Name: Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Öğrenin, fare modelinde Meibomian bez disfonksiyonu için oküler yüzey enflamasyonu indüksiyonu ve tutulan dokuların toplanması yöntemini. Bu teknik, doğuşal bağışıklık yanıtını ve nötrofil ekstraselüler tuzakları incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma kısmen Alman Araştırma Vakfı (DFG) 2886 PANDORA Projesi-No.B3 tarafından desteklenmiştir; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Proje 861878 ve Volkswagen-Stiftung (Hibe 97744) tarafından MH'ye.

Hayvanları içeren tüm prosedürler, hayvan refahı ile ilgili kurumsal kılavuzlara göre yürütülmüş ve Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nuremberg (FAU) hayvan refahı komisyonu tarafından onaylanmıştır (izin numarası: 55.2.2-2532-2-1217). Bu çalışmada 7-9 haftalık dişi C57Bl/6 fareler kullanılmıştır. Fareler ticari kaynaklardan elde edildi ( bakınız Malzeme Tablosu) ve 12 saat gündüz / gece döngüleri ile spesifik patojensiz koşullarda tutuldu.
1. Murin oküler yüzey inflamasyonunun indüksiyonu
<ol><li>Bağışıklama için immünojen preparatı gerçekleştirin.<ol><li>İmmünojeni, aşılama gününde taze olarak hazırlayın, ovalbümin (OVA, 50 mg / mL) ve boğmaca toksini (100 μg / mL) tuzlu suda ve adjuvan alüminyum hidroksit (40 mg / mL) (bakınız Malzeme Tablosu) 1: 1 oranında karıştırın. DİKKAT: Boğmaca toksininin açılmasını, sulandırılmasını ve immünojen preparatını laminer bir güvenlik kabininde gerçekleştirin. Koruyucu giysiler giyin ve ciltle herhangi bir temastan kaçının.</li>
		<li>İmmünojen ve adjuvan karışımı oda sıcaklığında 30 dakika boyunca inkübe edin ve 100 μL'yi 1 mL'lik bir şırıngaya yükleyin.</li>
		<li>İmmünojen çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonunu anestezi yapılmamış bir farede gerçekleştirin.<ol><li>Kafes ızgarasını kavrarken fareyi kuyruğundan yumuşak bir şekilde tutun. Sırtın derisini ve boyun bölgesini başparmak ve işaret parmağı arasında sıkıca tutun ve yüzük ile küçük parmak arasındaki kuyruğu ve alt ekstremiteleri elin avucuna sabitleyin.</li>
			<li>Sabit fareyi başı aşağı bakacak şekilde tutun.</li>
			<li>Hazırlanan immünojen çözeltisinin 100 μL'sini alt karın boşluğunun sağ veya sol çeyreğine enjekte edin.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Bağışıklamadan 2 hafta sonra oküler yüzey meydan okuması yapın.<ol><li>Fareyi izofluran ile uyuşturun (% 2.5).</li>
		<li>Her iki göze de göz başına 5 μL OVA (50 mg / mL) veya salin (% 0.9 NaCl) uygulayın ve damla göz tarafından emilene kadar bekleyin. Bu işlem ~ 5 dakika sürer.</li>
		<li>Prosedürü 7 gün boyunca günde 1 kez tekrarlayın. NOT: İlaçların topikal uygulaması aynı şekilde yapılabilir.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Oküler eksüdaların toplanması
<ol><li>Meydan okumadan hemen sonra göze 50 μL steril salin uygulayarak meydan okuma aşamasında oluşan oküler eksüdaları geri kazanın.</li>
	<li>Tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için, toplanan oküler deşarjı 20 dakika boyunca 37 ° C'de kofaktör kalsiyum (5 mM) içeren rekombinant MNaz (2 x 106 jel U / mL, Malzeme Tablosuna bakınız) ile tedavi edin.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 7 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj.</li>
