Reverse Genetics to Engineer Positive-Sense RNA Virus Variants

Shalini Soni; Shubhra Agarwal; Rakesh Aggarwal; Naga Suresh Veerapu

doi:10.3791/63685

Pozitif Anlamlı RNA Virüsü Varyantlarını Tasarlamak için Tersine Genetik

JoVE Journal
Genetics
Author Produced

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Reverse Genetics to Engineer Positive-Sense RNA Virus Variants

Pozitif Anlamlı RNA Virüsü Varyantlarını Tasarlamak için Tersine Genetik

Full Text

1,960 Views

15:49 min

June 9, 2022

DOI: 10.3791/63685-v

Shalini Soni¹, Shubhra Agarwal¹, Rakesh Aggarwal², Naga Suresh Veerapu¹

¹Virology Section, Department of Life Sciences,Shiv Nadar University, ²Gastroenterology,Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Protokol, hataya açık PCR ve ters genetik kullanarak tam uzunlukta mutant RNA sentezini birleştirerek hepatit C virüsü genomunda kontrol edilebilir genetik çeşitliliği tanıtmak için bir yöntemi açıklar. Yöntem, fenotip seçimi için bir model sağlar ve 10 kb uzunluğunda pozitif anlamlı RNA virüs genomları için kullanılabilir.

Burada açıklanan protokol, 10 kilobayt uzunluğa kadar tek iplikli pozitif RNA viral genomlarının rastgele mutajenize edilmiş tam uzunlukta RNA kütüphanelerinin oluşturulmasına ve istenen deneysel koşullar altında ilgilenilen fenotiplerin seçilmesine izin verir. Bu teknik, klonlamasız bir yaklaşım kullanarak kısa sürede değişen seviyelerde genetik çeşitliliğe sahip tam uzunlukta viral RNA kütüphaneleri oluşturabilir. Teknik, kütüphanelerin sentezi için ucuz ve yaygın olarak bulunan reaktifleri kullanır.

Prosedürü göstermek, Shiv Nadar Üniversitesi Yaşam Bilimleri Bölümü Viroloji Bölümü'nden doktora öğrencisi Shaheen Khan olacak. Başlamak için, metin el yazmasında açıklandığı gibi, pJFH1 şablonu olmadan reaksiyon bileşenleri ile birlikte ileri ve geri primerlerle dört set deney için ana karışımı hazırlayarak ep-PCR gerçekleştirin. Ana karışımı dört tüpe ayırın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos