Name: Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Öğrenin, fare modellerinde optik koherens tomografi kullanarak retinopatiyi nasıl teşhis edeceğinizi. Bu invaziv olmayan yüksek çözünürlüklü görüntüleme yöntemi, retina kalınlığını ölçerek lezyon özelliklerini belirlemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Proje Kaynağı: Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2018A0303130306). Yazarlar, finansman ve materyaller için Oftalmik Araştırma Laboratuvarı, Shantou Üniversitesi Ortak Shantou Uluslararası Göz Merkezi ve Hong Kong Çin Üniversitesi'ne teşekkür eder.

Operasyonlar, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin Oftalmik ve Görme araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin Bildirisi'ni takiben gerçekleştirildi. Deneysel tasarım kurumsal hayvan etik komitesi (JSIEC, EC Tıbbi Etik Komitesi, EC 20171213(4)-P01) tarafından onaylanmıştır. Bu çalışmada iki aylık C57BL/6J fareler ve Vldlr nakavt fareleri kullanılmıştır. Her grupta, hepsi dişi olan ve 20 g ila 24 g ağırlığında olan 7 fare vardı.
1. Deneysel koşullar
<ol><li>Fareleri iki gruba atayın: Vldlr nakavt farelerinden oluşan bir deney grubu ve C57BL / 6J farelerden oluşan bir kontrol grubu.</li>
	<li>Fareleri geleneksel olarak yiyecek ve suyla besleyin.</li>
	<li>Fareleri hayvan laboratuvarında oda sıcaklığı (22 ° C), nem (% 50-60), açık-karanlık döngüsü (12 saat-12 saat) ve oda ışık yoğunluğu (350-400 lüks) gibi sabit koşullar altında yükseltin.</li>
	<li>Deney ekipmanını hazırlayın: küçük hayvanlar için konfokal taramalı lazer oftalmoskop (cSLO) ile optik koherens tomografi (Şekil 1A).</li>
	<li>Deney için gerekli tüm malzemeleri hazırlayın (Şekil 1B) ve fareleri tartın (Şekil 1C).</li>
</ol>2. Bilgi kayıtları
<ol><li>Bilgileri kaydedin: grup, kod, doğum tarihi, yaş, cinsiyet, kilo ve anestezik dozaj.</li>
</ol>3. Cihaz başlatma ve test etme
<ol><li>Bilgisayarı açın ve yazılımı başlatın.</li>
	<li>Test programını tamamlamak için Programı test et düğmesini tıklatın.</li>
	<li>Termostati açın ve 37 ° C sıcaklığa önceden ısıtın.</li>
	<li>Program testinden sonra OCT modülü yordamını başlatın.</li>
	<li>Yeni bir konu oluşturun ve fare bilgilerini doldurun.</li>
	<li>Elektrikli battaniyeyi önceden ısıtın ve cerrahi havlularla örtün.</li>
</ol>4. Anestezi
<ol><li>Anestezik karışımı hazırlamak için Tiletamine ve Zolazepam içeren liyofilize anestezik toz kullanın. NOT: Anestezi uygulamasının seçimi, dozu ve yolu için yerel hayvan etik komitesinin tavsiyelerine uyun. Hayvanı en az 1 saat boyunca hareketsizlik ve ağrı algısı kaybı sağlayacak bir anestezi ile uyuşturun, ardından hayvan hızla iyileşir. Dozaj, deney süresinin uzunluğuna, hayvan ağırlığına ve diğer faktörlere dayanmalıdır.</li>
	<li>Hazırlanan anestezik karışımı kullanarak hayvanı anestezi altına alın. İyileşene kadar tüm prosedür boyunca hayvanı sıcak tuttuğunuzdan emin olun.</li>
</ol>5. Mydriatic damlaların uygulanması
<ol><li>Fareyi tırmıkla manuel olarak sınırlandırın, göz küresinin hafifçe çıkıntı yapmasını sağlayın ve fare kafasını bir göz yukarı bakacak şekilde döndürün.</li>
	<li>Göz bebeklerini genişletmek için midriatik damlaları uygulayın (Şekil 2A).</li>
	<li>10 dakika sonra öğrenci genişlemesini kontrol edin.</li>
</ol>6. Farenin yerleştirilmesi
<ol><li>Fareyi elektrikli battaniye platformunun üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Her iki gözü de tıbbi sodyum hyaluronatis jeli ile kaplayın (Şekil 2B).</li>
