Name: Akut Böbrek Hasarı Araştırmaları için Bilateral Renal İskemi-Reperfüzyon Fare Modelinin Teknik İyileştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-03T14:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: Öğrenin, akut böbrek hasarı araştırmaları için bilateral renal iskemi-reperfüzyon fare modelinin teknik iyileştirilmesini. C57BL/6 erkek farelerde renal pedikül klemp uygulaması ile güvenilir ve tutarlı hasar indüksiyonu sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu model, Tayvan Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'nın (MOST 109-2320-B-030-006-MY3) mali desteğiyle geliştirilmiştir. Bu makale Wallace Academic Editing tarafından düzenlenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından yayınlanan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir (NIH yayın no. 85-23, 1996'da revize edilmiştir). Çalışma protokolü, Fu-Jen Katolik Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından ve yönergelerine uygun olarak onaylandı. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler ve aletler hakkında ayrıntılı bilgi için Malzeme Tablosuna bakınız.
1. Farelerin hazırlanması
<ol><li>21-23 g ağırlığında 8 haftalık C57BL/6 erkek fareleri seçin.</li>
	<li>Fareleri, gıdaya, standart fare maması peletlerine ve musluk suyuna serbest erişim ile kontrollü bir sıcaklıkta (21 ± 2 °C) 12 saatlik aydınlık ve karanlık döngüsü altında barındırın ve bakımını yapın.</li>
</ol>2. Anestezi
<ol><li>Cerrahi maske ve steril eldiven giyin.</li>
	<li>Fareleri, indüksiyon odasında 1 L / dk'da oksijenle karıştırılmış% 2 izofluran ile anestezi altına alın.</li>
	<li>Anestezi seviyesini pedal refleksi ile değerlendirin. NOT: Pedal refleksi, sert bir ayak parmağı sıkışmasına yanıt olarak arka pençenin geri çekilmesidir. Pedal refleksi kaybolduğunda anestezi tamamlanır.</li>
	<li>Anestezi tamamlandıktan sonra vücut ısısını korumak için her fareyi elektrikli battaniye ile bir ameliyat platformuna yüzüstü pozisyonda hareket ettirin ve yerleştirin. Ameliyattan önce vücut ısısını stabilize edin ve rektal sıcaklık probları ile izleyin. Kuruluğu önlemek için her iki göze de oftalmik merhem sürün.</li>
	<li>Farelerin pençelerini tahtaya bantlayın.</li>
	<li>Sabit bir %1 izofluran ve 1 L/dk oksijen sağlamak için farelerin yüzüne bir maske takın</li>
	<li>Anestezi seviyesini düzenli olarak pedal refleksi ile değerlendirin ve ameliyat sırasında anestezik uygulamayı buna göre ayarlayın.</li>
</ol>3. Bilateral renal IR-ABH cerrahisi
<ol><li>Arkaya dokunun ve farelerin bel omurgasını manuel olarak bulun. Omurga boyunca sefalal olarak hareket edin ve farelerin son kaburgasının her iki tarafının altındaki costovertebral açıları arayın.</li>