	<li>Süpernatantı izole edin ve üreticinin talimatlarına göre çoklanmış ELISA kullanarak sitokinleri ve kemokinleri ölçün (bkz. NOT: Elde edilen süpernatant protein analizi için ve pelet immünofenotipleme, fagositoz, degranülasyon ve gen ekspresyonu gibi fonksiyonel testler için kullanılabilir.</li>
</ol>3. Oküler yüzey dokularının eksizyonu
<ol><li>Aşağıdaki adımları izleyerek göz kapaklarını ve göz küresini disseke edin.<ol><li>Fareyi CO2 boğulması ve servikal çıkık ile ötenazileştirin.</li>
		<li>Fareyi düz bir yüzeye yerleştirin.</li>
		<li>Göz çevresindeki orbital alanı% 70 etanol ile emprenye edilmiş bir çubukla dezenfekte edin.</li>
		<li>Kulak ile retro-orbital sinüs arasında ve skuamöz kemiğin üzerindeki yüzey boyunca dikey olarak bir kesi yapın, insizyonu maksiller kemik boyunca alt göz kapağının altına yatay olarak ve frontal kemik boyunca üst göz kapağının üzerine uzatın. Bu, göz çevresinde bir kesi oluşturur (Şekil 1).</li>
		<li>Kavisli forseps kullanarak disseke edilmiş dokuyu gözün etrafında dikkatlice tutun ve dokuyu ve göz küresini dışarı çekin.</li>
		<li>Eksize edilen organları steril PBS'ye yerleştirin.</li>
		<li>Eksize edilmiş üst göz kapaklarının etrafındaki fazla yüz kası dokusunu bir neşter kullanarak ve stereomikroskop altında kesin.</li>
	</ol></li>
	<li>Aşağıdaki adımları izleyerek konjonktivayı toplayın.<ol><li>Üst göz kapağını stereomikroskop altında kuru bir Petri kabına yerleştirin.</li>
		<li>İnce cımbız ve neşter kullanarak, beyazımsı mukoza tabakasını göz kapağının iç yüzeyinden çok nazikçe soyun.</li>
	</ol></li>
	<li>Ardından, aşağıdaki adımları izleyerek korneayı disseke edin.<ol><li>Göz küresini 3 dakika boyunca kuru buzun üzerine yeni bir kuru Petri kabına yerleştirin.</li>
		<li>Petri kabını tezgah yüzeyine sabit bir konumda alın.</li>
		<li>İnce keskin makas kullanarak limbusun yanındaki kornea sınırında küçük bir kesi yapın.</li>
		<li>Göz küresinin etrafındaki neşterle insizyonu uzatarak sklerayı korneadan ayırın.</li>
		<li>İris ve lens kalıntılarını korneanın arka tarafından tuzlu su çözeltisi ile cömertçe yıkayarak çıkarın.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Meibomian bezi (MG) tıkanıklığının belgelenmesi
<ol><li>MG ve deliklerini değerlendirmek için, eksize edilmiş göz kapaklarını stereomikroskop altında dik bir pozisyona yerleştirin (Şekil 2).</li>
	<li>Kameranın pozlama süresine ve ISO ayarlarına göre beyaz ışıklı epi-aydınlatmalı görüntüler yakalayın. NOT: Bu görüntülerin morfometrik analizi, bezlerin çıkışındaki fiş boyutunun güvenilir bir şekilde ölçülmesini sağlar. Niceleme, değnek aleti ile göz tıkaçlarının ana hatlarını çizerek ve Image J yazılımının "Parçacıkları Analiz Et" komutunu çalıştırarak gerçekleştirilebilir (bkz.</li>
</ol>5. Göz kapaklarının transilluminatasyonu (Meibomian bezi morfolojisi)
<ol><li>MG alanını değerlendirmek için, eksize edilen göz kapaklarını yatay bir konuma yerleştirin ve kızılötesi kamera ile donatılmış stereomikroskopun arka ışığını açın (Şekil 3).</li>
	<li>Pozlama süresini fotoğraf makinesinin ISO'suna göre ayarlayarak görüntüler yakalayın (bkz. NOT: Bu transilluminated göz kapaklarının stereomikroskop altında kızılötesi görüntülenmesi, her bir acini'nin şeklini ve boyutunu ölçmeye yardımcı olabilir. Bu görüntülerin morfometrik analizi, MG'nin boyutunun ve sayısının güvenilir bir şekilde ölçülmesini sağlar. Niceleme, MG'yi değnek aracıyla özetleyerek ve Image J yazılımının "Parçacıkları Analiz Et" komutunu çalıştırarak gerçekleştirilebilir.</li>
</ol>

