Name: Sıçan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif Tedavinin X-Ray Görselleştirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 57 s
Description: Keşfedin meme kanserini önlemek için sıçanlarda intraduktal etanol bazlı ablatif tedavi yöntemini. Bu teknik X-Ray görüntüleme ile minimal yan etki sağlar ve meme epitel hücrelerini hedefler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, kısmen, LFS'ye Ulusal Kanser Enstitüsü R21 CA226579 ve R01 CA258314 hibeleri ve EMS'ye Ulusal Biyomedikal Görüntüleme ve Biyomühendislik Enstitüsü R01 EB029418 hibesi tarafından desteklenmiştir. MSU Institute for Quantitative (IQ) Health Science and Engineering Imaging Core tesisine görüntüleme sistemlerini ve teknik uzmanlıklarını kullandıkları için minnettarız. Dr. Danielle Ferguson'a videonun içeriğini ve hayvan refahı kurallarına uyulması için rakamları incelediği için teşekkür ederiz.

Açıklanan tüm deneyler, Michigan State Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanan protokoller kapsamında gerçekleştirilmiştir.
1. Genişletilmiş anti-enflamatuar tedavi
<ol><li>Sukraloz jel kaplarını karprofenin oral dozu olarak hazırlayın. Sıçanlara% 70 EtOH ID enjeksiyonu almadan 2 gün öncesinden işlemden 7 gün sonrasına kadar bu anti-enflamatuar tedaviyi sağlayın.</li>
	<li>Bardağa enjeksiyon için steril PBS'de çalışan bir karprofen çözeltisini seyreltin. 50 mg / mL stok çözeltisinden,% 1 v / v steril mavi gıda boyası ile renklendirilmiş seyreltilmiş bir 2 mg / mL çözelti hazırlayın ve her bir kaba 500 μL enjekte edin. Boyanın eklenmesi, ilacın fincanın sukralozu içinde tamamen karıştırılmasının görselleştirilmesine yardımcı olur.</li>
	<li>Bardağı karprofen ilavesi için hazırlamak için üreticinin tavsiyesine uyun. Satıcı tarafından aksi belirtilmedikçe, bardağı 60 °C'de bir su banyosunda 15 dakika ısıtın ve kontaminasyon riskini azaltmak için çıkarıldıktan sonra kurutun.<ol><li>Sukraloz kabın kapağını alanda% 70 EtOH ile silin ve karprofen çalışma çözeltisini içeren şırınganın iğnesini sürün. Uygun hacmi (500 μL) dağıtın.</li>
		<li>Delinmeyi bir etiketle örtün. Bardağı enerjik olarak 15 sn sallayın ve sonra bu bardağı 15 sn daha bir girdaba yerleştirin. Daha sonra kullanmak üzere saklamadan önce homojen ve eksiksiz karıştırmayı görsel olarak değerlendirin. Koyu mavi bir rengin varlığını arayın. NOT: Bardakların oda sıcaklığına gelmesine izin verin. İstenirse bardakları oda sıcaklığında saklayın, ancak üreticinin ilaç etkinliği rehberliğine dikkat edin. Alternatif olarak, bardakları 4 ° C'de saklayın ve bir ay içinde kullanın. Çıkartmayı tarihlendirmek, kalemin veya keskin bir işaretleyicinin kapağı delme riski olmadan enjeksiyon tarihini takip etmek için iyi bir uygulamadır.</li>
	</ol></li>
	<li>Kullanmadan hemen önce, bardağın dışını %70 EtOH ile silin. Bardağı hayvan kafesine yerleştirmeden önce kapağı çıkarın. Bardakları her gün veya boşken değiştirin. Yeterli dozdan emin olmak için günlük jel seviyesini kontrol edin. Bir fincan, 2 güne kadar iki sıçana kadar karprofen tedarik edebilir; Bununla birlikte, sıçanlar tüm bardağı daha erken tüketebilir.</li>
</ol>2. Preoperatif hazırlık
NOT: Hayvan hazırlama adımının ID enjeksiyon prosedüründen 2-3 gün önce geldiğinden emin olun.
<ol><li>Sıçanı anestezik hale getirmek için izofluran buharlaştırıcısını (% 2 -% 3 izofluran, 1.5 L / dak oksijen) açın. Hayvanı bir ısıtma pedi üzerinde bir burun konisine taşıyın. Sıçana göz yağlayıcısı uygulayın ve ardından hayvanı sırtına yerleştirin. Anestezik düzlemin izofluranın% 1-3'ünde tutulmasını sağlamak için hayvanın solunumunu dikkatlice izleyin. NOT: Epilasyondan önce fazla kürkü çıkarmak için elektrikli tıraş bıçağı kullanılabilir. Jilet ile herhangi bir meme ucuna zarar vermemek için çok dikkatli olunmalıdır. Bu nedenle, bu adım atlanabilir. Sıçanlar tüy dökücü kremlere farelerden daha hassastır, bu nedenle fazla kremin çıkarılması çok önemlidir. Etanol içeren bir çözeltiyi, epilasyondan zaten aşınma mevcut olan bir alana enjekte etmekten kaçının. Bazı kremler, aşınma olasılığını en aza indirmeye yardımcı olabilecek aloe ve lanolin gibi bileşikler eklemiştir.</li>
	<li>Reçetesiz satılan tüy dökücü kremi meme ucu bölgesine yaymak için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Kremayı 10-30 sn boyunca bölgeye sürmek için aplikatörü kullanın. Kürkün hızla gevşeyip gevşemediğini kontrol edin.<ol><li>Kremi mümkün olan en kısa süre boyunca sıçan üzerinde bırakın ve cildin yanmasını önlemek için tamamen çıkarın. Sıçanlar bu prosedüre farelerden daha hassastır.</li>
	</ol></li>
	<li>10-30 s uygulamadan sonra, ılık suyla ıslak gazlı bez ve kremayı ve gevşemiş kürkü hayvandan durulamak için kullanın. Taze nemlendirilmiş gazlı bezle bölgenin en az üç durulamasını gerçekleştirin ve son durulamadan sonra kuru gazlı bezle kurulayın. İyi görünürlüğü ve kürkün çıkarıldığı meme ucu bölgesine erişimi onaylayın. Gerekirse tüy dökücü prosedürü tekrarlayın.</li>
	<li>Sıçanı bir ısıtma yastığı üzerindeki temiz bir kafese yerleştirin ve iyileşmesine izin verin. Kalıcı kafesine geri getirmeden önce anesteziden tamamen kurtulduğundan emin olmak için sıçanı kontrol edin.</li>
	<li>Anti-enflamatuar tedavi için kafese bir karprofen dozunda (1 mg / bardak) sukraloz jel kabı yerleştirin. Jel tüketimini günlük olarak kontrol edin ve uygun şekilde taze bir fincan ile değiştirin. Bardağı 2 günden fazla bırakmayın. Tipik olarak, bardakların 1 gün sonra değiştirilmesi gerekecektir.</li>
</ol>3. İntraduktal enjeksiyon
<ol><li>TaOx stok çözeltisini, steril fosfat tamponlu salin (PBS) kullanarak tarif edildiği gibi19'da 333,3 mM'de hazırlayın. Toz tamamen çözünmezse çözeltiyi ısıtın. Yavaşça karıştırın. Kabarcık oluşumunu önlemek için vorteks yapmayın veya kuvvetlice sallamayın.</li>
	<li>Son %70 EtOH 100 mM/TaO x çözeltisi için üç parça 333,3 mM TaOx ile yedi parça %100 EtOH karıştırın. İsteğe bağlı olarak, ablatif çözeltinin lokal tutulmasını en üst düzeye çıkarmak için jelleştirici ajan olarak uygun miktarda% 0.5 -% 1.5 etil selüloz (EC) ekleyin. İnfüzyon sırasında duktal ağaca yapılan teslimatın görsel olarak incelenmesi için ablatif çözeltiye% 1 v / v mavi gıda boyası ekleyin.</li>
	<li>Deneysel ihtiyaçlara uygun bir cilt hazırlayın. Bez çiftleri 1 (servikal) ve 6 (inguinal) çözeltinin 100 μL'sine kadar doldurulabilirken, diğer tüm çiftler 300 μL'ye kadar doldurulabilir.</li>
	<li>Sıçanı adım 2.1'de olduğu gibi anestezi altına alın ve tamamen anestezi uygulandıktan sonra sıçanı burun konisine taşıyın. Her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın ve ardından hayvanı sırtına yerleştirin. İstenirse, enjekte edilecek meme uçlarının yakınındaki bandı kullanarak stereoskobun altındaki sıçanı sabitleyin. Sıçanın ağırlığı genellikle bantlanmadan önemli ölçüde hareket etmesini önlemek için yeterlidir.</li>
	<li>Meme uçlarını enjeksiyona hazırlamak için, mümkünse meme ucu açıklığını ince sivri forsepslerle kaplayan ölü derileri çıkarın. Sıçanlar genellikle meme ucu açıklığından çıkıntı yapan ve çıkarılmadığı takdirde meme ucunun başarılı bir şekilde kanülasyonunu önleyebilen bir tıpaya sahiptir. NOT: Sıçanlarda kullanılan ablatif çözeltilerin daha büyük enjeksiyon hacimlerinin, enjeksiyon bölgelerinin yakınında yüzeysel cilt yaralarına neden olma olasılığının daha yüksek olabileceğini belirtmek önemlidir. Bu nedenle, diğer her meme ucunu tek bir seansta enjekte etmek, bitişik meme uçlarını enjekte etmekten daha az zararlı ve tahriş edicidir. Sıçanların enjeksiyon sonrası 7 gün boyunca herhangi bir sıyrık için izlenmesi, hayvanın çizilmesinden kaynaklanan ciddi sağlık etkilerinin olmamasına ve kafes tabanı kalıntıları ile kontaminasyondan kaynaklanan enfeksiyon olasılığının ortaya çıkmasına yardımcı olur. Üçlü antibiyotik merhem veya klorheksidin çözeltisi ile yıkamalar, oluşabilecek herhangi bir yaralanma enfeksiyonu belirtisini tedavi etmek için kullanılabilir (Tablo 1).</li>
	<li>101-301 μL ablatif çözeltiyi aspire etmek için 33 G iğne ile 500 μL'lik bir şırınga kullanın. Kanüllenmiş iğneyi çıkarırken olası küçük sızıntılar için çözeltinin fazladan 1 μL'sini aspire edin. NOT: Bunlar, duktal ağaç (lar) ı tamamen doldurmayı amaçlayan hacimler için önerilerdir: servikal ve kasık bezlerinde 100 μL'ye kadar ve diğer bezlerde 300 μL'ye kadar. Diğer uygulamalar için, daha küçük veya daha büyük birimler kullanmak uygun olabilir.</li>
	<li>Meme ucunu nazikçe tutmak için bir cımbız kullanın ve iğneyi meme ucu açıklığına kanüle edin. Eğim meme ucunun içine tamamen girene kadar iğneyi yavaşça sokmaya devam edin. İğneyi meme ucuna yerleştirmek için, iğneyi meme ucuna doğru itmek yerine meme ucunu iğneye doğru yukarı doğru getirin. (Tablo 1). Meme ucu açıklığının yolunu takip etmeye özen gösterin. NOT: Sıçan meme uçlarının manipüle edilmesi ve başarılı bir şekilde kanüle edilmesi, daha büyük boyut nedeniyle farelerdekilere göre genellikle çok daha kolaydır. Bununla birlikte, meme ucu açıklığını çevreleyen artan yağ miktarı, iğnenin ana kanaldan sapması durumunda yanlışlıkla yağ yastığının enjekte edilmesini de daha olası kılar.</li>
