Name: Vasküler Yanıtları Araştırmak için İntrapulmoner Arter ve Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Keşfedin sıçan intrapulmoner arter ve vasküler düz kas hücrelerinin izolasyonunu, organ banyosu tekniği ile vasküler yanıtları incelemek için. Bu yöntem pulmoner hipertansiyon gibi hastalıklarda ilaç etkilerini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Tayland Ulusal Araştırma Konseyi'ne, Kimyada İnovasyon Mükemmeliyet Merkezi'ne (PERCH-CIC) ve Uluslararası Araştırma Ağı'na (IRN61W0005) finansal destek sağladıkları için ve Naresuan Üniversitesi Tıp Bilimleri Fakültesi Fizyoloji Bölümü'ne araştırma tesisi desteği için teşekkür etmek isterler.

Bu çalışmada yapılan deneyler, Naresuan Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (NUACUC) Etik Kurulu tarafından, NU-AE620921 protokol numarasıyla, hayvanların bilimsel amaçlarla bakımı ve kullanımı için onaylanmıştır.
1. Fizyolojik çözeltilerin bileşimi
<ol><li>Krebs çözeltisini, nihai konsantrasyonları elde etmek için kimyasalları damıtılmış suda çözerek aşağıdaki gibi formüle edin: 122 mM NaCl, 10 mM HEPES, 5 mM KCl, 0,5 mM KH 2 PO 4, 0,5 mM NaHPO4, 1 mM MgCl 2, 1,8 mM CaCl 2 ve 11 mM glikoz8. Çözeltinin pH'ını 1 M NaOH ile 7,3'e ayarlayın ve kullanmadan önce 37 °C'ye ısıtın.</li>
	<li>Soğuk Krebs çözeltisini adım 1.1'de belirtildiği gibi hazırlayın. adım 2'de açıklandığı gibi IPA'nın yalıtım ortamı olarak kullanmak için.</li>
</ol>2. İntrapulmoner arter (IPA) izolasyonu
<ol><li>8 haftalık erkek Wistar sıçanlarını intraperitoneal sodyum tiyopental enjeksiyonu (100 mg/kg)9 ile uyuşturun. Sıçanları, ayaklarına kenetlenmiş forseps kullanarak derin uykuda ağrılı uyaranlara tepkilerini kontrol edin, ardından sıçanların adım 2.2'de ötenazi yapmadan önce ayak geri çekilme reaksiyonu olmadığından emin olun.</li>
	<li>Sıçanın orta toraksını ve kalp terminalini makasla (boyut 14 cm) kesin. Ardından, akciğerin kökünü makasla bulun (boyut 14 cm). Tüm akciğeri makasla keserek toplayın ve soğuk Krebs çözeltisi10,11'e batırın.</li>
	<li>Akciğerin tek bir lobunu makasla (boyut 11 cm) dilimleyin ve akciğerin medial tarafı / kökü yukarı bakacak şekilde bir Petri kabına (boyut 9 cm) yerleştirin (Şekil 2A, B). Damar, bronş ve arterin yukarıdan aşağıya hizalanmasını gözlemleyin ve tanımlayın (Şekil 2B).</li>
	<li>Bronşu makasla uzunlamasına kesin (boyut 11 cm). Ardından, bronşun ucunu tutmak için forsepsleri (boyut 11 cm) kullanın. Bronş ve damarları yavaşça disseke edin ve akciğerden çıkarın. IPA'nın her zaman bronşun altında anatomik olarak hizalandığını unutmayın.</li>
	<li>Bundan sonra, ana IPA görselleştirilebilir (Şekil 2C). IPA'nın ucunu tutmak için forsepsleri (boyut 11 cm) kullanın ve makasla (boyut 11 cm) akciğer dokusundan dikkatlice diseke edin.</li>
	<li>İzole edilmiş IPA'yı, organ banyosu tertibatı kurulana kadar soğuk Krebs çözeltisinde tutun (pH 7,3 ve sıcaklık 4 °C)1 1.</li>
</ol>3. Vasküler düz kas hücrelerinin (VSMC'ler) izolasyonu
<ol><li>IPA'yı daha önce adım 2'de açıklandığı gibi yalıtın. IPA'nın ana dalını makasla uzunlamasına kesin (boyut 11 cm) ve küçük şeritler halinde (2 mm) kesin (Şekil 3A).</li>
	<li>IPA şeritlerini 110 mM NaCl, 5 mM KCl, 0,5 mM KH 2 PO4, 0,5 mMNaH2PO4, 10 mM NaHCO 3, 10 mM HEPES, 0,03 mM fenol kırmızı, 10 mM taurin, 0,5 mM EDTA, 2 mM MgCl 2, 11 mM glikoz ve 0,16 mM CaCl2 içeren bir ayrışma ortamına (DM)daldırın, ve 1 M NaOH ile pH'ı 7,0'a ayarlayın. Şeritleri 1 mg / mL papain,% 0.04 sığır serum albümini (BSA) ve 0.4 mM 1,4- ditiyotreitol (DTT) içeren DM'de 4 ° C'de 1 saat boyunca inkübe edin ve 15 dakika boyunca 37 ° C'de inkübe edin. DM'ye 1 mg / mL kollajenaz tip 1A ekleyin ve 5 dakika boyunca 37 ° C'de daha fazla inkübe edin. NOT: DM, hücre canlılığını korumak için kullanılan bir çözümdür. Papain ve kollajenaz tip 1A, tek hücreleri izole etmek için hücre dışı matriks proteinlerini parçalayan enzimlerdir. BSA, depolama ve enzimatik reaksiyonlar sırasında enzimlerin stabilizasyonu için kullanılan bir serum albümin proteinidir. DTT, hücre izolasyon işlemi sırasında enzimlerin aktivitesini stabilize etmek ve teşvik etmek için kullanılan bir indirgeyici ajandır. Taurin, hücre zarını ve hücre bütünlüğünü stabilize etmek için kullanılan amino sülfürik asittir.</li>
	<li>Dokuları taze DM'ye aktarın ve bir cam Pasteur pipet kullanarak nazik tritürasyon ile dağılın (Şekil 3B). İzole VSMC'ler mikroskop altındaki banyo çözeltisinde görünür hale gelene kadar tritürasyona devam edin (Şekil 3C). NOT: Yeni izole edilmiş VSMC'ler, vasküler fizyoloji / patofizyolojinin incelenmesi için, farmakolojik ajanlarla modülasyon, yama-kelepçeli elektrofizyolojik analiz, kalsiyum görüntüleme vb. gibi çeşitli deneysel araştırmalarla birlikte kullanılabilir. Bununla birlikte, bu çalışma sadece organ banyosu tekniği kullanılarak izole IPA'nın vazogevşemesine odaklanmaktadır.</li>
</ol>4. Organ banyosu tekniği
<ol><li>IPA'yı daha önce adım 2'de açıklandığı gibi yalıtın. IPA'nın ana dalını ~2 mm uzunluğundaki halkalar halinde kesin (Şekil 2D)13.</li>
	<li>IPA halkalarını organ banyosu odalarına (Şekil 4) iki adet 40 μm çapında paslanmaz çelik tel üzerine geçirerek yapıştırın (Şekil 2E)11,13,14.</li>
	<li>IPA halkaları ile monte edilmiş paslanmaz çelik telleri, veri toplama cihazına bağlı izometrik kuvvet dönüştürücülere ve veri kaydı ve analizi için uygun fizyolojik yazılımla kurulan bilgisayar sistemine takın, ardından IPA halkasının gerginliğini yavaşça1 g 11'e yükseltin.</li>
	<li>Gemi segmentlerinin 1 g'lık bir dinlenme geriliminde yaklaşık 45 dakika boyunca dengelenmesine izin verin. Dengeleme süresi boyunca, Krebs çözeltisinin her 15 dakikada bir düzenli olarak değiştirildiğinden emin olun. Bu denge periyodundan sonra, vazokonstriksiyonlarını 47.4 mM NaCl, 80 mM KCl, 10 mM HEPES, 0.5 mM KH 2 PO 4, 0.5 mM NaHPO4, 1.8 mM CaCl 2, 1 mM MgCl 2 ve 11mM glikoz10,11 içeren yüksek hücre dışı K + (80 mM) çözeltisine ölçerek damarların yaşayabilirliğini test edin.</li>