<ol><li>Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tear+film+and+ocular+surface+changes+after+closure+of+the+meibomian+gland+orifices+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit.</a> Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).</li>
<li>Mishima, S., Maurice, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oily+layer+of+the+tear+film+and+evaporation+from+the+corneal+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The oily layer of the tear film and evaporation from the corneal surface.</a> Experimental Eye Research. 1, 39-45 (1961).</li>
<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+surface%3A+The+challenge+to+enable+and+protect+vision%3A+The+Friedenwald+lecture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The ocular surface: The challenge to enable and protect vision: The Friedenwald lecture.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).</li>
<li>Hahn, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+resolve+inflammation+by+proteolysis+of+cytokines+and+chemokines+and+protection+from+antiproteases%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases.</a> The FASEB Journal. 33 (1), 1401-1414 (2019).</li>
<li>Leppkes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+occlusion+by+neutrophil+extracellular+traps+in+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Vascular occlusion by neutrophil extracellular traps in COVID-19.</a> EBioMedicine. 58, 102925(2020).</li>
<li>Munoz, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+initiate+gallstone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps initiate gallstone formation.</a> Immunity. 51 (3), 443-450 (2019).</li>
<li>Schapher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+promote+the+development+and+growth+of+human+salivary+stones%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps promote the development and growth of human salivary stones.</a> Cells. 9 (9), 2139(2020).</li>
<li>Mahajan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frontline+science%3A+Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+prevent+inflammation+on+the+neutrophil-rich+ocular+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Frontline science: Aggregated neutrophil extracellular traps prevent inflammation on the neutrophil-rich ocular surface.</a> Journal of Leukocyte Biology. 105 (6), 1087-1098 (2019).</li>
<li>DEWS Definition and Classification Subcommittee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+definition+and+classification+of+dry+eye+disease%3A+Report+of+the+Definition+and+Classification+Subcommittee+of+the+International+Dry+Eye+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">The definition and classification of dry eye disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop.</a> The Ocular Surface. 5 (2), 75-92 (2007).</li>
<li>Nichols, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Executive+summary%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Executive summary.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1922-1929 (2011).</li>
<li>Mahajan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregated+neutrophil+extracellular+traps+occlude+Meibomian+glands+during+ocular+surface+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Aggregated neutrophil extracellular traps occlude Meibomian glands during ocular surface inflammation.</a> The Ocular Surface. 20, 1-12 (2021).</li>
<li>Jester, B. E., Nien, C. J., Winkler, M., Brown, D. J., Jester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+reconstruction+of+the+mouse+meibomian+gland+using+high-resolution+nonlinear+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Volumetric reconstruction of the mouse meibomian gland using high-resolution nonlinear optical imaging.</a> The Anatomical Record. 294 (2), 185-192 (2011).</li>
<li>Nien, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in the meibomian gland.</a> Experimental Eye Research. 89 (6), 1021-1027 (2009).</li>
<li>Parfitt, G. J., Xie, Y., Geyfman, M., Brown, D. J., Jester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+ductal+hyper-keratinization+in+mouse+age-related+meibomian+gland+dysfunction+%28ARMGD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">Absence of ductal hyper-keratinization in mouse age-related meibomian gland dysfunction (ARMGD).</a> Aging. 5 (11), 825-834 (2013).</li>
<li>Lambert, R. W., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+blepharoconjunctivitis+complicating+13-cis-retinoic+acid+%28isotretinoin%29+therapy+in+a+laboratory+model%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of blepharoconjunctivitis complicating 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) therapy in a laboratory model.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 29 (10), 1559-1564 (1988).</li>
<li>Jester, J. V., Nicolaides, N., Kiss-Palvolgyi, I., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+dysfunction.+II.+The+role+of+keratinization+in+a+rabbit+model+of+MGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland dysfunction. II. The role of keratinization in a rabbit model of MGD.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 30 (5), 936-945 (1989).</li>
<li>Jester, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biomicroscopy+and+photography+of+meibomian+glands+in+a+rabbit+model+of+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">In vivo biomicroscopy and photography of meibomian glands in a rabbit model of meibomian gland dysfunction.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 22 (5), 660-667 (1982).</li>
<li>Lambert, R., Smith, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperkeratinization+in+a+rabbit+model+of+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Hyperkeratinization in a rabbit model of meibomian gland dysfunction.</a> American Journal of Ophthalmology. 105 (6), 703-705 (1988).</li>
<li>Knop, E., Knop, N., Millar, T., Obata, H., Sullivan, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Report+of+the+subcommittee+on+anatomy%2C+physiology%2C+and+pathophysiology+of+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on anatomy, physiology, and pathophysiology of the meibomian gland.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1938-1978 (2011).</li>
<li>Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye+disease%3A+Useful%2C+varied+and+evolving+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review).</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 22 (6), 1394(2021).</li>