	<li>İğne eğimi tamamen yerleştirildikten sonra, çözeltiyi sıçanlarda yaklaşık 100 μL / dak sabit bir hızda yavaşça infüze edin. İnfüzyon hızındaki ani değişiklikler duktal ağaca patlayabilir veya zarar verebilir. Forseps kullanarak iğneyi kanüllenmiş ağaçtan çıkarmadan önce infüzyonun bitiminden sonra 30 s bekleyin; bu, enjekte edilen hacmin duktal ağaç içinde kalmasını sağlar (Şekil 2) ve sızıntı olasılığını azaltır.</li>
	<li>Görüntülerde yabancı kontrast çözeltisini önlemek için dökülen solüsyonu nemlendirilmiş gazlı bez veya EtOH mendil ile temizleyin.</li>
	<li>ID enjeksiyon solüsyonlarında etanol bulunuyorsa, alkol zehirlenmesinin etkilerini azaltmak için intraperitoneal olarak% 5 sakkaroz (10 mL / kg) içeren PBS enjekte edin. Bu doz prosedürün başında ve sonunda verilebilir.</li>
</ol>4. Mikro-BT görüntüleme
<ol><li>İstenilen tüm bezler enjekte edildikten sonra, hayvanı hızlı bir şekilde mikro-BT sistemine taşıyın ve entegre izofluran buharlaştırıcıyı kullanarak anesteziyi sürdürmeye devam edin.</li>
	<li>Hayvanın omurgasını düzeltin ve her bir arka bacağı uzatılmış bir pozisyonda bantlayın, böylece hayvanın bacak kemikleri ilgilenilen alt bezlerden daha uzakta olacak ve taranan görüntüdeki ilgi alanıyla örtüşmeyecektir.</li>
	<li>Alt bezleri tararsanız solunum artefaktlarını en aza indirmek için karın boyunca bantlayın. NOT: Hayvanlar, sıçanlar için uygun kabul edilebilir bir ömür boyu radyasyon dozunun belirlenmesine özen gösterilmesi ve kümülatif dozun bu seviyeyi aşmaması için özen gösterilmesi durumunda farklı tarama parametreleri (örneğin, yüksek çözünürlüklü, uzunlamasına taramalar) ile görüntülenebilir. Radyasyona maruz kalma, tarama yapmadan floroskopi fotoğrafları ve videoları elde edilerek daha da azaltılabilir (Şekil 2).</li>
	<li>Aşağıdaki tarama parametrelerini kullanarak sıçan duktal ağacının TaOx görüntülemesini iyi çözünürlükte ve tekrarlanan standart (2 dakika) edinme taramaları için fırsatla gerçekleştirin: 90 kVp / 88 μA; görüş alanı (FOV), 72 mm; dilim sayısı, 512; dilim kalınlığı, 72 μm; voksel çözünürlük, 72 μm3. Daha uzun süreler (4-14 dakika) için yüksek çözünürlüklü taramalar, aynı parametreler kullanılarak uzunlamasına taranmayacak hayvanlarda da elde edilebilir.</li>
	<li>Veri toplandıktan sonra, sıçanı anestezi konisinden dikkatlice alın ve bir ısıtma yastığı üzerinde yeni bir temiz kafese yerleştirin. Kalıcı kafesine geri getirmeden önce anesteziden tamamen iyileştiğinden emin olmak için sıçanı kontrol edin. Karprofen içeren sukraloz kabını yerleştirin ve hayvanların önümüzdeki 7 gün boyunca anti-enflamatuar tedavi almaya devam etmesini sağlamak için adım 2.5'te açıklandığı gibi uygun şekilde değiştirin.</li>
	<li>Herhangi bir kontrast sızıntısını, yalnızca kısmi doldurmayı veya aşırı doldurmayı daha iyi anlamak için taranan görüntüleri mikro-CT yazılımı içinde hızlı yorumlamalara dönüştürün (Şekil 2).</li>
	<li>İstenirse yayın için resmi görüntü işleme veya taramaların ayrıntılı analizini gerçekleştirmek için bir sonraki bölüme geçin (Şekil 3).</li>
</ol>5. Görüntü analizi
<ol><li>Doldurulmuş duktal ağacın görüntülerini üretmek için özel yazılım paketleri kullanın. NOT: Enjekte edilen duktal ağacın en iyi şekilde yorumlanması için meme yağ yastığını segmentlere ayırmak en iyisidir. Spline, bu segmentasyonu elde etmek için yağ yastığının karanlık sınırlarını hayvanın tam kalınlığı boyunca izler.</li>
	<li>Yağ yastığını segmentlere ayırmak için (farelerin aksine, bu bölmenin sınırları, benzer Hounsfield birimleri nedeniyle periton boşluğundan, femur kaslarından ve deriden kolayca ayırt edilemez), ilgilenilen duktal ağacın bulunduğu yerde, manuel menüden "spline trace" seçeneğini seçmek, bir render oluşturmanın ilk adımıdır.</li>
	<li>Spline, yağ yastığı taslağını her üç dilimde bir izler. Yarı otomatik menüden Nesneleri Yay seçeneğine tıklayın. Bu, tüm dilimleri tek bir bölümlenmiş ilgili nesneye yayacak ve bağlayacaktır. NOT: Bölümlenmiş bölgedeki eşiğin değiştirilmesi, sinyalin yalnızca belirli bir Hounsfield birimi aralığında (HU) görselleştirilmesine izin verir; diğer kontrast maddeler veya görüntüleme parametreleri için bu aralığın ayarlanması gerekebilir. Bir yazılım paketi veya Yapay Zeka analizi, duktal ağacın ne kadar doldurulduğunu göstermek için başka ölçümler ve görüntüler yapmak için kullanılabilir.</li>
	<li>Eşik ses düzeyi sekmesinin altındaki yarı otomatik menüde HU değerlerini düşük nokta 300 ve yüksek nokta 3.000 olarak ayarlayın. Bu, yalnızca duktal ağaç içindeki kontrastı (TaOx) görüntüleyen bir yorumlamanın oluşturulmasına izin verir.</li>
	<li>"Görünüm" düğmesini kullanarak yorumlamayı birincil olarak ayarlayın. Bu, ekranı yalnızca duktal ağacın 3B yorumlamasını gösterecek şekilde değiştirir. NOT: Daha fazla analiz için duktal ağacın yeniden yapılandırılmasını gerçekleştirin.</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Burada gösterildiği gibi,% 70 EtOH'nin ID verilmesi, farelerde çevredeki stroma ve vaskülatürün sınırlı kollateral hasarı olan meme epitel hücrelerini tercihen ablateeder 4. Duktal ağacın lokal ablasyonu, fare modelleri 4'te tümör oluşumunu önlemedeetkilidir. Burada, bu ablatif prosedürün sıçanlara kadar ölçeklendirilebileceğini gösteriyoruz.
Bu, bu ablatif prosedürün, yüksek riskli bireylerde meme kanserinin birincil önlenmesi için profilaktik mastektomiye alternatif bir müdahale olarak çevrilmesine giden yolda bir sonraki adımdır. TaOx nanopartiküllerinin ablatif çözeltiye bir X-ışını kontrast maddesi olarak eklenmesi, prosedürün duktal ağacı tamamen doldurmada başarılı olup olmadığı belirlenebildiğinden, çözeltinin tümör oluşumunu önlemedeki etkinliğini değerlendirmeyi sağlar. Enjekte edilen meme bezini görselleştirmek için floroskopi kullanmak, bu kimlik prosedürünü yönlendirmek için klinikte muhtemelen ne yapılacağını yansıtır. Çözeltinin duktal ağacı ne kadar doldurduğuna ve infüzyonun ne zaman durdurulacağına dair görüntü rehberliği, her bir duktal ağacın maksimum doldurulmasını sağlamak için klinik uygulamanın önemli bir yönü olacaktır. Sorun giderme ve yararlı ipuçları Tablo 1'de listelenmiştir. Bu ablatif prosedürün etkinliği, infüze edilmiş çözeltinin, hücre öldürme oranını en üst düzeye çıkarmak için tüm epitel hücreleriyle doğrudan temas kurmasını gerektirir. Bir veya daha fazla ağaç içindeki yedek epitel hücreleri sonunda BC gelişimi için bir kaynak olarak hizmet edebilir. Diğer gruplar, viral parçacıkların (örneğin, Cre / LoxP ve / veya Cas9 / CRISPR sistemlerinin bileşenleri), hormonların ve hormon antagonistlerinin (örneğin, prolaktin, fulvestrant), kemoterapötik ajanların (örneğin, sisplatin), siRNA'ların ve / veya antikorların veya diğer hedefleme ajanlarınınfarelerde ID dağıtımını bildirmiştir 4,19,21,35,36,37,38,39,40, 41,42,43,44,45, sıçanlar 21,33,46,47,48 ve/veya tavşanlar 18,49,50,51,52,53 . Kemoterapinin lokal olarak verilmesi için insan göğsü başına sekiz adede kadar duktal ağacın başarılı bir şekilde kanülasyonu, bağımsız klinik çalışmalarda 47,54,55 olarak bildirilmiştir. Tümör önlemeyi amaçlayan veya lokal tedaviye yönelik bu diğer çözümlerin infüzyonu için görüntü rehberliği benzer şekilde etkinliklerini en üst düzeye çıkaracaktır.
Bu prosedürün fareden sıçan duktal ağacına ölçeklenebilirliği ve iyileştirilmesi burada gösterilmiştir. Murin 4,19 ve sıçan (yayınlanmamış veriler) duktal ağacındaki TaO x nanopartikül, FDA onaylı iyot içeren X-ışını kontrast maddelerini aşan yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar. Benzer şekilde,40,41 farelerde veya TaO x ile karşılaştırılabilir çözünürlük sağlayabilen diğer hayvan modelleri18'de diğer duktal ağaç görüntüleme yaklaşımlarının farkındadeğiliz. Klinik çeviri ile ilgili olarak, EC'nin bu orta büyüklükteki sıçan modellerinde jelleştirici etkisinin, kollateral doku hasarını en aza indirmek için formülasyon iyileştirmesini sağlayan bir olanak sağlamasıdır. Bu ablatif kimlik prosedürünü BC'yi önleme kabiliyeti açısından değerlendirmeye devam ettikçe, kimyasal olarak indüklenen ve BC'nin diğer sıçan modellerinde ID verilmesinden sonra görüntüleme ile sağlanan ek bilgiler aracılığıyla BC'nin hangi bezlerden geliştiğini daha kesin olarak belirleyebileceğiz. Bu veriler, bu prosedürün güvenliğini belirleyecek ve kısmi veya başarısız tedavi edilen duktal ağaçların yüksek riskli bir kadında BC geliştirmeye daha yatkın olup olmadığına dair endişeleri veya eksiklikleri belirleyecektir.

ABD'deki kadınlar için1, meme kanseri (BC) en çok teşhis edilen kanser türü olmaya devam etmektedir ve akciğer kanseri dışındaki diğer kanser türlerinden daha fazla ölüme neden olmaktadır. 2022 için projeksiyonlar, 51.400 kadına in situ karsinom teşhisi konacağını ve 287.850 kadına invaziv karsinom teşhisi konacağını ve 43.600 kadının BC1'den öleceğini tahmin ediyor. BC ile ilişkili prevalansı ve mortalitesine rağmen, birincil önleme federal kurumlar tarafından önceliklendirilmediğinden, yeni müdahaleler üzerine birincil önleme ve translasyonel araştırmalar için çok az seçenek vardır2. Profilaktik mastektomi primer korunmada en etkili girişimdir. Bununla birlikte, bu prosedür sadece yüksek riskli bireyler için önerilir, çünkü yaşamı değiştiren sonuçları olan büyük bir ameliyattır3. Bu ameliyat, karsinogenezin geliştiği meme epitel hücrelerinin ve normal çevre dokunun tamamen çıkarılmasını içerir. Bireyler genellikle fiziksel, psikolojik ve sosyal stresin olumsuz etkisi nedeniyle bu prosedürü birincil müdahalenin ilk seçeneği olarak kullanmaktan caydırılırlar. Bu nedenlerden dolayı, bazı yüksek riskli bireyler bile bu prosedürden geçmemeyi tercih etmekte ve bunun yerine dikkatli bekleme veya benzer gözetim stratejilerini seçmektedir3. Önceki yayında,% 70 etanolün (EtOH) doğrudan fare modellerinin duktal ağacına verilmesi, bitişik normal dokuya sınırlı hasar veren meme epitel hücrelerinin kimyasal olarak ablatılmasında ve meme tümörü oluşumunu önlemede etkili olmuştur4. EtOH, bazı kanserlerin lokal tedavisinde ablatif bir ajan veya arteriyovenöz şişlik ve malformasyonların lokal tedavisi için sklerozan ajan olarak birçok klinik uygulamada kullanılmaktadır 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . EtOH'nin düşük toksisitesi ve güvenlik profili iyi bilinmektedir, çünkü bazı prosedürlerdeseans başına 5,10 mL'ye kadar% 95 EtOH uygulanabilir.
BC'nin geliştiği meme epitel hücrelerinin tamamen çıkarılması, hem profilaktik mastektominin hem de ablatif bir çözeltinin lokal olarak verilmesinin en önemli bileşenidir. Bu nedenle, ablatif çözeltinin tüm meme epitel hücreleri ile doğrudan temas ettiğini garanti etmek için tam duktal ağaç dolgusunun doğrulanması gereklidir. Duktal ağaç (lar) içinde bir çözelti sunmak ve görüntü rehberliğinde floroskopi veya duktografi ile görselleştirmek, halihazırda var olan klinik prosedürlerle mümkündür15,16,17. Bu nedenle, bu prosedürün klinik çalışmalarda kolayca uygulanması ve değerlendirilmesi mümkün olacaktır. İntraduktal (ID) ablasyonun etkinliğini ve translasyonel fizibilitesini birincil önleme için yeni bir müdahale olarak belirlemede önemli bir adım, duktal ağaç mimarisinin artan büyüklüğü ve karmaşıklığı olan hayvan modellerinde bu X-ışını görselleştirme yaklaşımının fizibilitesini göstermek olacaktır 4,18,19. Bu ablatif prosedürü fare20'den sıçan modellerine ölçeklendiren bir protokol burada açıklanmaktadır. Fare ve sıçan duktal ağaçları benzer bir doğrusal yapıya ve dallanma düzenine sahipken, sıçan duktal ağacı orantılı olarak daha büyüktür ve çok daha yoğun bir stroma ile çevrilidir. Laboratuvarda, bir sıçandaki her meme bezini, kontrast madde içeren ablatif bir çözelti ile bir dizi haftalık seans boyunca başarılı bir şekilde enjekte etmek için bir yöntem uyguladık. Hayvanların EtOH'nin minimum yan etkisine sahip olmasını sağlamak için seans aralığı gereklidir (Şekil 1 ve Şekil 2). Prosedür, ablatif çözeltinin doğrudan 33 G'lik bir iğne ile izofluran-anestezi uygulanmış bir sıçanın meme ucu açıklığına enjekte edilmesini içerir. Prosedürün bazı önemli iyileştirmeleri, genişletilmiş anti-enflamatuar tedavinin kullanılmasını, duktal ağaç başına önerilen21'den daha yüksek hacimlerin enjeksiyonunu ve sıvı ve gazlar için gaz geçirmez şırıngaları içerir. 5 mg / kg karprofen (bir NSAID) ile ID enjeksiyonlarından 48 saat öncesinden 1 hafta sonrasına kadar olan tedavi süresi, klinikte venöz malformasyonun sklerozan tedavisi için kullanılan anti-enflamatuar protokolle karşılaştırılabilir. Tedavi sistemik anestezi altındaki hastalarda gerçekleştirilir ve bunu 2 gün boyunca NSAID'ler gibi anti-enflamatuar ilaçlar izler. Anti-enflamatuar tedavi, lokal inflamasyonu ve olası ağrıyı azaltmak için birkaç gün daha uzatılabilir13. Farelerde olduğu gibi 20,% 5'lik bir sakkaroz çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu, sıçanlarda alkol zehirlenmesinin kısa vadeli etkisini hafifletir. Sıçanlar, bu sakkaroz çözeltisi ile uygulandığında tek bir seansta 1 mL'ye kadar% 70 EtOH (4 kanala kadar; kanda 0.2 g / dL EtOH içeriği) enjekte edilebilir; hayvanlar ID enjeksiyonlarından sonra 4 saat içinde tamamen iyileşir. 4'ten fazla bez ve / veya daha yüksek EtOH konsantrasyonları enjekte ederken yeterli iyileşme süresine izin vermek için sıralı seanslar gerçekleştiriyoruz. Kadınlarda alkol zehirlenmesi, her iki memedeki tüm duktal ağaçların ID enjeksiyonu olarak çok daha az olası olacaktır, kanal başına 16,17 ve 2 mL kanalbaşına 16,17 ve 2 mL,% 70 EtOH ile kanda 0.1 g / dL'den daha az EtOH içeriğine neden olur ve hafif bozulmaya neden olabilir.
X-ışını görüntüleme, her bir bezde intraduktal doğumun ne kadar başarılı olduğunun ve tüm duktal ağacın doldurulup doldurulmadığının belirlenmesini sağlar (Şekil 1, Şekil 2, Şekil 3). Mikro-BT taramasına ve/veya DICOM dosya verilerinin 3D rekonstrüksiyonuna hazırlık olarak gerçek zamanlı floroskopi görüntüleme, duktal ağaca çözelti iletiminin derecesini ve stroma içine herhangi bir sızıntıyı değerlendirmek için kullanılabilir. Floroskopi kullanımı, hayvana uygulanan genel radyasyon dozunu sınırlamaya yardımcı olabilir. Floroskopi tekniği, bu ablatif tedavinin görüntü rehberliği için amaçlanan klinik uygulamaya daha yakındır. FDA onaylı iyot içeren İzovue'nun tantal oksit (TaOx) nanopartikülleri ile karşılaştırılması, ablatif çözelti 4,19'un faydasını daha da hassaslaştırmak için gerçekleştirilmiştir. TaOx'in, farelerde duktal ağacın ilk dolgusunun görselleştirilmesi için Iovue'den daha üstün bir mikro-BT kontrast maddesi olduğu bulunmuştur 4,19. Burada, TaOx'un sıçan duktal ağacının ilk dolgusunu görselleştirmek için uygun bir kontrast madde olduğunu gösteriyoruz (Şekil 2 ve Şekil 3). Hem translasyonel araştırmalarda hem de klinik uygulama uygulamalarında, jelleştirici ajan etil selüloz (EC), amaçlanan hedef bölgelerden difüzyonu en aza indirmek için EtOH çözeltisine eklenmiştir 13,14,24,25,26,27,28,29. Çalışmalar, EtOH içeren ablatif çözeltilere% 1.5'e kadar EC ilavesinin TaOx tabanlı görüntüleme ile uyumlu olduğunu göstermiştir (Şekil 3). Bunlar ve ablatif çözeltiye yönelik daha fazla iyileştirme, bu görüntü rehberliğindeki prosedürün kliniğe hazır çevirisine yardımcı olabilir.

<table><tbody><tr><td>AnalyzeDirect&nbsp; v12.0</td><td>Kaliper</td><td>n/a</td><td>Mikro-CT görüntü işleme için</td></tr><tr><td>Carprieve, Carprofen 50 mg/mL</td><td>Allivet</td><td>50647</td><td>Anti-inflamatuar tedavi için</td></tr><tr><td>Etil selüloz</td><td>Acros Organics</td><td>9004-57-3</td><td>İntraductal enjeksiyon için</td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma</td><td>E2129-50G</td><td>Enjeksiyon görselleştirme için</td></tr><tr><td>Sıcak su banyo</td><td>Toolots</td><td>Yidu_HH-S2</td><td>Carprofen bardakları hazırlamak için</td></tr><tr><td>MediGel Sukraloz Bardakları</td><td>ClearH2O</td><td>74-02-5022</td><td>Carprofen teslimatı için</td></tr><tr><td>Model 1750 TTL, PTFE Luer Kilit Şırıngası, 500&mu; L</td><td>Hamilton</td><td>81220</td><td>İntraductal enjeksiyon için</td></tr><tr><td>Photoshop 2021</td><td>Adobe</td><td>n/a</td><td>Görüntü işleme için</td></tr><tr><td>Quantum GX2 microCT Görüntüleme Sistemi</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>CLS149276</td><td>Mikro-CT görüntü alımı için</td></tr><tr><td>Metal Hub İğnesi, 33 gauge, özel (30 & deg; eğim açısı, 0,4 inç, nokta stili 4)</td> <td>Hamilton</td><td>7747-01</td><td>İntraduktal enjeksiyon için</td></tr><tr>Stereo Mikroskop <td>İntraductal enjeksiyon için</td><td>SZM Serisi</td><td>AmScope</td><td>SM-4TPZ-144</td></tr><tr><td></td><td>Enjeksiyon görselleştirme</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>için steril mavi gıda boyası McCormick 930641Steril fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>14190250</td><td>Çözelti hazırlama için</td></tr><tr><td>Çıkartmalar</td><td>DOT Scientific</td><td>DOTSCI-C50</td><td>Carprofen bardakları hazırlamak için</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Calbiochem</td><td>8550-5KG</td><td>İntraductal enjeksiyon</td></tr><tr><td>Şırıngaları</td> için <td>Fisher</td><td>14-826-79</td><td>Carprofen kapları hazırlamak için</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>10153-834</td><td>Carprofen kapları hazırlamak için</td></tr><tr><td>Isıtma pompası/pedi (ler)</td><td>Braintree Scientific</td><td>HTP-1500 120V; AP-R 26E</td><td>İntraduktal enjeksiyon/preoperatif hazırlık için</td></tr></tbody></table>

sıçan modellerinde meme kanserinin Önlenmesi için İntraduktal etanol bazlı ablatif tedavinin x-ray görselleştirmesi