	<li>Costovertebral açı bölgesinin her iki tarafına yaklaşık 30 saniye boyunca epilasyon losyonu uygulayın ve ardından kürkü tuzlu su ile çıkarın.</li>
	<li>Tıraşlı cildi üç tur betadin solüsyonu ve pamuk topları kullanarak% 75 alkol ile dezenfekte edin. NOT: Prosedür boyunca ameliyat için steril bir alan sağlamak çok önemlidir. Cerrahi örtü uygulayın ve steril aletler kullanın.</li>
	<li>Cildi sol kosovertebral açının altına nazikçe kaldırmak için ince uçlu forseps kullanın ve ardından sol kanattaki lomber orta hattan cilt gerginlik çizgileri boyunca 1 cm'lik eğik dorsolateral bir kesi oluşturmak için makas kullanın. Sol böbreği görselleştirmek için makas kullanarak sol kanadın kas duvarını kesin.</li>
	<li>Sağ böbreği görselleştirmek için yukarıda belirtilen cerrahi prosedürleri tekrarlayın. İşlem sırasında üretilen az miktarda kanı steril pamuklu çubuklarla alın.</li>
	<li>Sol böbreği forseps ile çevre dokudan dikkatlice itin ve ayırın. Sol böbrek açığa çıktıktan sonra renal pedikülü tanımlayın. NOT: Böbreküstü bezine ve çevresindeki kan damarlarına zarar vermemeye dikkat edin.</li>
	<li>Sol renal pedikülün üzerine 25 dakika boyunca mikrovasküler klipsle kelepçeleyin. Böbrek renginde pembeden koyu kırmızıya gözle görülür bir değişiklikle iskemiyi doğrulayın.</li>
	<li>Sol renal pedikül klemplemesi sırasında kurumayı önlemek için klemplenmiş böbreği steril salin ıslak pamuk topları ile örtün.</li>
	<li>Sağ renal pedikülü 25 dakika boyunca mikrovasküler bir klipsle klemplemek için yukarıda belirtilen cerrahi prosedürleri tekrarlayın.</li>
	<li>Sağ renal pedikül klemplemesi sırasında kurumayı önlemek için klemplenmiş böbreği steril salin ıslak pamuk topları ile örtün.</li>
	<li>Steril salin ıslak pamuk toplarının anestezi derinliğini ve nemini periyodik olarak izleyin.</li>
	<li>Sol böbreğin reperfüzyonunu başlatmak için sol mikrovasküler klipsi açın. Sol böbreğin koyu kırmızıdan pembeye gözle görülür bir renk değişikliği ile reperfüzyonu onaylayın.</li>
	<li>Sağ böbreğin reperfüzyonunu başlatmak için sağ mikrovasküler klipsi açın.</li>
	<li>Böbrek rengi değişikliği doğrulandıktan sonra, böbreği karın boşluğuna geri koyun.</li>
	<li>Karın boşluğunu ve cildi 6-0 emilebilir dikiş materyalleri ile kapatın.</li>
	<li>Yarayı bir betadin çözeltisi ve% 75 alkol ile pamuk topları kullanarak dezenfekte etmek için fırçalayın.</li>
	<li>Serbestçe hareket etmeye ve beslenmeye başlayana kadar hayvanı dikkatlice gözlemleyin. NOT: Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar hayvanlara çok dikkat edin.</li>
	<li>Ameliyat sonrası ağrıyı önlemek için 2-3 gün boyunca carprofen (0.2 mL'de 5 mg / kg, deri altından uygulanır) uygulayın.</li>
</ol>