<li>Reyes, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+cause+obstruction+of+eyelid+sebaceous+glands+in+inflammatory+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neutrophils cause obstruction of eyelid sebaceous glands in inflammatory eye disease in mice.</a> Science Translational Medicine. 10 (451), (2018).</li>
<li>Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lid+margin+is+an+underestimated+structure+for+preservation+of+ocular+surface+health+and+development+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease.</a> Developments in Ophthalmology. 45, 108-122 (2010).</li>
<li>Knop, N., Knop, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+glands.+Part+I%3A+anatomy%2C+embryology+and+histology+of+the+Meibomian+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Meibomian glands. Part I: anatomy, embryology and histology of the Meibomian glands.</a> Ophthalmologe. 106 (10), 872-883 (2009).</li>
<li>Nien, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+and+dysfunction+on+human+meibomian+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Effects of age and dysfunction on human meibomian glands.</a> Archives of Ophthalmology. 129 (4), 462-469 (2011).</li>
<li>Lio, C. T., Dhanda, S. K., Bose, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cluster+analysis+of+dry+eye+disease+models+based+on+immune+cell+parameters+-+New+insight+into+therapeutic+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cluster analysis of dry eye disease models based on immune cell parameters - New insight into therapeutic perspective.</a> Frontiers in Immunology. 11, 1930(2020).</li>
<li>Nguyen, D. D., Luo, L. J., Lai, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermogels+containing+sulfated+hyaluronan+as+novel+topical+therapeutics+for+treatment+of+ocular+surface+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Today+Bio%22%5BJournal%5D)">Thermogels containing sulfated hyaluronan as novel topical therapeutics for treatment of ocular surface inflammation.</a> Materials Today Bio. 13, 100183(2022).</li>
<li>Lin, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alleviation+of+dry+eye+syndrome+with+one+dose+of+antioxidant%2C+anti-inflammatory%2C+and+mucoadhesive+lysine-carbonized+nanogels%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Alleviation of dry eye syndrome with one dose of antioxidant, anti-inflammatory, and mucoadhesive lysine-carbonized nanogels.</a> Acta Biomaterialia. 141, 140-150 (2022).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+beta+epithelial+sodium+channel+function+in+meibomian+glands+produces+pseudohypoaldosteronism+1-like+ocular+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Loss of beta epithelial sodium channel function in meibomian glands produces pseudohypoaldosteronism 1-like ocular disease in mice.</a> American Journal of Pathology. 188 (1), 95-110 (2018).</li>
<li>Mauris, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+CD147+results+in+impaired+epithelial+cell+differentiation+and+malformation+of+the+meibomian+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Loss of CD147 results in impaired epithelial cell differentiation and malformation of the meibomian gland.</a> Cell Death & Disease. 6 (4), 1726(2015).</li>
<li>Ibrahim, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+induced+age+dependent+meibomian+gland+dysfunction+in+Cu%2C+Zn-superoxide+dismutase-1+%28Sod1%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress induced age dependent meibomian gland dysfunction in Cu, Zn-superoxide dismutase-1 (Sod1) knockout mice.</a> PloS One. 9 (7), 99328(2014).</li>
<li>McMahon, A., Lu, H., Butovich, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ELOVL4+in+the+mouse+meibomian+gland+and+sebocyte+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A role for ELOVL4 in the mouse meibomian gland and sebocyte cell biology.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2832-2840 (2014).</li>
<li>Miyake, H., Oda, T., Katsuta, O., Seno, M., Nakamura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+dysfunction+model+in+hairless+mice+fed+a+special+diet+with+limited+lipid+content%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland dysfunction model in hairless mice fed a special diet with limited lipid content.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (7), 3268-3275 (2016).</li>
<li>Schaumberg, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+workshop+on+meibomian+gland+dysfunction%3A+Report+of+the+subcommittee+on+the+epidemiology+of%2C+and+associated+risk+factors+for%2C+MGD%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on the epidemiology of, and associated risk factors for, MGD.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1994-2005 (2011).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+tear+cytokines+and+clinical+correlations+in+Sjogren+syndrome+dry+eye+patients+and+non-Sjogren+syndrome+dry+eye+patients%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Analysis of tear cytokines and clinical correlations in Sjogren syndrome dry eye patients and non-Sjogren syndrome dry eye patients.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 247-253 (2013).</li>
<li>Nakae, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T+cell+sensitization+is+impaired+in+IL-17-deficient+mice%2C+causing+suppression+of+allergic+cellular+and+humoral+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses.</a> Immunity. 17 (3), 375-387 (2002).</li>
<li>von Vietinghoff, S., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17A+controls+IL-17F+production+and+maintains+blood+neutrophil+counts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-17A controls IL-17F production and maintains blood neutrophil counts in mice.</a> Journal of Immunology. 183 (2), 865-873 (2009).</li>
<li>Langrish, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-23+drives+a+pathogenic+T+cell+population+that+induces+autoimmune+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation.</a> Journal of Experimental Medicine. 201 (2), 233-240 (2005).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-IL-23+therapy+inhibits+multiple+inflammatory+pathways+and+ameliorates+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Clinical Investigation. 116 (5), 1317-1326 (2006).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Meibomian bezlerinin yağlı salgılanması sağlıklı bir göz için büyük önem taşımaktadır22. Bununla birlikte, bu yağ bezlerinin, her iki göz kapağının tarsal plakalarında bulunan paralel iplikçikler olarak sıralanan toplanmış nötrofil hücre dışı tuzaklar (aggNET'ler) tarafından tıkanması, gözyaşı filmi23'ü bozabilir. Bu bozulma Meibomian bezi disfonksiyonu (MGD)1 ve hızlandırılmış gözyaşı buharlaşması ile sonuçlanır ve oküler yüzeyin hasarını şartlandır...