X-Ray Visualization of Intraductal Ethanol-Based Ablative Treatment for Prevention of Breast Cancer in Rat Models

Meme kanserinin önlenmesi için hala sınırlı sayıda birincil müdahale vardır. Meme kanseri gelişme riski yüksek olan kadınlar için en etkili müdahale profilaktik mastektomidir. Bu, meme kanserine yol açabilecek meme epitel hücrelerinin çevre doku ile birlikte tamamen çıkarıldığı sert bir cerrahi prosedürdür. Bu protokolün amacı, meme kanserinin önlenmesi için yeni bir birincil müdahale haline gelebilecek minimal invaziv bir intraduktal prosedürün fizibilitesini göstermektir. Bu lokal prosedür, meme epitel hücrelerini malign hale gelmeden önce tercihen ablate edecektir. Meme kanserinin kemirgen modellerinde bu epitel hücrelerine doğrudan çözüm sunmak için intraduktal yöntemler Michigan State Üniversitesi'nde ve başka yerlerde geliştirilmiştir. Sıçan meme bezi, insan göğsüne kıyasla daha basit ve daha doğrusal bir mimariye sahip tek bir duktal ağaçtan oluşur. Bununla birlikte, kimyasal olarak indüklenen meme kanseri sıçan modelleri, fare modellerinden insanlara yeni önleyici müdahalelerin ve ölçeklenebilirliğin kavram kanıtı çalışmaları için değerli araçlar sunmaktadır. Burada, X-ışını kontrast maddesi olarak tantal oksit nanopartikülleri ve jelleştirici ajan olarak etil selüloz içeren etanol bazlı bir ablatif çözeltinin sıçan meme duktal ağacına intraduktal verilmesi için bir prosedür açıklanmaktadır. Sulu reaktiflerin (örneğin, sitotoksik bileşikler, siRNA'lar, AdCre) intraduktal enjeksiyon yoluyla verilmesi daha önce fare ve sıçan modellerinde tanımlanmıştır. Bu protokol tanımı, ablatif bir çözelti sunmak, ablatif çözeltinin lokal ve sistemik yan etkilerini en aza indirmek için formülasyon düşüncesi ve duktal ağaç dolgusunun in vivo değerlendirmesi için X-ışını görüntülemesi ile ilgili metodolojik değişiklikleri ve adımları vurgulamaktadır. Floroskopi ve mikro-BT teknikleri, tantal içeren kontrast madde ile uyumluluğu sayesinde ablatif solüsyon sunumunun başarısını ve duktal ağaç dolgusunun derecesini belirlemeyi sağlar.