	<li>Fenilefrin (PE, 1 x 10−5 M) ile önceden konteke edilmiş halkalarda asetilkoline (1 x 10−5 M) gevşeme yanıtını hesaplayarak endotelin varlığını veya yokluğunu değerlendirin (PE eklendikten sonra vasküler kasılmaların 1 saat boyunca sabit kaldığını unutmayın). Halkaları% 70'ten fazla gevşeme için nicelleştiriyorlarsa, endotel bozulmamış olarak düşünün (Şekil 5A). % 10'dan az gevşeme varsa, halkaları endotel kaynaklı13 olarak düşünün (Şekil 5B). Denudasyonu indüklemek için kabın içine küçük bir telle hafifçe sürtünerek endoteli mekanik olarak çıkarın.</li>
	<li>Test deneylerinin başlamasından önce arteriyel halkaları 30 dakika boyunca tekrar dengeleyin.</li>
</ol>5. Bitki ekstraktına vazorelaxant yanıtı
<ol><li>IPA halkalarını PE (1 x 10−5 M) ile önceden kontonere ederek bitki ekstraktının gevşetici etkisini araştırın.</li>
	<li>Daha sonra, vazogevşemeyi indüklemek (Şekil 6A, B) ve konsantrasyona bağlı bir yanıt eğrisi elde etmek için bitki ekstraktını (1-1.000 μg / mL) endotel bozulmamış halkalara ve endotel reddedilen halkalara kümülatif olarak dikkatlice ekleyin (Şekil 6C).</li>
	<li>Çözücü olarak kullanılan dimetil sülfoksitin (DMSO) etkisinin de negatif kontrol görevi görecek şekilde benzer şekilde değerlendirildiğinden emin olun (Şekil 6C).</li>
</ol>6. Endotel yoluyla bitki özü kaynaklı vazogevşeme mekanizması
<ol><li>Endotel paraziti bozulmamış IPA halkalarını aşağıdaki inhibitörlerle 30 dakika boyunca inkübe ederek bitki ekstraktının endotel nitrik oksit sentaz (eNOS), siklo-oksijenaz (COX)13 ve endotel kaynaklı hiperpolarize edici faktör (EDHF) yolları aracılığıyla vazorelaxant etki mekanizmasını değerlendirin (Şekil 7A): 1 x 10−4 M NG-nitro-L-arginin metil ester (L-NAME, bir eNOS inhibitörü)9, 1 x 10−5 M indometazin (bir COX inhibitörü)9, veya 1 x 10−5 M PE ile IPA kasılmalarını indüklemeden önce 1 x 10−7 M apamin (küçük bir kalsiyum ile aktive potasyum kanal blokeri) ve 1 x 10−7 M charybdotoxin (bir ara ve büyük iletkenlikli kalsiyum ile aktive potasyum kanal blokeri) kombinasyonu.</li>
	<li>Daha sonra, PE stabilize etmek için kasılmalardan sonra, bitki ekstraktının kümülatif konsantrasyonlarını (0.1-1.000 μg / mL) ekleyin.</li>
	<li>Bitki ekstraktının etkilerini, inhibitörlerin varlığında IPA halkalarının inhibitörsüz yanıtına kıyasla IPA halkalarının yüzde gevşemesi olarak sunar (Şekil 7B-D) ve konsantrasyon-yanıt eğrisini oluşturur.</li>
</ol>7. Vasküler düz kas K+ kanalları aracılığıyla bitki özü kaynaklı vazogevşeme mekanizması
<ol><li>Endotel ile infüze edilmiş IPA halkalarını 1 x 10−3 M 4-aminopiridin (4-AP), voltaj kapılı potasyum kanalı blokeri (KV) (Şekil 8A), 1 x 10−5 M glibenklamid, ATP'ye duyarlı potasyum kanalı (KATP) blokeri veya büyük iletkenlik Ca2+-aktive K+ kanallarının (KCa) blokeri olan 1 x 10−7 M iberiotoksin ile 30 dakika boyunca önceden inkübe edin, 1 x 10−5 M PE ile IPA kasılmalarını indüklemeden önce.</li>
	<li>Daha sonra, bitki ekstraktının kümülatif konsantrasyonlarını ekleyin.</li>
	<li>Bitki ekstraktının etkilerini, inhibitörlü IPA halkalarının inhibitörsüz IPA halkalarına kıyasla yüzde gevşemesi olarak sunar (Şekil 8B-D) ve konsantrasyon-yanıt eğrisini oluşturur.</li>
</ol>8. VSMC'lerde hücre dışı kalsiyum (Ca2+) akışının inhibisyonu yoluyla bitki ekstraktına bağlı vazogevşeme mekanizması
<ol><li>Endotelyumla denud edilmiş IPA halkalarını, 1 mM etilen glikol-bis (2-aminoetilet)-N,N,N',N'-tetraasetik asit (EGTA) içeren Ca 2+-free Krebs çözeltisinde 30 dakika boyunca inkübe edin (Şekil 9A).</li>
	<li>Ardından, VSMC'leri depolarize etmek için banyo solüsyonunu 10 dakika boyunca Ca2 + serbest-80 mM K+ çözeltisi ile değiştirin ve ardından VOCC'leri açın (Şekil 9A).</li>
	<li>IPA'nın vazokonstriksiyonunu indüklemek ve konsantrasyon-yanıt eğrisini oluşturmak için kümülatif olarak CaCl2 (0.01-10 mM) ekleyin (Şekil 9A).</li>
	<li>Bu protokolü aynı IPA halkalarında tekrarlayın, ancak bunları 10 dakika boyunca 80 mM K + çözeltisi içeren Ca 2+ 'da bitki özü veya 1 μM nikardipin (L tipi Ca2 + kanal bloker) ile önceden inkübe edin ve ardından CaCl28'in kümülatif ilavesini yapın.</li>
	<li>Son olarak, kontraktil yanıtı daha önce kontrol CaCl2 zorluklarının neden olduğu maksimum kasılma ile karşılaştırın (Şekil 9B).</li>
</ol>9. Sarkoplazmik retikulumdan (SR) hücre içi kalsiyum (Ca2+) salınımının inhibisyonu yoluyla bitki ekstraktına bağlı vazogevşeme mekanizması
<ol><li>Endotel ile doldurulmuş IPA halkalarını yaklaşık 5 dakika boyunca 80 mM K+ çözeltisine maruz bırakın, VSMC'leri depolarize edin, VOCC'leri açın ve sonuçta SR'ye Ca2+ yüklemesini üretin (Şekil 10A).</li>
	<li>Banyo solüsyonunu 10 dakika boyunca 1 mM EGTA içeren Ca2+-free Krebs çözeltisi ile değiştirin (Şekil 10A).</li>
	<li>Daha sonra, fosfolipaz C / IP3 yolunu aktive eden, sonuçta SR'den Ca2 + 'yı serbest bırakan ve IPA'nın geçici bir daralmasını uyandıran 1 x 10−5 M PE ile IPA halkalarına meydan okuyun (Şekil 10A).</li>
	<li>PE'ye benzer şekilde geçici kasılmaları tespit etmek için aynı protokolü tekrarlayın.</li>
	<li>IPA halkalarına yaklaşık 5 dakika boyunca 80 mM K+ çözeltisi ile tekrar meydan okuyun, ardından banyo solüsyonunu 10 dakika boyunca bitki özü olsun veya olmasın 1 mM EGTA içeren Ca2+-free Krebs çözeltisi ile değiştirin.</li>
	<li>Yine, IPA halkalarına 1 x 10−5 M PE ile meydan okuyun.</li>
	<li>PE tarafından indüklenen IPA kasılmalarını, bitki ekstraktlı ve bitkisiz durum arasında karşılaştırın (Şekil 10B).</li>
</ol>10. İstatistiksel analiz
<ol><li>Bu değerleri Öğrencinin t-testini kullanarak karşılaştırın veya uygun istatistiksel yazılımı kullanarak Tukey-Kramer post hoc testi ile takip edilen bir varyans analizi (ANOVA) ile analiz edin.± p < 0.05'teki farkların istatistiksel olarak anlamlı olduğunu düşünün. Burada n=6 sıçan/deney protokolü vardı. NOT: Vazokonstriksiyon ve vazogevşeme kaydı, bilgisayarda yüklü uygun bir yazılımla değerlendirilebilir. Örneğin, Şekil 5A , kan damarları kasılmaya neden olan PE tarafından uyarıldığında, bunun orijinal izlemenin artan gerginliğinden gözlemlenebileceğini göstermektedir. İzleme, % 100 daralma olarak kabul edilen 20-30 dakika içinde stabilize olacaktır. Bundan sonra, ACh kan damarlarını uyarır ve orijinal izlemenin azalan gerginliğinden gözlemlenebilen gevşemeye neden olur. Böylece, azalan gerilim% 100 daralmaya kıyasla yüzde olarak hesaplanır.</li>
</ol>