	<li>cSLO cihazına 60 D çift küresel lens (önceden ayarlanmış lens) vidalayın (Şekil 1A-5, 6).</li>
	<li>Fare korneasına, içbükey tarafı kornea yüzeyindeki sodyum hyaluronatat jeline dokunacak şekilde 100 D'lik bir kontakt lens yerleştirin (Şekil 2C, D ve Şekil 3A-II).</li>
	<li>Fareyi küçük, sabit sıcaklıktaki hayvan platformuna yerleştirin ve gözü cSLO cihazının merceğinden 1-2 mm uzakta tutun (Şekil 3A).</li>
	<li>Göz bebeğini lensin merkezinde tutmak için forseps ile kontakt lensin açısını ayarlayın.</li>
	<li>Gözün düz bir şekilde öne bakmasını sağlamak için kafadaki ayarlamalara ince ayar yapın.</li>
</ol>7. Konfokal Taramalı Lazer Oftalmoskop (cSLO)
<ol><li>OCT düğmesine tıklayın, fare modülünü seçin ve cSLO programını başlatın (Şekil 4B).</li>
	<li>IR modunu seçin (ışık kaynağı: kırmızı ışık) ve parametreyi ayarlayın (aralık: 2047, Şekil 4D).</li>
	<li>İncelenecek gözü seçin (sağ göz: Şekil 4C-1; sol göz: Şekil 4C-2). </li>
	<li>Kolu kontrol edin ve önceden ayarlanmış lensi yavaşça kontakt lense doğru hareket ettirin.</li>
	<li>Arka kutup görüntüleme netleşene kadar diyoptri değerini ayarlayın (Şekil 4E).</li>
	<li>Retinal arka kutbun görüntüsünü hizalamak için optik sinir kafasına ortalayarak daha fazla ayarlama yapın.</li>
</ol>8. Optik koherens tomografi (OKT)
<ol><li>OCT programını başlatın (Şekil 4G).</li>
	<li>OCT görüntüsü görünene kadar ilerleme çubuğunu yukarı ve aşağı tıklatın (Şekil 4H).</li>
	<li>Parametreleri ayarlayın: Aralık Min (Şekil 4I) = 0-20, Aralık Maksimum (Şekil 4J) = 40-60.</li>
	<li>İdeal bir OCT görüntüsü elde edilene kadar önceden ayarlanmış lens mesafesini ve konum yönünü ayarlayın.</li>
	<li>cSLO'daki standart çizgiyi hareket ettirerek tarama konumunu seçin (Şekil 4M).</li>
	<li>Optik sinir kafasından taramaya başlayın.</li>
	<li>Görüntüleri her göz için aynı sırayla toplayın: yatay çizgi: optik sinir başı → üstün → aşağı; dikey çizgi: optik sinir başı → nazal → zamansal.</li>
	<li>Dört yönden görüntü toplayın.</li>
	<li>cSLO ve OCT görüntü sinyallerini kaplamak için Ortalama'yı tıklatın (Şekil 4F ve Şekil 4O).</li>
	<li>SLO-OCT görüntüsünü elde etmek için çekim düğmesini tıklatın (Şekil 4P).</li>
	<li>Tüm görüntüleri kaydedin ve dışa aktarın (Şekil 4Q, R).</li>
</ol>9. Deneyin sonu (OCT muayenesinden sonra)
<ol><li>Uyanana kadar sıcak tutmak için fareyi elektrikli battaniyenin üzerine yerleştirin. NOT: Fare, sternal yatışmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar izlenmelidir. Postoperatif parlak ışığa maruz kalma en aza indirilmelidir.</li>
	<li>100 D kontakt lensi çıkarın.</li>
	<li>Korneayı korumak için levofloksasin göz jelini uygulayın.</li>
	<li>Uyandıktan sonra fareyi tekrar kafese yerleştirin. NOT: İncelenen farenin tamamen iyileşene kadar diğer farelerin şirketine iade edilmediğinden emin olun.</li>
	<li>Yazılımı kapatın ve bilgisayarı kapatın.</li>
	<li>100 D kontakt lensi suyla temizleyin; lensi kurutun.</li>
	<li>Çevreyi temizleyin ve dezenfekte edin.</li>
</ol>10. Görüntü analizi
<ol><li>Vldlr nakavt farelerinin OCT görüntülerini C57BL/6J farelerinkilerle karşılaştırın.</li>
	<li>Birden fazla pozisyonu gözlemleyin: optik papilladan geçen dikey ve yatay taramalar; üstün, inferior, nazal ve temporal taramalar; ve anormal yansıma sitesi taramaları.</li>