Bir dişi sıçanın 12 meme bezinin her biri, meme ucu deliğinde açılan tek bir duktal ağaç içerir. Fare ve sıçan arasındaki boyut farklılıklarına rağmen, meme bezlerinin gelişimsel zamanlaması ve bu hayvanların yetişkinliğe ulaştığı zaman çok benzer30,31'dir. Sıçanlarda meme bezi gelişiminin kilit aşamalarının her iki kemirgen türünü de temsil eden kısa bir açıklaması sağlanmaktadır. Terminal uç tomurcukları (TEB'ler),30,31 duktal dallanmayı yönlendiren uzamış duktal ağacın uçlarındaki yüksek proliferatif yapılardır. TEB'lerin proliferasyon ve yoğunluğunun zirvesi, pubertal gelişimde duktal ağacın uzama fazı sırasında 3-4 haftalıkken ortaya çıkar30. 9-10 haftalıkken, duktal ağaç yağ pedi30'un tüm uzunluğunu kaplayacak şekilde büyüdüğü için az sayıda TEB kalmıştır. Bundan sonra, duktal ağacın büyümesi ve genişlemesi, yağ yastığının ve hayvanın32'si ile orantılıdır. İnsan göğsündeki terminal duktal lobüler birimler (TDLU'lar), kemirgenlerdeki TEB'lere benzer bir rol oynar. TDLU'lar karsinogenezin başlaması ve M.Ö. 33,34'e ilerlemenin ana kaynağıdır. 9 haftalık Sprague-Dawley sıçanının torasik ve abdominal meme bezlerinin tüm duktal ağacını doldurmak için 300 μL'ye kadar% 70 EtOH çözeltisi enjekte edebiliriz (Şekil 1, Şekil 2, Şekil 3). Fareler 20'den farklı olarak, Sprague-Dawley sıçanlarının servikal ve kasık bezlerinin meme uçları tipik olarak hayvanların% 80'inden fazlasında enjeksiyon için uygundur ve tüm duktal ağacı doldurmak için 100 μL'ye%70 EtOH çözeltisi gereklidir (Şekil 2). İncelenen ablatif çözelti ile rutin olarak 10 meme bezine enjekte ediyoruz. Tipik bir deneysel tasarım, beş alternatif bezin, jelleştirici ajan olarak X-ışını kontrast maddesi ve / veya EC içeren ablatif çözelti ile aşılandığı iki bağımsız haftalık ID enjeksiyon seansından oluşur (Şekil 2). TaOx içeren (50-200 mM) ablatif çözelti için, her bir duktal ağacın kısmi veya tam miktarda infüzyonlu çözelti ile infüze edilmesinin bireysel başarısını belirlemek ve kaydetmek için her seansın bitiminden sonra floroskopi ve / veya mikro-BT taraması yapılır (Şekil 2). Enjeksiyondan sonra hemen ve uzunlamasına görüntüleme, formülasyondaki değişikliklerin, özellikle EC jelleştirici ajanın konsantrasyonunun, enjekte edilen hacmin bir fonksiyonu olarak ablatif çözeltinin dışa doğru difüzyonunu nasıl etkilediğinin ve sınırladığının değerlendirilmesini sağlar (Şekil 3). Bu görüntüleme analizi, minimal kollateral doku hasarı ile maksimal ablasyon elde etmek için en uygun parametreleri anlamak için bilgi sağlar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64042/64042fig01.jpg"> Şekil 1: Sıçanlarda intraduktal enjeksiyon ve görüntü analizi prosedürünün şemaları. İntraduktal enjeksiyon ve görüntü analizi için adım adım prosedür vurgulanmıştır. Daha fazla ayrıntı için lütfen videoya bakın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64042/64042fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64042/64042fig02.jpg"> Şekil 2: Meme başı kanülasyonu örnekleri ve ablatif çözeltinin çoklu meme bezlerine doğum sonucu. (A) Sprague-Dawley sıçan suşunda meme başı şekillerinin tipik sunumu. Meme ucu uzunluğu, başarılı kanülasyon olasılığı ile ilişkilidir. Uzun meme uçlarının kanüllenmesi kısa meme uçlarından daha kolaydır, oysa aşırı kısa veya körelmiş meme uçları kanüle edilemez. Kanüle edildikten sonra, hem uzun hem de kısa meme uçları çözelti ile aşılanabilir ve benzer doğum başarı oranlarına ulaşabilir. Enjekte edilen çözeltideki mavi gıda boyası, duktal ağaç dolgusu ve dağıtım başarısının in vivo kanıtı olarak kullanılabilir (en belirgin olanı, başarısız bir yağ yastığı enjeksiyonu için kubbe oluşumu). Görüntü yakalama (C) sonrası üretilen gerçek zamanlı floroskopi (B) ve 3D mikro-BT yorumlamaları, TEB'lere ulaşan çözümün in vivo kanıtını ve daha nicel değerlendirmesini sağlar. (B) İlk çiftin (#4, #10) her abdominal meme bezi,% 1 EC (turuncu anahat) veya onsuz (yeşil anahat) ablatif çözelti aldı (C) Sağ servikal 'de ablatif çözeltinin başarılı bir şekilde verilmesi (mavi anahat), ikinci çift torasik (#3, #9) ve ilk çift abdominal (#4, #10) meme bezi ve sol torasik bezde başarısız enjeksiyon (kesikli beyaz anahat). Ölçek çubukları, görüntülerde farklı büyütmelerde 1 mm'ye karşılık gelir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64042/64042fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64042/64042fig03.jpg"> Şekil 3: 3D rekonstrüksiyon ve ablatif solüsyon dolumu ve difüzyonunun değerlendirilmesi . p EtOH/100 mM TaOx %1 EC'li (üst) veya EC'siz (alt) nanopartiküller intraduktal olarak ikinci abdominal meme bezi çiftine (#4 ve #10) enjekte edildi ve hemen mikro-BT ile görüntülendi. Her Sprague-Dawley sıçanı, her iki çözeltinin de artan bir hacmini aldı. Bireysel duktal ağaçlar bir görüntü analizi yazılım paketi (spline trace + propagate object + threshold rendition) kullanılarak yeniden yapılandırıldı. %1 EC ile çözeltinin terminal uçlarına ulaştığı görülebilir. Teslim edilen hacim arttıkça doldurulan TEB sayısı da daha belirgindir. Ölçek çubuğu tüm yorumlamalarda 10 mm'ye karşılık gelir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64042/64042fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Sorun</td>
			<td>Görünüş</td>
			<td colspan="4">Çözüm</td>
		</tr><tr><td>Kısa meme başı (Res. 2)</td>
			<td>Meme ucu düşük profile sahiptir – kavraması zor</td>
			<td colspan="4">Cildi meme ucunun yakınında tutmak ve iğne ile meme ucunun merkezini hedeflemek bazen daha kolaydır. İğne muhtemelen cildin altına dalacaktır. Yavaşça yukarı çekmek, meme ucunun iğnenin ucunun biraz üzerinde olduğunu ortaya çıkarabilir ve yolun geri kalanında iğnenin üzerine tutup çekmek için yer açabilir. İğnenin açısı hakkında cildin altına dalarken çok dikkatli olun. Yanlışlıkla yanlış açıda bıçaklayarak yağ yastığı enjeksiyonu yaptırmak kolaydır.</td>
		</tr><tr><td>Yağ yastığı enjeksiyonu (Res. 2)</td>
			<td>Meme ucunun etrafında ve muhtemelen meme ucunun kendisinde şişmiş - enjeksiyon çözeltisine renk eklenip eklenmediğini görmek en kolay</td>
			<td colspan="4">Meme başı ilk birkaç ul enjekte edildiğinde şişiyorsa, iğneyi çıkarın ve açıya daha fazla dikkat ederek tekrar yerleştirmeye çalışın. Enjeksiyona tekrar başlayın ve daha fazla şişmeye dikkat edin. Şişlik devam ederse, denemeden vazgeçin. Yağ yastığı enjeksiyonu olarak başlayan bir meme ucunu başarılı bir şekilde enjekte etmek çok nadirdir.</td>
		</tr><tr><td>Yaralar/kabuklanma</td>
			<td>EtOH çözeltisinin enjeksiyon bölgesine yakın açık yara veya kabuklama</td>
			<td colspan="4">Sıçanların, enjeksiyon alanının yakınında yara veya kabuklanma geliştirmesi farelerden daha olasıdır. Yaralar bulunursa, yaraları açmak için üçlü antibiyotik merhem uygulayın, ancak kabuklu yaraları yalnız bırakın. Kabuklara merhem uygulamak, hayvanın kabuğu rahatsız etme ve çıkarma olasılığını artırabilir. Yaranın ciddiyetine bağlı olarak iyileşene kadar her 1-2 günde bir kontrol edin. Carprofen, normal pencerenin ötesinde olsa bile iyileşene kadar verilmelidir.</td>
		</tr><tr><td>Alternatif bezleri enjekte edin</td>
			<td>YOK</td>
			<td colspan="4">Sıçanlarda daha büyük enjeksiyon hacimleri, ardışık bezlerin enjekte edilmesi durumunda cilt sıyrıklarına neden olma olasılığını artırır. Enjeksiyon alanına en az travma olasılığı için, alternatif bezler tek bir seansta enjekte edilir (yani, # 1-4 yerine # 1, 3, 4 ve 6'yı enjekte edin). Üçüncü (#3 ve #9) ve dördüncü (#4 ve #10) bez çiftleri arasındaki boşluk, bu bezlerin her ikisinin de tek seansta enjekte edilmesine izin verir.</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Yararlı ipuçları ve sorun giderme

Meme kanserinin görüntü rehberliğinde önleyici tedavisi için sıçan meme duktal ağacına kimyasal bir ablatif çözeltinin verilmesi için bir prosedür açıklanmaktadır. Meme epitel hücreleri, doğrudan meme başı açıklığına kanülasyon ve %70 etanol bazlı ablatif solüsyonun intraduktal infüzyonu yoluyla minimal kollateral doku hasarı ile hedeflenebilir.

Sıçan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif Tedavinin X-Ray Görselleştirmesi

There are still a limited number of primary interventions for prevention of breast cancer. For women at a high risk of developing breast cancer, the most ...

