Bir Sıçan Sakküler Yan Duvar Modelinde Neointima Oluşturan Hücrelerin Kökenini Araştırmak için Bir Hücre İzleyici Enjeksiyonu Kullanma

Doğrudan intra-aort hücre izleyici uygulaması kullanarak, ana arterden kaynaklanan endotel hücrelerinin neointima oluşumundaki rolünü iki farklı zaman noktasında analiz edebiliriz. Bu tekniğin büyük bir avantajı, bu modeli sağlam ve tekrarlanabilir bir teknik haline getiren doğrudan, tek noktalı, yorumlayıcı bir in-vivo enjeksiyondur. Ameliyattan önce, desellülarize anevrizmalar elde etmek için donör sıçanlardan arteriyel poşetleri 37 santigrat derecede 10 saat boyunca% 0.1 sodyum dodesil sülfat içinde inkübe edin.

Bu keseleri ameliyattan birkaç gün önce donör hayvanlardan toplayın. Başlamak için, hayvanın davranışını analiz edin ve ameliyat öncesi klinik muayenenin bir parçası olarak mukus zarlarını ve turgoru inceleyin. Her hayvanın ağırlığını kaydedin.

Anestezi indüksiyonu için, tüm sıçanları beş ila 10 dakika sonra bilinç kaybına kadar oksijenle donatılmış temiz bir kutuya yerleştirin. Pedal çekilme refleksinin yokluğunda anestezi derinliğini kontrol edin. Sıçanları sırtüstü pozisyona yerleştirin ve torakoabdominal bölgeyi elektrikli tıraş makinesiyle tıraş edin.

Bant kullanarak, sıçanın pençelerini otomatik olarak düzenleyen bir rektal proba bağlı bir ısıtma yastığı ile kaplı bir tahtaya sabitleyin. Bir ısıtma yastığı yardımıyla istenen sıcaklığı 37 santigrat derece korumak için rektal probu sıçanın anüsüne yerleştirin. Ardından, intraoperatif olarak hayati belirtileri kontrol etmek için bilgisayarlı bir sisteme bağlı sağ arka bacağa bir sensör takın.

Perianestetik bakım için, gözlere steril bir oftalmik kayganlaştırıcı uygulayın ve cerrahi lambanın kurumasını ve zarar görmesini önlemek için opak bir folyo maskesi ile örtün. Cerrahi alanı povidon iyotla dezenfekte edin ve cerrahi alanı steril bir şekilde örtün. Arteri kaval damardan ayrılır ayrılmaz daha iyi görselleştirmek için aortun proksimal ve distal kısımlarının altına mor dolgulu bir mikro çubuk koyun.

Sonra karnı beyaz gazlı bezle koruyun. Çalışma gününde, bir mililitre PBS'de pipetleme yaparak hücre izleyicinin iki mikrolitresini çözün. Karışımı bir kanülle donatılmış bir mililitrelik bir şırıngaya aktarın.

Ameliyathanedeki ışığı kapatın. Bir mikroskop kullanarak, aortun orta ventral kısmına mikro forseps ile tek noktalı enjeksiyonu gerçekleştirin ve bir mililitre heparize% 0.9 salin çözeltisini dikkatlice enjekte edin. Hücre izleyiciyi dikkatlice enjekte edin ve hemen çalışma mikroskobunu da kapatın.

Karnı tekrar ıslak gazlı bezle koruyun. Boyanın en az 15 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin. Ardından mikroskop ve ameliyathane ışıklarını açın.

Uzunlamasına arteriyotomi yapmak için mikro forseps ve mikro makas kullanın, böylece uzunluğu hasat edilen anevrizmanın çapının ortalamasını alır. Doğru uzunluğu sağlamak için arteriyotomi yapmadan önce anevrizmayı aortun yanına yerleştirin. Anevrizmayı emilemeyen 10-0 dikiş kullanarak sekiz ila 10 tek dikişle dikişleyin.

Son dikişten önce, bobini bir santimetrelik bir ambalaj yoğunluğu ile teslim edin. Bu modelde bobin veya stent tedavisi yapılabilir. Ardından, heparinize salin ile sürekli sulama altında, distal olarak başlayan geçici kelepçeleri dikkatlice çıkarın.

Yarayı katmanlı bir şekilde kapatın. Ameliyatın sonunda, anesteziyi deri altı enjeksiyonu ile tersine çevirin. Çalıştırılan her hayvanın temiz bir kafeste tamamen uyanana ve bir ısıtma lambası ile gerektiği gibi ısınana kadar iyileşmesine izin verin.

Yedinci gün ve 21. gün için çekilen başlangıç anevrizması hacimleri, bobin veya stent tedavi grupları arasında desellülarize veya vital anevrizmalar için anlamlı farklılık göstermedi. Desellülarize anevrizmalar için çekilen FU hacimleri, stentli anevrizmalara kıyasla sarmallarda anlamlı olmayan bir anevrizma büyümesi gösterdi. Çekilen FU hacmi, vital bobinli grupta stentli gruba göre anlamlı derecede daha fazlaydı.

Desellülarize anevrizmaların neointimasındaki hücre izleyici pozitif hücrelerin miktarları, yedinci FU gününde stent veya sarmal tedavi edilen gruplar arasında anlamlı olarak farklılık göstermedi, ancak 21. günde stent sıçanlarda anlamlı derecede yüksekti FU.No vital-anevrizma dikişli sıçanlarda, yedi gün FU'da desellülarize anevrizmalar FU.In yedi gün veya 21 günde anlamlı farklılıklar kaydedildi. Stent ile tedavi edilen trombusta, bobin ile tedavi edilen gruba kıyasla önemli ölçüde daha fazla hücre izleyici pozitif hücre kalmıştır. Bu fark yedi günlük FU'da vital anevrizmalarda gözlenmedi. Solmayı önlemek için hücre izleyiciyi enjekte etmeden önce ameliyathanedeki ışıkları her zaman kapatmayı unutmayın. Ayrıca, boyayı en az 15 dakika kuluçkaya yatırın.