<ol><li>Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+pulmonary+vascular+smooth+muscle+contractility+in+pulmonary+arterial+hypertension%3A+Implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy.</a> Frontiers in Physiology. 8, 614(2017).</li>
<li>Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+and+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Clinics%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide and endothelial dysfunction.</a> Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).</li>
<li>Ruan, K. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advance+in+understanding+the+biosynthesis+of+prostacyclin+and+thromboxane+A2+in+the+endoplasmic+reticulum+membrane+via+the+cyclo-oxygenase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Mini+Reviews+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway.</a> Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).</li>
<li>Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prostacyclin+pathway+in+pulmonary+arterial+hypertension%3A+A+clinical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).</li>
<li>Morgado, M., Cairrão, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-dependent+relaxation+pathways+in+vascular+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).</li>
<li>Schmidt, K., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium-derived+hyperpolarizing+factor+and+myoendothelial+coupling%3A+The+in+vivo+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective.</a> Frontiers in Physiology. 11, (2020).</li>
<li>Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elementary+calcium+signaling+in+arterial+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle.</a> Channels. 13 (1), 505-519 (2019).</li>
<li>Wisutthathum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extract+of+Aquilaria+crassna+leaves+and+mangiferin+are+vasodilators+while+showing+no+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Traditional+and+Complementary+Medicine%22%5BJournal%5D)">Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity.</a> Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).</li>
<li>Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasodilatory+effects+and+mechanisms+of+action+of+Bacopa+monnieri+active+compounds+on+rat+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries.</a> Molecules. 24 (12), 2243(2019).</li>
<li>Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+P2+receptors+mediating+contraction+of+the+rat+isolated+pulmonary+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature.</a> British Journal of Pharmacology. 131, 167(2000).</li>
<li>Paracha, T. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+vasodilation+response+and+structure+activity+relationships+of+N2%2C+N4-disubstituted+quinazoline+2%2C+4-diamines+in+a+rat+pulmonary+artery+model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model.</a> Molecules. 24 (2), 281(2019).</li>
<li>Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+P2Y+receptors+couple+to+calcium-dependent%2C+chloride+channels+in+smooth+muscle+cells+of+the+rat+pulmonary+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery.</a> Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).</li>
<li>Wisutthathum, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eulophia+macrobulbon+extract+relaxes+rat+isolated+pulmonary+artery+and+protects+against+monocrotaline-induced+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension.</a> Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).</li>
<li>Kruangtip, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin+analogues+inhibit+phosphodiesterase-5+and+dilate+rat+pulmonary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Bu yazıda, sıçan IPA ve VSMC'lerinin izolasyon tekniğini açıklayacağız. IPA'nın in vitro vasküler yanıtını araştırmak için, bitki ekstresi tarafından indüklenen IPA vazogevşemesinin farmakolojik etkisini ve mekanik temelini karakterize etmek için kullanılabilecek çeşitli deneysel protokoller kullanılmıştır.
Bitki ekstraktının endotele bağımlı vazodilatör etkisi ile ilgili olarak, L-NAME (eNOS), indometazin (COX) ve apamin + charybdotoxin (EDHF) gibi çeşitli blokerler kullanılmıştır. T...