Bir gözün her yanıp sönmesi, korneanın üzerine dağılmış pürüzsüz gözyaşı filmini doldurur. Oküler yüzey epitelyası, gözyaşı filminin oküler yüzeydeki dağılımını ve doğru yönlendirilmesini kolaylaştırır. Müsinler, göz yüzeyindeki lakrimal bezlerden gelen gözyaşı filminin sulu kısmının konumlandırılmasına yardımcı olmak için kornea ve konjonktiva epitel hücreleri tarafından sağlanır. Son olarak, MG, gözyaşı filmi 1,2,3'ün sulu kısmının buharlaşmasını önleyen bir kaplama tabakası oluşturan lipitleri salgılar. Bu şekilde, tüm oküler organların koordineli fonksiyonları, oküler yüzeyi istilacı patojenlerden veya yaralanmalardan korur ve herhangi bir ağrı veya rahatsızlık olmadan kristal berraklığında görmeyi destekler.
Sağlıklı bir oküler yüzeyde, oküler akan akıntı veya göz romatı tozu, ölü epitel hücrelerini, bakterileri, mukusları ve bağışıklık hücrelerini süpürür. Agrega nötrofil hücre dışı tuzakları (aggNET'ler), hücre dışı kromatinden oluşan ağ benzeri bir matris formüle eder ve bu bileşenleri göz romatizmine dahil eder. AggNET'ler, pro-inflamatuar sitokinlerin ve kemokinlerin proteolitik yıkımı ile inflamasyonu çözer4. Bununla birlikte, işlevsiz hale geldiklerinde, bu anormal aggNET'ler COVID-195'te vasküler tıkanıklıklar, safra kesesi taşları6 ve sialolitiyazis7 gibi hastalıkların patogenezini yönlendirir. Benzer şekilde, oküler yüzeydeki aggNET'ler koruyucu bir rol oynar ve yüksek oranda maruz kalan yüzey8'in iltihaplanmasının çözülmesine katkıda bulunur. Oküler yüzeyde abartılı bir oluşum veya aggNET eksikliği gözyaşı filmi stabilitesini bozabilir ve/veya kornea yaralarına, sikatrize edici konjonktivite ve kuru göz hastalığına neden olabilir. Örneğin, MG'nin tıkanması, kuru göz hastalığının önde gelen nedenlerinden biridir9. AggNET'lerin ayrıca MG kanallarından lipit sekresyon akışını tıkadığı ve Meibomian bezi disfonksiyonuna (MGD) neden olduğu bilinmektedir. MG deliklerinin aggNET'ler tarafından tıkanıklığı, oküler yüzeyi saran yağlı sıvı eksikliğine ve retrograd şişelenmiş sıvıya neden olarak bez fonksiyonunun işlev bozukluğuna ve asinar hasara neden olur. Bu işlev bozukluğu gözyaşı filmi buharlaşmasına, göz kapaklarındaki kenar boşluklarının fibrozisine, göz iltihabına ve MG10,11'de zararlı hasara neden olabilir.
İnsanlarda MGD'nin patolojik sürecini taklit etmek için yıllar içinde çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir. Örneğin, 1 yaşındaki C57BL / 6 fareleri, 50 yaş ve üstü12,13,14 yaş ve üstü hastalarda oküler hastalık patolojisini yansıtan kuru göz hastalığı (DED) ve MGD üzerindeki yaşa bağlı etkilerin incelenmesine yardımcı olmuştur. Ayrıca, tavşanlar farmakolojik müdahalelerin etkilerini araştırmak için uygun modellerdir. Bu nedenle, tavşanlarda MGD'nin indüklenmesi, epinefrin topikal uygulaması veya 13-cis-retinoik asidin (izotretinoin) sistemik olarak sokulması ile bildirilmiştir 15,16,17,18,19.
Bu hayvan modelleri, MGD'nin patofizyolojisine katkıda bulunan farklı faktörleri belirlemek için yeterli olmasına rağmen, kullanımları kısıtlanmıştır. Örneğin, yaşa bağlı MGD'nin murin modeli, yalnızca yaşlı yetişkinlerde elementleri deşifre etmek için idealdi ve bu nedenle, tavşanlar, çoklu patofizyolojik mekanizmaların araştırılmasını sağladıkları için oküler yüzey hastalıklarını incelemek için en uygun hayvan modeli olarak ortaya çıktı. Bununla birlikte, oküler yüzeydeki proteinleri tespit etmek için kapsamlı analitik araçların bulunmaması ve tavşan genomunun birçok bölümünün açıklamasız olması nedeniyle,araştırmalar için sınırlıdır 20,21.
