Name: Doku Teşhisi için Fare Beyninin Gerçek Zamanlı, İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-01T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: Öğrenin, fare beyninde iki renkli uyarılmış Raman saçılma mikroskobisi ile gerçek zamanlı doku teşhisi yapmayı. Bu etiketsiz görüntüleme yöntemi, histolojik çalışmaların verimliliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH R35 GM133435 to D.F. tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Cui, M., Zhang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+intelligence+and+computational+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">Artificial intelligence and computational pathology.</a> Laboratory Investigation. 101 (4), 412-422 (2021).</li>
<li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).</li>
<li>Orringer, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+intraoperative+histology+of+unprocessed+surgical+specimens+via+fibre-laser-based+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Rapid intraoperative histology of unprocessed surgical specimens via fibre-laser-based stimulated Raman scattering microscopy.</a> Nature Biomedical Engineering. 1, 0027(2017).</li>
<li>Ji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((label-free+detection+of+brain+tumors+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">label-free detection of brain tumors with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science Translational Medicine. 5 (201), (2013).</li>
<li>Hollon, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+real-time+intraoperative+brain+tumor+diagnosis+using+stimulated+Raman+histology+and+deep+neural+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Near real-time intraoperative brain tumor diagnosis using stimulated Raman histology and deep neural networks.</a> Nature Medicine. 26 (1), 52-58 (2020).</li>
<li>Shin, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+assessment+of+skull+base+tumors+using+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Intraoperative assessment of skull base tumors using stimulated Raman scattering microscopy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20392(2019).</li>
<li>Lu, F. -K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+neurosurgical+pathology+with+stimulated+Raman+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Label-free neurosurgical pathology with stimulated Raman imaging.</a> Cancer Research. 76 (12), 3451-3462 (2016).</li>
<li>Shin, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+chemical+imaging+of+breast+calcifications+in+association+with+neoplastic+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Quantitative chemical imaging of breast calcifications in association with neoplastic processes.</a> Theranostics. 10 (13), 5865-5878 (2020).</li>
<li>Fu, D., Holtom, G., Freudiger, C., Zhang, X., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperspectral+imaging+with+stimulated+Raman+scattering+by+chirped+femtosecond+lasers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Hyperspectral imaging with stimulated Raman scattering by chirped femtosecond lasers.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 117 (16), 4634-4640 (2013).</li>
<li>Figueroa, B., Hu, R., Rayner, S. G., Zheng, Y., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+microscale+temperature+imaging+by+stimulated+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Real-time microscale temperature imaging by stimulated Raman scattering.</a> The Journal of Physical Chemistry Letters. 11 (17), 7083-7089 (2020).</li>
<li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li>
<li>Hill, A. H., Hill, A. H., Manifold, B., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li>
<li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+intracellular+distribution+of+tyrosine+kinase+inhibitors+in+living+cells+with+quantitative+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Imaging the intracellular distribution of tyrosine kinase inhibitors in living cells with quantitative hyperspectral stimulated Raman scattering.</a> Nature Chemistry. 6 (7), 614-622 (2014).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+tracing+of+deuterium+for+imaging+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Spectral tracing of deuterium for imaging glucose metabolism.</a> Nature Biomedical Engineering. 3 (5), 402-413 (2019).</li>
<li>Tsai, P. S., et al. Principles, design, and construction of a two-photon laser-scanning microscope for in vitro and in vivo brain imaging. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTsai%2C+PS+%22In+Vivo+Optical+Imaging+of+Brain%22">In Vivo Optical Imaging of Brain</a>. Frostig, R. D., et al. , CRC Press. 113-171 (2002).</li>
<li>Francis, A., Berry, K., Chen, Y., Figueroa, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+pathology+by+spectrally+sliced+femtosecond+stimulated+Raman+scattering+%28SRS%29+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Label-free pathology by spectrally sliced femtosecond stimulated Raman scattering (SRS) microscopy.</a> PLoS One. 12 (5), 0178750(2017).</li>
<li>Figueroa, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broadband+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy+with+a+parabolic+fiber+amplifier+source%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Broadband hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy with a parabolic fiber amplifier source.</a> Biomedical Optics Express. 9 (12), 6116-6131 (2018).</li>
<li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+stimulated+Raman+scattering+microscopy+with+a+rapidly+tunable+optical+parametric+oscillator%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Multicolor stimulated Raman scattering microscopy with a rapidly tunable optical parametric oscillator.</a> Optics Letters. 38, 145-147 (2013).</li>
<li>He, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-phase+stimulated+Raman+scattering+microscopy+for+real-time+two-color+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Optica%22%5BJournal%5D)">Dual-phase stimulated Raman scattering microscopy for real-time two-color imaging.</a> Optica. 4 (1), 44-47 (2017).</li>
<li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-window+sparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Multi-window sparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li>
<li>Wei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+chemical+imaging+by+clearing-enhanced+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Volumetric chemical imaging by clearing-enhanced stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (14), 6608-6617 (2019).</li>
<li>Wright, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+for+enhanced+signal+in+CARS+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics for enhanced signal in CARS microscopy.</a> Optics Express. 15 (26), 18209-18219 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bu protokolde sunulan iki renkli SRS görüntüleme şeması, tek renkli SRS görüntülemenin doğru şekilde uygulanmasına bağlıdır. Tek renkli SRS görüntülemede kritik adımlar uzamsal hizalama, zamansal hizalama, modülasyon derinliği ve faz kaymasıdır. İki kirişin mekansal olarak birleştirilmesi, dikroik bir ayna ile gerçekleştirilir. Kirişleri dikroik aynaya gönderirken ince ayar için birkaç direksiyon aynası kullanılır. Kirişler dikroik ayna ile birleştirildikten sonra, bir IR kartı ile örtüşüp örtüşmediğini görmek için kombi...

