Name: Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Keşfedin, bağırsak mikrobiyal metabolitlerinin serbestçe hareket eden farelerdeki beyin fonksiyonu ve davranış üzerindeki etkilerini intraserebroventriküler verilim yöntemiyle nasıl incelendiğini. Bu doğrulanmış teknik, bağırsak-beyin ekseni araştırmalarına ışık tutar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ulusal Cheng Kung Üniversitesi'ndeki (NCKU) Laboratuvar Hayvanları Merkezi personeline hayvanlara baktıkları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, CHENG-HSING Tıp Vakfı'nın Prof. Kun-Yen Huang Eğitim Fonu'ndan C.-W.L.'ye verilen bursla desteklenmiştir; Tayvan'daki Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan (MOST) gelen fonlar: (Lisans Araştırması MOST 109-2813-C-006-095-B) T.-H.Y.'ye; (ÇOĞU 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) W.-L.W.'ye; ve Yüksek Öğrenim Filizi Projesi, Eğitim Bakanlığı'ndan NCKU'daki Üniversite İlerleme Merkezi'ne W.-L.W.'ye

Yazarların bu çalışma ile ilgili çıkar çatışması yoktur.

Bağırsak kaynaklı metabolitler, kısmen vücuttaki çoklu bağlanma bölgelerinden dolayı, çok kesin bir mekanizma olmadan, beyin aracılı hastalıklarla ilişkilendirilmiştir 6,12,24. Önceki raporlar, SCFA'ların G proteinine bağlı reseptörler, epigenetik düzenleyiciler ve vücudun birden fazla bölgesinde enerji üretimi için kaynaklar için ligandlar olarak hizmet edebileceğini gösterdi 6,12<sup class="x...