Ek olarak, kuru göz hastalığının patogenezini araştırmak için kullanılan bu hayvan modelleri, oküler yüzeyin iltihaplanmasını tetikleyen bozukluğun immünolojik kolunu analiz etmek için yeterli ayrıntı sağlamamıştır. Buna göre, Reyes ve ark. tarafından geliştirilen MGD'nin murin modeli, farelerde alerjik göz hastalığı ile insanlarda MGD arasında bir ilişki olduğunu göstermiş ve obstrüktif MGD21'den sorumlu immün etiyolojiyi vurgulamıştır. Bu model, alerjik göz hastalığını, konjonktiva ve göz kapağına nötrofilleri işe alan, MGD ve kronik oküler inflamasyona neden olan TH17 yanıtı ile ilişkilendirir21. Bu murin modelinde MGD ve oküler inflamasyonun indüksiyonu, devam eden bir bağışıklık tepkisi 21 tarafından yönlendirilen lokal inflamasyonun gelişimi sırasında yukarı akış olaylarını araştırmak için değerli bir araçtır21. Mevcut protokol, obstrüktif MGD'nin eşlik ettiği oküler yüzey inflamasyonunu tanımlamaktadır. Bu yöntemde, fareler bağışıklanır ve 2 hafta sonra, 7 gün boyunca immünojen ile oküler yüzeyde meydan okunur. Ayrıca, akut inflamasyon sırasında oküler eksüda ve ilişkili oküler organları izole etme adımları ve kornea, konjonktiva ve göz kapaklarının diseksiyonu anlatılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum Hidroksit</td><td>Imject şap Adjuvan</td><td>77161</td><td>40 mg / mL < güçlü > Nihai Konsantrasyon < / güçlü >: in vivo: 1 mg / 100 & mikro; L</td></tr><tr><td>C57Bl / 6 fareler, 7 yaşında&ndash; 9 hafta</td><td>Charles River Laboratuvarları&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum</td><td>Carl roth</td><td>CN93.1</td><td>1 M <güçlü>Nihai Konsantrasyon</güçlü>: 5 mM</td></tr><tr><td>Kavisli forseps</td><td>FST by Dumont İSVİÇRE</td><td>5/45 11251-35</td><td></td></tr><tr><td>İnce keskin makas</td><td>FST Paslanmaz çelik, Almanya</td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>Laminer güvenlik kabini</td><td>Herasafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makrofotografi Kamerası</td><td>Canon</td><td>EOS6D</td><td></td></tr><tr><td>Makro Fotoğrafçılık Kamerası (IR filtresi olmadan)</td><td>Nikon</td><td>D5300</td><td></td></tr><tr><td>Mnase</td><td>New England biolabs</td><td>M0247S</td><td>2 x 106 jel U/mL</td></tr><tr><td>Çoklu analit akış testi kiti (Özel fare 13-plex paneli)</td><td>Biolegend</td><td>CLPX-200421AM-UERLAN</td><td></td></tr><tr><td>NaCl %0,9 (Tuzlu)</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin (OVA)</td> <td>Endofit, Invivogen</td><td>9006-59-1</td><td>10 mg / 200 &mikro; Tuzlu su içinde</td></tr><tr><td>L Boğmaca toksini&nbsp;</td><td>ThermoFisher Bilimsel&nbsp;</td><td>PHZ1174</td><td>50 ve mikro; g / 500 ve mikro; L in salin < güçlü > Nihai Konsantrasyon < / güçlü >: in vivo : 100 & mikro; g / 100 ve mikro; L</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Greiner bio-one</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>Tüyü tek kullanımlık neşter</td><td>No. 21&nbsp;</td><td>< güçlü > Son Konsantrasyon< / güçlü >: in vivo:&nbsp; 300 ng / 100 &mikro; L</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi508</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga (kornea/iris yıkama)</td><td>BD Microlane</td><td>27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga (i.p bağışıklama)</td><td>BD Microlane</td><td>24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm</td><td></td></tr></tbody></table>