Pulmoner vaskülatür, ana fonksiyonun akciğerlerin gaz değişim alanına oksijensiz kan vermek olduğu düşük basınçlı bir vasküler sistemdir. Akciğerlerdeki pulmoner arterler, bronşiyal ağaca paralel dallar halinde düzenlenir, sonuçta birkaç alveol üzerinde sürekli olan ve son olarak venüller ve damarlar halinde bir araya gelen geniş bir kılcal damar ağı oluşturur. Pulmoner arterin vasküler tonusu, endotel ve vasküler düz kas hücreleri (VSMC'ler) arasındaki etkileşimi içeren çeşitli faktörler tarafından kontrol edilir1.
Bu çalışmada, intrapulmoner arterin (IPA) endotele bağımlı ve bağımsız vazogevşemesi üzerinde durulmuştur. Endotel bağımlı vazogevşeme ile ilgili olarak, endotel hücrelerinin yüzeyinde meydana gelen çeşitli mekanizmalar, hücre içi Ca 2+ konsantrasyonunu artırabilir (örneğin, muskarinik reseptör [M3] ile asetilkolin [ACh] bağlanır), nitrik oksit (NO), prostasiklin (PGl2) ve endotel kaynaklı hiperpolarize edici faktör (EDHF) oluşumuna yol açabilir (Şekil 1 ). NO, endotel nitrik oksit sentaz (eNOS)2 tarafından L-arginin'den sentezlenen ana endotel kaynaklı gevşetici faktördür, daha sonra endotel hücrelerinden VSMC'lere ayrışır (Şekil 1) ve çözünür guanilil siklaz (sGC) enzimini uyarır; Bu enzim guanosin trifosfatı (GTP) protein kinaz G'yi (PKG) aktive eden ve sitozolik Ca2+ seviyelerini azaltan ve böylece vazogevşemeye neden olan siklik guanozin monofosfata (cGMP) dönüştürür (Şekil 1). PGl2, endotel hücreleri tarafından siklo-oksijenaz (COX) yolu 3,4 üzerinden sentezlenir. VSMC'ler üzerindeki prostasiklin reseptörü (IP) ile bağlanır ve adenozin trifosfatı (ATP) siklik adenozin monofosfata (cAMP) dönüştüren adenilil siklaz (AC) enzimini uyarır (Şekil 1)3,4. cAMP, protein kinaz A'yı (PKA) aktive eder, sitozolik Ca2+ seviyelerini azaltır ve vazogevşemeye neden olur5 (Şekil 1). EDHF yolu ayrıca çeşitli endotel mediatörleri ve elektriksel olaylar yoluyla endotele bağımlı vazogevşemeye katılır. EDHF yolunun aktivasyonu, VSMC'lerin hiperpolarizasyonuna yol açar, böylece voltajla çalışan Ca 2 + kanallarını (VOCC'ler) kapatır, hücre içi Ca2 + seviyelerini azaltır ve vazogevşeme6'yı indükler. Endotelden bağımsız vazogevşeme, hücre içi Ca 2+ seviyesinin düşürülmesi, miyozin hafif zincir kinazının (MLCK) inhibisyonu, miyozin hafif zincirli fosfatazın (MLCP) aktivasyonu ve VSMC'lerin kontraktil makinelerine Ca2+ duyarlılığının azaltılması gibi çeşitli mekanizmalar yoluyla doğrudan VSMC'lerde meydana gelir. Bu çalışmada, çeşitli K+ kanallarının açılmasının neden olduğu vazogevşeme, VOCC'lerin blokajı ve sarkoplazmik retikulum7'den Ca 2+ salınımının inhibisyonuna odaklanıyoruz, bu da hücre içi Ca 2+ seviyelerinin azalmasına yol açan, böylece VSMC miyozin hafif zincir fosforilasyonunu ve miyoz-aktin bağlanmasını veya çapraz köprü oluşumunu azaltan, sonuçta vazogevşeme ile sonuçlanır.
İzole IPA'da vazokonstriksiyon ve vazogevşeme ölçümlerini değerlendirme tekniği kemirgenler için iyi kurulmuştur, ancak veriler deneysel protokollere bağlı olarak değişmiştir. Bu çalışmada, sinir sinyalleri, hormonlar, sitokinler, kan basıncı gibi in vivo vasküler yanıtı modüle eden dış faktörlerin yokluğunda yapılan sıçan IPA preparatlarının in vitro vasküler reaktivitelerini değerlendirmek için kullanılan yöntem açıklanmaktadır.
IPA'nın vasküler reaktivitelerini incelemek için bitki ekstraktını örnek olarak kullanan birkaç deneysel protokol kullandık. Bitki ekstresi tarafından indüklenen endotele bağımlı ve bağımsız vazogevşeme mekanizmalarını tanımlamak için çeşitli blokerler (Şekil 1) kullanılmıştır. Bununla birlikte, aynı protokoller, IPA'nın çeşitli pulmoner patolojilerin tedavisinde kullanılan herhangi bir ilaca, ekstrakta veya fitokimyasallara vasküler yanıtlarını değerlendirmek için uyarlanabilir.