Geleneksel doku teşhisi, boyama protokollerine ve ardından optik mikroskop altında incelemeye dayanır. Patologlar tarafından kullanılan yaygın boyama yöntemlerinden biri H & E boyamasıdır: hematoksilin hücre çekirdeklerini morumsu maviye boyar ve eozin hücre dışı matrisi ve sitoplazmayı pembe boyar. Bu basit boyama, başta kanser teşhisi olmak üzere birçok doku teşhisi görevi için patolojide altın standart olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, H&E histopatolojisi, özellikle intraoperatif bir ortamda kullanılan dondurulmuş kesit tekniği, hala sınırlamalara sahiptir. Boyama prosedürü, doku gömme, kesitleme, fiksasyon ve boyama1'i içeren zahmetli bir işlemdir. Tipik geri dönüş süresi 20 dakika veya daha uzundur. Dondurulmuş kesitleme sırasında H&E gerçekleştirmek, marj değerlendirmesi için hücresel özellikleri veya büyüme modellerini 3B'de değerlendirme ihtiyacı nedeniyle aynı anda birden fazla bölüm işlendiğinde bazen daha zor hale gelebilir. Ayrıca, intraoperatif histolojik teknikler yetenekli teknisyenler ve klinisyenler gerektirir. Birçok hastanede kurul onaylı patologların sayısındaki sınırlama, birçok durumda intraoperatif konsültasyon için bir kısıtlamadır. Bu tür sınırlamalar, dijital patoloji ve yapay zeka temelli tanı2'deki hızlı gelişme ilgileri ile hafifletilebilir. Bununla birlikte, H&E boyama sonuçları, teknisyenin deneyimine bağlı olarak değişkendir ve bu da bilgisayar tabanlı tanı için ek zorluklar ortaya çıkarır2.
Bu zorluklar, etiketsiz optik görüntüleme teknikleriyle potansiyel olarak ele alınabilir. Böyle bir teknik SRS mikroskopisidir. SRS, moleküler titreşimleri yüksek verimlilikle uyarmak için senkronize darbeli lazerler (pompa ve Stokes) kullanır3. Son raporlar, proteinlerin ve lipitlerin SRS görüntülemesinin, herhangi bir doku işleme ihtiyacını atlayan, tanı için gereken süreyi önemli ölçüde kısaltan ve intraoperatif olarak uyarlanan bozulmamış taze doku ile H & E eşdeğeri görüntüler (uyarılmış Raman histolojisi veya SRH olarak da bilinir) üretebileceğini göstermiştir4. Ayrıca, SRS görüntüleme, 2D görüntüler yetersiz olduğunda teşhis için ek bilgi sunan 3D görüntüler sağlayabilir5. SRH tarafsızdır ve bilgisayar tabanlı tanılama için hazır olan dijital görüntüler üretir. Özellikle beyin kanserinde intraoperatif kanser tanısı ve tümör marj analizi için olası bir çözüm olarak hızla ortaya çıkmaktadır 6,7,8. Daha yakın zamanlarda, dokunun kimyasal değişikliklerinin SRS görüntülemesinin, klinisyenlerin farklı kanser türlerini veya evrelerini9'u sınıflandırmasına yardımcı olabilecek yararlı tanısal bilgiler sağladığı da önerilmiştir.
Doku teşhisi uygulamalarındaki muazzam potansiyeline rağmen, SRS görüntüleme çoğunlukla ultra hızlı lazerler, lazer tarama mikroskobu ve sofistike algılama elektroniklerini içeren görüntüleme platformuyla ilişkili karmaşıklık nedeniyle optik konusunda uzmanlaşmış akademik laboratuvarlarla sınırlıdır. Bu protokol, gerçek zamanlı, iki renkli SRS görüntüleme için ortak bir femtosaniye lazer kaynağının kullanımını ve fare beyin dokusundan sahte H&E görüntülerinin oluşturulmasını göstermek için ayrıntılı bir iş akışı sağlar. Protokol aşağıdaki prosedürleri kapsayacaktır:
Hizalama ve cıvıl cıvıl optimizasyon Çoğu SRS görüntüleme şeması, uyarma kaynağı olarak pikosaniye veya femtosaniye lazerleri kullanır. Femtosaniye lazerlerde, lazerin bant genişliği Raman çizgi genişliğinden çok daha büyüktür. Bu sınırlamanın üstesinden gelmek için, femtosaniye lazerleri cıvıl cıvıl cıvıl Optimum spektral çözünürlük ancak temporal cıvıltı (grup gecikme dispersiyonu veya sadece dispersiyon olarak da bilinir) pompa ve Stokes lazerleri için uygun şekilde eşleştirildiğinde elde edilir. Hizalama prosedürü ve yüksek oranda dağıtıcı cam çubuklar kullanarak lazer ışınlarının dağılımını optimize etmek için gereken adımlar burada gösterilmiştir.