Meme kanseri, ciddi olumsuz yan etkilerle birlikte gelen sınırlı önleme stratejileri olan yaygın ve ölümcül bir hastalıktır. Yan etkileri azaltılmış bir yöntem sağlamak için, sıçan meme duktal ağacına eşzamanlı in vivo görüntüleme ve meme kanseri önlenmesine izin veren etanol bazlı bir ablatif çözeltinin intraduktal enjeksiyonu için bir teknik geliştirdik. Bu, doğrudan meme ucu açıklığına enjeksiyonun, meme epitel hücrelerini minimum kollateral doku hasarı ile hedeflemeye izin verdiği farelerde yapılan önceki çalışmalara dayanmaktadır.Hem fareler hem de sıçanlar, meme ucu açıklığından kaynaklanan tek bir duktal ağaç içeren meme bezlerine sahiptir. Sıçanlar farelerden daha büyüktür ve modelin ölçeklenebilirliğini kanıtlamak için ablasyon başarısının incelenmesi için daha büyük miktarda etanol enjeksiyonuna izin verir. Bu yöntemin bir başka iyileştirmesi, ablatif çözeltiye etil selüloz eklenmesidir.Etil selüloz, etanolün hedeflenen alandan uzağa yayılmasını azaltmak için daha önce diğer klinik yaklaşımlarda kullanılmıştır. Bu, bileşiğin doğası gereği gerçekleştirilir, bu da dokudaki sıvıya temas ettiğinde jelleşmesine neden olur. Görüntü doğrulanmış meme kanseri önleme yönteminde yer alan beş önemli adım vardır.Öncelikle laboratuarda hazırlanan sukraloz jel kaplarını kullanarak hayvanları karprofen ile dozlamaya başlamalıyız. Bu genişletilmiş antienflamatuar tedavi, prosedür öncesi ve sonrası sürdürülür. Daha sonra, hayvanı enjeksiyonlara hazırlamak için tüy dökücü krem enjekte edilecek meme uçlarını çevreleyen bölgeden kürkü çıkarırız.İntraduktal enjeksiyonlar daha sonra iğne yerleştirme için meme ucu açıklığının görselleştirilmesine yardımcı olan bir stereoskop ile gerçekleştirilir. Hayvanlar, enjeksiyonların başarısını belirlemek için enjeksiyonu takiben mikroBT veya floroskopi ile taranır veya değerlendirilir. mikroBT taramaları daha sonra başarılı dolgunun daha fazla analizi için enjekte edilen meme duktal ağacının 3D rekonstrüksiyonlarını oluşturmak için işlenebilir.Stok karprofen ilk önce PVS'de istenen konsantrasyona seyreltilir. İlacın kabın sukralozuna tam olarak karıştırılmasını daha iyi doğrulamak için karışıma steril gıda boyası eklenebilir. Bardaklar daha sonra 15 dakika boyunca 60 santigrat derecede bir su banyosunda ısıtılır.Bardakların çıkarıldıktan sonra kurutulması ve fincan kapağının %70 etanol ile temizlenmesi kontaminasyon riskini azaltır. Carprofen çözeltisi, kapağı delmek için bir şırınga kullanılarak doğrudan bardağa enjekte edilebilir. Bu durumda, istenen sonuç için 500 mikrolitre enjekte etmemiz gerekir.Bardağı 15 saniye sallamadan önce deliği bir çıkartma ile kapatın ve ardından 15 saniye daha vorteksleme yapın. Homojen karıştırma, koyu mavi kümeler aranarak değerlendirilebilir. Bardaklar daha sonra ihtiyaç duyulana kadar soğutulabilir.Hayvanlar, enjeksiyonların gerçekleşmesinden iki ila üç gün önce hazırlanmalıdır. İnhalan izofluran kullanarak hayvanı anestezi altına alın. Anestezi uygulanan sıçanı bir ısıtma pedi üzerindeki bir burun konisine aktarın.Burun konisinde iken sıçana göz yağlayıcısı uygulayın ve ardından hayvanı sırtına yerleştirin. Tüy dökücü krem, pamuk uçlu bir aplikatör ile enjekte etmeyi planladığınız meme uçlarının bölgesine uygulanabilir. Kürkün daha hızlı gevşemesi, aplikatörün istenen bölgede hayvanın derisi boyunca yukarı ve aşağı ovalanması ile sağlanabilir.Cildin yanmasını önlemek için kremi sıçan üzerinde mümkün olduğunca az süre bırakmak önemlidir. Sıçanlar bu prosedüre farelerden bile daha hassastır. 10 ila 30 saniyelik uygulamadan sonra, kremayı tamamen çıkarmak için gazlı bez üzerinde ılık su kullanın.Cildi temiz gazlı bezle kurutmadan önce tamamen çıkarılmasını sağlamak için üç ila dört durulama kullanın. Kürk çıkarma alanlarında iyi görünürlüğü ve meme uçlarına erişimi onaylayın. Gerekirse tüy dökücü prosedürü tekrarlayın.Anesteziden kurtulmak için sıçanı bir ısıtma pedi üzerinde temiz bir kurtarma kafesine yerleştirin. İyileştikten sonra ev kafeslerinde hazırlanmış sıçanlara bir carprofen fincanı verin. İnhalan izofluran anestezisi kullanarak hayvanı uyuşturarak başlayacak ve tamamen indüklendikten sonra sıçanı bir burun konisine taşıyacaksınız.Enjeksiyonlar için hayvanı sırtına yerleştirmeden önce göz kayganlaştırıcı uygulanmalıdır. Enjekte edilecek ancak gerekli olmayan meme uçlarının yakınındaki bacakları bantlamak yararlı olabilir. Şırıngayı istenen hacimde enjeksiyon çözeltisi ile hazırladıktan sonra, mümkünse ince uçlu forseps kullanarak görünür ölü derileri çıkararak meme ucunu hazırlayın.En yaygın endişe alanı meme başı açıklığının kendisidir. Sıçanlar genellikle açıklıktan çıkıntı yapan bir fişe sahiptir. Bu fişin çıkarılması daha iyi kanülasyona yardımcı olabilir.İğnenin eğimi görünür durumdayken, ince uçlu forsepslerin rehberliğinde iğneyi meme ucuna yerleştirin. Meme ucu açıklığının yolunu takip etmeye özen gösterin. Sıçan meme uçları, açıklığı çevreleyen daha fazla yağa sahip olma eğilimindedir, bu da bu yağın delinmesini kolaylaştırır ve yanlışlıkla iğnenin ilerlemesi nedeniyle kanülasyon elde ettiğinize inanır.İğne eğimi meme ucu ile tamamen çevrelendikten sonra, çözeltiyi yavaşça enjekte etmeye başlayın. İstenilen oran sıçanlarda dakikada yaklaşık 100 mikrolitredir. Duktal ağacın olası hasarını önlemek için bundan daha hızlı enjekte etmekten kaçının.Tam enjeksiyondan sonra, forsepslerin yardımıyla iğneyi meme ucundan çıkarmadan önce 30 saniye bekleyin. Bu, meme ucundan sızıntı olasılığını azaltacaktır. Sızıntı meydana gelirse, çözeltiyi temizlemek için nemlendirilmiş gazlı bez veya etanol mendil kullanın.Kontrast ve dökülen solüsyon elde edilen görüntüleri bozabilir. Burada, az önce görüntülenen enjeksiyon dizisinin büyütülmüş bir videosunu görüyoruz. Hayvanın nefes almasının meme ucunu tek bir odak düzleminde tutmayı zorlaştırdığına dikkat edin.Bu, meme başı sabit bir yerde kalmadığı için enjeksiyonu daha zor hale getirebilir. Bu sorun, göğüs kafesine ve ilk üç bez çiftine yakınlık ile daha da kötüleşir. Meme ucu açıklığındaki fiş şimdi daha iyi kanülasyon için çıkarıldı.İğne şimdi forseps yardımıyla meme ucuna ilerletilmek üzere eğimli olarak yönlendirilebilir. Konik tamamen yerleştirildikten sonra, enjeksiyon başlayabilir. Meme ucunun sol tarafına dikkatlice bakarsanız, enjeksiyon çözeltisinin duktal ağaçtan yayılırken hafifçe görülebildiği mavi renk tonunda bir artış fark edebilirsiniz.Bu, daha kalın cilt nedeniyle sıçanda çok daha az görülür. Burada, enjeksiyon tamamlandıktan 30 saniye sonra iğnenin çıkarıldığını ve sonuçta ortaya çıkan çözeltinin meme ucundan döküldüğünü görebiliriz. Ekstra çözelti temizlenir, meme ucunda travma görmediğimiz alanın değerlendirilmesine veya bölgenin kubbesi yapılmasına izin verir, bu da yağ yastığı enjeksiyonunu gösterir.Etanol içeren bir çözelti enjekte edilirse, alkol zehirlenmesini önlemek için özen gösterilmelidir. Bu, bir seansta ne kadar etanolün enjekte edilebileceğini bilmeyi ve etkilere karşı koymak için prosedür sırasında sakkaroz içeren çözelti IP'sinin uygulanmasını gerektirir. Enjeksiyonu takiben, hayvanlar bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafeste kurtarılabilir veya enjeksiyon başarısının görüntülenmesi için mikroBT'ye taşınabilir.Enjekte edilen hayvanı mikroBT cihazına taşıdıktan sonra, görüntüleme sırasında anesteziyi korumak için izofluran uygulamaya devam edin. Sıçanın artan boyutu, iyi bir görüntü elde etmek için ek konum manipülasyonu gerektirir. Görüntülenecek alanın yakınındaki bacakları bantlamadan önce omurganın düzleştirilmesi, tutarlı görüntüler oluşturmada yardımcı olur.Bacakları uzatılmış bir konumda bantlamak, kemiklerin görüntünün odak noktası olmasını önleyebilir. Ayrıca, sıçanın karnı boyunca bantlamanın, alt bezler için solunum artefaktının azaltılmasına yardımcı olabileceğini bulduk. Duktal tedavinin görselleştirilmesi için çeşitli tarama parametreleri kabul edilebilir.Bununla birlikte, parametreler seçilirken radyasyon dozu her zaman dikkate alınmalıdır. Bu taramalardan kaynaklanan radyasyon dozu, belirli bir sıçan suşu için radyasyon sınırlarını aşmamalıdır. Görüntü elde etmek yerine floroskopik analiz, genel radyasyon yükünü büyük ölçüde azaltabilir.Tüm taramalar veya değerlendirmeler yapıldıktan sonra, hayvan bir ısıtma pedi üzerinde temiz bir kurtarma kafesine geri döndürülebilir. Hayvan tamamen iyileşene ve ev kafesine geri dönene kadar izlenmelidir. Carprofen bardakları enjeksiyondan en az yedi gün sonrasına kadar sağlanmalıdır.Kullandığımız microCT cihazındaki yazılım, resmi analiz olmadan enjeksiyonun başarısını değerlendirmek için hızlı yorumlamaların oluşturulmasına izin verir. Bu özellik, gürültü azaltma için makul sinyal sağlayan basit bir kontrast kaydırıcısına sahiptir. Bu yorumlamalardaki birincil kusur, tüm görüntünün aynı anda eşik olması gerektiğidir.Bu, diyetteki demir gibi açıkça duktal ağacın bir parçası olmayan parlak sinyallerin görüntüde kalmasını sağlar. Bazı durumlarda, burada görüldüğü gibi gerçek sinyal arka plan kadar loştur ve görüntüden kolayca eşik çıkarılabilir. İlgi alanının segmentasyonuna izin veren daha sofistike analiz yazılımı kullanılarak daha iyi resmi yorumlamalar yapılabilir.Enjekte edilen duktal ağacın en iyi şekilde yorumlanmasını sağlamak için daha fazla görüntü işleme için meme yağ yastığını segmentlere ayırmak en iyisidir. Meme yağ yastığının karanlık sınırı, bu segmentasyonu elde etmek için hayvanın tam kalınlığı boyunca spline izlenebilir. Her üç dilimde bir izleme yapmak ve nesneyi yaymak, deneyimlerimize göre kanalın tamamını yakalamak için yeterlidir.Bu noktada, yalnızca meme yağ yastığı içinde bulunan kontrastı görüntülemek için belirli bir öfke kullanarak yorumlamayı eşik etmek mümkündür. Bu, duktal ağaç içindeki çözeltiyi ve yakın çevredeki herhangi bir sızıntıyı içermelidir. Tantal oksit çözeltileri genellikle 300 ila 3000 HU aralığında iyi görüntülenir. Duktal ağacın yeniden yapılandırılmasını sağladıktan sonra daha fazla analiz yapılabilir.Uzunlamasına görüntüleme istenmiyorsa, duktal ağacın karmaşık mimarisini daha iyi yakalayan daha yüksek çözünürlüklü görüntüler elde edilebilir. Hayvanlar arasındaki farklılıklar enjeksiyonu az ya da çok zorlaştırabilir. Şu anda sadece Sprague Dawley sıçanlarıyla çalıştığımız için gerilme değişkenliğine karşı gerinimle konuşamayız.Bazı hayvanların, burada resmedilenler gibi düşük profilli meme uçları olacak ve bu da başarılı kanülasyonun manipüle edilmesini ve elde edilmesini zorlaştıracaktır. Diğerleri, burada gösterildiği gibi, kanülasyona daha uygun olacak daha yüksek profilli meme uçlarına sahip olacaktır. Burada başarılı bir şekilde kanüllenmiş bir meme ucu tasvir edilmiştir.Kanülasyon zorluğu, burada gösterildiği gibi meme ucunda travmaya neden olabilir. Enjeksiyondan hemen sonra mikroBT görüntülerinin elde edilmesi, araştırmacıları bir enjeksiyonun başarısı hakkında daha iyi bilgilendirebilir ve belirli çözeltilerin doldurma özelliklerini belirlemeye yardımcı olabilir. Burada, 100 milimolar tantal oksit tarafından sağlanan kontrast ile% 70 etanol içeren bir ablatif çözeltinin aynı hacmi ile enjekte edilen aynı sıçanın karın bezlerinin farklı yönlerini görüyoruz.Gösterilen üst bezde kullanılan çözelti ayrıca% 1 etil selüloz içeriyordu. Duktal dalların uçlarında duvar benzeri yapılar görüyoruz. Bunlar, çözelti ile doldurulmuş ve dökülmeyen terminal uç tomurcuklarıdır.Alt sırada, çözeltinin duktal ağaçtan kaçışını gösteren daha az tanımlanmış duktal uçlar görüyoruz. Bu, histolojik incelemede daha sınırlı kollateral hasar ile birlikte. etil selüloz içeren çözeltilerin duktal ağaca daha iyi tutulduğunu gösteriyor gibi görünmektedir.Bu yöntem, profilaktik mastektomi için bir alternatif sunmak üzere meme kanseri önlemede daha az invaziv bir yöntemin ölçeklenebilirliğine doğru bir adım sağlar. Daha büyük bir kemirgen modelinde başarılı epitelyal ablasyon, hayvana minimum yan etki ile gösterilmiştir. Ablatif çözeltiye etil selüloz ilavesi, çözeltinin enjeksiyon alanına daha iyi tutulmasını sağlar ve bu da kollateral hasarın azalmasına neden olur.Klinik olarak kanıtlanmış çözümlerin yeni kullanımı ve yaygın görüntüleme modaliteleri ile doğum başarısını görselleştirme yeteneği eklenmiş olması, kliniğe hazır çeviriye olanak sağlamaktadır.