oküler yüzey enflamasyonunun İndüklenmesi ve tutulan dokuların toplanması

Induction of Ocular Surface Inflammation and Collection of Involved Tissues

Oküler yüzey hastalıkları, kornea, konjonktiva ve ilişkili oküler yüzey bezi ağının fonksiyonlarını ve yapılarını bozan bir dizi bozukluğu içerir. Meibomian bezleri (MG), gözyaşı filminin sulu kısmının buharlaşmasını önleyen bir kaplama tabakası oluşturan lipitleri salgılar. Nötrofiller ve hücre dışı DNA tuzakları, alerjik göz hastalığının bir fare modelinde MG ve oküler yüzeyi doldurur. Agrega nötrofil hücre dışı tuzakları (aggNET'ler), MG çıkışlarını tıkayan ve MG disfonksiyonunu koşullandıran hücre dışı kromatinden oluşan ağ benzeri bir matris formüle eder. Burada oküler yüzey inflamasyonunu ve MG disfonksiyonunu indüklemek için bir yöntem sunulmuştur. Kornea, konjonktiva ve göz kapakları gibi oküler yüzeyle ilgili organların toplanmasına yönelik prosedürler ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Her organın işlenmesi için belirlenmiş teknikler kullanılarak, MG disfonksiyonunun başlıca morfolojik ve histopatolojik özellikleri de gösterilmiştir. Oküler eksüdalar, oküler yüzeyin enflamatuar durumunu değerlendirme fırsatı sunar. Bu prosedürler topikal ve sistemik antiinflamatuar girişimlerin preklinik düzeyde araştırılmasını sağlar.

Bu protokol, oküler yüzey inflamasyonunun murin modelini oluşturmak için sıralı adımları açıklamaktadır. Protokoller, terapötiklerin lokal olarak nasıl uygulanacağını, oküler eksüdaların nasıl elde edileceğini ve sağlıklı ve iltihaplı göz kapakları (Şekil 2), kornea ve konjonktiva gibi ilişkili aksesuar organların nasıl çıkarılacağını göstermeyi amaçlamaktadır. Konjonktivanın izolasyonu için üst göz kapakları diseke edildiğinde dikkat edilmeli ve korneanın diseksiyonu sırasında 1x PBS'de sak...

Oküler yüzey iltihabı oküler yüzey dokularına zarar verir ve gözün hayati fonksiyonlarını tehlikeye atar. Mevcut protokol, oküler inflamasyonu indüklemek ve Meibomian bezi disfonksiyonunun (MGD) bir fare modelinde tehlikeye atılmış dokuları toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır.

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular ...

Bu protokol, oküler yüzey inflamasyonunun indüksiyonunda ve Meibomian bezi disfonksiyonunda rol oynayan ilişkili etkilenen organların toplanmasında rol oynayan adımları sırayla tanımlar. MGD'nin bu yeni modeli, hastalığın doğuştan gelen bağışıklık yönünün araştırılmasını, özellikle Meibomian bezini tıkayan nötrofil hücre dışı tuzakların oluşumunu sağlar. Protokolde sergilenen teknik, klinik öncesi bir aşamada topikal terapötik müdahaleleri tanıtmak için genişletilebilir.Ayrıca, oküler eksüdaların ve organların toplanması tedavinin etkinliğini yansıtır. İmmünojen çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonunu gerçekleştirmek için, kafes ızgarasını kavrarken yedi ila dokuz haftalık C57 siyah altı anestezisiz dişi fareyi kuyruğundan yumuşak bir şekilde tutun. Daha sonra sırt derisini ve boyun bölgesini başparmak ve işaret parmağı arasında sıkıca tutun ve yüzük ile küçük parmak arasındaki kuyruğu ve alt uzuvları avuç içine sabitleyin.Fareyi başı aşağı doğru sabit tutarak, hazırlanan immünojen çözeltisinin 100 mikrolitresini alt karın boşluğunun sağ veya sol çeyreğine enjekte edin. Bağışıklamadan sonra oküler yüzey zorluğu gerçekleştirmek için, anestezi uygulanan bir farenin gözüne beş mikr

induction-ocular-surface-inflammation-collection-involved

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, sıçanlarda kronik deneysel otoimmün kuru göz hastalığını indüklemek için bir tekniği göstermektedir. Otoantijenler ve yabancı antijenler içeren bir antijen adjuvan emülsiyonun önceden tanımlanmış aralıklarla bir sıçana enjekte edilmesinin ardından, aynı antijenlerin oküler yüzey dokularına enjekte edilmesiyle bağışıklanmış sıçanda kronik göz iltihabı indüklenir.