Frekans kalibrasyonu Spektral odaklama SRS'nin bir avantajı, Raman uyarımının pompa ve Stokes lazerleri arasındaki zaman gecikmesini değiştirerek hızlı bir şekilde ayarlanabilmesidir. Bu tür ayarlamalar, lazer dalga boylarının ayarlanmasına kıyasla hızlı görüntüleme ve güvenilir spektral kazanım sağlar. Bununla birlikte, uyarma frekansı ile zaman gecikmesi arasındaki doğrusal ilişki harici kalibrasyon gerektirir. Bilinen Raman tepelerine sahip organik çözücüler, spektral odaklama SRS için Raman frekansını kalibre etmek için kullanılır.
Gerçek zamanlı, iki renkli görüntüleme Büyük doku örneklerinin analizi için gereken süreyi kısaltmak için doku tanı uygulamalarında görüntüleme hızının artırılması önemlidir. Lipitlerin ve proteinlerin eşzamanlı iki renkli SRS görüntülemesi, lazeri veya zaman gecikmesini ayarlama ihtiyacını ortadan kaldırır ve bu da görüntüleme hızını iki kattan fazla artırır. Bu, yeni bir ortogonal modülasyon tekniği ve kilitli bir amplifikatör11 ile çift kanallı demodülasyon kullanılarak elde edilir. Bu yazıda ortogonal modülasyon ve çift kanallı görüntü elde etme protokolü açıklanmaktadır.
Epi-mod SRS görüntüleme Bugüne kadar gösterilen SRS görüntülemenin çoğunluğu iletim modunda gerçekleştirilmektedir. Epi modlu görüntüleme, doku12'den geri saçılan fotonları algılar. Patoloji uygulamaları için cerrahi örnekler oldukça büyük olabilir. İletim modu görüntüleme için, doku kesiti genellikle gereklidir, bu da istenmeyen bir şekilde ekstra zaman gerektirir. Buna karşılık, epi-mod görüntüleme bozulmamış cerrahi örneklerle çalışabilir. Aynı amaç geri saçılan ışığı toplamak için kullanıldığından, iletim görüntülemesi için gereken yüksek sayısal açıklıklı bir kondenserin hizalanmasına da gerek yoktur. Epi-mod, kemikte olduğu gibi doku kesiti zor olduğunda da tek seçenektir. Daha önce beyin dokusu için epi-mod görüntülemenin 2 mm13'> doku kalınlığı için üstün görüntüleme kalitesi sunduğunu göstermiştik. Bu protokol, doku tarafından depolarize edilen dağınık fotonları toplamak için polarize edici bir ışın ayırıcı (PBS) kullanır. Özelleştirilmiş dedektör düzeneğinin karmaşıklığı pahasına dairesel bir dedektörle daha fazla foton toplamak mümkündür12. PBS yaklaşımının uygulanması daha kolaydır (floresana benzer), standart fotodiyot zaten iletim modu tespiti için kullanılmaktadır.
Pseudo-H&E görüntü oluşturma İki renkli SRS görüntüleri toplandıktan sonra, H&E boyamasını simüle etmek için yeniden renklendirilebilirler. Bu yazıda, patoloji uygulamaları için lipid ve protein SRS görüntülerinin psödo-H&E SRS görüntülerine dönüştürülmesi prosedürü gösterilmektedir. Deneysel protokol, yüksek kaliteli SRS görüntüleri oluşturmak için gereken kritik adımları ayrıntılarıyla açıklar. Burada gösterilen prosedür sadece doku tanısına uygulanamaz, aynı zamanda ilaç görüntüleme ve metabolik görüntüleme gibi diğer birçok hiperspektral SRS görüntüleme uygulamasına da uyarlanabilir14,15.
Genel sistem gereksinimleri Bu protokol için lazer sistemi 2 senkronize femtosaniye lazer ışını üretebilmelidir. Sistemler, lazer ışınlarından birinin geniş dalga boyu ayarı için ideal olarak bir Optik Parametrik Osilatör (OPO) içerir. Bu protokoldeki kurulum, 80 MHz tekrarlama hızına sahip iki lazer (1.040 nm'de bir sabit ışın ve 680 ila 1.300 nm arasında değişen bir OPO tabanlı ayarlanabilir ışın) üreten ticari bir lazer sistemi Insight DS + kullanır. Kullanılan mikroskop, ticari bir dik mikroskop çerçevesinin üzerine inşa edilmiş dik bir lazer tarama mikroskobudur. Lazer ışınını taramak için bir çift 5 mm galvo ayna kullanılır. Ev yapımı bir lazer tarama mikroskobu benimsemeyi seçen kullanıcılar için, lazer tarama mikroskobunun yapımı için daha önce yayınlanmış bir protokole bakın16.

