Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus Kullanarak Enfeksiyöz Etiyolojinin Epilepsisi İçin Bir Model

TMEV modeli, CNS enfeksiyonunun bir sonucu olarak nöbet gelişim mekanizmalarının araştırılmasına izin veren ilk deneysel platformlardan biridir. CNS enfeksiyonları epilepsi riskini önemli ölçüde artırır. Bu model, risk altındaki hastalar için potansiyel terapötik hedeflerin ve bileşiklerin belirlenmesine yardımcı olur.

Deneyciler farelerle çalışma konusunda eğitilmelidir. Virüs enjeksiyonu, yeterli hassasiyet ve rutin elde etmek için ölü hayvanlara boya enjekte edilerek çok iyi uygulanabilir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi Laura Bell olacak.

Başlamak için, insülin şırıngasının kapağını çıkarın ve 2,5 milimetrelik yeterli bir enjeksiyon derinliği sağlamak için iğnenin etrafına bir yaka olarak polietilen boru ekleyin. Daha sonra şırıngayı 30 dakika boyunca etanol içine batırın ve şırıngayı 30 dakika boyunca UV ışığı altında yerleştirin. Daha sonra, kapağı tekrar iğnenin üzerine koyun ve şırıngayı sterilize edici bir keseye sarın.

Kapatmak için torbayı bantlayın ve hazırlık tarihi ile etiketleyin. Virüs enjeksiyonu yapmak için, eksi 80 santigrat derece dondurucudan TMEV'nin Daniels suşunun alikotlarını alın. Virüsü çözün ve buzda tutun.

Ardından şırıngayı virüs süspansiyonu ile yükleyin. Daha sonra, tezgahı dezenfektanla temizleyin ve bir duman emici altında çalışın. Anestezi uygulanan fareyi kaputun altındaki anestezi kutusundan aktarın ve bir ayak parmağı sıkışması yaparak cerrahi toleransı kontrol edin.

Ardından, hayvanın kafasını bir alkol pedi ile temizleyin ve farenin kafasını hafifçe sola doğru eğin, böylece enjeksiyon bölgesi yukarı doğru bakacaktır. Cildi biraz geriye doğru çekin ve iğneyi kafaya yerleştirin. Daha sonra, sağ yarımkürenin temporal bölgesinde 2,5 milimetre derinliğe kadar 20 mikrolitreyi intrakordal olarak enjekte edin.

Şırıngayı beş ila 15 saniye boyunca yerinde bırakın ve enjeksiyondan herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol edin veya hava kabarcıkları görülürse, yeni bir şırınga hazırlayın. Şırıngayı dikkatlice dışarı çekerken, hafifçe döndürün. Daha sonra hayvanı, anesteziden iyileşme sırasında bir ısıtma yastığının yarısına, yarısına yerleştirilen yeni bir kafese aktarın.

Ve sternal yatmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanları gözetimsiz bırakmayın. İlk olarak, tüm kafesleri tezgaha getirin ve hayvanları ışık fazı sırasında günde iki kez nöbet için gözlemleyin. Nöbet aktivitesini modifiye edilmiş bir yarış ölçeği ile puanlayın ve nöbetlerin sayısını ve yoğunluğunu bildirin.

Ardından, biraz ses çıkarmak ve her hayvanı başka bir kutuya ve geriye aktarmak için kafes boyunca bir kalemi kaydırın. Kendiliğinden veya hafif kafes sallanmasından sonra ele geçirmemiş hayvanlar için, fareyi kuyruğunda soldan sağa çevirerek dikkatlice çevirirken daha yoğun bir şekilde kullanarak nöbetleri tetikleyin. Her hayvanı nöbet davranışı için tekrar gözlemleyin ve sonraki kafesler için işlemi tekrarlayın.

Davranışsal nöbetler, uyuşturucu enjeksiyonları sırasında veya sonraki nöbet işleme izleme oturumları sırasında meydana gelirse kaydedildi. Gözlemlenen veriler, nöbet evrelerinin farklı renklerde resmedilmesiyle oluşturulan bir ısı haritası olarak sunulmuştur. EEG'nin kaydedilmesiyle, TMEV enfeksiyonundan aylar sonra kronik fazda çeşitli epileptik olaylar tanımlanabilir.

Hipokampal dejenerasyon ve epileptik TMEV ile enfekte olmuş farelerin nicelleştirilmesi, hipokampal alanda önemli bir azalma ve TMEV farelerinin ventriküler alanında kontrollere kıyasla buna karşılık gelen bir artış göstermektedir. İmmünohistolojik analiz, inflamatuar hücrelerin varlığı gibi çeşitli parametreler hakkında bilgi verebilir. Bu durumda, hipokampüsü içeren bölümler T lenfositlerini etiketlemek için antikorlarla boyandı.

Mock-enfekte hayvanlar T hücresi infiltrasyonu göstermezken, TMEV ile enfekte olmuş farelerin çoğunda orta derecede infiltrasyon görülmüştür. Enfekte farelerin bazıları T lenfositlerinin ciddi infiltrasyonunu gösterir. Hayvanların hepsinde her gözlem döneminde nöbet geçirmez.

Ayrıca, en yüksek nöbet insidansı aşılamadan sonraki beş ve altı günlerde ortaya çıkar. TMEV modelini, yeni anti-nöbet ilaçlarının enfeksiyona bağlı nöbetlere karşı etkinliğini test etmek için kullanıyoruz. Komorbid davranış değişikliklerini ve elektrofizyolojik değişiklikleri araştıran testler de değerlendirilebilir.

TMEV modeli, epilepsi araştırma topluluğuna, enfeksiyon sonrası epileptogenezin altta yatan mekanizmalarının araştırılmasına olanak tanıyan ilk CNS enfeksiyonuna bağlı temporal lob epilepsi modelini sağlamıştır.