	<li>Her görüntüde retinanın kalınlığını, şeklini, katmanlanmasını ve anormal yansıma lezyonlarını, ayrıca retinanın ve vitreus gövdesinin vitreus arayüzünü gözlemleyin.</li>
	<li>Lezyonların yerlerini, özelliklerini ve sayılarını kaydedin.</li>
</ol>11. Retinal tabakalaşma düzeltmesi
<ol><li>OCT arabiriminde Yük Muayenesi'ni tıklatın (Şekil 5A).</li>
	<li>Açılır pencereden farenin OCT görüntülerini çağırın.</li>
	<li>Görüntüleri seçin: Optik papilla boyunca yatay veya dikey olarak OCT görüntü taraması.</li>
	<li>Ekranda görüntülemek için Medya Kapsayıcısı'ndaki görüntüyü çift tıklatın (Şekil 5C).</li>
	<li>Retina üzerinde otomatik katmanlamayı tamamlamak için Katman Algılama'ya tıklayın (Şekil 5D).</li>
	<li>Analiz için hazırlanan katmanın her iki tarafındaki bölme çizgilerini seçin (Şekil 6D-10).</li>
	<li>Ayrı bir bölme çizgisi seçin (Şekil 6B-6) ve kırmızı bir daire göründüğünde çizgiyi etkinleştirmek için Katmanı Düzenle'yi (Şekil 6A-1) tıklatın (Şekil 6B-7).</li>
	<li>Aralığı (Şekil 6A-4, örneğin 50) ve Sınır Aralığını (Şekil 6A-5, örneğin 50) ayarlayın.</li>
	<li>Kırmızı daireyi hareket ettirerek bölme çizgisini değiştirin ( Şekil 6B ve Şekil 6C'deki yeşil bölme çizgisini karşılaştırın; Şekil 6C, değiştirilen sonucu göstermektedir).</li>
</ol>12. Retinal laminasyon kalınlığı
<ol><li>Ölçü İşaretçisi düğmesini tıklatın (Şekil 6D-9).</li>
	<li>OCT görüntüsünde katmanın sınırını görüntülemek için analiz edilecek katmanın bölme çizgisini seçin (örneğin, dış nükleer katmanda, listedeki 4. ve 5. bölme çizgisini seçin) (Şekil 6D-10).</li>
	<li>Katmanla bağlan (Şekil 6D-11) ve Hareket halindeyken bağlı kal (Şekil 6D-12) seçeneğini belirleyin.</li>
	<li>Sonuçların görüntüleneceği alanı seçin (seçilen sütun renklidir, Şekil 6D-13). </li>
	<li>Ölçüm çizgisinin görünmesini sağlamak için OCT görüntüsünde analiz edilecek konuma tıklayın (yatay eksene dik ve ortaya çıkan alanın rengiyle tutarlı) (Şekil 6D-14).</li>
	<li>Bir sonraki ölçüm için bir sonraki sütuna tıklayın ve önceki verileri ortaya çıkarın (Şekil 6E-15).</li>
	<li>μm (doku) cinsinden uzunluk satırındaki Vert değerini (ölçülen konumun kalınlığı) okuyun (Şekil 6E, kırmızı dikdörtgen).</li>
	<li>Sonuçların orijinal verileri kapsayacak şekilde (yeniden ölçüm gerekirse) yeniden test etmek için İşaretçiyi Sil (Şekil 6E-16) ve Yeni İşaretleyici'yi (Şekil 6E-17) tıklatın.</li>
	<li>Ekran görüntülerini kaydetmek için klavyede Print Scr tuşuna basın veya doğrudan kaydetmek için Sınavı Kaydet'i tıklatın (Şekil 5H).</li>
	<li>İstatistiksel analiz için verileri bir elektronik tabloya veya istatistiksel yazılıma girin.</li>
</ol>13. Tam retina kalınlığının ölçülmesi
<ol><li>Satır 1'i (ILM, iç sınırlayıcı membran, Şekil 7B) ve satır 7'yi (OS-RPE, OS: dış fotoreseptör segmentleri; RPE: retinal pigment epitel tabakası, Şekil 7C) sağ üst köşedeki listede. NOT: Tam retina kalınlığı, OCT'de ILM ve OS-RPE arasındaki retina olan retinal nötrepitelyum tabakasının kalınlığı anlamına gelir).</li>
	<li>Optik papillanın her iki tarafındaki retina kalınlığını belirli bir aralıkta ölçün.<ol><li>Örneğin: optik papillanın kenarındaki retinal yapının görünümünden, yatay cetvelin 200 μm aralığı ile 4 değer ölçün (Şekil 7G, H).</li>
	</ol></li>
	<li>Ölçülen tüm değerleri bir e-tabloya kaydedin.</li>
	<li>Her iki gruptaki her bir karşılık gelen pozisyonun ölçülen değerlerini karşılaştırmak için birden fazla t-testi (satır başına bir tane) kullanın.</li>
</ol>