x-ray-visualization-intraductal-ethanol-based-ablative-treatment-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Burada, reaktiflerin intraduktal enjeksiyon yoluyla tavşan meme bezine lokalize olarak verilmesi için bir teknik açıklıyoruz. Ek olarak, kontrast maddelerin yüksek çözünürlüklü ultrason görüntülemesi ile görselleştirme ve teslimatın onaylanması için bir protokol açıklıyoruz.

Rabbit Meme Bezi için İntraduktal Teslimat

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

İn vivo görüntüleme ve meme kanserini önleme için fare meme düktal ağacına etanol bazlı ablatif bir çözüm için reaktiflerin intradüktal enjeksiyon yöntemi açıklanmıştır. Doğrudan meme ucu açıklığına enjeksiyon, meme epitel hücrelerinin minimum kollateral doku hasarı ile hedeflenmesini sağlar.

Fare Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi ve Lokal Tedavisi için Etanol Bazlı Ablatif Çözümün İntradüktal Doğumu ve Röntgen Görselleştirmesi

Bu protokol, tavşan meme bezinin duktal ağaç sistemine görüntü kılavuzluğunda infüzyon için bir prosedür sunar. Floroskopi gerçek zamanlı görüntüleme ile X-ışını kontrast maddesi içeren etanol bazlı ablatif solüsyonun tüm meme açıklıklarına kontrollü infüzyonunu gösteriyoruz.

Tavşan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif İnfüzyonun X-ışını Görselleştirmesi

Bu protokol Drosophila göz / antennal hayali diskleri (EAD) floresan işaretli, genetik olarak tanımlanmış klonal tümörleri oluşturmak için nasıl gösterir. Üçüncü evre larvaları ve nasıl görselleştirmek ve gen ifadesi değişikliklerini ve tümör yayılmasını ölçmek için bunları işlemek için EAD ve beyin teşrih açıklamaktadır.

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Klinik öncesi testlerden insan denemelerine geçiş yapan yeni ilaç hedeflerinin belirlenmesi bilimsel bir önceliktir. Bu amaçla, burada, gen tükenmesinin kanser hücre hattı sferoidleri üzerindeki etkisini incelemek için işlevsel bir genomik yaklaşımı tanımlıyoruz, bu da insan kanserlerini in vivo olarak daha uygun bir şekilde modelliyor.

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

Bu protokol amacı yeni bir meme kanseri modelleme yaklaşımı CRE-ifade adenovirüsü fare meme bezleri içine intraduktal enjeksiyon dayalı açıklamak için. Bu yaklaşım, Onkojenik olayların hem hücre tipi hem de Organ spesifik manipülasyon geçici olarak kontrollü bir şekilde sağlar.

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Geçerli protokol, hasta tarafından türetilen xenograft (PDX) modelleri ve cerrahi mide kanseri örneklerinden primer kanser hücresi hatları oluşturmak için yöntemleri açıklar. Yöntemleri ilaç geliştirme ve kanser Biyoloji araştırma için yararlı bir araç sağlar.

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Keşfedin meme kanserini önlemek için sıçanlarda intraduktal etanol bazlı ablatif tedavi yöntemini. Bu teknik X-Ray görüntüleme ile minimal yan etki sağlar ve meme epitel hücrelerini hedefler.

Sıçan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif Tedavinin X-Ray Görselleştirmesi

Daha fazla video keşfet