<table><tbody><tr><td>1,4-ditiotreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0632 CAS NO. 348-12-3</td><td></td></tr><tr><td>4-aminopiridin (4-AP)</td><td>Aldrich Chemical</td><td>A78403 CAS NO. 504-24-5</td><td></td></tr><tr><td>Asetilkolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6625 CAS NO. 60-31-1</td><td></td></tr><tr><td>Apamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9459 CAS NO. 24345-16-2</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153 CAS NO. 9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Ajax Finechem</td><td>AJA960 CAS NO. 1707055184</td><td></td></tr><tr><td>Charybdotoxin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7802 CAS NO. 95751-30-7</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz tip 1A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9891 CAS NO. 9001-12-1</td><td>Clostridium histolyticum</td></tr><tr><td>D(+)- Glikoz monohidrat</td><td>Millipore Corporation</td><td>K50876942 924 CAS NO. 14431-43-7</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540 CAS NO. 67-68-5</td><td></td></tr><tr><td>Etilen glikol-bis (2-aminoetileter)-N,N,N',N'-tetraasetik asit (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E3889 CAS NO. 67-42-5</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884 CAS NO. 60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Forseps 11 cm.</td><td>Paslanmaz Dumoxel-Forseps</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>14 cm.</td><td>Paslanmaz Dumoxel-Glibenclamide</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6039 CAS NO. 16673-34-0</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism programı</td><td>Yazılım sürümü 5.0 (San Diego, CA, ABD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375 CAS NO. 7365-45-9</td><td></td></tr><tr><td>Iberiotoksin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5904 CAS NO. 1002546960</td><td>rekombinant Mesobuthus tamulus</td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7378 CAS NO. 53-86-1</td><td></td></tr><tr><td>Labchart Program</td><td>Yazılımı sürüm 7.0'dan (AD Instrument, Castle Hill, Avustralya).</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Ajax Finechem</td><td>296 CAS NO. 1506254995</td><td></td></tr><tr><td>Erkek Wistar sıçanları</td><td>Nomura Siam International Co. Ltd., Bangkok, Tayland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NG-nitro-L-arginin metil ester (L-NAME)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>N5751 CAS NO. 51298-62-5</td><td></td></tr><tr><td>Nikardipin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N7510 CAS NO. 54527-84-3</td><td></td></tr><tr><td>Organ banyosu 15 mL.</td><td>-</td><td></td> <td>Araştırmacılar tarafından özel sipariş</td></tr><tr><td>Papain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4762 CAS NO. 9001-73-4</td><td>FromPapaya Lateks Fenal</td></tr><tr><td>kırmızı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5530 CAS NO. 34487-61-1</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6126 CAS NO. 61-76-7</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Kemaus</td><td>KA383 CAS NO. 7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojenfosfat</td><td>Aldrich Chemical</td><td>EC231-913-4 CAS NO. 7778-77-0</td><td></td></tr><tr><td>S+A2:E36odium klorür</td><td>Kemaus</td><td>KA465 CAS NO. 7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Makas 11 cm.</td><td>İç Mekan Paslanmaz</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Makas 14 cm.</td><td>Spall Paslanmaz-Sodyum</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>bikarbonat</td><td>Ajax Finechem</td><td>475 CAS NO. 912466</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum dihidrojenfosfat</td><td>Aldrich Chemical</td><td>33,198-8 CAS NO. 7558-80-7</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>Ajax Finechem</td><td>482 CAS NO. 1506196602</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum tiyopental</td><td>Anesthal</td><td>JPN3010002 CAS NO. 1C 314/47</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625 CAS NO. 107-35-7</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu WBU 45</td><td>Memmert</td><td>2766 CAS NO. -</td><td></td></tr></tbody></table>

vasküler yanıtları araştırmak için İntrapulmoner arter ve düz kas hücrelerinin İzolasyonu

