Name: Meme Tümörü Mikroçevresinin İntravital Görüntülemesi için Etiketsiz Bir Segmentasyon Yaklaşımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: Keşfedin meme tümörü mikroçevresinin etiketsiz segmentasyon yöntemiyle intravital görüntülemesini. Kollajen ikinci harmonik jenerasyonu ve NAD(P)H otofloresansı kullanılarak tümör, stroma ve vasküler bölmeler ayrıştırılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, bu çalışmayı finanse etmek için NCI R01 CA216248, CA206458 ve CA179556 hibelerini kabul etmek istiyor. Ayrıca, Dr. Kevin Eliceiri ve görüntüleme grubuna, intravital programımızın erken gelişimindeki teknik uzmanlıkları için teşekkür ederiz. Ayrıca Dr. Ben Cox'a ve Morgridge Araştırma Enstitüsü'ndeki Eliceiri İmalat Grubu'nun diğer üyelerine, MIW'nin ilk aşamalarındaki temel teknik tasarımları için teşekkür ederiz. Dr. Ellen Dobson, ImageJ eğitilebilir WEKA segmentasyon aracı hakkında yararlı konuşmalara yardımcı oldu. Ayrıca, mikroskoplarını zamanında kullandıkları için Dr. Melissa Skala ve Dr. Alexa Barres-Heaton'a teşekkür ederiz. Son olarak, fare kullanımı ve bakımıyla ilgili tüm düşünceli tartışmalar ve tavsiyeler için Dr. Brigitte Raabe, DVM'ye teşekkür ederiz.

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

4D intravital görüntüleme, doğal tümör mikroçevresinin mekansal ve zamansal bağlamındaki dinamik fizyolojik etkileşimleri araştırmak için güçlü bir araçtır. Bu makale, tümör kütlesi, bitişik stroma veya vasküler ağa yakın dinamik hücre etkileşimlerini sadece ikinci harmonik jenerasyondan veya NAD (P) H otofloresansından gelen endojen sinyalleri kullanarak bölümlere ayırmak için çok temel ve uyarlanabilir bir operasyonel çerçeve sunmaktadır. Bu protokol, görüntüleme penceresinin implantasyonundan görüntü toplama, analiz v...