<table><tbody><tr><td>100 mm Akromatik Lens</td><td>THORLABS</td><td>AC254-100-B</td><td>Geniş bant, 650 - 1.050 nm, akromatik lens odak uzaklığı, 100 mm</td></tr><tr><td>20 MHz bant geçiren filtre</td><td>Mini devreler</td><td>BBP-21.4+</td><td>Topaklanmış LC bant geçiren filtre, 19.2 - 23.6 MHz, 50 & omega;</td></tr><tr><td>200 mm Akromatik Lens</td><td>THORLABS</td><td>AC254-200-B</td><td>Geniş Bant, 650 - 1.050 nm, akromatik lens odak uzaklığı, 200 mm</td></tr><tr><td>Akromatik Yarım Dalga Plakası</td><td>Birliği Optik</td><td>WPA2210-650-1100-M25.4</td><td>Geniş bant yarım dalga plakası</td></tr><tr><td>Akromatik Çeyrek Dalga Plakası</td><td>Birliği Optik</td><td>WPA4210-650-1100-M25.4</td><td>Geniş bant çeyrek dalga plakası</td></tr><tr><td>Işın Örnekleyici</td><td>THORLABS</td><td>BSN11</td><td>10:90 Plaka Işın</td></tr><tr><td>Ayırıcı Dikroik Ayna</td><td>THORLABS</td><td>DMSP1000</td><td>Merkez dalga boyu yaklaşık 1.000 nm olan diğer dikroikler kullanılabilir.</td></tr><tr>Raman kaymasının kalibrasyonu için <td>DMSO (Dimetil sülfoksit)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>472301</td><td>Çözücü. Bilinen Raman tepe noktalarına sahip diğer çözücüler kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Elektrooptik Genlik Modülatörü</td><td>THORLABS</td><td>EO--NR-C1</td><td>Ortogonal modülasyon ve çift kanallı görüntüleme için iki EOM gereklidir. Daha düşük sürüş voltajının kullanılabilmesi için rezonanslı versiyon önerilir.</td></tr><tr><td>Yanlış H& E Boyama Komut Dosyası</td><td>Matlab</td><td></td><td>https://github.com/TheFuGroup/HE_Staining</td></tr><tr><td>Fanout Tamponu</td><td>PRL-414B</td><td>Nabız Araştırma Laboratuvarı</td><td>1:4 TTL/CMOS Fanout Tamponu ve Hat Sürücüsü, EOM sürüş frekansını ve kilitli</td></tr><tr><td>Hızlı Fotodiyot</td> referansını oluşturmak için <td>THORLABS</td><td>DET10A2</td><td>Si Dedektörü, 1 ns Yükselme</td></tr><tr><td>Süresi Frekans Bölücü</td><td>PRL-220A</td><td>Nabız Araştırma Laboratuvarı</td><td>Lazer çıkışından 20MHz üretmek için bölücü (f/2, f/4, f/8, f/16).</td></tr><tr><td>Yüksek Dağılımlı Cam Çubuklar</td><td>Birliği Optik</td><td>CYLROD01</td><td>Yüksek dağılımlı H-ZF52A Çubuk lens 120 mm, SF11 Çubuk lens 100 mm</td></tr><tr>Insight <td>80 MHz tekrarlama hızıyla iki senkron darbeli lazer (1.040 nm'de bir sabit ışın ve 680-1.300 nm arasında değişen bir ayarlanabilir ışın) çıkışı yapabilen</td> <td>DS+</td><td>Newport</td><td></td> Lazer sistemi.</tr><tr><td>Kilitli Amplifikatör</td><td>Sıvı Aletler</td><td>Moku Lab</td><td>Fotodiyottan SRS sinyalini çıkarmak için kilitli amplifikatör. Bir Zürih Enstrümanı HF2LI veya benzeri bir enstrüman da kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Aynalar</td><td>THORLABS</td><td>BB05-E03-10</td><td>Geniş Bant Dielektrik Ayna, 750 - 1.100 nm. Gümüş aynalar da kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Motorlu Gecikme Aşaması</td><td>Zaber</td><td>X-DMQ12P-DE52</td><td>Pompanın ve Stokes lazerlerinin zamansal örtüşmesinin hassas kontrolü için gecikme aşaması. Başka herhangi bir motorlu sahne çalışmalıdır.</td></tr><tr><td>Yağa Daldırma Kondansatörü</td><td>Nikon</td><td>CSC1003</td><td>1.4 NA. NA>1.2 içeren diğer kondansatörler kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Osiloskop</td><td>Tektronix</td><td>TDS7054</td><td>400 MHz bant genişliği veya daha yüksek olan diğer herhangi bir osiloskop çalışmalıdır.</td></tr><tr><td>Faz Değiştirici</td><td>SigaTek</td><td>SF50A2</td><td>Modülasyon frekansının fazını değiştirmek için</td></tr><tr><td>Fotodiyot</td><td>Hamamatsu Corp</td><td>S3994-01</td><td>Geniş alana sahip silikon PIN diyot (10 x 10 cm2). Geniş alanlı ve düşük kapasitanslı diğer diyotlar kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Polarize Işın Ayırıcı</td><td>Birliği Optik</td><td>PBS9025-620-1000</td><td>Geniş bant polarize ışın ayırıcı</td></tr><tr><td>Refaktif İndeks Veritabanı</td><td></td><td></td><td>refractiveindex.info</td></tr><tr><td>Retro-reflektör</td><td>Edmund Optics</td><td>34-408</td><td>BBAR Dik Açı Prizma. Diğer prizmalar veya retroreflektör kullanılabilir.</td></tr><tr><td>RF Güç Amplifikatörü</td><td>Mini Devreleri</td><td>ZHL-1-2W+</td><td>Kazanç Bloğu, 5 - 500 MHz, 50 & Omega;</td></tr><tr><td>Tarama Aynaları</td><td>Cambridge Technologies</td><td>6215H</td><td>Gümüş kaplamalı 5 mm ayna seti kullandık</td></tr><tr><td>ScanImage</td><td>Vidrio</td><td>ScanImage Basic</td><td>Lazer tarama mikroskobu kontrol yazılımı</td></tr><tr><td>Kısa Geçiren Filtre</td><td>THORLABS</td><td>FESH1000</td><td>25.0 mm Premium Kısa Geçiren Filtre, Kesme Dalga Boyu: 1.000 nm. Stokes'un verimli bir şekilde bastırılması için iki filtre gerekli olabilir.</td></tr><tr><td>Dik Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse FN1</td><td>Başka herhangi bir mikroskop çerçevesi kullanılabilir. Lazer tarama mikroskobu mevcutsa, doğrudan kullanılabilir. Aksi takdirde, mikroskoba bir galvo tarayıcı ve tarama merceği eklenmesi gerekiyordu.</td></tr><tr><td>Suya Daldırma</td><td>Objektifi Olympus</td><td>XLPLN25XWMP2</td><td>Multifoton 25X Objektifin NA değeri 1,05'tir. Diğer benzer hedefler kullanılabilir.</td></tr></tbody></table>

