>0.5 μL 99.96 mM nörotoksin 6-OHDA (veya sahte kontrol grubu için% 0.9 w / v salin) enjekte edin ve mikrokılcal damarın 20 s dinlenmesine izin verin. Kurumasını önlemek için enjeksiyon işlemi boyunca balıkları damıtılmış suyla ıslatmaya devam edin.</li>
	<li>Mikrokılcal damarı yavaşça çıkarın ve balıkları akan damıtılmış su altında yeniden canlandırın. Balıkları izole edilmiş bir kurtarma tankına yerleştirin ve kurtarma işlemini potansiyel olarak bozabilecek dikkat dağıtıcı unsurları giderin.</li>
	<li>Tıkanıklığı gidermek ve enjeksiyon yoğunluğunun istenen 0.5 μL 6-OHDA hacmini elde etmek için yeterli olduğundan emin olmak için bir sonraki enjeksiyondan önce mikrokılcal damarı yıkayın.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63355/63355fig01v2.jpg"> Şekil 1: Nörotoksin enjeksiyon bölgesi, 6-OHDA. (A) Mikrokapiller giriş noktası, zebra balığı beyninin frontal ve parietal kafatasını birbirine bağlayan metopik sütür (MS), koronal sütür (CS) ve sagital sütür (SS) arasındaki kesişme ile yönlendirilir (plan görünümü). (B) Zebra balığı kafatasının ve beyninin şematik bir çizimi (plan görünümü), doğrudan habenula'nın (Hab) üzerine indirilen mikrokılcal damarı ve yarımküreler arasındaki kesişme noktasındaki giriş noktasını gösterir. (C) Zebra balığı beyninin şematik bir çizimi (sagital bölüm), enjeksiyon açısını ve penetrasyon derinliğini gösterir. Siyah nokta, hedeflenen bölgenin, ventral diensefalonun üzerinde yer alan lezyonlu bölgeyi temsil eder. Kısaltmalar: 6-OHDA: 6-hidroksidopamin, CS: koronal sütür, Dn: diensefalon, Hab: habenula, Hyp: hipotalamus, MS: metopik sütür, OB: koku alma ampulü, POA: preoptik alan, PT: posterior tüberkül, SS: sagital sütür, Tec: tektum ve Tel: telensefalon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63355/63355fig01largev2.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
3. Lokomotor değerlendirmesi
NOT: Zebra balıklarının lokomotor değerlendirmesi (n = altı / grup; sahte vs lezyonlu), 6-OHDA lezyonu sonrası üçüncü günde ve 30. günde yerleşik protokoller28,29 kullanılarak açık tank testi ile bireysel olarak değerlendirildi.
<ol><li>Video kaydı<ol>
<li>Deney tankını (uzunluk 20 cm, genişlik 11,5 cm, yüksekliği 13 cm) duvarları beyaz kağıtla kaplı olarak yükseltilmiş bir platform üzerine yerleştirin (Şekil 2A).</li>
		<li>Bir ışık kaynağı kullanarak tankı alttan aydınlatın. Depoyu damıtılmış suyla doldurun (% 80 -% 90 dolu) ve sıcaklığı 28 ± 1.0 ° C'de tutun. Bir termometre kullanarak sıcaklığı ölçün ve ticari bir akvaryum ısıtıcısı kullanarak düzenleyin.</li>
		<li>En az 2 dakikalık iklimlendirmeden sonra, 5 dakika boyunca bir video kamera kullanarak balık yüzme davranışını deney arenasının 2 boyutlu (2D) düzleminde bir plan görünümünden kaydedin (Şekil 2B). Önceki ve son kayıt grubunun yüzme davranışında tutarsızlık olmasını önlemek için, iklimlendirmeyi 10 dakika 30 aşmayın.</li>