Isolation of Intrapulmonary Artery and Smooth Muscle Cells to Investigate Vascular Responses

Sıçan akciğerlerinden izole edilen intrapulmoner arter (IPA) ve vasküler düz kas hücreleri (VSMC'ler), vazokonstriksiyon ve vazogevşemenin altında yatan mekanizmaları incelemek için kullanılabilir. IPA ve VSMC'ler izole edildikten sonra, fizyolojik ve patolojik durumlarda vasküler yanıtların özellikleri, sinir sinyalleri, hormonlar, sitokinler vb. gibi dışsal faktörlerin yokluğunda değerlendirilebilir. Bu nedenle, IPA ve VSMC'ler, farmakolojik ajanlarla modülasyon, yama-kelepçeli elektrofizyolojik analiz, kalsiyum görüntüleme gibi çeşitli deneysel araştırmalarla birlikte vasküler fizyoloji / patofizyolojiyi incelemek için mükemmel modeller olarak hizmet eder. Burada, bir organ banyosu kurulumunda vasküler yanıtları araştırmak için IPA'yı izole etmek için bir teknik kullandık. IPA segmentleri intraluminal teller vasıtasıyla organ banyosu odasına monte edildi ve çeşitli farmakolojik ajanlarla uyarıldı. IPA vasküler tonusundaki değişiklikler (yani vazokonstriksiyon ve vazogevşeme), izometrik kuvvet dönüştürücü ve fizyolojik veri analizi yazılım programı kullanılarak kaydedildi. Fitokimyasal veya sentetik ilaçların farmakolojik aktivitelerini incelemek için vazogevşeme / vazokonstriksiyon mekanizmalarını araştırmak için uyarlanabilen birkaç deneysel protokol uyguladık. Protokoller, pulmoner arteriyel hipertansiyon da dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların modülasyonunda ilaçların rollerini değerlendirmek için de kullanılabilir. IPA modeli, ilaçların farmakodinamik parametrelerinin değerlendirilmesinde çok önemli olan konsantrasyon-yanıt eğrisini araştırmamıza izin verir.

Bu çalışmadaki protokol, izole IPA preparatlarının vasküler yanıtlarında gözlenen fizyolojik fenomenleri ölçmek için en uygun deneysel koşulları belirlemek için geliştirilmiştir. Pilot deneyler, bitki ekstraktının vazogevşetici etkisinin vasküler etkilerinin ve mekanik temelinin anlaşılmasına yardımcı olan potansiyel sonuçları aşağıdaki gibi tanımlamak için gerçekleştirilmiştir.
Bitki ekstraktının vazorelaxant etkisi Şekil 6A,B'de gösterildiği gibi, endotel...

Arteriyel pulmoner dolaşımın vasküler yanıtları intrapulmoner arter (IPA) ve vasküler düz kas hücreleri (VSMC'ler) kullanılarak araştırılabilir. Bu çalışmada IPA'nın izolasyonu ayrıntılı olarak ve fizyolojik uyaranlara yanıt olarak vazogevşemenin araştırılmasında kullanılan protokoller açıklanmaktadır.

Vasküler Yanıtları Araştırmak için İntrapulmoner Arter ve Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu

The intrapulmonary artery (IPA) and vascular smooth muscle cells (VSMCs) isolated from rat lungs can be used to study the underlying mechanisms of ...