Tümör mikroortamındaki hücre dışı matriksin (ECM), hastalığın ilerlemesini daha da kolaylaştırmak için çoklu hücre tipleri tarafından dinamik olarak biriktirildiği ve yeniden şekillendirildiği bilinmektedir 1,2,3. Bu matris değişiklikleri, hücre davranışını değiştiren ve sıklıkla matris yeniden şekillenmesinin devam eden bir döngüsüyle sonuçlanan hem mekanik hem de biyolojik ipuçları sağlar4. Tümör hücreleri ve hücre dışı matriks arasındaki dinamik, karşılıklı etkileşimin araştırılması genellikle üç boyutlu (3D) in vitro kültür veya mikroakışkan sistemler kullanılarak gerçekleştirilir. Bu aşağıdan yukarıya yaklaşımlar ECM yeniden şekillenme mekanizmalarını göstermiş olsa da 5,6,7, artmış proliferasyon8, epitelden mezenkimal geçişegeçiş 9,10,11,12 ve tümör hücresi migrasyonu ve invazyonu 7,13,14,15,16 , odak noktaları öncelikle fizyolojik bir doku içinde bulunan etkileşimlerin çeşitliliği ve heterojenliği ile karşılaştırıldığında homojen bir 3D matris içindeki birkaç hücre tipi (örneğin, tümör hücreleri veya fibroblastlar) üzerinde olmuştur. İn vitro sistemlere ek olarak, ex vivo tümör histolojisi de bu hücre-hücre ve hücre-ECM etkileşimleri hakkında bazı bilgiler sağlayabilir17. İmmünohistokimya, ECM'nin mekansal olarak heterojen bileşimi ve mimarisi açısından çoklu hücre tiplerini analiz edebilme avantajına sahiptir, ancak sabit dokunun statik sonlanım noktaları, hücreler ve mikroçevre arasındaki etkileşimlerin dinamik doğasını yakalamaz. İntravital görüntüleme, doğal tümör mikroçevresinin fizyolojik bağlamı içinde çeşitli ve dinamik etkileşimleri sorgulamak için kapıyı açmıştır.
İntravital tümör görüntülemenin yetenekleri hızla ilerlemektedir. Görüntüleme pencerelerinin tasarımındaki gelişmeler ve pencereleri implante etmek için cerrahi teknikler, çeşitli anatomik lokalizasyonlarda (yani primer tümör, lenf nodları, metastatik bölgeler18,19,20) uzun süreli uzunlamasına tümör görüntülemesini mümkün kılmıştır. Dahası, optik enstrümantasyonun çoklu boyutlarda (yani spektral, uzamsal floresan yoğunluğu ve kullanım ömrü) ve yüksek çözünürlükte ve hızda (video hızı) verileri görselleştirme ve toplama kapasitesi yaygın olarak erişilebilir hale gelmektedir. Gelişmiş teknoloji, fizyolojik bir ortamda hücre sinyalizasyonundaki ve fenotipik dinamiklerdeki hızlı değişiklikleri keşfetme fırsatı sunar. Son olarak, optogenetik araçların genişlemesi ve çok çeşitli genetik floresan yapılar, tümör mikro ortamında hücre göçünü yakalamak için spesifik hücre tiplerinin etiketlenmesine veya gelişim veya hastalık ilerlemesi sırasında hücre soyu izlemesine izin verir21,22. Bu araçların CRISPR / Cas9 teknolojisi ile birlikte kullanılması, araştırmacılara zamanında benzersiz hayvan modelleri oluşturma fırsatı sunar.
Tüm bu ilerlemeler, intravital görüntülemeyi dinamik ve fizyolojik hücresel etkileşimleri keşfetmek için giderek daha güçlü bir yöntem haline getirirken, bu biyolojik etkileşimlere doku düzeyinde mekansal, zamansal ve yapısal bağlam sağlayan stratejiler geliştirmeye hala önemli bir ihtiyaç vardır. Şu anda, birçok intravital görüntüleme çalışması, vaskülatüre floresan boyalar enjekte ederek veya fiziksel özellikleri tanımlamak için floresan proteinleri dışsal olarak eksprese eden fare modellerini kullanarak kan damarları gibi görsel işaretlerin eksikliğini telafi etmektedir. Enjekte edilebilir boyalar ve floresan dekstrans gibi substratlar, intravital koleksiyonlarda vaskülatürü başarılı bir şekilde etiketlemek için yaygın olarak kullanılmaktadır19, 23, 24. Ancak, bu yaklaşım sınırlama olmaksızın değildir. Birincisi, ek fare manipülasyonları gerektirir ve faydası kısa vadeli deneylerle sınırlıdır. Uzunlamasına çalışmalar için, fagositik hücrelerde dekstran birikimini veya zamanla çevre dokuya difüzyonu gözlemlediğimiz için floresan dekstran sorunlu olabilir25. Fare modeline eksojen floresan protein katılımı, floresan dekstransa alternatif olarak sunulmuştur, ancak kendi sınırlamalarını sunmaktadır. Fare modellerindeki eksojen floroforların mevcudiyeti ve çeşitliliği hala sınırlı ve oluşturulması pahalıdır. Ek olarak, PDX modelleri gibi belirli modellerde, genetik manipülasyonlar arzu edilmez veya mümkün değildir. Ayrıca, hücrelerdeki floresan veya biyolüminesan proteinlerin varlığının fare içinde yabancı olarak kabul edildiği ve immünokompetan fare modellerinde, bunun konakçı bağışıklık sisteminin tepkisine bağlı metastaz miktarını azalttığı gösterilmiştir26,27. Son olarak, uzamsal bağlam için veya sonraki verileri segmentlere ayırmak için kullanılan eksojen floresan proteinler veya floresan boyalar, genellikle ilginin fizyolojik etkileşimlerini araştırmak için kullanılabilecek ışık spektrumunun asal aralıklarını işgal eder.
ECM'den gelen içsel sinyalin veya doku içindeki hücrelerden endojen floresanın kullanılması, daha derinlemesine hücresel ve mekansal analiz için intravital verileri segmentlere ayırmak için potansiyel bir evrensel etiketsiz aracı temsil eder. İkinci harmonik jenerasyon (SHG), ECM28'i görselleştirmek için uzun zamandır kullanılmaktadır. Daha sonra fiber organizasyonu 29,30,31'in karakterizasyonuna yardımcı olacak önemli araçların geliştirilmesiyle, yerel ECM yapısına göre hücre davranışını karakterize etmek mümkündür. Ek olarak, endojen metabolitten gelen otofloresan olan NAD (P) H, tümör mikro ortamını in vivo olarak bölümlere ayırmak için başka bir etiketsiz araç sağlar. NAD (P) H, tümör hücrelerinde parlak bir şekilde flüoresan eder ve büyüyen tümör yuvasının sınırlarını çevresindeki stroma21,32'den ayırt etmek için kullanılabilir. Son olarak, vaskülatür, tümör mikroortamında ve anahtar hücre tipine özgü etkileşimlerin yapıldığı yerde önemli bir fizyolojik yapıdır33,34,35. Kırmızı kan hücrelerinin (RBC) veya kan plazmasının uyarılması, tümör vaskülatürünü görselleştirmek için kullanılmıştır ve iki veya üç foton uyarımı (2P; 3P) kullanılarak kan akış hızlarının ölçülmesinin mümkün olduğu gösterilmiştir36. Bununla birlikte, daha büyük kan damarları endojen floresan imzaları ile kolayca tanımlanabilirken, ince, değişken ve daha az floresan küçük kan damarlarının tanımlanması daha fazla uzmanlık gerektirir. Bu doğal zorluklar optimum görüntü segmentasyonunu engeller. Neyse ki, bu endojen floresan kaynakları (yani, kırmızı kan hücreleri ve kan plazması), vaskülatürün benzersiz fotofiziksel özelliklerinden yararlanan ve büyüyen intravital alet kutusuna yararlı bir katkı sağlayan floresan ömür boyu görüntüleme37 ile de ölçülebilir.
Bu protokolde, endojen floresan ve SHG gibi içsel sinyalleri açıkça kullanarak dört boyutlu (4D) intravital görüntülemenin segmentasyonu için bir iş akışı, edinimden analize kadar tanımlanmıştır. Bu protokol, PDX modellerinde olduğu gibi, eksojen floresanın pratik veya mümkün olmayabileceği bir meme görüntüleme penceresinden geçen uzunlamasına çalışmalar için özellikle uygundur. Bununla birlikte, burada özetlenen segmentasyon ilkeleri, tümör biyolojisini, doku gelişimini ve hatta normal doku fizyolojisini araştıran intravital kullanıcılar için geniş çapta uygulanabilir. Bildirilen analiz yaklaşımları paketi, kullanıcıların hizalanmış veya rastgele kollajen lifi konfigürasyonlarının bölgeleri arasındaki hücresel davranışı ayırt etmelerine, tümör mikro ortamının belirli bölgelerinde bulunan hücrelerin sayılarını veya davranışlarını karşılaştırmalarına ve vaskülatürü yalnızca etiketsiz veya içsel sinyal kullanarak tümör mikro ortamına eşlemelerine olanak sağlayacaktır. Birlikte, bu yöntemler meme bezinin 4D intravital görüntülemesinden elde edilen bilgi derinliğini en üst düzeye çıkarmak için operasyonel bir çerçeve oluştururken, ek eksojen etiketlere olan ihtiyacı en aza indirir.