İnsan gastrointestinal sistemi, konakçıyı etkileyen çeşitli mikroorganizmaları barındırır 1,2,3. Bu bağırsak bakterileri, konakçıtarafından tüketilen diyet bileşenlerinin kullanımı sırasında bağırsak kaynaklı metabolitleri salgılayabilir 4,5. İlginçtir ki, çevrede metabolize edilmeyen bağırsak metabolitleri, dolaşım yoluyla diğer organlarataşınabilir6. Not olarak, bu salgılanan metabolitler, merkezi sinir sistemi ile bağırsak arasındaki çift yönlü iletişim olarak tanımlanan bağırsak-beyin ekseni için aracılar olarak hizmet edebilir7. Önceki çalışmalar, bağırsak kaynaklı metabolitlerin hayvanlarda karmaşık davranış ve duyguları modüle edebileceğini göstermiştir 8,9,10,11.
Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA'lar), diyet lifi ve sindirilemeyen karbonhidratların fermantasyonu sırasında bağırsak mikrobiyotası tarafından üretilen ana metabolitlerdir6. Asetat, propiyonat ve bütirat, bağırsaktaki en bol SCFA'lardır12. SCFA'lar gastrointestinal sistemdeki hücreler için enerji kaynağı görevi görür. Bağırsaktaki metabolize edilmemiş SCFA'lar portal ven yoluyla beyne taşınabilir, böylece beyin ve davranışmodüle edilir 6,12. Önceki çalışmalar, SCFA'ların nöropsikiyatrik bozukluklarda kritik bir rol oynayabileceğini öne sürmüştür 6,12. Örneğin, otizm spektrum bozukluğunun (ASD) bir hayvan modeli olan BTBR T + Itpr3tf / J (BTBR) farelerinde intraperitoneal bütirat enjeksiyonu, sosyal eksikliklerini kurtardı13. Depresif deneklerden mikrobiyota alan antibiyotik tedavisi görmüş sıçanlar, anksiyete benzeri davranışlarda ve dışkı SCFA'larında bir artış göstermiştir14. Klinik olarak, OSB'li kişilerde fekal SCFA düzeylerindeki değişiklikler, tipik olarak gelişmekte olan kontrollere kıyaslagözlenmiştir 15,16. Depresyonu olan kişiler, sağlıklı deneklerden daha düşük dışkı SCFA seviyelerine sahiptir17,18. Bu çalışmalar, SCFA'ların hayvanlardaki ve insanlardaki davranışları çeşitli yollarla değiştirebileceğini öne sürdü.
Mikrobiyal metabolitler, gastrointestinal sistem, vagus siniri ve sempatik sinir dahil olmak üzere konakçı fizyolojisini ve davranışlarını 4,19 etkileyerek vücudun birçok bölgesi üzerinde çeşitli etkiler gösterir. Metabolitleri periferik yollarla uygularken bağırsaktan türetilmiş metabolitlerin beyindeki kesin rolünü belirlemek zordur. Bu makale, serbestçe hareket eden bir farenin beynindeki bağırsak kaynaklı metabolitlerin etkilerini araştırmak için video tabanlı bir protokol sunmaktadır (Şekil 1). SCFA'ların davranış testleri sırasında rehber kanül yoluyla akut olarak verilebileceğini gösterdik. Metabolitlerin tipi, hacmi ve infüzyon hızı amaca bağlı olarak değiştirilebilir. Kanülizasyon bölgesi, bağırsak metabolitlerinin belirli bir beyin bölgesindeki etkisini araştırmak için ayarlanabilir. Bilim insanlarına, bağırsaktan türetilmiş mikrobiyal metabolitlerin beyin ve davranış üzerindeki potansiyel etkisini araştırmak için bir yöntem sunmayı amaçlıyoruz.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Malzeme< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Advil Liqui-Jels Çözündürülmüş İbuprofen A2: D41</td><td>Pfizer</td><td>yok</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 eşek anti-tavşan</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Floresan Altın (tavşan poliklonal)</td> <td>Millipore</td><td>AB153-I</td><td></td></tr><tr><td>Şişe Üstü Vakum Filtresi, 500 mL, 0.22 & mu; m, PES, Steril</td><td>YUVA</td><td>121921LA01</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>ACSF: 0,14 g/L</td></tr><tr><td>Klorheksidin ovma %2</td> <td>Phoenix</td><td>NDC 57319-611-09</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin çözeltisi</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-599-09</td><td></td></tr><tr><td>Ticari kukla</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>62004</td><td>Single_OD 0,20 mm/ M3,5/G = 0,5 mm</td></tr><tr><td>Ticari kılavuz kanül</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>62104</td><td>Single_OD 0,41 mm-27G/ M3,5/C = 2,5 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Ticari enjektör</td><td>RWD Life Science</td><td>62204</td><td>Single_OD 0,21 mm-33G/ M3,5/C ile montaj ilişkileri = 3,5 mm/G = 0,5 mm</td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td>ACSF: 0,61 g/L</td></tr><tr><td>Diş akrilik</td><td>HİJYENİK</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sabitleme vidaları</td><td>RWD Life Science</td><td>62521</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td> <td>ile