Yazarlar bu makalenin yayınlanması ile ilgili herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Önerilen bilateral İR-ABH protokolü, her iki böbreğin hipoperfüzyon ve reperfüzyon hasarı mekanizmasını araştırmak için uygundur. Protokol, hafif farelerin, izofluran ile genel anestezinin, cerrahiye dorsolateral bir yaklaşımın ve operasyon sırasında vücut ısısının korunmasının, ilişkili teknik zorlukları hafiflettiğini, ameliyat süresini kısalttığını ve akut bilateral renal IR-ABH araştırması için prosedürün tutarlılığını artırdığını göstermektedir.
Bilateral renal IR-ABH cerrahisinde teknik ...

Kardiyak arrest, Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda 80.000'den fazla kez meydana gelir 1,2. Kardiyak arrest mortalite oranı son derece yüksektir 3,4,5,6. ABH, ROSC 7,8,9,10,11,12,13 sonrası kardiyak arrest geçiren hastalarda yüksek mortalite ve kötü nörolojik sonuçlarla ilişkili majör bir risk faktörüdür. ABH'den iyileşme, olumlu nörolojik sonuçların ve hastaneden taburculuğun iyi bir göstergesidir14,15,16. Bununla birlikte, İİR-ABH için etkili tedaviler hala eksiktir 15,16,17,18,19. Hastalığın klinik sonuçlarını daha da iyileştirmek için ek terapötik stratejiler gereklidir.
Bilateral renal iskemi yaklaşımlı İR-ABH, ABH araştırmaları için kullanılan hayvan modellerinden biridir 20,21,22,23,24,25,26. Renal IR-ABH hayvan modelleri, ROSC6,27,28,29,30'u takiben ani kardiyak arrest geçiren hastalarda ABH çalışması için tüm vücut IR yaralanma modelinden daha az karmaşıktır. Bu, deneylerde daha az kafa karıştırıcı faktörün varlığı nedeniyle bir renal IR-ABH hayvan modelinden tutarlı sonuçların elde edilmesinin daha kolay olduğu anlamına gelir. Ayrıca, renal IR-ABH protokolleri sıklıkla tek taraflı veya iki taraflı renal pedikül tıkanıklığını içerir. Bilateral renal IR-ABH ile ilgili deneylerdeki koşullar, başarılı kardiyopulmoner resüsitasyondan sonra ani kardiyak arrest geçiren hastalarda ROSC'yi takiben ABH için klinik koşullarla karşılaştırılabilir. Her iki modelde de böbreklerin patolojik özellikleri insan renal IR hasarının patolojik özelliklerini yansıtsada 31,32,33, bilateral renal iskemi yaklaşımı, kalp yetmezliği, vazokonstriksiyon ve septik şok gibi insan patolojik koşulları altında ABH ile daha ilgilidir 35. Bilateral renal IR-ABH hayvan modelleri, ROSC'yi takiben kardiyak arrestte renal IR yaralanmalarına odaklanan çalışmalar için uygundur.
Bilateral renal IR-ABH modelleri teknik zorluklar, deneysel karmaşıklık ve uzun cerrahi süreile ilişkilidir 23,26,32,33,35,36. Bu teknik zorlukların üstesinden gelmek için, bu çalışma bazı teknik değişiklikler yaparak farelerde güvenilir bir bilateral IR-ABH araştırma protokolü oluşturmuştur. Önerilen protokol, daha az cerrahi komplikasyon, daha az doku hasarı ve ameliyat sırasında daha düşük mortalite olasılığı ile sonuçlandı. Bu nedenle, renal hipoperfüzyon ve reperfüzyon hasarına karşı yeni terapötik stratejiler geliştirmek için ROSC sonrası ABH'nin patofizyolojik süreçlerini araştırmak için kullanılabilir37,38,39.

<table><tbody><tr><td>Emilebilir Sütür, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>J510G-BX</td><td></td></tr><tr><td>Betadine solüsyonu</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Sigma</td><td>PHR1452</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk topları</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal Yoğun Bakım A.Ş.</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Moria Gemi Kelepçesi</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18320-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar iğne tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12002 - 12</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neşter bıçakları</td><td>Shinva</td><td>s2646</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Anestezi Makinesi</td><td>Sheng-Cing Instruments Co.</td><td>STEP AS-01</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt mendil makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14072 - 10</td><td></td></tr></tbody></table>

akut böbrek hasarı araştırmaları için bilateral renal İskemi-reperfüzyon fare modelinin teknik İyileştirilmesi

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

Kardiyak arrest büyük bir halk sağlığı yükü oluşturmaktadır. Akut böbrek hasarı (ABH), başarılı kardiyopulmoner resüsitasyondan sonra spontan dolaşımın (ROSC) geri dönmesini takiben kardiyak arrestten kurtulanlarda olumsuz bir belirteçtir. Tersine, böbrek fonksiyonunun ABH'den geri kazanılması, olumlu nörolojik sonuçların ve hastaneden taburcu olmanın bir göstergesidir. Bununla birlikte, ROSC'den sonra kardiyak arrestin neden olduğu böbrek hasarını önlemek için etkili bir müdahale eksiktir, bu da ek terapötik stratejilerin gerekli olduğunu düşündürmektedir. Renal hipoperfüzyon ve reperfüzyon, kardiyak arrest sonrası ABH'ye neden olan iki patofizyolojik mekanizmadır. Her iki böbreğin iskemi-reperfüzyona bağlı AKI'SININ (IR-AKI) hayvan modelleri, klinik ortamda ROSC'yi takiben ABH'li hastalarla karşılaştırılabilir. Bununla birlikte, her iki böbreğin IR-AKI'sini analiz etmek teknik olarak zordur, çünkü model yüksek mortalite ve böbrek hasarında geniş varyasyon ile ilişkilidir ve bu da analizi etkileyebilir. Hafif fareler seçildi, izofluran ile genel anestezi altına alındı, dorsolateral yaklaşımla cerrahiye tabi tutuldu ve operasyon sırasında vücut sıcaklıkları korundu, böylece doku hasarı azaltıldı ve tekrarlanabilir bir akut renal IR-ABH araştırma protokolü oluşturuldu.