<ol><li>Frombach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease-mediated+cutaneous+inflammation%3A+characterization+of+an+ex+vivo+skin+model+for+the+assessment+of+dexamethasone-loaded+core+multishell-nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Serine protease-mediated cutaneous inflammation: characterization of an ex vivo skin model for the assessment of dexamethasone-loaded core multishell-nanocarriers.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 862(2020).</li>
<li>Osiac, E., Săftoiu, A., Gheonea, D. I., Mandrila, I., Angelescu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+and+Doppler+optical+coherence+tomography+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography and Doppler optical coherence tomography in the gastrointestinal tract.</a> Journal of Gastroenterology. 17 (1), 15-20 (2011).</li>
<li>Xiong, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+accuracy+of+optical+coherence+tomography+for+bladder+cancer%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Photodiagnosis+and+Photodynamic+Therapy%22%5BJournal%5D)">Diagnostic accuracy of optical coherence tomography for bladder cancer: A systematic review and meta-analysis.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 27, 298-304 (2019).</li>
<li>Andrews, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+of+the+aging+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22%26+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography of the aging kidney.</a> & Clinical Transplantation. 14 (6), 617-622 (2016).</li>
<li>Terashima, M., Kaneda, H., Suzuki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+optical+coherence+tomography+in+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22The+Korean+Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of optical coherence tomography in coronary intervention.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 27 (1), 1-12 (2012).</li>
<li>Avital, Y., Madar, A., Arnon, S., Koifman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+coronary+calcifications+in+optical+coherence+tomography+imaging+using+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of coronary calcifications in optical coherence tomography imaging using deep learning.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11269(2021).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li>
<li>Tsai, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+in+gastroenterology%3A+a+review+and+future+outlook%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography in gastroenterology: a review and future outlook.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (12), 1-17 (2017).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+optical+intensity+on+optical+coherence+tomography+and+retinal+ischemia+in+branch+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Relationship between optical intensity on optical coherence tomography and retinal ischemia in branch retinal vein occlusion.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9626(2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+layer+optical+intensities+on+three-dimensional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal layer optical intensities on three-dimensional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 54 (10), 6846-6851 (2013).</li>
<li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+retinal+changes+with+optical+coherence+tomography+predicts+neuronal+loss+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Monitoring retinal changes with optical coherence tomography predicts neuronal loss in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 203(2019).</li>
<li>Podoleanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Journal of Microscopy. 247 (3), 209-219 (2012).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+findings+in+the+retinas+of+SOD1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography findings in the retinas of SOD1 knockout mice.</a> Translational Vision Science & Technology. 9 (4), 15(2020).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye%3A+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494(2014).</li>
<li>Burns, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+murine+imaging+for+assessing+photoreceptor+degeneration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">New developments in murine imaging for assessing photoreceptor degeneration in vivo.</a> Advances in Experimental Medicine & Biology. 854, 269-275 (2016).</li>
<li>Jagodzinska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+imaging+mouse+retinal+ganglion+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+Jove%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo.</a> Journal of Visualized Experiments: Jove. (127), e55865(2017).</li>
<li>Kocaoglu, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+fundus+imaging+and+optical+coherence+tomography+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Simultaneous fundus imaging and optical coherence tomography of the mouse retina.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 48 (3), 1283-1289 (2007).</li>
<li>Tode, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+stimulation+of+the+retina+reduces+Bruch%27s+membrane+thickness+in+age+related+macular+degeneration+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Thermal stimulation of the retina reduces Bruch's membrane thickness in age related macular degeneration mouse models.</a> Translational Vision Science & Technology. 7 (3), 2(2018).</li>
<li>Wang, R., Jiang, C., Ma, J., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+morphological+changes+in+the+retina+of+rhodopsin-%2F-+mice+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Monitoring morphological changes in the retina of rhodopsin-/- mice with spectral domain optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 3967-3972 (2012).</li>
<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spectral-domain+optical+coherence+tomographic+analysis+of+Rdh5-%2F-+mice+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A spectral-domain optical coherence tomographic analysis of Rdh5-/- mice retina.</a> PLoS ONE. 15 (4), 0231220(2020).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+imaging+by+optical+coherence+tomography+to+monitor+retinal+degeneration+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Noninvasive imaging by optical coherence tomography to monitor retinal degeneration in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 42 (12), 2981-2989 (2001).</li>
<li>Horio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+change+of+optical+coherence+tomography+scans+in+retinal+degeneration+slow+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Progressive change of optical coherence tomography scans in retinal degeneration slow mice.</a> Archives of Ophthalmology. 119 (9), 1329-1332 (2001).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+VLDLR+in+the+retina+and+evolution+of+subretinal+neovascularization+in+the+knockout+mouse+model%27s+retinal+angiomatous+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Expression of VLDLR in the retina and evolution of subretinal neovascularization in the knockout mouse model's retinal angiomatous proliferation.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 49 (1), 407-415 (2008).</li>
<li>Wyne, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+VLDL+receptor+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Expression of the VLDL receptor in endothelial cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 16 (3), 407-415 (1996).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+spontaneous+retinal+neovascularization+in+the+mouse+eye+by+multifunctional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of spontaneous retinal neovascularization in the mouse eye by multifunctional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 59 (5), 2054-2068 (2018).</li>
<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence%2C+spectral-domain+optical+coherence+tomography%2C+and+histology+correlations+in+a+Stargardt+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence, spectral-domain optical coherence tomography, and histology correlations in a Stargardt disease mouse model.</a> The FASEB Journal. 34 (3), 3693-3714 (2020).</li>
</ol>