Fluoroshield montaj ortamı</td></tr><tr><td>At serumu</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>16050130</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngaları</td><td>BBraun</td><td>XG-LBB-9151133S-1BX</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>İzofluran;</td><td>Panyon & BF biyoteknoloji</td><td>DG-4900-250D</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td>ACSF: 0.19 g / L</td></tr><tr><td>Ketoprofen&nbsp;</td><td>İsviçre İlaç</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Lidokain&nbsp;</td><td>AstraZeneca</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Düşük erime noktalı agaroz</td><td>Invitrogen</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>ACSF: 0,19 g/L</td></tr><tr><td>Mikroskop kapak fişleri</td><td>MARIENFELD</td><td>101242</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>4951PLUS-001E</td><td></td></tr><tr><td>Mineral yağ lambası, beyaz NF</td><td>Macron İnce Kimyasallar</td><td>MA-6358-04</td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>ACSF: 7,46 g/L</td></tr><tr><td>NaH2PO4&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8282</td><td>ACSF: 0,18 g/L</td></tr><tr><td>NaHCO<alt>3</alt>nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>ACSF: 1.76 g/L</td></tr><tr><td>n-bütil siyanoakrilat yapıştırıcı (doku yapıştırıcı tutkalı)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>3M Vetbond</td></tr><tr><td>Nöral izleyici ve nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-358883</td><td>FluoroGold</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen tüp</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>62329</td><td>OD 1.50, ID 0.50 mm ve OD 1.09, ID 0.38 mm</td></tr><tr><td>Puralube Vet (göz) Merhem</td><td>Dechra&nbsp;</td><td></td><td></td>12920060</tr><tr><td>Sodyum asetat ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td>SCFA'lar: 13,5 mM</td></tr><tr><td>Sodyum azid&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bütirat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td>SCFA'lar: 8 mM</td></tr><tr><td>Sodyum propiyonat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1880</td><td>SCFA'lar: 5.18 mM</td></tr><tr><td>Paslanmaz kılavuz kanül</td><td>Chun Ta paslanmaz çelik enterprise CO., LTD.</td><td>yok</td><td>OD 0,63 mm; Yerel satıcı</td></tr><tr><td>Paslanmaz enjektör</td><td>Chun Ta paslanmaz çelik kurumsal CO., LTD.</td><td>yok</td><td>OD 0,3 mm; kukla enjektörden yapılmıştır; yerel satıcı</td></tr><tr><td>Süper yapıştırıcı</td><td>Krazy Tutkal</td><td>KG94548R</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kanül tutucu</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>B485-68217</td><td></td></tr><tr><td>Tavan kamerası</td><td>FOSCAM</td><td>R2</td><td></td></tr><tr><td>Dijital stereotaksik aletler</td><td>Çalmak</td><td>51730D</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>INNOVIEW</td><td>SEM-HT / TW</td><td></td></tr><tr><td>Cam Boncuk Sterilizatörü</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>RS1501</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı</td><td>Çalmak</td><td>53800M</td><td></td></tr><tr><td>Leica mikroskobu ve nbsp;</td><td>Leica</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Forseps</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5136</td><td>Tırtıklı, Hafif Eğri; Ekstra hassas; 0,5 mm uç genişliği; 4 "Uzunluk&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5918</td><td>4.5" Açılı Keskin</td></tr><tr><td>Mikroenjeksiyon denetleyici</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>MICRO2T</td><td>SMARTouch Kontrol Cihazı Mikroenjeksiyon</td></tr><tr><td>şırınga pompası</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>UMP3T-1</td><td>UltraMicroPump3&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Mikrolitre şırınga</td><td>Hamilton</td><td>80014</td><td>10 & mikro; L</td></tr><tr><td>Çift Fiber Adımlı Fiber Optik Soğuk Işık</td><td></td><td>LGY-150</td><td>Yerel satıcı</td></tr><tr><td>Evcil hayvan düzeltici</td><td>WAHL</td><td>09962-2018</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran Adımı</td><td></td><td>AS-01</td> için Buharlaştırıcı <td>Yerel satıcı</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hayvan davranışı videosu izleme yazılımı</td><td>Noldus</td><td>EthoVision</td><td>Sürüm: 15.0.1416</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X yazılımı</td><td>Leica</td><td>LASX</td><td>Sürüm: 3.7.2.22383</td></tr></tbody></table>