		<li>Her konunun kat edilen mesafesini (cm) ve ortalama hızını (cm / s) elde etmek için açık tank protokolü ile video izleme yazılımı kullanarak videoları analiz edin.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63355/63355fig02.jpg"> Şekil 2: Zebra balığı lokomotor davranışının değerlendirilmesi için açık tank testinin deneysel kurulumu . (A) Deney tankı (önden görünüm), aşağıdan aydınlatılan yükseltilmiş bir platforma yerleştirilir. Tankın dört duvarı beyaz kağıtla kaplanmış ve kayıtlar eksenel olarak yakalanmıştır. Sıcaklık bir termometre kullanılarak ölçülür ve ticari bir akvaryum ısıtıcısı kullanılarak 28 ± 1.0 ° C'de düzenlenir. (B) Kurulum kullanılarak yakalanan video kaydının ekran görüntüsü (plan görünümü). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63355/63355fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="2"><li>Veri analizi<ol>
<li>Video izleme yazılımını açmak için simgeye çift tıklayın. Dosya sekmesine tıklayın ve Yeni Boş Deneme Oluştur'u seçin. Bu, kullanıcının deneme parametrelerini araştırmanın amaçlarına göre özelleştirmesine olanak tanır.</li>
		<li>Protokol sekmesine tıklayın, Video Kaynakları'nı seçin ve Yeni Video Kaynağı Ekle'ye tıklayın. Mevcut açılır listeye tıklayın ve Video Dosyası seçeneği. Bu, ilgilenilen video kayıtlarının seçilebileceği dosyaya göz atma açılır penceresini ister.</li>
		<li>Aparat alt sekmesine tıklayın ve aparatı ayarlamak için Dikdörtgen simgesini seçin. Tüm deneysel arenayı kaplamak için dikdörtgen simgeyi sürükleyin. Ölçek çubuğunu buna göre ayarlayın ve cetvel bölümünün uzunluğunda kullanılan ölçek ölçümünün sayısal değerini girin. Bu deney, açık tank testi için 10 mm'lik bir ölçek kullandı.</li>
		<li>Hayvanlar Cihaz Arka Planından Daha Koyu'nu seçerek hayvan rengini ayarlayın. İzleme'deki diğer kullanılabilir seçenekleri önceden ayarlanmış varsayılan ayarlara bırakın.</li>
		<li>Bölgeler alt sekmesinde, önceden çizilmiş aygıta tıklayın. Bu bölge, tüm testler için pozisyonunun aynı olduğu standart bölge olarak ayarlanır.</li>
		<li>Test zamanlama ve test verileri raporu altında aşağıdaki seçenekleri belirleyin: Test Süresi, Kat Edilen Toplam Mesafe ve Ortalama Hız. Listedeki diğer mevcut testler isteğe bağlıdır ve araştırmacının araştırmacı ilgisine bağlıdır.</li>
		<li>Deney sekmesinde, Ad bölümünün altındaki grup adını ve Hayvan Sayısı bölümüne grup başına düşen hayvan sayısını yazarak hayvanları test gruplarına göre atayın.</li>
		<li>Denemeyi çalıştırmak için Testler sekmesine geçin. Testi Başlat simgesine tıklayın ve tüm videolar analiz edilene kadar bekleyin.</li>
		<li>Lokomotor verilerini metin rapor formunda görüntülemek için Sonuçlar sekmesinde Raporu Görüntüle simgesine tıklayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bu çalışma, kurulan 6-OHDA kaynaklı, yetişkin zebra balığı bazlı PD modelinin lokomotor değerlendirmesini başarıyla göstermiştir. Tüm deney üç ana adımdan oluşuyordu: ICV öncesi mikroenjeksiyon preparatları, zebra balıklarının ICV mikroenjeksiyonu ve lokomotor değerlendirme. ICV mikroenjeksiyon prosedürünü takiben yetişkin zebra balıklarının sağlıklı bir şekilde iyileşmesini ve iyi deneysel sonuçları sağlamak için, bu çalışmada her adım için bazı iyi uygulamalar önerilmiştir.
ICV öncesi mikroe...