doku teşhisi için fare beyninin gerçek zamanlı, İki renkli uyarılmış raman saçılma görüntülemesi

Real-Time, Two-Color Stimulated Raman Scattering Imaging of Mouse Brain for Tissue Diagnosis

Stimulated Raman scattering (SRS) mikroskopisi, doku tanısında güçlü bir optik görüntüleme tekniği olarak ortaya çıkmıştır. Son yıllarda, iki renkli SRS'nin, beyin kanserinin hızlı ve güvenilir teşhisini sağlayan hematoksilin ve eozin (H & E) eşdeğeri görüntüler sağlayabildiği gösterilmiştir. Bu yetenek, heyecan verici intraoperatif kanser teşhisi uygulamalarını mümkün kılmıştır. Dokunun iki renkli SRS görüntülemesi pikosaniye veya femtosaniye lazer kaynağı ile yapılabilir. Femtosaniye lazerler, hızlı hiperspektral görüntüleme ve gerçek zamanlı, iki renkli SRS görüntüleme dahil olmak üzere esnek görüntüleme modları sağlama avantajına sahiptir. Cıvıl cıvıl lazer darbeleri ile spektral odaklama yaklaşımı, yüksek spektral çözünürlük elde etmek için tipik olarak femtosaniye lazerlerle kullanılır. 
İki renkli SRS alımı, ortogonal modülasyon ve kilitleme algılama ile gerçekleştirilebilir. Darbe cıvıltısının, modülasyonunun ve karakterizasyonunun karmaşıklığı, bu yöntemin yaygın olarak benimsenmesi için bir darboğazdır. Bu makale, spektral odaklı SRS'nin uygulanmasını ve optimizasyonunu ve epi modda fare beyin dokusunun gerçek zamanlı, iki renkli görüntülenmesini göstermek için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Bu protokol, SRS'nin yüksek hızlı ve spektroskopik görüntüleme yeteneğinden yararlanan çok çeşitli SRS görüntüleme uygulamaları için kullanılabilir.

Spektral çözünürlüğü optimize etme: Bir malzeme boyunca dağılım, dağıtıcı ortamdan (uzunluk ve malzeme) ve dalga boyundan etkilenir. Dağılım çubuğu uzunluğunun değiştirilmesi spektral çözünürlüğü ve sinyal boyutunu etkiler. Uygulamaya bağlı olarak farklı şekilde tartılabilen bir al-ver ilişkisidir. Çubuklar, ışın darbesini frekansta geniş ve zamanda dar olmaktan, frekansta dar ve zaman içinde geniş olmaya kadar uzatır. Şekil 7 , değişen çubuk uzunluklarının spektral çözün...

Uyarılmış Raman saçılması (SRS) mikroskobu güçlü, tahribatsız ve etiketsiz bir görüntüleme tekniğidir. Ortaya çıkan bir uygulama, protein ve lipit Raman geçişlerinde iki renkli SRS görüntülemenin psödo-hematoksilin ve eozin görüntüleri üretmek için kullanıldığı uyarılmış Raman histolojisidir. Burada, doku teşhisi için gerçek zamanlı, iki renkli SRS görüntüleme için bir protokol gösteriyoruz.

Doku Teşhisi için Fare Beyninin Gerçek Zamanlı, İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi

Stimulated Raman scattering (SRS) microscopy has emerged as a powerful optical imaging technique for tissue diagnosis. In recent years, two-color SRS has ...