Yazarlar potansiyel bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bu çalışmada, Vldlr nakavt farelerinde eksik posterior vitreus dekolmanı, subretinal neovaskülarizasyon ve retina kalınlığında incelme gösteren retinal değişiklikleri değerlendirmek için küçük hayvan retinal görüntüleme sistemi kullanılarak OCT görüntüleme uygulanmıştır. OKT, retinanın durumunu in vivo olarak incelemek için kullanılan noninvaziv bir görüntüleme yöntemidir. Çoğu OCT cihazı insan gözü muayenesi için tasarlanmıştır. Donanım ekipmanının boyutu, odak uzaklığının ayarı, sistem parametrelerini...

Optik koherens tomografi (OKT), 1,2,3,4,5,6,7,8 dokusu için, özellikle retinadaki noninvaziv inceleme için in vivo yüksek çözünürlüklü ve kesitsel görüntüleme sağlayabilen bir görüntüleme tekniğidir 9,10,11,12 . Ayrıca retina kalınlığı ve retina sinir lifi tabakası kalınlığı gibi bazı önemli biyobelirteçleri ölçmek için de kullanılabilir. OCT'nin prensibi, bir numuneden yansıyan ışığın tutarlılığından kesitsel doku bilgisini elde eden ve bir bilgisayar sistemi aracılığıyla grafik veya dijital bir forma dönüştüren optik tutarlılık reflektometrisidir7. OKT, retina hastalıkları olan hastaların tanısı, takibi ve yönetimi için gerekli bir araç olarak oftalmoloji kliniklerinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca retina hastalıklarının patogenezi hakkında fikir verebilir.
Klinik uygulamalara ek olarak, OCT hayvan çalışmalarında da kullanılmıştır. Patoloji morfolojik karakterizasyonun altın standardı olmasına rağmen, OKT noninvaziv in vivo görüntüleme ve uzunlamasına takip avantajına sahiptir. Ayrıca, OKT'nin retinopati hayvan modellerinde histopatoloji ile iyi ilişkili olduğu gösterilmiştir 11,13,14,15,16,17,18,19,20. Fare, biyomedikal çalışmalarda en sık kullanılan hayvandır. Bununla birlikte, küçük göz küreleri farelerde OCT görüntüleme yapmak için teknik bir zorluk oluşturmaktadır.
İlk olarak farelerde retinal görüntüleme için kullanılan OCT21,22 ile karşılaştırıldığında, küçük hayvanlarda OCT artık donanım ve yazılım sistemlerine göre optimize edilmiştir. Örneğin, OCT, izleyici ile birlikte, sinyal-gürültü oranını önemli ölçüde azaltır; OCT yazılım sistemi yükseltmeleri, daha fazla retina katmanının otomatik olarak algılanmasını sağlar; ve entegre DLP beamer, hareket artefaktlarını azaltmaya yardımcı olur.
Çok düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Vldlr), endotel hücrelerinde bulunan bir transmembran proteinidir. Retinal vasküler endotel hücreleri, retinal pigment epitel hücreleri ve dış sınırlayıcı membran23,24 çevresinde eksprese edilir. Subretinal neovaskülarizasyon, Vldlr nakavt fareleri23'ün fenotipidir. Bu nedenle, Vldlr nakavt fareleri, subretinal neovaskülarizasyonun patogenezini ve potansiyel tedavisini araştırmak için kullanılır. Bu makalede, küçük hayvan modellerinde retinopati araştırması için bazı teknik referanslar sağlamayı umarak, Vldlr nakavt farelerinde retinal lezyonları tespit etmek için OCT görüntülemenin uygulanması gösterilmektedir.