Parkinson hastalığı (PD), kas sertliği, istirahat titremesi ve bradikinezi ile belirgin bir şekilde karakterize bir hastalık, dünyada en hızlı büyüyen nörolojik hastalıktır1,2. Özellikle 50 yaş ve üzeri bireylerde PD riski ve prevalansı yaşla birlikte hızla artmaktadır3. PH'nin etiyolojisi ve patogenezi bugüne kadar tam olarak anlaşılamamıştır. Bu genellikle PD'nin erken başlangıcını tanı konmamış bırakmıştır. Şu anda, PD hastalarında dopamin eksikliği ve dopaminerjik nöronların (DpN) kaybı, motor semptomların tezahürü ile güçlü bir şekilde bağlantılıdır4. Bu ilişkiden yararlanarak, doğrudan dopamin replasmanı (yani levodopa) olarak hareket etmek veya DpN kaybını (yani derin beyin stimülasyonu) telafi etmek için çeşitli tedaviler tasarlanmıştır. Bu tedaviler semptomatik faydalar sağlasa da, hastalığın kötüleşen seyrini değiştirmez5. Bu önemli zayıflık göz önüne alındığında, hücre replasman tedavisi önerilmiştir. Bununla birlikte, bu yaklaşımın etkinliği, greft hazırlama, hücre büyüme kontrolü ve fenotip instabilitesinin zorlukları göz önüne alındığında tutarsızdır. Etik kaygıları artıran hücre replasman tedavisi, beyin tümörlerini ve istenmeyen bağışıklık reaksiyonlarını tetikleme riskini de beraberinde getirmektedir6,7.
Mevcut terapötik stratejilerin sınırlılıkları, PD tedavisinde potansiyel bir yaklaşım olarak DpN'nin rejenerasyonuna daha fazla vurgu yapılmasına yol açmıştır. DpN veya nörorejenerasyonun rejenerasyonu, sadece yeni bir terapötik yöntem olarak potansiyeli nedeniyle değil, aynı zamanda hastalığın mekanizmasını anlama aracı olarak da PD'nin yönetiminde umut verici atılımlardan biri olarak ortaya çıkmıştır8, 9. Bu yaklaşım, farklılaşma, migrasyon ve mevcut progenitör hücrelerin lezyonlu devreye entegrasyonu yoluyla nöronal fonksiyonun restorasyonuna odaklanmaktadır10. Nörorejenerasyonu daha fazla araştırmak için, çeşitli in vivo çalışmalar yapılmıştır. Memeliler, amfibiler ve sürüngenler gibi omurgalıların yaralanma sonrası yeni beyin hücreleri ürettikleri bulunmuştur11,12. Omurgalılar arasında, memeli hayvanlar, insanlara genetik benzerlikleri nedeniyle daha çok aranmaktadır. Bununla birlikte, memeliler, merkezi sinir sisteminde (CNS) bir beyin lezyonunu takiben yetişkinliğe kadar sürebilen sınırlı ve zayıf onarıcı kapasite sergilerler13. Genel olarak, memeliler, üretilen düşük sayıda nöronun PD'de gözlenen hasarlı sinir devrelerini restore etmek için yeterli olmayacağı göz önüne alındığında, nörorejenerasyonu anlamak için hayvan modelleri olarak uygun değildir. Bu nedenle, özellikle zebra balıklarında teleost tabanlı model, yüksek proliferatif oranı, sürekli kendini yenileme kabiliyeti ve insanlarla beyin homolojisini kapatma kabiliyeti nedeniyle büyük ölçüde tercih edilmektedir14,15.