serbestçe hareket eden farelerde bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin İntraserebroventriküler verilmesi

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

Bağırsak mikrobiyotasının ve metabolitlerinin konakçı fizyolojisi ve davranışı üzerindeki etkisi bu on yılda kapsamlı bir şekilde araştırılmıştır. Çok sayıda çalışma, bağırsak mikrobiyotasından türetilmiş metabolitlerin, konakçıdaki karmaşık bağırsak-beyin yolları aracılığıyla beyin aracılı fizyolojik fonksiyonları modüle ettiğini ortaya koymuştur. Kısa zincirli yağ asitleri (SCFA'lar), bağırsak mikrobiyomu tarafından diyet lifi fermantasyonu sırasında üretilen başlıca bakteri kaynaklı metabolitlerdir. Bağırsaktan salgılanan SCFA'lar, SCFA reseptörlerinin geniş dağılımı nedeniyle bağışıklık, endokrin ve nöral yanıtları etkileyerek, periferdeki birden fazla bölgede hareket edebilir. Bu nedenle, SCFA'ların oral ve intraperitoneal uygulaması yoluyla SCFA'ların merkezi ve periferik etkilerini ayırt etmek zordur. Bu makale, SCFA'ların beyindeki işlevsel rolünü, serbestçe hareket eden farelerde bir rehber kanül aracılığıyla sorgulamak için video tabanlı bir yöntem sunmaktadır. Beyindeki SCFA'ların miktarı ve türü, infüzyon hacmi ve hızı kontrol edilerek ayarlanabilir. Bu yöntem, bilim insanlarına bağırsaktan türetilmiş metabolitlerin beyindeki rolünü takdir etmenin bir yolunu sağlayabilir.

Fare, yeni bir kafeste lokomotor aktiviteyi değerlendirmek için kılavuz kanül implantasyonundan kurtulduktan 1 hafta sonra SCFA'larla aşılandı. Fare yeni bir kafese yerleştirildi ve beynin lateral ventrikülüne implante edilen ticari kılavuz kanül aracılığıyla beyne ilk 5 dakikada (7 nL / s teslimat oranı) 2.100 nL SCFA veya ACSF ile aşılandı. Yeni bir kafesteki lokomotor aktivite, infüzyondan sonra 30 dakika daha kaydedildi. SCFA'ların infüzyonu ile ACSF arasındaki yeni kafesteki lokomotor aktivitede fark gözlenmedi (<st...

Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitler, hayvanlarda karmaşık davranışlara yol açan çok yönlü etkilere sahiptir. Bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin beyindeki etkilerini bir rehber kanül aracılığıyla intraserebroventriküler yolla tanımlamak için adım adım bir yöntem sunmayı amaçlıyoruz.