Bu protokol, spektral odaklamalı SRS mikroskobunun uygulanmasını ve optimizasyonunu ve gerçek zamanlı uyarılmış Raman histolojisi uygulamaları için nasıl kullanılabileceğini gösterecektir. Bu tekniğin temel avantajı, enstrümantasyon düzgün bir şekilde hizalandıktan sonra numunelerin işlenebilme hızıdır, çünkü SRS doku işleme ve boyama gerektirmez. Bu protokol sadece histoloji ile sınırlı değil, diğer SRS uygulamaları için de geçerlidir.Bu tür uygulamalar arasında küçük moleküller, ilaçlar, hücreler ve dokular bulunur. Lazer ışını boyutunu başlangıç noktası olarak iki kat büyütmek için pompa ışını için bir çift akromatik lens takarak başlayın. 100 ve 200 milimetrelik bir lensi birbirinden yaklaşık 300 milimetreye yerleştirin.Ardından pompa ışını her iki lensin ortasından hizalayın. Ardından, ışını bir metreden daha uzaktaki bir duvara doğru göndermek için ikinci lensten sonra bir ayna yerleştirin. Kirişi aynadan duvara bir IR kartı ile izleyin ve ışının boyutunun değişip değişmediğini kontrol edin.Kiriş, mesafenin bir fonksiyonu olarak boyut olarak değişirse kirişi kolimasyona alın. Ayarlama için birkaç direksiyon aynası ile dikroik bir ayna takarak iki lazer ışınını birleştirin. Dikroik aynadan sonraki ışınları yaklaşık bir metre uzaklıktaki iki farklı konumda izleyerek pompanın ve Stokes'un uzamsal örtüşmesini optimize edin.Stokes kirişini pompa kirişi ile hizalamak için direksiyon aynasını ve ardından dikroik aynayı yinelemeli olarak ayarlayın. Tarama aynaları park edilmiş konumdayken bir çift direksiyon aynasını ayarlayarak kombine ışınların lazer tarama mikroskobunun tarama aynalarının merkezine gönderildiğinden emin olun. Kondenserden sonra, iletilen ışını fotodiyota iletmek için sırasıyla 100 milimetre ve 30 milimetre odak uzaklığına sahip başka bir lens çifti kullanın ve her iki ışının da fotodiyot içinde yer almasını sağlayın.Ardından, modüle edilmiş Stokes ışınını engellemek için iki alçak geçirgen filtre takın. Işının% 10'unu almak için Stokes ışın yoluna bir ışın örnekleyici yerleştirin ve 80 megahertz darbe trenini algılamak için hızlı bir fotodiyota gönderin. Yayma tamponunun çıkışlarından birini alın ve 20 megahertz sinüzoidal dalga elde etmek için bir bant geçiş filtresi ile filtreleyin.Ardından, çıkış tepe noktasından tepe voltajına yaklaşık 500 milivolta ayarlamak için bir RF zayıflatıcı kullanın. Elde edilen çıkışı, RF fazının bir voltaj kaynağıyla hassas bir şekilde ayarlanmasını sağlayan bir faz değiştiriciye gönderin. Bu çıkışı bir RF güç amplifikatörüne gönderin ve amplifikatörün çıkışını EOM'ye bağlayın.Stokes ışınının blokajını açtıktan sonra, ışın yoluna bir fotodiyot yerleştirerek ilk EOM'nin modülasyon derinliğini optimize edin. Modülasyon derinliği tatmin edici görünene kadar EOM voltajını ve çeyrek dalga plakasını ayarlayın. Lazer ışınını algılamak için dikroik aynadan sonra bir fotodiyot yerleştirin.Önce Stokes ışınını bloke edin, ardından osiloskop üzerindeki pompa darbe piklerinden birini yakınlaştırın. Osiloskop ile bu zirvenin zamansal konumunu işaretlemek için dikey bir imleç yerleştirin. Şimdi pompa kirişini bloke edin ve Stokes kirişinin blokajını kaldırın.Osiloskop üzerindeki tepe konumlarını geçici olarak önceki adımda işaretlenmiş konumla eşleştirmek için gecikme aşamasını çevirin. İki kirişi eşleştirmek için gereken gecikme mesafesini hesaplayarak, ardından daha hızlı kirişin kiriş yolunu uzatarak veya daha yavaş kirişin kiriş yolunu kısaltarak. Daha sonra, numuneyi slayt ve bir kapak kayması arasında tutmak için DMSO ve çift taraflı bant ile bir ara parça olarak bir mikroskop slayt örneği hazırlayın.Numuneyi, kapak kayması tarafı mikroskop hedefine bakacak şekilde mikroskop üzerine yerleştirin ve numuneyi parlak alan aydınlatması altında I parçasından gözlemleyin. Cam bant arayüzündeki hava kabarcıklarının hem üst hem de alt katmanında numunenin odağını bulun, ardından odağı bandın iki katmanı arasında olacak şekilde hareket ettirin. Daha sonra ayarlanabilir ışın çıkışını 798 nanometreye ayarlayın.Kondenserin optik çıkışına bağlı olarak, optik gücü pompa ve Stokes ışınları için objektif odakta her biri yaklaşık 40 miliwatt olacak şekilde ayarlayın. Ardından MATLAB'da tarama görüntüsünü açın ve taramaya başlamak için focus etiketli düğmeye tıklayın. DC sinyalini kanal bir ekranda ortalamak için galvo tarayıcıdan önce direksiyon aynasını ayarlayın.Motorlu gecikme aşamasını hareket