<table><tbody><tr><td># 1.5 12mm yuvarlak kapak camı</td><td>Warner Instruments</td> <td># 64-0712</td><td>MIW yapısı</td></tr><tr><td>SQ enjeksiyonu için 1.0 mL şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td>Şırınga</td></tr><tr><td>20x objektif</td><td>Zeiss</td><td>421452-988</td><td>SQ enjeksiyonu için suya daldırma</td></tr><tr><td>27G iğne</td><td>Covidien</td><td>1188827012</td><td>İğnesi</td></tr><tr><td>40x objektif</td><td>Nikon</td><td>MRD77410</td><td>Suya daldırma</td></tr><tr><td>5-0 ipek örgülü sütür</td><td>MIW implantasyonu için</td><td>Ethicon</td><td>K870</td> Sütür</tr><tr><td>Yapay gözyaşı jeli</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-162-35</td><td>Göz jeli</td></tr><tr><td>Betadine çözeltisi, %5</td> <td>Fisher Scientific</td><td>NC1558063</td><td>Cerrahisi antiseptik</td></tr><tr><td>pamuk uçlu aplikatör</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Siyanoakrilat yapıştırıcı</td><td>Loctite</td><td>1365882</td><td>MIW yapımı</td></tr><tr><td>floresan dekstran</td><td>Sigma</td><td>T1287-50mg</td><td>vasküler forsepslerin intravenöz etiketlenmesi</td></tr><tr><td></td><td>Mckesson.com</td><td>Miltex&nbsp;#18-782</td><td>paslanmaz, 4 inç, kavisli</td></tr><tr><td>GaAsP fotoçoğaltıcı tüp</td><td>Hamamatsu&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ısıtma battaniyesi</td><td>CARA 72 ısıtma yastığı</td><td>&nbsp; 038056000729</td><td>Sıcaklık seçilebilir</td></tr><tr><td>ısıtma odası</td><td>ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan ömür boyu el kitabı</td><td>Becker ve Hickl</td><td></td><td>https://www.becker-hickl.com/literature/handbooks</td></tr><tr><td>ters mikroskop tabanı</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-106-01</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>Liqui-Nox</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>16-000-125</td><td>MIW temizleme</td></tr><tr><td>Meloksikam</td><td>Norbrook</td><td>NDC 55529-040-10</td><td>Analjezik</td></tr><tr><td>Mikro Hortum</td><td>Scientific Commodities INC.</td><td>&nbsp; BB31695-PE/1</td><td></td></tr><tr><td>çoklu foton tarama kafası</td><td>Bruker Ultima II</td><td></td><td>Çoklu foton tarama kafası ve görüntüleme platformu</td></tr><tr><td>NADH FLIM filtresi</td><td>Chroma</td><td>284994</td><td>ET 440/80 m-2P</td></tr><tr><td>Nair</td><td>CVS</td><td>339826</td><td>Tüy dökücü krem</td></tr><tr><td>objektif ısıtıcı</td><td>Tokai Hit</td><td>STRG-WELSX-SET</td><td></td></tr><tr><td>SHG/FAD filtresi</td><td>Chroma</td><td>320740</td><td>ET450/ 40m-2P</td></tr><tr><td>Sparkle cam temizleyici</td><td>Amazon.com</td><td>implante</td><td>MIW</td></tr><tr><td>SPC-150 foton sayma tahtası</td> için B00814ME24 Cam Temizleyici <td>Becker ve Hickl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cerrahi ışık</td><td>FAJ</td><td>B06XV1VQVZ</td><td>Manyetik LED deveboynu ışık</td></tr><tr><td>cerrahi mikro makas</td><td>Excelta</td><td>366</td><td>paslanmaz, 3 inç</td></tr><tr><td>Üçlü antibiyotik merhem</td><td>Actavis İlaç</td><td>NDC 0472-0179-34</td><td>Antibiyotik</td></tr><tr><td>TV kateteri</td><td>Özel</td><td>BD 30G iğne:</td><td>TV enjeksiyonu için 305106 kateter</td></tr><tr><td>İki foton filtresi</td><td>Chroma</td><td>320282</td><td>ET585 / 65m-2P</td></tr><tr><td>iki fotonlu lazer</td><td>Tutarlı charmeleon</td><td></td><td>Ayarlanabilir multifoton lazer</td></tr><tr><td>ultrason jeli</td><td>Parker</td><td>PKR-03-02</td><td>Suya daldırma jeli</td></tr><tr><td>Üre kristaller</td><td>Sigma</td><td>U5128-5G</td><td>İsteğe bağlı: FLIM IRF</td></tr></tbody></table>