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Bağırsak mikrobiyotası tarafından salınan metabolitler, konakçı üzerinde karmaşık etkiler yaratır. Bu protokol, bağırsak metabolitlerinin fare beynindeki ve davranışındaki rolünü sorgulamak için bir yöntem sunar. Bu teknik, bağırsak metabolitlerini serbestçe hareket eden farelerde bir beyne iletmek için hassas, titiz ve doğrulanmış bir yöntem sağlar.Bağırsak beyin ekseni araştırmasına ilişkin içgörü için kapsamlı ve fizyolojik olarak en iyi metodolojiyi sunuyoruz. Fareyi stereotaksik çerçeveye yerleştirin ve fare kesici dişlerini stereotaksik kesici tutucudaki kesici çubukta sabitleyin. Burun, burun koni maskesi ile örtün.Ardından, farenin nosiseptyonunu üst kıstırma refleksi ile değerlendirin ve cerrahi bölgeyi kesmeden önce sabit bir solunum hızı sağlayın. Baştaki kesilmiş kürk yapışkan bant tarafından çıkarıldıktan sonra, ağrıyı hafifletmek ve göz merhemi uygulamak için deri altından analjezik ketoprofen enjekte edin. Ardından, sivri uçlu kulak çubuğunu kulak kanalına yerleştirerek kafayı sabitleyin.Kesici tutucudaki burun kelepçesini sıkın ve başın sabitlendiğinden emin olmak için kafaya hafifçe bastırın. Kafa derisini dezenfekte etmek için 3 alternatif klorheksidin çubuk fırçası kullanın. Şimdi, kafa derisinde bir santimetreden daha az bir kesi yapmak için diseksiyon neşter kullanın.Kesini açtıktan sonra, kafatasını mikro diseksiyon forsepsleri tarafından tutulan pamuklu bir çubukla silin. Stereotaksik koordinatlara dayanarak, makalede açıklandığı gibi sağ lateral ventrikülün konumunu tanımlayın ve etiketleyin. Daha sonra, stereotaksik bir matkap kullanarak etiketli bölgedeki kafatasından bir delik açın ve daha sonra kafatasında iki ila dört delik daha açın.Kafatasını lidokain pamuklu çubukla silin ve deliklere 2 ila 4 paslanmaz vida takın. Ticari kılavuz kanülü stereotaksik kanül tutucuya yerleştirin ve cam hız sterilizatörü ile 150 santigrat derecede dezenfekte edin. Ardından, stereotaksik kanül tutucuyu lateral ventrikül için açılan deliğe taşıyın ve istenen derinliğe ulaşana kadar ticari kılavuz kanülü yavaşça deliğe yerleştirin.Şimdi ticari kılavuz kanülünü delinmiş deliğe sabitlemek için 10 mikrolitre n-Butil siyanoakrilat yapıştırıcı uygulayın ve 3 ila 4 dakika bekleyin. Ticari kılavuz kanülü stereotaksik kanül tutucudan yavaşça serbest bırakın ve ticari kılavuz kanülünü sabitlemek için kesilmiş kafa derisine diş akrilik uygulayın ve en az 5 dakika bekleyin. Ticari mankeni ticari rehber kanülüne yerleştirin.Ardından, anesteziden kurtulmak için fareyi altında bir ısıtma yastığı bulunan yeni bir kafese yerleştirin ve fare tamamen uyanana kadar sürekli gözlemleyin. 10 mikrolitre damıtılmış su içeren mikrolitre şırıngayı mikroenjeksiyon pompasına monte edin. Bir insülin şırıngası kullanarak, polietilen tüpü damıtılmış suyla doldurun ve mikrolitre şırıngayı asılı polietilen tüpe bağlayın.Mikroenjeksiyon denetleyicisini açın ve komut ekranına erişmek için tüm kanalları görüntüle düğmesine basın. Ardından, yapılandırmaya basın ve saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla hacim hedefini 9.800 nanolitre olarak ayarlayın. Ardından, demleme moduna geçmek için yöne basın ve mikrolitre şırıngaya bağlı polietilen tüpten 9.800 nanolitre damıtılmış su demlemek için çalıştır'a basın.Şimdi, enjektörü mineral yağı içeren bir şişeye yerleştirin, konfigürasyona basın ve hacim hedefini saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla 3.000 nanolitreye ayarlayın. 3.000 nanolitre mineral yağ çekmek için, çekme moduna geçmek için yöne basın ve ardından çalıştır'a basın. Polietilen tüpü mikrolitre şırınga iğnesinden sökün.Mikrolitre şırınga iğnesinden 3.000 nanolitre damıtılmış su tükürmek için, demleme moduna geçmek için yöne basın ve çalıştır'a basın. Daha sonra mikrolitre şırıngayı tekrar polietilen tüpe yerleştirin. Enjektörü SCFA'lar içeren bir şişeye yerleştirin.Konfigürasyona basın ve hacim hedefini saniyede 100 nanolitre teslimat oranıyla 9.500 nanolitreye ayarlayın. Para çekme moduna geçmek için yöne basarak 9.500 nanolitre SCFA'yı geri çekin ve çalıştır'a basın. SCFA'ların başarıyla aşılanıp aşılanmadığını doğrulamak için yağ SCFA'ları aşamasını etiketleyin.Konfigürasyona basın ve teslimat hızı saniyede 7 nanolitre olan istenen hacim hedefini ayarlayın. Demleme moduna geçmek için yöne basın. SCFA'ların enjeksiyonu için enjektörü kanüle sokmadan önce mikrolitre şırıngayı ticari enjektörün ön ucunda sıvı çıkana kadar ileri doğru inflendirmek için run tuşuna basın.Fareyi uyuşturduktan sonra, ticari enjektörü ticari kılavuz kanülüne yerleştirin. Fare anesteziden kurtulduktan sonra, yeni bir kafese yerleştirin ve 35 dakika boyunca serbestçe keşfetmesine izin verin. SCFA'ları, ilk 5 dakikada 2.100 nanolitrelik bir hedef hacim için saniyede 7 nanolitrelik bir dağıtım hızı kullanarak infüze edin.Ardından demleme moduna yön tuşuna basın ve çalıştır'a basın. Davranışsal testlerden sonra, ticari enjektörü ticari kılavuz kanülünden çıkarın. İnfüzyon bölgesini doğrulamak için nötr izleyicinin 2.100 nanolitresini saniyede 7 nanolitre verme oranıyla infüze edin.İnfüzyon bölgesindeki floresan sinyalini bir floresan mikroskobu kullanarak görüntüleyin. Hem ACSF hem de SCFA'larla aşılanmış fareler, toplam 35 dakika boyunca yeni bir kafeste seyahat ettiler. Yeni kafesteki lokomotor aktivitede SCFA'ların infüzyonu ile ACSF arasında fark gözlenmedi.Floresan boya, ticari bir kılavuz kanül ile aşılandığında lateral ventrikülde ve fare beyninin çevresindeki bölgelerde tespit edildi. Benzer şekilde, paslanmaz çelik kılavuz kanülünden infüzyon, lateral ventriküldeki ve fare beyninin çevresindeki bölgelerdeki sinyallerin algılanmasına yol açar. Bu prosedürü devre tabanlı sinir teknolojileri ile birleştirmek, bilim adamlarının beynin devre tabanlı kontrolü ve bağırsak metabolitlerinin katkıda bulunduğu davranış hakkında fikir edinmelerini sağlayacaktır.Bu teknik, araştırmacıların mikrobiyota ve metabolitlerin karmaşık bağırsak beyin eksenindeki rolünü keşfetmelerinin yolunu açmaktadır.