Sıçanlarda Kronik Deneysel Otoimmün Kuru Gözü İndüklemek İçin Bir Teknik

Bu video, bir murin modelinde oküler yüzey iltihabını ve meibomian bezi disfonksiyonunu indüklemek için bir yöntem göstermektedir. Farenin bağışıklık sisteminin bir immünojen kullanılarak uyarılması ve daha sonra aynı immünojen ile yeniden uyarılması, nötrofil tarafından üretilen aggNET'ler yoluyla meibomian bezi salgısının tıkanmasına neden olan oküler yüzey iltihabını teşvik eder ve kuru göz hastalığına yol açar.

Bir Murin Modelinde Oküler Yüzey Iltihabını İndüklemek İçin Bir Yöntem

Kaynak: Lani-Louzada, R.,  ve ark., Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, bir sıçan modelinde yüksek göz içi basıncının (GİB) indüksiyonunu ve izlenmesini göstermektedir. İşlem, limbal kan damarlarının koterize edilmesini içerir, bu da damar tıkanıklığı ve yüksek GİB ile sonuçlanır. Daha sonra sıçanın iyileşmesine izin verilir ve GİB, karşılaştırma için hem deneysel hem de kontrol gözlerinde düzenli...

 Bir Sıçan Modelinde Yüksek Göz İçi Basıncının İndüksiyonu

İnsan deneklerin iç göz kapağı kenarının konjonktivasından hücreleri topladık, boyadık ve görüntüledik. Bu yöntem, hücre morfolojisini ve metabolik aktiviteyi karakterize ederek, kuru göz ve oküler yüzeyler arasındaki sürtünmenin oküler rahatsızlığı algılamada oynayabileceği rol hakkındaki anlayışımızı daha da geliştirebilir.

Kapak Silecek Area izlenim Sitoloji

Maruz kalan normal oküler yüzey kornea ve konjonktivadan oluşur. Konjunktiva içerisinde epitel hücreleri, goblet hücreleri ve immün hücreler bulunur. Burada, non-invaziv bir izlenim sitolojisi yöntemi, konjonktivadaki bağışıklık hücrelerini analiz etmek için bir impresyon sitolojisi cihazı ve akış sitometrisi kullanılarak tarif edilmiştir.

Conjunktiva&#39;dan Hücreleri İzole Etmek ve Fenotip Hedeflemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yöntem

Açık küre göz yaralanmaları, kırsal veya askeri senaryolarda birden fazla gün boyunca tedavi edilmeyebilir ve bu da körlüğe neden olabilir. Görme kaybını en aza indirmek için terapötiklere ihtiyaç vardır. Burada, bir organ kültürü açık küre yaralanma modelini detaylandırıyoruz. Bu model ile, bu yaralanmaları stabilize etmek için potansiyel terapötikler uygun şekilde değerlendirilebilir.

Açık Küre Yaralanmalarını ve Terapötik Performansı İzlemek için Ön Segment Organ Kültürü Platformu

Bu protokol, farelerde Astarlı Mikobakteriyel Üveit'i (PMU) indükleme adımlarını özetlemektedir. Bu yöntem, fare modeli sisteminde güvenilir ve sağlam oküler inflamasyon üretmeye yardımcı olacak adımları özetlemektedir. Bu protokolü kullanarak, immünolojik, transkriptomik ve proteomik tahlillerle daha ileri değerlendirme için tek hayvanlardan uveitik gözler ve iltihapsız diğer gözler ürettik.

Post-Enfeksiyöz Üveit için Bir Model Olarak Astarlanmış Mikobakteriyel Üveit (PMU)

OSTSS, gözyaşı filminde birikmiş inflamatuar mediatörlere yol açarak epifora ve rahatsızlık gibi semptomlara neden olur. Burada, her 2 ayda bir uygulanan terapötik nazolakrimal lavajın epifora ve kaşıntıyı düzelttiği ve OSTSS için terapötik bir girişim olarak etkinliğini düşündüren bir olgu sunulmuştur. Ek olarak, 3 hastada daha semptomlarda subjektif iyileşmeler bildiriyoruz.

Oküler yüzey toksik çorba sendromunun tedavisi olarak nazolakrimal lavaj

Burada, mukoza zarı pemfigoidini tanımlamak için konjonktival biyopsinin alınması ve işlenmesi için bir protokol sunuyoruz.

Mukoza Membranı Pemfigoid Tanısı için Konjonktival Biyopsi ve Direkt İmmünofloresan Tekniği

Öğrenin, fare modelinde Meibomian bez disfonksiyonu için oküler yüzey enflamasyonu indüksiyonu ve tutulan dokuların toplanması yöntemini. Bu teknik, doğuşal bağışıklık yanıtını ve nötrofil ekstraselüler tuzakları incelemeye olanak tanır.

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Daha fazla video keşfet