ettirin ve kanal iki ekranında gösterilen kilitleme çıkışını yakından izleyin. Son olarak, AC sinyal yoğunluğunu en üst düzeye çıkarmak için zaman gecikmesini ayarlayın. Dikroik aynayı, SRS sinyalini AC kanalında ortalayacak şekilde ayarlayın.Ardından, sinyali en üst düzeye çıkarmak için kilitli amplifikatörün fazını ayarlayın. Numuneyi mikroskopa monte ettikten ve her iki ışının gücünü daha önce gösterildiği gibi numune odağında her biri yaklaşık 40 miliwatt'a ayarladıktan sonra. MATLAB'dan tarama görüntüsünü açın.Ardından, DMSO'nun 2.913 ters santimetre Raman zirvesine karşılık gelen gecikme aşamasını tarayarak maksimum SRS sinyalini bulun. DMSO'nun 2.913 ters santimetre Raman zirvesine karşılık gelen bir SRS görüntüsü elde edin. Görüntüyü ImageJ'de açın ve çerçevenin ortasında küçük bir alan seçin.Seçilen alandaki değerlerin ortalama ve standart sapmasını hesaplamak için hesaplama işlevini kullanın. Frekans erişim kalibrasyonu için, DMSO'nun 2, 913 ve 2.994 ters santimetre Raman zirvelerini kapsayan gecikme aşaması aralığıyla hiperspektral bir tarama kaydedin. Ardından, hiperspektral veri kümesine karşılık gelen sahne alanı konumlarını kaydedin.Sahne alanı konumları için doğrusal regresyon gerçekleştirin ve Raman 2, 913 ve 2.994 ters santimetrede kayıyor. Doğrusal regresyon denklemini kullanarak, gecikme konumlarını karşılık gelen Raman frekanslarına dönüştürün. Spektral çözünürlüğün kalibrasyonu için, çubukların yerleştirilmesi nedeniyle artan optik yol uzunluğu ile önceki konuma göre aşama konumunu tahmin edin.Cam çubuklar eklendiğinde kirişin hafif sapması nedeniyle kirişlerin uzamsal örtüşmesini yeniden hizalayın. İlk EOM'den sonra ıslatma ışını yoluna polarize edici bir ışın ayırıcı, çeyrek dalga plakası ve ikinci bir EOM takın. Sinyal girişini ikinci EOM'ye çıkarın, ardından sinyal girişini ilk EOM'ye takın ve açın.Stokes ışınını ilk EOM'den geçirerek 20 megahertz'de modüle edin. Işının EOM kristali boyunca ortalandığından emin olmak için ilk EOM'nin eğimini ve konumunu ayarlayın. Çift taraflı bant, mikroskop slayt ve kapak camı ile bir doku slayt örneği hazırlayın.Numuneyi, kapak kayması tarafı mikroskop hedefine bakacak şekilde mikroskop üzerine yerleştirin. Epi-mod SRS görüntüleme için, mikroskopa giren ışının polarizasyonunu değiştirmek için ışın mikroskopa girmeden önce yarım dalga plakası takın. Depolarize edilmiş geri yansıyan ışının dedektöre ulaşmasına izin vermek için hedefin üzerine polarize edici bir ışın ayırıcı yerleştirin.Ardından, arka dağınık fotonları hedefin arka diyafram açıklığından fotoğraf dedektörüne aktarmak için 75 milimetrelik bir akromat lens ve 30 milimetrelik asferik lens kullanın. Polarize edici ışın ayırıcı tarafından yönlendirilen arkaya dağılmış ışığı toplamak için dedektörü monte edin. Ardından, modüle edilmiş ışının dedektöre girmesini engellemek için bir filtre takın.Çubuk uzunluklarının değiştirilmesi spektral çözünürlüğü etkiler. Cam cıvıl cıvıl çubuklar kullanılmadığında, DMSO'dan gelen iki Raman zirvesi hiç çözülmez. Cam cıvıl cıvıl çubukların sayısındaki artış, iki tepeyi tatmin edici bir noktada çözmeye başlar.Eşleşen cıvıltı her iki tepe noktasını da çözer ve sahne pozisyonlarını frekansa göre kalibre etmek için kullanılabilir. DMSO spektrumlarını görüntülemek için kullanılan iki kez gecikmiş ortogonal polarizasyon darbe treni, kabul edilebilir modülasyon derinliği ve zamansal ayırma ile SRS uyarımları arasındaki zaman gecikmesini gösterir. Buna karşılık, zayıf iki renkli SRS faz kayması, ters çevrilmiş veya negatif zirvelere yol açar.Burada ex vivo fare beyin dokusunun 2, 850 ve 2.930 ters santimetresinde gerçek zamanlı iki renkli SRS görüntüleme gösterilmektedir. Ham lipit ve protein görüntüleri, lipit ve protein katkılarını gösteren tek bir görüntü üretmek için renk kodluydu. Patolojik uygulamalar için hematoksilin ve eozin boyamasını taklit etmek için yanlış hematoksilin ve eozin yeniden renklendirme de yapıldı.Uzamsal zamansal örtüşme ve uzamsal çözünürlük optimizasyonu, SRS'nin uzamsal odaklanma yaklaşımı için en önemli adımlardır. Bu yöntem genellikle geçici absorpsiyon mikroskobu gibi diğer pompa probu mikroskopi deneyleri için geçerlidir. Yöntem ayrıca hücrelerde ve dokularda floresan olmayan moleküllerin görüntülenmesine izin verir.Burada sunulan yöntem, klinikte uyarılmış Raman histolojisinin gelecekteki çevirisi için görüntü elde etme süresini hızlandırmaktadır.