Bilateral renal IR-ABH cerrahisinin kalitesi, daha fazla mikroskobik veya moleküler analizden önce değerlendirilmelidir. Cerrahi sırasında, renal pedikül mikrovasküler klips ile klemplendikten hemen sonra böbreğin pembeden koyu kırmızıya renk değiştirip değiştirmediğine bakılarak renal iskemi doğrulanmalıdır (Şekil 1). Ameliyattan sonra, IR-ABH cerrahisinin neden olduğu böbrek hasarı, sonuçların başlangıçtan itibaren kan üre nitrojeni ve kreatinin seviyesinde bir artış olduğunu gösterdiği bi...

Bu çalışma, akut böbrek hasarı araştırmaları için bilateral renal iskemi-reperfüzyonun bir fare modelinin teknik olarak iyileştirilmesine odaklanan bir protokol oluşturdu.

Akut Böbrek Hasarı Araştırmaları için Bilateral Renal İskemi-Reperfüzyon Fare Modelinin Teknik İyileştirilmesi

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

Akut böbrek hasarı, dolaşımın geri dönüşünden sonra kardiyak arrest olan hastalarda yüksek mortalite ile ilişkili önemli bir risk faktörüdür. Bu prosedür akut böbrek hasarını indüklemek için yapılabilir. Bu protokol, renal iskemi reperfüzyonunu doğru, güvenli ve tutarlı bir şekilde indüklemektir.Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan bir asistan olan Huang Cheng-Wei olacak. Başlamak için, anestezi uygulanmış sekiz haftalık bir C57BL / 6 erkek fareyi, vücut ısısını korumak için elektrikli battaniyeli bir ameliyat platformuna yüzüstü pozisyonda yerleştirin. Ardından, arkaya dokunun, lomber omurgayı bulun ve son kaburganın her iki tarafının altındaki costovertebral açıları arayın.Tıraş etmek için epilasyon losyonu uygulayın ve costovertebral açı bölgesinin her iki tarafına yakın saçları ovalayın. Cerrahi bölgeyi bir Betadine solüsyonu ve pamuk topları kullanarak% 75 alkol kullanarak dezenfekte edin. Cildi sol costovertebral açının altına nazikçe kaldırmak için ince uçlu forseps kullanın.Daha sonra makas kullanarak sol kanatta lomber orta hattan cilt gerginlik çizgileri boyunca bir santimetre eğik dorsolateral kesi oluşturun. Ardından, sol böbreği görselleştirmek için sol kanadın kas duvarını kesin. Sol böbreği forseps ile çevre dokudan dikkatlice itin ve ayırın.Ardından, böbrek pedikülünü tanımlayın. Sol renal pedikülü mikrovasküler bir klipsle sıkıştırın. Böbrek renginde pembeden koyu kırmızıya gözle görülür bir değişiklikle iskemiyi doğrulayın.Sıkıştırma sırasında kurumayı önlemek için, böbreği steril tuzlu suyla ıslak pamuk topları ile örtün. 25 dakika sonra, sol böbreğin reperfüzyonunu başlatmak için sol mikrovasküler klipsi açın. Böbreği karın boşluğuna geri getirin.Karın boşluğunu 6/0 emilebilir dikiş materyalleri ile kapatın. Serbestçe hareket etmeye ve beslenmeye başlayana kadar fareyi gözlemleyin. Renal pedikül klemplemesi sonrası renal iskemi burada gösterilmiştir.Böbrek renginin pembeden koyu kırmızıya doğru değişmesi, böbrek perfüzyonunun yetersiz hale geldiğini ortaya koymaktadır. Kontrollerle karşılaştırıldığında, renal reperfüzyondan iki gün sonra serum kan üre azotu ve kreatinin düzeyleri arttı. Bu teknik, araştırmacıların akut böbrek hasarına karşı yeni terapötik yaklaşımları keşfetmeleri için bir yol açmaktadır.