intracerebroventricular-delivery-gut-derived-microbial-metabolites

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Merkezi sinir sistemi içine yenidoğan farelerin beyin (intraserebroventriküler) ve (intravenöz) 2) sistemik tedavi ajanları tanıtmak içine 1): Bu makale, enjeksiyon iki çok farklı yöntemler göstermektedir.

Fare intraserebroventriküler sayesinde Terapötik Ajanlar teslimi (ICV) ve intravenöz (IV) Enjeksiyon

Bu video, yenidoğan fare beyninde murin sitomegalovirüs (MCMV) dağılımını incelemek için intraserebroventriküler enjeksiyon sürecini göstermektedir. Görünürlük için gelişmiş bir yeşil floresan proteini (EGFP) ifade etmek üzere tasarlanan MCMV, bir fare yavrusunun beyninin yan ventrikülüne enjekte edilir. Enjekte edilen virüs, beyin omurilik sıvısında dolaşır ve marjinal bölge, koroid pleksus ve subventriküler bölge dahil olmak üzere periventriküler bölgedeki hücreleri enfekte eder.

Yenidoğan Fare Beyninde Murin Sitomegalovirüs Dağılımını Analiz Etmek için İntraserebroventriküler Enjeksiyon

Kaynak: Liou, C. et al. Serbest Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2022).Bu video, beyin aracılı davranış üzerindeki etkilerini incelemek için serbestçe hareket eden bir farede kısa zincirli yağ asitlerinin (SCFA'lar) intrakraniyal enjeksiyonunu göstermektedir. Fare beynine implante edilen bir kılavuz kanüle bir enjektör kanülü yerleştirilir. İyileştikten sonra, fare yeni bir kafese alışır. Daha sonra SCFA'lar...