Zebra balığı en yaygın olarak PD16'daki düzensiz hareketi incelemek için kullanılır. Zebra balığı bazlı PD modeli genellikle 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) ve 6-hidroksidopamin (6-OHDA)17 içeren nörotoksinler tarafından indüklenir. Spesifik DpN kaybını ve dopamin seviyelerinin azalmasını indüklemede etkili olmasına rağmen, MPTP tabanlı modeller, DpN kaybı yalnızca CNS18 ile sınırlı olmadığından PD koşullarını yakından taklit etmez. 6-OHDA'nın kan-beyin bariyerini geçememesi, intramüsküler olarak değil, intrakraniyal olarak uygulandığında beyindeki hücresel ve fonksiyonel değişiklikler üzerindeki etkilerini kısıtlamıştır19. 6-OHDA'nın periferik uygulaması, sinir sistemi boyunca dopamin seviyelerinin küresel olarak azalmasına neden olmuştur20. 6-OHDA'nın beyin omurilik sıvısına uygulanması, CNS21 boyunca DpN'nin ablasyonuna neden olurken, PD'de görüldüğü gibi durumu taklit etmez, bu sayede DpN kaybı özellikle insan beyninin substantia nigra'sında meydana gelir. 6-OHDA'nın ICV uygulaması, aksine, zebra balığı beynindeki ventral Dn bölgesinde, substantia nigra22'ye çok benzeyen DpN'nin önemli ablasyonunu spesifik olarak indükledi. İlginçtir ki, DpN'nin iyileşmesi 6-OHDA kaynaklı lezyondan 30 gün sonra bildirilmiştir ve bu nöronlar yaşam boyunca hayatta kalmıştır23,24. DpN'nin fonksiyonel geri kazanımı, 6-OHDA kaynaklı yetişkin zebra balığı bazlı PD modeli 22 kullanılarak kat edilen mesafenin (cm) ve ortalama hızın (cm/s) lokomotor değerlendirmesi ile gösterilmiştir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Malzemeler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>6-Hidroksidopamin (6-OHDA)</td> <td>Sigma-Aldrich, Missouri, ABD</td><td>162957</td><td></td></tr><tr><td>Askorbik asit</td><td>Thermo Fisher Scientific, Kaliforniya, ABD</td><td>FKC # A / 8882/53</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık pastör pipeti, 3 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific, California, ABD</td><td>FB55348</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü, 0.2 mL</td><td>Eppendorf, Hamburg, Almanya</td><td>30124332</td><td></td></tr><tr><td>Güzel konik şişe, 100 mL</td><td>Evergreen Mühendislik & Kaynaklar, Semenyih, Malezya</td><td>SumYau0200</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, ABD</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, ABD</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon, Tokyo, Japonya</td><td>SMZ745</td><td></td></tr><tr><td>Trikain metansülfonat (MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, ABD</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ANY-labirent yazılımı</td><td>Stoelting Co., Illinois, ABD-sürüm</td><td></td> <td>7.0; video izleme yazılımı</td></tr><tr><td>Cubis II Micro Lab Balance</td><td>Sartorius, G&ouml; ttingen, Almanya</td><td>SE 2</td><td></td></tr><tr><td>FemtoJet IV mikroenjektör</td><td>Eppendorf, Hamburg, Almanya</td><td>5192000035</td><td></td></tr><tr><td>Femtotip II, steril enjeksiyon kılcal</td><td>damar Eppendorf, Hamburg, Almanya</td><td>5242957000</td><td></td></tr><tr><td>InjectMan 4 mikromanipülatör</td><td>Eppendorf, Hamburg, Almanya</td><td>5192000027</td><td></td></tr><tr><td>LED Portatif Lamba</td><td>MR. DIY, Selangor, Malezya 9023251</td><td></td><td>20 mAh</td></tr><tr><td>PELCO Pro Superalloy, ofset, ince uçlar</td><td>Ted Pella, California, ABD</td><td>5367-12NM</td><td></td></tr><tr><td>Shanda akvaryum ısıtıcısı</td><td>Yek Fong Akvaryumu, Selangor, Malezya</td><td>SDH-228</td><td></td></tr><tr><td>Termometre</td><td>Sera Precision, Heinsberg, Almanya</td><td>52525</td><td></td></tr><tr><td>Video kamera</td><td>Nikon, Tokyo, Japonya</td><td>D3100</td><td></td></tr></tbody></table>