<table><tbody><tr><td>100-Dpt kontakt lens</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>RETImap'e ait aksesuar</td></tr><tr><td>Çift asferik 60 Dpt cam mercek</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>RETImap'e ait aksesuar</td></tr><tr><td>Elektrikli ısıtma battaniyesi</td><td>POPOCOLA</td><td>CW-DRT-01</td><td>50 x 35 cm</td></tr><tr><td>Enjeksiyon şırıngası (1 mL)</td><td>Kaile</td><td></td><td>0.45 x 16RWLB</td></tr><tr><td>Levofloksasin Hidroklorür Göz Jeli</td><td>EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD</td><td></td><td>5 g: 0.015 g</td></tr><tr><td>Tıbbi sodyum hyaluronat jel</td><td>Alcon</td><td>16H01E</td><td></td></tr><tr><td>Mikrolitre şırıngalar</td><td>Şangay yüksek güvercin sanayi ve ticaret co., LTD</td><td>Q31/0113000236C001-2017</td><td>50 & L</td></tr><tr><td>Povidone iyot çözeltisi</td><td>Guangdong medihealth pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td>100 mL</td></tr><tr><td>RETImap</td><td>ROLAND CONSULT</td><td>19-99_50-2.1_1.2E</td><td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td></tr><tr><td>Küçük hayvan kulak çıtçıtları</td><td>OSMO POCKET OT110</td><td>INS1005-1S</td> Tropicamid Fenilefrin Göz Damlası <td></td></tr><tr><td></td><td>Santen Pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td>5 mg / mL</td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Sigma</td><td>X1251-5G</td><td>5 g</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac.S.A</td><td>7FRPA</td><td>Tiletamin 125 mg + Zolazepam 125 mg</td></tr></tbody></table>

optik koherens tomografinin retinopatinin bir fare modeline uygulanması

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optik koherens tomografi (OKT) retinopati tanısında noninvaziv bir yöntem sunmaktadır. OCT makinesi, retina kalınlığının hesaplanabileceği retinal kesitsel görüntüleri yakalayabilir. OCT klinik pratikte yaygın olarak kullanılmasına rağmen, temel araştırmalardaki uygulaması, özellikle fareler gibi küçük hayvanlarda yaygın değildir. Göz kürelerinin küçük boyutu nedeniyle, farelerde fundus görüntüleme incelemeleri yapmak zordur. Bu nedenle, küçük hayvanlarda OCT görüntülemeyi yerleştirmek için özel bir retinal görüntüleme sistemi gereklidir. Bu makalede, OCT muayene prosedürleri için küçük hayvanlara özgü bir sistem ve görüntü analizi için ayrıntılı bir yöntem gösterilmektedir. Çok düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Vldlr) nakavt fareleri ve C57BL/6J farelerin retinal OCT incelemesinin sonuçları sunulmuştur. C57BL / 6J farelerinin OCT görüntüleri retina tabakalarını gösterirken, Vldlr nakavt farelerininki subretinal neovaskülarizasyon ve retina incelmesi gösterdi. Özetle, OCT muayenesi fare modellerinde retinopatinin noninvaziv tespitini ve ölçümünü kolaylaştırabilir.

OCT'nin yüksek çözünürlüklü taramaları sayesinde, fare retinasının katmanları gözlemlenebilir ve anormal yansımalar ve bunların tam konumları belirlenebilir. Bu çalışmada Vldlr nakavt fareleri ve C57BL/6J farelerin retinal OCT görüntüleri karşılaştırıldı. Tüm C57BL/6J farelerinin OCT görüntüleri, farklı yansıtıcılığa sahip çeşitli retina tabakaları gösterdi ve sınır açıktı (Şekil 8D). Buna karşılık, tüm Vldlr nakavt fareleri, OCT görüntülerinde anormal, hiperreflektif lezyo...

Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

Optik koherens tomografi, farklı retina hastalıklarının klinik tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak fare modellerinde uygulanması hala zordur. Bu protokol, hayvanlarda OCT tekniğinin nasıl yönetileceğini açıklar. Bu teknoloji farklı göz küresi boyutlarına sahip hayvanlara uygulanabilir.İnvaziv olmayan, yüksek çözünürlüklü ve gerçek zamanlı retinal kesitsel görüntülemenin yanı sıra retina kalınlığının kantitatif ölçümlerini sağlar. OKT, lezyonların lokalizasyonu, aralığı, şekli ve büyüklüğü gibi lezyon özelliklerinin yanı sıra retinal neovaskülarizasyon gibi şüphelenilen tüm retinal anormallikleri tanımlayarak retinopati tanısında yardımcı olur. Bu protokol, retina hastalıkları da dahil olmak üzere hayvan çalışmaları veya fundus hastalıkları için geçerlidir.Prosedüre başlamadan önce hazırlıklı olun ve protokolü adım adım takip edin. Hayvan anestezi uygulandığında deneyi yapın. Bazı uygulamalardan sonra kaliteli OCT görüntüleri elde edilebilmelidir.Başlamak için bilgisayarı açın ve yazılımı başlatın. Test programını tamamlamak için test programı düğmesini tıklatın. Ardından, termostatı açın ve 37 santigrat dereceye kadar önceden ısıtın.Program testinden sonra, OCT modülü yordamını başlatın. Yeni bir konu oluşturun ve fare bilgilerini doldurun. Ardından, elektrikli battaniyeyi önceden ısıtın ve cerrahi havlularla örtün.Anestezi uygulanan fareyi elektrikli battaniye platformuna yerleştirin ve hemen her iki gözü de tıbbi sodyum hyaluronatis jeli ile kaplayın. Ardından, fare korneasına, içbükey tarafı kornea yüzeyindeki sodyum hyaluronatat jeline dokunacak şekilde 100D kontakt lens yerleştirin. Ardından, fareyi cSLO cihazının küçük, sabit sıcaklıktaki hayvan platformunun üzerine getirin.Göz bebeğini lensin merkezinde tutmak için forseps ile kontakt lensin açısını ayarlayın. Gözün düz bir şekilde öne bakmasını sağlamak için kafadaki ayarlamalara ince ayar yapın. OCT düğmesine tıklayın, fare modülünü seçin ve cSLO programını başlatın.Ardından, ön ayarlı lensi yavaşça kontakt lense doğru hareket ettirmek için çalışma kolunu kullanın. Anterior-posterior kutbun görüntüsünü optik sinir kafasında ortalayarak hizalamak için daha fazla ayarlama yapın. Ardından, OCT programını başlatın ve OCT görüntüsü görünene kadar ilerleme çubuğunu yukarı ve aşağı tıklatın.Minimum aralığı 0 ile 20 arasında, maksimum aralığı ise 40 ile 60 arasında ayarlayın. Ardından, ideal bir OCT görüntüsü elde edilene kadar önceden ayarlanmış lens mesafesini ve konum yönünü ayarlayın. cSLO'daki standart çizgiyi hareket ettirerek tarama konumunu seçin.Ardından, cSLO ve OCT görüntü sinyalini kaplamak için ortalama'yı tıklatın ve SLO OCT görüntüsünü almak için çekim düğmesini tıklatın. Deneyden sonra, 100D kontakt lensi çıkarın ve korneayı korumak için levofloksasin göz jelini uygulayın. Retinal tabakalaşma düzeltmesi için, OCT arayüzünde yük incelemesine tıklayın ve bir açılır pencereden OCT görüntülerini çağırın.Ardından, ekranda görüntülemek için medya kabındaki görüntüyü çift tıklatın. Ardından, retinada otomatik katmanlamayı tamamlamak için katman algılamaya tıklayın. Analiz için hazırlanan katmanın her iki tarafındaki bölme çizgisini seçtikten sonra, aralığı ayarlamak ve aralığı sınırlamak için katmanı düzenle'yi tıklatın.Ardından, kırmızı daireyi hareket ettirerek çizgiyi değiştirin. Retinal laminasyon kalınlığını ölçmek için, ölçüm işaretçisi düğmesini tıklatın ve OCT görüntüsünde katmanın sınırını görüntülemek üzere analiz edilecek katmanın bölme çizgisini seçin. Ardından, katmanla bağlan'ı seçin ve hareket halindeyken bağlı kalın.Ardından, sonuçların görüntüleneceği alanı seçin ve ölçüm çizgisinin görünmesini sağlamak için OCT görüntüsünde analiz edilecek konumu tıklatın. Sonraki ölçümler için ve önceki verileri ortaya çıkarmak için bir sonraki sütuna tıklayın. Tam retina kalınlığını ölçmek için, sağ üst köşedeki listeden birinci satırı ve yedinci satırı seçin.Daha sonra, optik papillanın kenarındaki retinal yapının görünümünden, yatay cetvel üzerinde 200 mikrometre aralıklı aralıklarla dört değer ölçün. C57BL/6 farelerin OCT görüntüleri, net sınırları olan çeşitli retina tabakalarını gösterdi. Buna karşılık, Vldlr nakavt fareleri anormal hiperreflektif lezyonlar gösterdi.OCT görüntüleri, Vldlr nakavt farelerinin retinal yüzeylerinde bazı orta yansıtıcı bantlar gösterdi. Bu bantlar retina damarına yapışmış olup, eksik vitreus dekolmanı OCT özellikleri ile tutarlıdır. Subretinal boşlukta bir hiperreflektif lezyon ortaya çıktı ve dış nükleer tabakaya yayıldı, ancak dış pleksiform tabakayı kırmadı.Bu lezyonun OKT görünümü patolojik bulgularla uyumluydu. Patolojik kesit, neovaskülarizasyonun retinal pigment epitel tabakasını, fotoreseptör iç-dış segmentlerini ve dış sınırlayıcı membranı kırarak dış nükleer tabakayı invaze ettiğini, ancak dış pleksiform tabakayı invaze etmediğini gösterdi. Subretinal boşlukta bulunan bir başka hiperreflektif lezyon bandı, dış nükleer tabakayı içermiyordu.Patolojik bulgularla uyumlu olarak, bu subretinal neovaskülarizasyon dış sınırlayıcı membranı kırmadı. İki grup arasında sağ gözün retinal kalınlığının posterior poların zamansal, nazal, üst ve alt yönlerinde karşılaştırılması, Vldlr nakavt farelerinin retina kalınlığının C57BL / 6J farelerinkinden anlamlı derecede düşük olduğunu ortaya koymuştur. Protokolü uygularken, korneaya düzgün bir şekilde 100D kontakt lens yerleştirin, ardından görüntü konumunu ayarlayın.Tarama konumunu seçin ve çekimden önce görüntüyü bindirin. Bu prosedürü takiben, ön ayarlı lens ile kornea arasındaki mesafenin değiştirilmesini gerektiren ön segment OCT uygulanabilir. Korneayı, ön kamsayı, irisi, siliyer gövdeyi ve lensi gösterebilir.Bu teknik, küçük hayvan modellerinde retinopati araştırması için önemli bir araç sağlar ve temel araştırmalarda retinopatinin non-invaziv tespitini ve ölçümünü teşvik eder.