technical-refinement-bilateral-renal-ischemia-reperfusion-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz fareler tabi olan orta ve ağır iskemi-reperfüzyon bağlı böbrek hasarı modelleri tanımlamak tek taraflı renal pedikül sırasıyla, eş zamanlı veya gecikmeli taraf nefrektomi takip sıkma. Bu modeller sürekli böbrek fonksiyon bozukluğu ve post-yaralanma fibrozis yol, ancak yaralanma şiddeti ve yaşam fare arka plan, yaş ve cerrahi ekipman bağlıdır.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Burada açıklanan renal iskemi reperfüzyon yaralanmasının fare modeli, akut böbrek hasarı ile sonuçlanan iskemiyi indüklemek için kontrol dokusu ve sol renal pedikülün klemplenmesini sağlayan bir sağ nefrektomiden oluşur. Bu model, tüm adımların tek bir kesi ile gerçekleştirildiği bir orta hat laparotomi yaklaşımı kullanır.

Renal İskemi Reperfüzyon Hasarı: Yaralanma Fare Modeli ve Rejenerasyon

Renal iskemi-reperfüzyon hasarı hastanede yatan hastalarda yüksek morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Burada, tek taraflı renal iskemi-reperfüzyon hasarının basit ve etkili bir fare modelini sunmakta ve böbrekte gözlenen temsili patolojik değişikliklere sıralı bir genel bakış sunulmaktadır.

Tek Taraflı İskemi-Reperfüzyon Hasarının Etkili Bir Fare Modeli

Bu makale, örnek toplamadan bir gün önce yapılan kontralateral nefrektomi ile tek taraflı böbrek IRI kullanan iskemik CKD modelini sunmaktadır; bu protokol, serum tabanlı fonksiyonel değerlendirme, yüksek sağkalma ve tekrarlanabilir KBD patolojisini 28 ve 42 gün içinde mümkün kılarak mekanik ve girişimsel çalışmalar için çok yönlü bir platform sağlar.

Böbrek Iskemisi/Reperfüzyon Yaralanması Nedeniyle Akut Böbrek Hastalığına Geçişin Fare Modeli

Perioperatif ve yoğun bakım ile ilgili akut böbrek hasarı için güçlü bir model sundu. Neredeyse, klinik AKI, histolojik ve fonksiyonel değişiklikleri çoğaltmak mümkündür kardiyak arrest ile indüklenen tüm vücut hipoperfüzyon kullanma.

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Burada tarlada bu tekniğin standardizasyonu teşvik etmek mortalite olmadan tekrarlanabilir yaralanma ile sonuçlanan farelerde bağırsak iskemi-reperfüzyon ayrıntılı prosedürü açıklar. Bağırsak iskemi-reperfüzyon hasarının Bu model yaralanma ve yenilenme hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Bu makalede, farelerde yüksek göz tansiyonu retinal iskemi-reperfüzyon hasarı uyarılması için bir yöntem tarif eder. yüksek göz içi basıncı ile retinal iskemi-reperfüzyon hasarı, retina nörovasküler biriminin, insan hastalıkları için, potansiyel hücresel mekanizmaları ve tedavi incelemelerine sağlayan retinada tehlikeye oksijen ve besin teslimat karakterize olan insan patolojilerinin model vermektedir.

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Bu protokol mıknatıs sıkma kullanarak fare kulak cilt üzerinde bir iskemi-reperfüzyon (İR) modeli indüksiyon açıklar. Özel bir dahili Intravital görüntüleme modeli kullanarak, in vivo inflamatuvar yanıt sonrası reperfüzyon eğitim. Bu tekniğin gelişiminin arkasındaki mantık lökosit cilt IR hasarı nasıl cevap anlayışı yaygınlaştırmaktır.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Öğrenin, akut böbrek hasarı araştırmaları için bilateral renal iskemi-reperfüzyon fare modelinin teknik iyileştirilmesini. C57BL/6 erkek farelerde renal pedikül klemp uygulaması ile güvenilir ve tutarlı hasar indüksiyonu sağlar.

Akut Böbrek Hasarı Araştırmaları için Bilateral Renal İskemi-Reperfüzyon Fare Modelinin Teknik İyileştirilmesi

Daha fazla video keşfet