Bir fare modelinde bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin intrakraniyal enjeksiyonu

İnsan endoskopik kafa tabanı yeniden fare modeli nazal mukozal greft kullanılarak beyin ve burun arasındaki yarı geçirgen bir arayüz oluşturur geliştirilmiştir. Bu yöntem, araştırmacılar, sistemik olarak uygulandığında, aksi takdirde, kan-beyin bariyeri tarafından hariçtir yüksek moleküler ağırlıklı terapötik maddelerin merkezi sinir sistemi teslim çalışma sağlar.

Farelerde Beyin Doğrudan İlaç Teslim heterotopik mukozal aşılanması Prosedürü

Burada, viral partiküllerin veya floresan mikroboncukların yenidoğan fare beynine intraserebroventriküler ve intravasküler enjeksiyonu için basit bir yöntemi açıklıyoruz. Virüs ve nanopartiküllerin lokalizasyon paterni, mikroskobik değerlendirme veya in situ hibridizasyon ile tespit edilebilir.

Yenidoğan Beyin içine Viral Parçacıklar ve Floresan mikro boncuklar intraserebroventriküler ve İntravasküler Enjeksiyon

Bu çalışmada yenidoğan fareler için Probiyotikler gavaging kesin miktarda işlem ayrıntıları. Deneysel ayarı içerecek şekilde optimize edildi ama dozaj, yönetim yöntemleri ve bakterilerin bağırsak quantification probiyotik sınırlı değildir.

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

Buradaki amaç, kardiyovasküler hastalıklarda dysbiosis mekanizmalarını araştırmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektir. Bu yazıda, murin dışkı örneklerinin aseptik olarak nasıl toplanacağı ve nakledileceği, bağırsakların nasıl izole edileceği ve "Swiss-roll" yönteminin nasıl kullanılacağı, ardından gastrointestinal sistemdeki değişiklikleri sorgulamak için immün boyama teknikleri tartışılmaktadır.

Murin Fekal İzolasyonu ve Mikrobiyota Transplantasyonu

Vagus siniri tarafından kolaylaştırılan bağırsak-beyin iletişimi, gastrointestinal endokrin sistem ile beyin arasındaki iletişim için çok önemlidir. Bununla birlikte, intragastrik glukoz enjeksiyonunun kortikal aktiviteyi değiştirip değiştiremeyeceği hala anlaşılamamıştır. Burada, duodenuma glikoz enjeksiyonundan sonra kortikal aktivitedeki değişiklikleri gözlemlemek için kapsamlı bir protokol sunuyoruz.

Bağırsak-beyin Nöral İletişiminin Gerçek Zamanlı Analizi: Bağırsak Glukoz Stimülasyonuna Yanıt Olarak Korteks Çapında Kalsiyum Dinamiği

Protokol, bağırsak mikrobiyal metabolitlerinin üretimini ve emilimini değerlendirmek için portal venlerden ve farelerden inferior vena kava'dan sırayla kan toplamak için bir yöntem göstermektedir.

Farelerde Bağırsak Mikrobiyal Metabolitlerini Değerlendirmek için İnferior Vena Cava'dan Ardışık Kan Alımı ve Ardından Portal Ven

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Bu makale şunları açıklar: (1) test moleküllerinin DOL 6 kadar erken bir tarihte neonatal farelere oral gavaj iletimi; ve (2) DOL 10'dan südden kesilmeye (DOL 20) kadar yapılan biyopsilerde kolonik epitel bariyer fonksiyonunun ex vivo değerlendirilmesi, Ussing odalarıyla parasellüler ve transhücresel geçirgenlik değerlendirilerek değerlendirildi.

Neonatal fare yavrularında oral gavaj ve Ussing Chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi

Keşfedin, bağırsak mikrobiyal metabolitlerinin serbestçe hareket eden farelerdeki beyin fonksiyonu ve davranış üzerindeki etkilerini intraserebroventriküler verilim yöntemiyle nasıl incelendiğini. Bu doğrulanmış teknik, bağırsak-beyin ekseni araştırmalarına ışık tutar.

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Verilmesi

Daha fazla video keşfet