application-optical-coherence-tomography-to-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir fare enfeksiyöz üveit fare modelinde göz iltihabını tespit etmek ve ölçmek için in vivo bir görüntüleme tekniğini göstermektedir. Optik koherens tomografi (OCT) olarak bilinen teknik, hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için gözün yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntülerini üretir.

Bir Fare Modelinde Üveiti Değerlendirmek için Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optik Koherens Tomografi: Fare Retinal Ganglion Hücrelerini Görüntüleme In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  Bu videoda, optik nöropatili genetik olarak değiştirilmiş bir fare modelinde retina katmanlarını görüntülemek ve yapısal değişiklikleri değerlendirmek için spektral alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını gösteriyoruz.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Fare Retinasının İn Vivo Görüntülenmesi

Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Yapısal ve görsel dökümanları Rodents optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt tarafından değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sunulmuştur. Sonuçları Oftalmolojik gibi nörolojik araştırma için değerli bilgiler sağlar.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Mevcut protokol, in vivo görüntülerde gözlenen retinal ganglion hücre akson demeti morfolojisini doğrulamak amacıyla in vivo görünür ışık optik koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) görüntülerini aynı fare retinasının ex vivo konfokal görüntüleriyle hizalama adımlarını özetlemektedir.

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

Öğrenin, fare modellerinde optik koherens tomografi kullanarak retinopatiyi nasıl teşhis edeceğinizi. Bu invaziv olmayan yüksek çözünürlüklü görüntüleme yöntemi, retina kalınlığını ölçerek lezyon özelliklerini belirlemenizi sağlar.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Daha fazla video keşfet