real-time-two-color-stimulated-raman-scattering-imaging-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Nanoparçacıkların hücre biodistribution değerlendirmek için kullanılan bio-görüntüleme yöntemleri, nanoformulated bileşikler tedavi ve teşhis izleme için geçerlidir. Burada açıklanan yöntemler, histolojik coregistration tarafından değerlendirilir, hassas ve özeldir. Metodolojileri kemirgen insan uygulamaları bir translasyonel yol sağlar.

Teşhis ve Tedavi İzleme Nanomalzemelerin Kayıtlı bio

Source: Espinoza, R., et al. Doku teşhisi için fare beyninin gerçek zamanlı, iki renkli uyarılmış Raman saçılma görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2022). Video, fare beyin dokusu bölümlerinin iki renkli uyarılmış Raman saçılması (SRS) görüntülemesini gösterir. İki senkronize lazer ışını, moleküler titreşimleri uyarmak için doku bölümüne yönlendirilir ve bu da ışınlarda nispi bir yoğunluk değişikliğine neden olur. Dokudaki lipitler ve proteinler, lazer ışınlarının farklı frekans çiftleri kullanılarak...

Fare Beyin Dokusunun İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılması Görüntülemesi

Source: Nishimura, C.  ve ark. HIV Kaynaklı Nöroinflamasyonun Fare Modelinde İki Foton Mikroskobu Kullanılarak Serebral Vasküler Mimarinin Ölçülmesi. J. Vis. Exp. (2016). Bu video, iki foton mikroskobu kullanılarak fare beynindeki kortikal kılcal damarların in vivo görselleştirmesini göstermektedir. İnce kafatası kortikal pencereli anestezi uygulanmış bir fareye floresan boya enjekte etme, görüntüleme için kurulumu hazırlama ve analiz için beyin mikrovasküler yapılarının ayrıntılı görüntülerini...

 Fare Beyni Mikrovaskülatürünün İn Vivo Görüntülenmesi için İki Foton Mikroskobu 

Kaynak: McCullagh, EA, et al. Beyin Dilimlerinde Miyelinasyonu Görüntülemek için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2022)Video, kemirgen beyin dokusundaki nöronal mimariyi görselleştirmek için floresan ve Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) görüntülemeyi göstermektedir. Nissl boyama, ribozomal RNA'ya bağlanarak hücre gövdelerini etiketlerken, CARS görüntüleme, lazerle indüklenen sinyaller yoluyla lipit açısından zengin miyelini hedefler.

Fare Beyin Dokusundaki Miyelinli Nöronları Görselleştirmek için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi

Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Bu video, Thy1-GFP transgenik hattında in vivo iki foton mikroskobu kullanılarak fare retrosplenial korteksindeki nöronların kronik olarak görüntülenmesine izin veren kraniyotomi prosedürünü göstermektedir. Bu yaklaşım, mCherry eksprese eden adeno ilişkili virüsün dorsal hipokampusa enjeksiyonu ile birleştirilir. Bu teknikler, RSC'de deneyime bağlı yapısal plastisitenin uzun süreli izlenmesine izin verir.

Eşzamanlı İki foton<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Retrosplenial kortekste sinaptik Girişlerin Görüntüleme ve postsinaptik Hedefler

Uyarılmış Raman saçılması (SRS) mikroskopisi, biyomoleküllerin spesifik kimyasal bağların içsel titreşimine dayanarak etiketsiz görüntülenmesini sağlar. Bu protokolde, canlı farelerin omuriliğindeki hücresel yapıları görselleştirmek için entegre bir SRS ve iki fotonlu floresan mikroskobun enstrümantal kurulumu açıklanmaktadır.

İn vivo Kombine İki Foton Floresan ve Stimüle Raman Saçılma Mikroskobu ile Biyolojik Dokuların Görüntülenmesi

Gökkuşağı benzeri Raman boyalarının elektronik pre-rezonans uyarılmış Raman saçılması (epr-SRS) görüntülemesi, yüksek oranda çoklanmış epitop bazlı protein görüntüleme için yeni bir platformdur. Burada, antikor hazırlama, doku örneği boyama, SRS mikroskop montajı ve epr-SRS doku görüntülemeyi içeren pratik bir kılavuz sunuyoruz.

Raman Boyaları ile Yüksek Oranda Çoklanmış Doku Görüntüleme

Miyelinasyonu görselleştirmek, sinir sistemini inceleyen birçok araştırmacı için önemli bir hedeftir. CARS, miyelin gibi özel yapıları aydınlatan beyin gibi doku içindeki lipitleri doğal olarak görüntüleyebilen immünofloresan ile uyumlu bir tekniktir.

Beyin Dilimlerinde Miyelinasyon Görüntüleme için Tutarlı Anti-Stokes Raman Spektroskopisi (CARS) Uygulaması

Bu protokol, floresan polistiren mikrosferler kullanılarak in vivo iki foton mikroskopi görüntüleme için optimize edilmiş kronik kraniyal pencere ve mikrovasküler embolizm fare fare modeli için adım adım yaklaşımın ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Floresan Polistiren Mikrosferleri Kullanarak In Vivo İki Foton Mikroskopi İçin Mikrovasküler Embolizm Fare Modeli

Öğrenin, fare beyninde iki renkli uyarılmış Raman saçılma mikroskobisi ile gerçek zamanlı doku teşhisi yapmayı. Bu etiketsiz görüntüleme yöntemi, histolojik çalışmaların verimliliğini artırır.

Doku Teşhisi için Fare Beyninin Gerçek Zamanlı, İki Renkli Uyarılmış Raman Saçılma Görüntülemesi

Daha fazla video keşfet