6-hidroksidopamin kaynaklı yetişkin zebra balığı bazlı parkinson hastalığı modelinin lokomotor değerlendirmesi

Locomotor Assessment of 6-Hydroxydopamine-induced Adult Zebrafish-based Parkinson's Disease Model

Parkinson hastalığında (PD) dopaminerjik nöronal kaybı geciktirmede mevcut tedavilerin sınırlamaları, bu nöronları geri yükleyebilecek alternatif tedavilere olan ihtiyacı artırmaktadır. Şu anda preklinik in vivo modeller kullanılarak nörorejenerasyonun daha iyi anlaşılması için çok çaba sarf edilmektedir. Bununla birlikte, kendi kendini onarmak için bu rejeneratif yetenek, memelilerde verimsizdir. Zebra balığı gibi memeli olmayan hayvanlar, sürekli kendini yenileme ve insanlara yakın bir beyin homolojisine sahip olma kabiliyeti nedeniyle mükemmel bir nörorejeneratif model olarak ortaya çıkmıştır. İn vivo nörorejenerasyonda yer alan hücresel olayları aydınlatma çabalarının bir parçası olarak, 6-hidroksidopamin (6-OHDA) kaynaklı yetişkin zebra balığı bazlı PD modelini kurduk. Bu, zebra balığı beyninin ventral diensefalonunda (Dn) dopaminerjik nöronları (DpN) spesifik olarak ablate etmek için 99.96 mM 6-OHDA'nın optimize edilmiş intraserebroventriküler (ICV) mikroenjeksiyonu ile elde edildi. İmmünofloresan, postlezyonun üçüncü gününde DpN ablasyonunun %85'inden fazlasını ve lezyonlu bölgede 30 günlük postlezyonda DpN'nin tam restorasyonunu gösterdi. Bu çalışma, lezyonu takiben zebra balığı yüzme davranışının bozulmasını ve ardından iyileşmesini, kat edilen mesafe (cm) ve ortalama hız (cm / s) olmak üzere iki parametrenin ölçüldüğü açık alan testi kullanılarak belirlemiştir. Hareket, video izleme yazılımı kullanılarak her grubun (n = 6) ayrı balıklarının kayıtlarını analiz ederek değerlendirildi. Bulgular, lezyonlu zebra balıklarının 3 gün postlezyonunda (p) shamile kıyasla hızlarında (cm / s) ve kat edilen mesafede (cm) anlamlı bir azalma (p < 0.0001) gösterdi. Lezyonlu zebra balığı, 30 gün sonra yüzme davranışının tamamen iyileştiğini gösterdi. Mevcut bulgular, 6-OHDA lezyonlu yetişkin zebra balığının, PD'de nörorejenerasyonun incelenmesini kolaylaştırmak için tekrarlanabilir kalitede mükemmel bir model olduğunu göstermektedir. nörorejenerasyonun altında yatan mekanizmaların yanı sıra süreci modüle eden içsel ve dışsal faktörler üzerine gelecekteki çalışmalar, PD'ye karşı yeni hücre replasman tedavi stratejileri hakkında önemli bilgiler sağlayabilir.

Bu deney, 6-OHDA ile ICV mikroenjeksiyonunu takiben yetişkin zebra balığı yüzme davranışındaki değişiklikleri değerlendirdi. 6-OHDA'nın tercih edilen nörotoksin olarak kullanılmasının nedeni, ilgilenilen ventral diensefalon (Dn) 16 alanında DpN'nin spesifik ve hedefli ablasyonunu üreten kan-beyin bariyerini geçememesinden kaynaklanıyordu. Buradaki DpN alt popülasyonu, insanın substantia nigra pars compacta31'indeki DpN alt popülasyonuna anatomik benzerlik göstermektedir.</p...

Bu protokol, yetişkin zebra balıklarının ventral diensefalonda (Dn) nörotoksik 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ile intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonunu ve bir video izleme yazılımı kullanılarak analizin eşlik ettiği açık tank testi kullanılarak yüzme davranışı postlezyonunun bozulmasının ve daha sonra iyileşmesinin değerlendirilmesini açıklamaktadır.

6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi

The limitations of current treatments in delaying dopaminergic neuronal loss in Parkinson&#39;s disease (PD) raise the need for alternative therapies that ...