Bu çalışmada sıçan intrapulmoner arter ve vasküler düz kas hücrelerinin izole edilmesi anlatılmaktadır. İntrapulmoner arterin vasküler yanıtını araştırmak için organ banyosu tekniğini kullanmak gibi çeşitli deneysel protokoller kullanılmıştır. İntrapulmoner arterler ve vasküler düz kas hücreleri, vasküler fizyoloji ve patofizyolojiyi incelemek için mükemmel modellerdir.Bu tekniğin adaptasyonları, herhangi bir ilacın, ekstraktın veya fitokimyasalın vasküler yanıtlarını değerlendirebilir. İzole intrapulmoner arteriyel halkanın bir organ banyosuna monte edilmesi, bir ilacın pulmoner hipertansiyon da dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların modülasyonundaki rolünü değerlendirmek için izole intrapulmoner arterlerin kullanılmasını sağlar. Deneysel protokoller teknik olarak uygulanabilir, ancak önemli adımlar karmaşık ve başarı için gereklidir, bu nedenle görsel bir gösterime sahip olmak anlamayı ve takip etmeyi kolaylaştırır.Prosedürü gösteren, Naresuan Üniversitesi Tıp Fakültesi Fizyoloji Bölümü, Kardiyovasküler Araştırma Birimi Laboratuvarı'ndan fizyoloji alanında yüksek lisans öğrencisi olan Kittiwoot To-on olacak. Akciğerin tek bir lobunu 11 santimetrelik makasla dilimleyerek ve medial tarafı veya akciğerin kökü yukarı bakacak şekilde dokuz santimetrelik bir Petri kabına yerleştirerek başlayın. Damar, bronş ve arterin yukarıdan aşağıya hizalanmasını gözlemleyin ve tanımlayın.Bronşu makasla uzunlamasına kesin. Ardından bronşun ucunu tutmak için 11 santimetrelik forseps kullanın. Bronş ve damarları yavaşça disseke edin ve akciğerden çıkarın.İntrapulmoner arterin ucunu tutmak için forsepsleri kullanın ve makasla akciğer dokusundan dikkatlice diseke edin. İzole intrapulmoner arteri, organ banyosu düzeneği kurulana kadar soğuk Krebs çözeltisinde tutun. İntrapulmoner arteri izole ettikten sonra, intrapulmoner arterin ana dalını 11 santimetrelik makasla uzunlamasına kesin ve iki milimetrelik şeritler halinde kesin.İntrapulmoner arter şeritlerini DM'ye batırın, daha sonra şeritleri mililitre papain,% 0.04 BSA ve% 0.4 milimolar DTT içeren DM'de dört santigrat derecede bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra 15 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. DM'de mililitre kollajenaz Tip IA başına bir miligram ekleyin ve beş dakika boyunca 37 santigrat derecede tekrar inkübe edin.Dokuları taze DM'ye aktarın ve bir cam Pasteur pipet kullanarak nazik tritürasyonla dağıtın. İzole vasküler düz kas hücreleri mikroskop altında banyo çözeltisinde görünür hale gelene kadar tritürasyona devam edin. Daha önce gösterildiği gibi intrapulmoner arteri izole edin ve intrapulmoner arterin ana dalını yaklaşık iki milimetre uzunluğundaki halkalara kesin.İntrapulmoner arter halkalarını organ banyosu odacıklarına 40 mikrometre çapında iki paslanmaz çelik tel üzerine geçirerek yapıştırın. İntrapulmoner arter halkaları ile monte edilmiş paslanmaz çelik telleri, veri toplama cihazına bağlı izometrik kuvvet dönüştürücülere ve veri kaydı ve analizi için uygun fizyolojik yazılımla kurulan bilgisayar sistemine takın. Daha sonra intrapulmoner arter halkasının gerginliğini yavaşça bir grama yükseltin.Damar segmentlerinin bir gramlık bir dinlenme geriliminde yaklaşık 45 dakika boyunca dengelenmesine izin verin. Dengeleme süresi boyunca, Krebs çözeltisinin her 15 dakikada bir düzenli olarak değiştirildiğinden emin olun. Dengeden sonra, yüksek hücre dışı potasyum çözeltisine vazokonstriksiyonlarını ölçerek damarların yaşayabilirliğini test edin.PE ile önceden kontrakte edilmiş halkalarda asetilkoline gevşeme yanıtını hesaplayarak endotel varlığını veya yokluğunu değerlendirin. Denudasyonu indüklemek için kabın içini küçük bir telle hafifçe ovalayarak endoteli mekanik olarak çıkarın. Daha sonra test deneylerinin başlamasından önce arteriyel halkaları 30 dakika boyunca dengeleyin. Bitki ekstraktının gevşetici etkisini, intrapulmoner arter halkalarını PE ile önceden daraltarak araştırın. Daha sonra, vazogevşemeyi indüklemek ve konsantrasyona bağlı bir yanıt eğrisi elde etmek için bitki ekstraktının mililitresi başına 0.1 ila 1000 mikrogramı dikkatlice endotel bozulmamış halkalara ve endotel ile indüklenmiş halkalara kümülatif olarak ekleyin.Bir çözücü olarak kullanılan etkili DMSO'nun da negatif kontrol görevi görecek şekilde benzer şekilde değerlendirildiğinden emin olun. Metin yazısında belirtildiği gibi bitki ekstraktının vazogevşetici etki mekanizmasını değerlendirir. Daha sonra PE stabilize için kasılmalardan sonra, bitki ekstraktının kümülatif konsantrasyonlarını ekleyin.İnhibitörlerin varlığında intrapulmoner arter halkalarının inhibitörlerin varlığında gevşeme yüzdesi olarak bitki ekstresinin etkilerini, inhibitörsüz intrapulmoner arter halkalarının yanıtına kıyasla sunar ve konsantrasyon yanıt eğrisini oluşturur. Endotel sağlam intrapulmoner arterde, bitki ekstresi vazoresyonun konsantrasyona bağımlı bir yanıtını ortaya çıkardı. Endotelin eradikasyonu, EC50'deki artışın 2.2 kat artmasıyla yansıtıldığı gibi, bitki ekstraktının neden olduğu vazogevşemeyi derinden azalttı, eNOS ve EDHF'nin inhibisyonu bitki ekstraktına verilen vazorelaxant tepkisini açıkça azalttı.Bu, konsantrasyon tepki eğrisini sağa kaydırdı ve E max değerlerini değiştirmeden EC50'yi artırdı. Aksine, Indometazin, bitki ekstraktına vazogevşetici yanıt üzerinde hiçbir etki göstermedi. Endotel ile indüklenmiş intrapulmoner arter halkalarında, kalsiyum ile aktive edilen potasyum kanal blokerleri, bitki ekstraktına vazogevşetici yanıtı azaltmıştır.Voltaj kapılı veya ATP'ye duyarlı potasyum kanallarının blokerleri ise sapma göstermedi. Bitki özü ile ön inkübasyon, kalsiyum-klorür kaynaklı kasılmayı inhibe etti. Endotel ile indüklenen intrapulmoner arter halkaları, kalsiyum içermeyen Krebs solüsyonu ve PE ile önceden inkübe edilerek geçici bir kasılma meydana getirdi.Araca kıyasla, bitki özleri PE tarafından indüklenen büzülmeyi önemli ölçüde azaltmıştır. İşlem sırasında, damar, bronş ve arteri erken yaşta açıkça tanımlamalıdır. Arterin kesilmesi veya zarar görmesi, uzunluğunu azaltacak ve vasküler yanıtları etkileyecektir. Bu teknik, pulmoner arteriyel hipertansiyon gibi pulmoner vasküler hastalıkların tedavisi için prototip görevi görebilecek bileşikleri araştırmak için uyarlanabilir.

isolation-intrapulmonary-artery-smooth-muscle-cells-to-investigate

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz yerli, sağlam mikrovasküler endotel kalsiyum sinyalizasyon görselleştirme ve işlemek için bir hazırlık mevcut. Endotel tüpler taze iskelet kası komşu hücreleri içinde ve arasında vivo morfolojisi ve dinamik sinyalizasyon korumak besleyen fare direnç arterlerinin izole. Endotelyal tüp, diğer doku ve organların kılcal hazırlanabilir.