meme tümörü mikroçevresinin İntravital görüntülemesi için etiketsiz bir segmentasyon yaklaşımı

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

Canlı bir tümör mikroortamında çok sayıda hücre tipi ve hücre dışı matriks (ECM) arasındaki karmaşık ve dinamik fizyolojik etkileşimleri görselleştirme yeteneği, tümör progresyonunu düzenleyen mekanizmaları anlamak için önemli bir adımdır. Bu, mevcut intravital görüntüleme teknikleriyle gerçekleştirilebilse de, dokuların heterojen doğası ve deneysel gözlem içindeki mekansal bağlama duyulan ihtiyaç nedeniyle zor olmaya devam etmektedir. Bu amaçla, kollajen ikinci harmonik jenerasyon görüntülemeyi, metabolik ko-faktör NAD(P)H'den endojen floresanı ve floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobunu (FLIM) tümör mikroçevresini tümör yuvasının, çevresindeki stroma veya ECM'nin ve vaskülatürün temel alanlarına invaziv olmayan bir şekilde bölümlere ayırmak için bir araç olarak eşleştiren intravital bir görüntüleme iş akışı geliştirdik. Bu non-invaziv protokol, meme tümörü modellerinin hızlandırılmış görüntülerinin elde edilmesinden işlem sonrası analiz ve görüntü segmentasyonuna kadar uzanan adım adım süreci detaylandırır. Bu iş akışının birincil avantajı, eksojen floresan etiketler kullanmadan dinamik olarak değişen canlı tümör mikro ortamını bağlamsallaştırmak için metabolik imzalardan yararlanmasıdır, bu da onu insan kaynaklı ksenogreft (PDX) modelleri ve dışsal floroforların kolayca uygulanamadığı gelecekteki klinik kullanım için avantajlı hale getirir.

MIW'nin kurulumu ve temel deneysel planlama bu süreçteki ilk adımlardır. Bu özel MIW tasarımı ve protokolü, uzunlamasına çalışmalara19 daha uygundur ve hem dik hem de ters mikroskoplarla başarıyla kullanılmıştır. Bu durumda, daha az solunum artefaktı ile meme bezinin daha fazla görüntü stabilitesine neden olduğu için ters çevrilmiş bir mikroskop kullanılmıştır. Şekil 1A'da, rijit MIW'nin boyutlarını ve implantasyon işlemine grafiksel bir genel bakış sunuyoruz.
<p ...

Burada tarif edilen intravital görüntüleme yöntemi, 4D intravital görüntülerin derinlemesine analizi için etiketlenmemiş bir tümör mikroçevresini tümör, stromal ve vasküler kompartmanlara invaziv olmayan bir şekilde segmentlere ayırmak için metabolik ko-faktör NAD (P) H'den kollajen ikinci harmonik jenerasyonu ve endojen floresanı kullanır.

Meme Tümörü Mikroçevresinin İntravital Görüntülemesi için Etiketsiz Bir Segmentasyon Yaklaşımı

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

İntravital görüntüleme, tümör mikroçevresi içindeki fizyolojik etkileşimleri gözlemlememizi sağlar. Ve bu yöntem kullanılarak, gözlemlenen spesifik dinamik davranışlar lokal doku özellikleri kullanılarak bölümlere ayrılabilir. Bu protokol, TME'yi segmentlere ayırmak için kollajen liflerinden veya otofloresan metabolitlerden yalnızca her yerde bulunan etiketsiz bir sinyal kullanır, böylece fareye yapılan manipülasyon miktarını en aza indirir.Bu yöntem, hücre dışı matriks yapılarına veya vasküler yapılara göre dinamik etkileşimleri anlamanın gerekli olduğu herhangi bir intravital sisteme geniş ölçüde uygulanabilir. Bu prosedürü gösteren, kıdemli araştırma uzmanı Dave Inman ve laboratuvardan yüksek lisans öğrencisi Erica Hoffmann olacak. 1,5 12 milimetrelik yuvarlak kapak camını 10 dakika boyunca% 100 etanol içine batırarak bir meme görüntüleme penceresi kapağı camı hazırlamaya başlayın, ardından kapak camını bir ısı lambası altında kurutun ve camı siyanoakrilat yapıştırıcı kullanarak metal meme görüntüleme penceresi çerçevesine sabitleyin.Yapıştırıcıyı gece boyunca kürleyin. Ertesi gün, temizlemeye yardımcı olmak için meme görüntüleme penceresini en az 10 dakika boyunca% 70 etanol iç

a-label-free-segmentation-approach-for-intravital-imaging-mammary

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Meme Görüntüleme Penceresi ile Dendra2 etiketli tümör hücrelerinin intravital photoswitching ve izleme, bize görüntü gün bir zaman ölçeği üzerinde seçilen tümör mikroçevrelerde tümör hücrelerinin metastatik davranış sağlayan bir tekniktir.

Meme Görüntüleme Penceresi yoluyla Dendra2 Photoswitching

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Transgenik raportör fareler ve enjekte edilebilir floresan etiketler kullanarak, uzun süreli intravital eğirme diski konfokal mikroskobu, ApcMin/+ kolorektal kanser modelinde miyeloid hücre davranışının bağırsak adenomuna doğrudan görselleştirilmesini sağlar.

Miyeloid hücrelerin Dynamics Gerçek zamanlı Görüntüleme Süm Min / + Bağırsak Tümörleri Disk Eşodaklı Mikroskopi Spinning tarafından

Bu protokol, tek bir hücre çözünürlükte in vivo olarak, gerçek zamanlı olarak çok-etkileşimlerin uzatılmış zaman atlamalı görüntüleme gerçekleştirmek için multiphoton mikroskobu kullanımını tarif eder.

Tümör mikroçevresinde Gerçek zamanlı Multisellüler Dynamics Genişletilmiş Time-lapse intravital Görüntüleme

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Burada, bir kan beyin bariyeri metastatik tümör mikro-ortamının hazırlanması ve kültürlenmesi ve konfokal görüntüleme ve yapay zeka (makine öğrenimi) kullanılarak durumunun ölçülmesi için bir protokol saklıyız.

Organ-On-A Chip 3D Modeli, Makine Öğrenimi ve Konfokal Tomografi Kullanarak Beyin Metastatik Tümör Mikro-Ortamının Ölçülmesi

Bu protokol, değiştirilebilir kapaklı (R.MIW) yeni bir meme görüntüleme penceresini tanımlar. R.MIW'nin implantasyonundan sonra intravital mikroskopi, farklı gelişim aşamalarında sağlıklı ve hastalıklı meme bezinin hücresel çözünürlükle uzunlamasına ve çok günlük görüntülenmesini sağlar.

Değiştirilebilir Kapaklı Meme Görüntüleme Penceresi Kullanarak Boyuna İntravital Mikroskopi

Mevcut protokol, lazer taramalı konfokal ve multifoton mikroskobu ile emziren fare meme bezinin intravital görüntülenmesi için kolay bir tekniği tanımlamaktadır.

Meme bezinin intravital hücre altı mikroskobu

Tümör mikroçevresini (TME) taklit etmek için geçirgen bir mikro gözenekli membran ekini uyarladık. Model, karışık bir hücre kültüründen oluşur, floresan etiketleme veya hücre sıralama kullanmadan yüksek oranda zenginleştirilmiş bireysel hücre popülasyonlarının basitleştirilmiş üretimine izin verir ve normal veya stres koşulları altında TME içinde hücreler arası iletişimin incelenmesine izin verir.

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

Keşfedin meme tümörü mikroçevresinin etiketsiz segmentasyon yöntemiyle intravital görüntülemesini. Kollajen ikinci harmonik jenerasyonu ve NAD(P)H otofloresansı kullanılarak tümör, stroma ve vasküler bölmeler ayrıştırılır.

Meme Tümörü Mikroçevresinin İntravital Görüntülemesi için Etiketsiz Bir Segmentasyon Yaklaşımı

Daha fazla video keşfet