Protokol, ventral diensefalonda nörotoksin 6-hidroksidopaminin intraserebroventriküler enjeksiyonunu takiben zebra balığı motor bozukluğunu ve müteakip iyileşmeyi göstermede önemlidir. Bu teknik, çok basit bir kurulum kullanarak, 6-OHDA lezyonlu yetişkin zebra balıklarının ventral diensefalonundaki dopaminerjik nöronların spesifik ablasyonuna karşılık gelen fonksiyonel etkilerdeki değişiklikleri göstermektedir. Nörorejenerasyonun altında yatan mekanizmaların yanı sıra süreci modüle eden içsel ve dışsal faktörler üzerine gelecekteki çalışmalar, Parkinson hastalığına karşı hücre replasman tedavi stratejileri hakkında önemli bilgiler sağlayabilir.Balıkları, litre ticari deniz tuzu başına bir gram ile, 28, artı veya eksi bir santigrat derece kontrol sıcaklığı altında, havalandırılmış damıtılmış mineralize bir su tankında tutun. 45 litrelik tank başına en fazla 25 balık barındırın ve bunları 14 saatlik bir ışığa ve 10 saatlik karanlık fotoperiyoda maruz bırakın. Balıkları günde en az iki kez, dondurularak kurutulmuş solucanlarla desteklenmiş yiyecek topaklarıyla besleyin.250 mililitre damıtılmış suda iki buçuk gram Trikain metansülfonat ve beş gram sodyum bikarbonat çözerek bir Trikain metansülfonat stok çözeltisi hazırlayın. 200 mililitre çalışma anestezi çözeltisi yapmak için iki mililitre stok çözeltisini seyreltin. 99.96 milimolar 6-hidroksidopamini, ilk önce 0.2 miligram askorbik asidi, hacim steril filtrelenmiş sodyum klorür ile% 0.9 ağırlıkta% 0.9 ağırlığında çözerek taze olarak hazırlayın.Çözeltiyi 0,2 mikron filtre ile filtreleyin. Daha sonra çözeltiye toz halinde 25 miligram 6-hidroksidopamin ekleyin. Anestezi uygulanan balıkları, stereo mikroskop altına yerleştirilmiş suya batırılmış bir sünger üzerine yerleştirin ve balıkları düzenli olarak ıslatın.Zebra balığı beyninin parietal ve frontal kafatasını birbirine bağlayan metopik sütür, koronal sütür ve sagital sütür arasındaki kesişime dayanarak enjeksiyon pozisyonunu tanımlayın. Ardından, keskin bir 27 gauge iğne kullanarak bir milimetre karelik küçük bir delik açın. Zebra balığı kafatasının kafatası çatısından 1200 mikrometre derinliğe ulaşana kadar mikrokapiler enjektörü 60 derecelik bir açıyla indirin.Konumu düzeltmek için Z sınırına basın. İlk enjeksiyon basıncını 4.000 hektopaskal olarak ayarlayın. 2.3 saniyede enjeksiyon süresi.10 hektopaskal için kompanzasyon basıncı. Sonraki her enjeksiyonda enjeksiyon yoğunluğunu azaltın. Sahte kontrol grubuna 0.5 mikrolitre 99.96 milimolar nörotoksin 6-hidroksidopamin veya hacim salinine göre% 0.9 ağırlık enjekte edin ve mikrokılcal damarın 20 saniye dinlenmesine izin verin.Kurumasını önlemek için balıkları işlem boyunca damıtılmış suyla ıslatmaya devam edin. Mikrokılcal damarı yavaşça çıkarın