Fare Direnç arterlerden mikrovasküler endotel Tüpler İzolasyonu

Biz, böylece yeni doğan düz kas hücresi kasılma ve gevşeme dahil sinyal yollarının daha iyi çalışma izin olarak, yeni ve P7 kadar küçük farelerden pulmoner arter düz kas hücrelerinin primer kültürleri (PASMC) izole etmek için kullanışlı bir teknik geliştirdik.

Yenidoğan fareler ile Pulmoner Arter Düz Kas Hücre İzolasyonu

Hipoksik pulmoner vazokonstriksiyon (HPV), alveolar hipoksi akciğer perfüzyonunun ventilasyonla eşleştiği önemli bir fizyolojik olgudur. HPV'ye katkıda bulunan başlıca vasküler segment, intra-acinar arterdir. Burada, 20-100 μm çapındaki murine pulmoner damarların HPV analizi için protokolümüzü açıklıyoruz.

Murine Hassas Kesim Akciğer Dilimleri Kullanılarak Pulmoner Arterlerin Hipoksik Pulmoner Vazokonstriksiyonunun Videomorfometrik Analizi

Aort patolojisi ciddi morbidite ve mortaliteye yol açabilir, bu nedenle hastalığın ilerlemesi ve potansiyel tedavilerin araştırılması gereklidir. Burada, araştırmacılara kardiyovasküler hastalık araştırmalarında yardımcı olmak için murin aortunu izole etmek ve eksize etmek için bir protokol sunuyoruz.

İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği

Bu protokolün amacı, koroner dolaşımdan fare primer vasküler düz kas hücrelerinin izolasyonu ve kültür teknikleri (VSMC) göstermektir. VSMC'Ier izole edildikten sonra, pek çok standart kültür teknikleri için kullanılabilir.

Murin Koroner Damar düz kas hücrelerinin izolasyonu

IRF5 inhibitör peptit ile tedavi edilen C57Bl/6J kontrol farelerinden, sıkı derili farelerden ve sıkı derili farelerden kardiyak hücre dışı matrisin izolasyonunu açıklıyoruz. Ayrıca, IRF5 inhibitör peptit ile tedavi edilen C57Bl / 6J, sıkı ciltli fareler ve sıkı ciltli farelerden izole edilen damarlar üzerindeki vazodilatasyon çalışmalarını da açıklıyoruz.

İzole Kapların vazodilatasyon ve Sıkı cilt Fare Ekstraselüler Matrix İzolasyonu

Bu el yazması arteriyoller elektrofizyolojik, kalsiyum görüntüleme ve baskı myography çalışmalarda kullanılan fare retina üzerinden yalıtım için basit bir protokol açıklar.

Retina arteriyoller yalıtım Ex Vivo Hücre fizyolojisi çalışmaları için

Bu yazıda birincil, hastaya özgü insan aort düz kas hücrelerinin ve dermal fibroblastların izolasyonu ve kültürlenmesi için eksplant kültürüne dayalı bir yöntem anlatılmaktadır. Ayrıca, hücre kasılmasını ölçmek ve daha sonra bu hücrelerdeki hastaya özgü farklılıkları incelemek için kullanılabilecek yeni bir yöntem sunulmaktadır.

Primer Hastaya Özgü Aort Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu ve Yarı Kantitatif Gerçek Zamanlı Kasılma Ölçümleri In Vitro

Bu protokol, elektrofizyolojik çalışmalar için uygun, yetişkin, genç, larval ve embriyonik zebra balıklarından (Danio rerio) canlı kardiyak ve vasküler düz kas hücrelerinin akut izolasyonunu tanımlamaktadır.

Kardiyak ve Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Elektrofizyolojik Çalışmalar İçin Yetişkin, Genç, Larva ve Embriyonik Zebra Balıklarından İzolasyonu

Mevcut protokol, neredeyse in vivo bir ortamda hava yolunu ve intrapulmoner arteriyel düz kas kontraktilitesini değerlendirmek için fare hassasiyetiyle kesilmiş akciğer dilimlerinin hazırlanmasını ve kullanılmasını açıklamaktadır.

Hava yolu ve intrapulmoner arteriyel düz kasın kasılma regülasyonunu incelemek için hassas kesilmiş akciğer diliminin kullanılması

Bu protokol, murin pulmoner venlerinin mikroskopi kılavuzluğunda izolasyonunu ve immünofloresan boyamasını gösterir. Sol atriyum, pulmoner venler ve ilgili akciğerleri içeren doku örnekleri hazırlıyoruz ve bunları kardiyak Troponin T ve Connexin 43 için boyuyoruz.

Murin Pulmoner Venlerde Miyokard Kılıflarının Mikrodiseksiyonu ve İmmünofloresan Boyanması

Keşfedin sıçan intrapulmoner arter ve vasküler düz kas hücrelerinin izolasyonunu, organ banyosu tekniği ile vasküler yanıtları incelemek için. Bu yöntem pulmoner hipertansiyon gibi hastalıklarda ilaç etkilerini değerlendirmeye yardımcı olur.

Vasküler Yanıtları Araştırmak için İntrapulmoner Arter ve Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu

Daha fazla video keşfet