ve balıkları akan damıtılmış su altında yeniden canlandırın. Balıkları izole edilmiş bir kurtarma tankına yerleştirin ve kurtarma işlemini potansiyel olarak bozabilecek dikkat dağıtıcı unsurları giderin.Bir sonraki enjeksiyondan önce mikrokapiler ile yıkayın, tıkanıklığı temizleyin ve enjeksiyon yoğunluğunun istenen 0.5 mikrolitre 6-hidroksidopamin hacmini elde etmek için yeterli olduğundan emin olun. Zebra balıklarının lokomotor değerlendirmesini ayrı ayrı, açık tank testi yoluyla, üçüncü gün ve 30. günde, 6-hidroksidopamin sonrası yapın. Duvarları beyaz kağıtla kaplı deney tankını yükseltilmiş bir platforma yerleştirin.Bir ışık kaynağı kullanarak tankı alttan aydınlatın. Tankı% 80 ila% 90 damıtılmış suyla doldurun ve sıcaklığı 28, artı veya eksi bir santigrat derecede tutun. Bir termometre kullanarak sıcaklığı ölçün ve ticari bir akvaryum ısıtıcısı kullanarak düzenleyin.En az iki dakikalık iklimlendirmeden sonra, beş dakika boyunca bir video kamera kullanarak, balık yüzme davranışını deney alanının iki boyutlu düzleminde planlı bir görünümden kaydedin. Tutarsızlıkları önlemek için, farklı kayıt gruplarında, 10 dakikalık iklimlendirmeyi geçmeyin. Kat edilen mesafenin ve her konunun ortalama hızının elde edilmesi için açık tank protokolüne sahip video izleme yazılımını kullanarak videoları analiz edin.Bu deney, 6-hidroksidopamin ile intraserebroventriküler mikroenjeksiyonu takiben yetişkin zebra balığı yüzme davranışındaki değişiklikleri değerlendirdi. Ana beyin bölgesi, preoptik bölge, posterior tüberkülum ve hipotalamustan oluşan ventral diensefalondu. Ventral diensefalondaki tirozin hidroksilaz immünoreaktif dopaminerjik nöronların% 85'inden fazlası üçüncü gün postlezyonunda ablatlandı.Tirozin hidroksilaz immünoreaktif dopaminerjenik nöronların sayısı daha sonra 30 günlük postlezyonda tam rejenerasyona ulaşmadan önce, 14. gün postlezyonunda% 50'den fazla artar. Zebra balıklarının yüzme davranışının video izleme yazılımı kullanılarak analizi, lezyonlu grubun hem ortalama hızının hem de seyahat ettiği mesafenin, üçüncü gün postlezyonunda, sahte ile karşılaştırıldığında% 45'in altına düştüğünü göstermiştir. Lezyonlu grup, 30 günlük postlezyon ile karşılaştırıldığında, ortalama hız veya kat edilen mesafe arasında anlamlı bir fark olmaksızın motor fonksiyon iyileşmesi sergiledi.Lokomotor değerlendirmesinin sabit bir zaman dilimi içinde yapılması önemlidir. Örneğin, 08:00 - 12:00 arası. Ve su sıcaklığı deney boyunca 28 santigrat derecede tutuldu. Yetişkin zebra balığı beyninin 6-OHDA enjeksiyonunu takiben, dopaminerjik nöronların ablasyonunun ek değişikliklerini veya fonksiyonel etkilerini araştırmak için shoaling ve anksiyete benzeri davranışlar gibi diğer davranış testleri yapılabilir.

locomotor-assessment-6-hydroxydopamine-induced-adult-zebrafish-based

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Parkinson hastalığı, deneysel 6-OH-dopamin tarafından tetiklenen olabilir striatum, dopaminerjik innervasyon kaybına neden olur. Biz stereotaksik lezyon gerçekleştirmek ve farelerde apomorfin bağlı dönme davranışı nasıl izleneceğini açıklar. Bu model, Parkinson hastalığı için yeni tedavilerin test etmek için faydalı ve güvenilir.

Parkinson Hastalığı için murin Model: 6-OH Dopamin Lezyon Davranış Testi

Zebra balığı, kas fonksiyonlarını ve hastalıklarını incelemek için mükemmel bir modeldir. Erken embriyogenez sırasında zebra balığı düzenli kas kasılmalarına başlar ve ritmik yüzme davranışı üretir ve bu da kas bozulduğunda değişir. Burada, yüzme performansını kas fonksiyonunun bir ölçüsü olarak incelemek için dokunma ile uyarılmış bir tepki ve hareket testini açıklıyoruz.

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Biz bir fare modeli için Parkinson hastaligi MPTP ve davranışsal değerlendirme motor işlevleri ölçmek için silindir ve açık alan testleri kullanarak kullanarak kurulması tanımlamak. O zaman bir örnek olarak PD ilaçların çalışmada bu modeli uygulamak nasıl göstermek için L-DOPA kullanın.

Bir fare MPTP kaynaklı Parkinson hastalığı modelinde kendiliğinden hareket davranış değerlendirme

Burada, DEPDC5 geninin geçici inhibisyonundan kaynaklanan bir zebra balığı epilepsi modelinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Zebra balığı epilepsi modelinde davranışsal ve fizyolojik analiz

6-hidroksidopamin (6-OHDA) modeli, Parkinson Hastalığının anlaşılmasını ilerletmek için on yıllardır kullanılmaktadır. Bu protokolde, medial ön beyin demetine 6-OHDA enjekte ederek, motor eksiklikleri değerlendirerek ve basamaklama testini kullanarak lezyonları tahmin ederek sıçanda tek taraflı nigrostriatal lezyonların nasıl gerçekleştirileceğini gösteriyoruz.

Parkinson Hastalığının 6-hidroksidopamin Sıçan Modeli

L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin kemirgen modelleri, L-DOPA'nın tekrarlanan uygulaması nedeniyle ortaya çıkan belirtileri hafifletmek veya gelişimi hafifletmek için terapötik müdahaleleri tanımlamak için paha biçilmez araçlardır. Bu protokol, Parkinson hastalığının tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçan modelinde diskinetik benzeri hareketlerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir.

Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi

Bu makalede, Parkinson hastalığının sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezileri indükleme ve değerlendirme yöntemleri açıklanmaktadır. Protokol, hem distonik hem de hiperkinetik olan bir dizi diskinetik davranışın yoğunluğu ve sıklığı hakkında ayrıntılı bilgi sunarak, bu karşılanmamış tıbbi ihtiyacı hedefleyen tedavileri test etmek için güvenilir bir araç sağlar.

Parkinson Hastalığının Sıçan Modelinde Levodopa Kaynaklı Diskinezilerin İndüksiyonu ve Değerlendirilmesi

Bu protokol, MPTP ile tedavi edilen zebrafish larvalarında Parkinson hastalığına benzeyen motor ve motor dışı eksiklikleri değerlendirmek için davranışsal fenotipleme paradigması oluşturur.

Davranışsal Deneye Dayalı Zebrafish Larvalarında MPTP Kaynaklı Parkinson Benzeri Davranışsal Fenotiplerin Fenotipik Profillenmesi

Locomotion genellikle, nöroloji ve ortopedi gibi alanlarda çeşitli hastalık modellerinde bir davranış sonucu olarak incelenir. Bu video kağıt dizginlenmemiş lokomosyon sırasında sıçan zemin reaksiyon kuvvetleri ve kinematik toplamak için bir yöntem tarif etmek niyetindedir.

Kinematik ve Zemin Mukabele Gücü&#39;nün Belirlenmesi: Genç Yetişkin, Orta yaşlı ve Geriatrik Sıçanlar, bir gösteri miktarının Lokomotor Yetenekler

Parkinson hastalığı hareket yeteneği etkilere neden, merkezi sinir sistemindeki dopaminerjik nöronların dejenerasyonu ile sonuçlanan bir nörodejeneratif hastalıktır. Rotenon modelleri Drosophila Parkinson hastalığı bulunmaktadır. Bu kağıt rotenone neden spontan ve irkilme-kaynaklı hem lokomosyon eksiklikleri niteleyen iki deneyleri özetliyor.

Yöntem Spontan Karakterizasyonu Ürkütme kaynaklı hareket yeteneği bir Rotenon ile uyarılan Parkinson Hastalığı Modeli için<em&gt; Drosophila</em

Keşfedin 6-hidroksidopamin ile yetişkin zebra balığında Parkinson modeli oluşturma ve lokomotor değerlendirme yöntemlerini. Video takip yazılımı ile yüzme davranışı analizi yaparak nörorejenerasyon mekanizmalarını inceleyin.

6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet