Name: Caenorhabditis elegansta Uzun Ömürlülük ve Gen Transkripsiyonel Analizi için Lipid Takviyesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: Öğrenin Caenorhabditis elegans'ta lipid takviyesi ve gen transkripsiyonel analizi yöntemlerini. Sıvı besleme ve doku diseksiyonu ile yaşlanma araştırmalarında gen ifadesi değişikliklerini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bakım desteği için P. Svay'a teşekkür ederiz. Bu çalışma NIH hibeleri R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), March of Dimes Foundation (MCW), Welch Foundation (MCW), HHMI araştırmacısı (M.C.W.) ve NIH T32 ES027801 doktora öncesi öğrenci arkadaşı (M.S.) tarafından desteklenmiştir. Bazı suşlar, NIH Araştırma Altyapı Programları Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilen CGC tarafından sağlanmıştır.

<ol><li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li>
<li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+LIPID+MAPS+classification%2C+nomenclature%2C+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li>
<li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li>
<li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li>
<li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C. Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+J+%22Ageing%3A+Lessons+from+C.+elegans.+Healthy+Ageing+and+Longevity%22">Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity</a>. Olsen, A., Gill, M. , Springer. Cham. 307-329 (2017).</li>
<li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li>
<li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li>
<li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li>
<li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li>
<li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+window+into+biology%3A+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li>
<li>Nigon, V. M., Félix, M. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li>
<li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li>
<li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545(2009).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108(2006).</li>
<li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-CoA-specific+%CE%949+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-CoA-specific Δ9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li>
<li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li>
<li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+an+animal+%CE%9412+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of an animal Δ12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li>
<li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+animal+%CF%89-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Identification of an animal ω-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+%CE%945-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a Δ5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li>
<li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879(2013).</li>
<li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression%3A+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695(2021).</li>
<li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li>
<li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CF%89-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">ω-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes & Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1%2FNrf+in+response+to+germ+cell+absence%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836(2015).</li>
<li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1%2FNrf%2C+stress+responses%2C+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li>
<li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li>
<li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CF%89-3+fatty+acid+%CE%B1-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49%2FPPAR%CE%B1+and+oxidation+to+oxylipins%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The ω-3 fatty acid α-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPARα and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li>
<li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254(2017).</li>
<li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li>
<li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li>
<li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li>
<li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li>
<li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li>
<li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li>
</ol>

Yazarların çıkar çatışması yoktur.

Lipid takviyesi, bazı lipit türlerinin sağlıklı yaşlanma üzerindeki doğrudan etkisini aydınlatmak için yaşlanma araştırmalarında kullanılmıştır 6,7,23,26,27,31. Bununla birlikte, lipit takviyesi prosedürü zor olabilir ve deneyler arasındaki herhangi bir tutarsızlık tekrarlanamayan sonuçlara neden olabilir. Burada, ilk ayrıntı...

Lipit Lipitler, organik çözücülerde çözünen, ancak suda çözünmeyen küçük hidrofobik veya amfipatik moleküllerdir 1,2. Farklı lipit molekülleri, zincirlerinde bulunan karbonların sayısına, konumlarına, çift bağların sayısına ve gliserol veya fosfatlar dahil olmak üzere bağlı yapılara bağlı olarak birbirlerinden ayrılırlar. Lipitler, membran çift katmanlarını oluşturmak, enerji depolaması sağlamak ve sinyal molekülleri olarak hareket etmek de dahil olmak üzere organizma fonksiyonlarını düzenlemek için farklı hücreler içinde ve arasında çok önemli roller oynar 3,4.
İlk olarak, lipitler, iç bölmeleri hücre dışı ortamdan ayıran plazma zarı ve hücre içi hücre altı membranlar dahil olmak üzere biyolojik membranların yapısal bileşenleridir. İkincisi, lipitler omurgalı ve omurgasız hayvanlarda enerji depolamanın ana şeklidir. Triasilgliseroller de dahil olmak üzere nötr lipitler, yağ dokusu da dahil olmak üzere çeşitli dokularda uzun süre depolanır. Nematodda Caenorhabditis elegans, bağırsak başlıca metabolik yağ depolama organıdır; işlevi sadece besinlerin sindirimi ve emiliminde değil, aynı zamanda memeli hepatositlerinin aktivitesine benzeyen detoksifikasyon sürecinde de rol oynar. Diğer yağ depolama dokuları, lipitlerin oosit gelişimi için gerekli olduğu germline ve cilt benzeri epidermal hücrelerden oluşan hipodermisi içerir 3,5. Üçüncüsü, son yıllarda, lipitlerin, G proteinine bağlı ve nükleer reseptörler de dahil olmak üzere çeşitli reseptörlere doğrudan etki ederek veya dolaylı olarak membran akışkanlık modülasyonu veya çeviri sonrası modifikasyonlar yoluyla hücre içi ve hücre dışı sinyalleşmede rol oynayan güçlü sinyal molekülleri olduğunu ileri sürmüştür 6,7,8,9 . Daha ileri çalışmalar, uzun ömürlülüğü ve sağlık süresini teşvik etmede lipid sinyallemesinin altında yatan moleküler mekanizmaları aydınlatmaya devam edecektir.
Model organizmalar, insanlarda çalışılamayacak kadar karmaşık olan belirli biyolojik soruları ele almak için önemlidir. Örneğin, yuvarlak kurt C. elegans, insan beslenmesi ve hastalığı ile ilgili biyolojik süreçleri incelemek için genetik analiz yapmak için mükemmel bir modeldir10. İnsan fizyolojisi, karmaşık dokular, davranış kalıpları ve bol miktarda genetik manipülasyon araçları ile ilgili yüksek oranda korunmuş moleküler yollar, C. elegans'ı dikkate değer bir model organizma11 yapar. Örneğin, C. elegans, fenotipe özgü genleri tanımlamak için genetik ekranların iletilmesinde ve RNA girişimi12 yoluyla genom çapında ters genetik ekranlarda mükemmeldir.
Laboratuvarlarda, nematodlar, Escherichia coli bakterilerinin bir çimi ile tohumlanmış agar Petri plakaları üzerinde yetiştirilir, proteinler, karbonhidratlar ve enerji ve yapı taşları olarak doymuş ve doymamış yağ asitleri gibi makro besinler ve ko-faktörler ve vitaminler gibi mikro besinler sağlar13. Memelilere benzer şekilde, nematodlar yağ asidi moleküllerini hem palmitik asitten hem de stearik asitten (sırasıyla doymuş 16-karbon ve 18-karbon molekülleri) sentezler, bunlar sırayla doymamış ve çeşitli tekli doymamış yağ asitleri (MUFA'lar) ve çoklu doymamış yağ asitleri (PUFA'lar) 14,15,16,17,18'e uzatılır. İlginçtir ki, C. elegans, yağ asidi biyosentezi, doygunluğun giderilmesi ve uzamasında rol oynayan gerekli tüm yağ asitlerinin ve çekirdek enzimlerin de novo sentezini yapabilir ve uzun zincirli PUFA'ların sentezini kolaylaştırır19. Diğer hayvan türlerinden farklı olarak, C. elegans 18-karbon ve 20-karbon ω-6 yağ asitlerini kendi ω-3 desaturaz enzimleri ile ω-3 yağ asitlerine dönüştürebilir. Ek olarak, solucanlar oleik asitten linoleik asit (LA) oluşumunu katalize eden bir Δ12 desaturaza sahiptir (OA, 18: 1) 20,21. Çoğu hayvan veya bitki hem Δ12 hem de ω-3 desaturazlardan yoksundur ve bu nedenle PUFA'larını elde etmek için ω-6 ve ω-3'ün diyet alımına güvenirken, C. elegans diyet yağ asitleri gerektirmez22. Fonksiyonel desaturaz enzimlerinden yoksun izole mutantlar, spesifik yağ asitlerinin üreme, büyüme, uzun ömürlülük ve nörotransmisyon dahil olmak üzere farklı biyolojik süreçlerdeki işlevlerini incelemek için kullanılmıştır. Bireysel yağ asitlerinin spesifik biyolojik yollar üzerindeki etkisi, hem genetik bir yaklaşım hem de diyet takviyesi kullanılarak ele alınabilir16,17,23. Bugüne kadar, lipit araştırmaları, nörolojik ve gelişimsel koşullarda lipit sentezi, bozulması, depolanması ve parçalanmasında rol oynayan genleri karakterize etmeye odaklanmıştır24. Bununla birlikte, lipitlerin uzun ömürlülük regülasyonundaki rolleri yeni ortaya çıkmaya başlamıştır.
Uzun ömürlülük regülasyonunda lipit sinyalizasyonu Lipitler, farklı dokularda ve hücre tiplerinde hücresel sinyal kaskadlarını aktive ederek uzun ömürlülük regülasyonunda önemli roller oynamaktadır. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, lipid bağlayıcı proteinler yoluyla transkripsiyon ve hücre-hücre iletişiminin modüle edilmesinde veya membran reseptörlerinin tanınmasında lipitlerin aktif rollerini vurgulamıştır25. Ek olarak, diyet lipit takviyesi, lipit metabolizmasının C. elegans'ta yaşam süresini nasıl etkilediğini incelemek için mükemmel bir araç sunar. Farklı MUFA'ların ve PUFA'ların, transkripsiyon faktörleri 26,27'yi aktive ederek uzun ömürlülüğü arttırdığı gösterilmiştir.
İnsülin / IGF-1 sinyallemesi ve germline öncü hücrelerinin ablasyonu da dahil olmak üzere uzun ömürlü modeller, MUFA biyosentez yolu ile ilişkilidir ve oleik asit, palmitoleik asit ve cis-vaccenic dahil olmak üzere MUFA takviyesi, C. elegans ömrünü uzatmak için yeterlidir26. MUFA uygulaması tarafından verilen uzun ömürlülük etkisi daha fazla araştırma gerektirse de, altta yatan mekanizmanın, oksidatif stres yanıtının ve uzun ömür düzenlemesinin kilit bir aktivatörü olan SKN-1 / Nrf2 transkripsiyon faktörü tarafından aracılık edilmesi muhtemeldir28,29. MUFA'lar arasında, N-asiletanolaminler (NAE'ler) adı verilen belirli bir yağlı açil etanolamidler sınıfı, iltihaplanma, alerjiler, öğrenme, hafıza ve enerji metabolizması gibi farklı mekanizmalarda çok önemli roller oynar30. Özellikle, oleoylethanolamid (OEA) olarak bilinen lipit molekülü, nükleer hormon reseptörleri NHR-49 ve NHR-807'yi aktive etmek için lipit bağlayıcı protein 8'in (LBP-8) çekirdeğe translokasyonunu teşvik ederek uzun ömürlülüğün pozitif bir düzenleyicisi olarak tanımlanmıştır. OEA analog KDS-5104'ün takviyesi ömrünü uzatmak için yeterlidir ve oksidatif stres yanıtları ve mitokondriyal β-oksidasyonda rol oynayan genlerin ekspresyonunu indükler 7,8.
Aynı zamanda, PUFA'ların rolü de uzun ömürlülük düzenlemesiyle ilişkilendirilmiştir. PUFA ω-3 yağ asidi α-linolenik asit (ALA) uygulaması, NHR-49 / PPARa, SKN-1 / NRF transkripsiyon faktörlerini aktive ederek ve mitokondriyal β-oksidasyonu indükleyerek uzun ömürlülüğü arttırır31. İlginç bir şekilde, oksilipinler olarak adlandırılan ALA'nın perokside ürünleri, SKN-1 / NRF'yi aktive eder, bu da hem PUFA'ların hem de oksidatif türevlerinin uzun ömürlülük yararları sağlayabileceğini düşündürmektedir23. ω-6 yağ asidi arakidonik asit (AA) ve dihomo-γ-linolenik asit (DGLA) takviyesi, otofaji aktivasyonu yoluyla ömrünü uzatır, protein kalite kontrolünü teşvik eder ve atık ve toksik protein agregalarının bozulmasına neden olur27,32. Daha yakın zamanlarda, lipid bağlayıcı protein 3 (LBP-3) ve DGLA'nın aracılık ettiği bir hücre-otonom olmayan sinyal düzenlemesinin, nöronlara periferik sinyaller göndererek uzun ömürlülüğü teşvik etmek için çok önemli olduğu gösterilmiştir, bu da lipid moleküllerinin sistemik seviyelerde dokular arası iletişimde uzun vadeli bir rol oynadığını düşündürmektedir33. Bu çalışma, plakalara ekilen bakterilerle lipit takviyesi veya sıvı kültürde bakteriyel süspansiyon ile lipit takviyesi yapmak için her adımı bildirmektedir. Bu metodolojiler, tüm vücut içeriğini veya birkaç solucandan türetilen disseke dokuları kullanarak yaşam süresini ve transkripsiyonel analizi değerlendirmek için kullanılır. Aşağıdaki teknikler çeşitli beslenme çalışmalarına uyarlanabilir ve lipit metabolizmasının uzun ömürlülüğü ve sağlıklı yaşlanmayı nasıl etkilediğini incelemek için geçerli bir araç sunar.

<table><tbody><tr><td>1.5 mL Havaneli</td><td>Genesee Scientific</td><td>93-165P15</td><td>Trizol</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A9639-500G</td><td></td></tr><tr><td>AmfiRivert cDNA Sentezi ile</td> solucan öğütme için Platinum Master Mix <td>GenDEPOT</td><td>R5600</td><td>Toplu solucan örneklerinden ters transkripsiyon için</td></tr><tr><td>Uygulamalı Biyosistemler QuanStudio 3 Gerçek Zamanlı PCR</td><td>ThermoFisher</td><td>A28567</td><td>qRT-PCR için</td></tr><tr><td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Mikrosantrifüj</td><td>Benchmark Scientific</td><td>C1248</td><td>PCR tüplerini döndürmek için</td></tr><tr><td>Branson 450 Dijital Sonifier, 1/8" uçlu</td><td>Branson Ultrasonic Corporation</td><td>100-132-888R</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Fisher Scientific</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Sigma</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma</td><td>D8418-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424 R santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>22620444R</td><td>RNA ekstraksiyonu için</td></tr><tr><td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td><td>Eppendorf</td><td>950030010</td><td>Ters transkripsiyon için</td></tr><tr><td>Etanol, Mutlak (200 Kanıt)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-500</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W Plakalı</td><td>Neta Scientific</td><td>665180</td><td>12 kuyulu sıvı besleme plakaları</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Kabı, Ps, 100 x 20 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>664161</td><td>Bakteriyel LB plakaları ve solucan için 10 cm NGM plakaları</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Petri Kabı, Ps, 60 x 15 mm</td><td>Neta Scientific</td><td>628161</td><td>Solucan için6 cm NGM plakaları</td></tr><tr><td>Invitrogen nükleaz içermeyen su</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9937</td><td></td></tr><tr><td>İzoproanol</td><td>Sigma</td><td>PX1835-2</td><td></td></tr><tr><td>Levamizol hidroklorür</td><td>VWR</td><td>SPCML1054</td><td></td></tr><tr><td>lipl-4Tg</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>Transgenik C. elegans</td></tr><tr><td>lipl-4Tg; yağ-3(wa22)</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>Transgenik C. elegans</td></tr><tr><td>Luria Suyu Bazlı</td><td>ThermoFisher</td><td>12795-084</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat (MgSO4)</td><td>Sigma</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate Barkodlu Optik 96 Kuyulu Hızlı Şeffaf Reaksiyon Plakası</td><td>ThermoFisher</td><td>4483354</td><td>96 kuyulu qPCR plakası</td></tr><tr><td>MicroAmp Optik Yapışkan Film</td><td>Uygulamalı BioSystem</td><td></td><td>4311971 96 oyuklu qPCR plakasını sızdırmaz hale getirmek için</td></tr><tr><td>Milli-Q Advantage A10 Su Arıtma Sistemi</td><td>Sigma</td><td>Z00Q0V0WW</td><td>Protokolde nükleaz içermeyen su olarak belirtilmedikçe, tampon ve kültürel ortamlar da dahil olmak üzere tüm reaktifleri yapmak için kullanılan deiyonize su</td></tr><tr><td>N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>C. elegans yabani izolat</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 Spektrofotometre</td><td>ThermoFisher</td><td>N/A</td><td>RNA konsantrasyonunu ölçmek için</td></tr><tr><td>OP50</td><td>Kaenorhabdit Genetik Merkezi</td><td>N/A</td><td>C. elegans gıda olarak kullanılan bakteriler</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat dibazik trihidrat (K2HPO4&middot; 3H2O)</td><td>Sigma</td><td>P5504-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik (KH2PO4)</td><td>Sigma</td><td>P0662-2.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Güç SYBR Yeşil hücrelerden CT'ye kiti</td><td>ThermoFisher</td><td>4402953</td><td>Birkaç solucan veya solucan dokusundan ters transkripsiyon ve qPCR için</td></tr><tr><td>Power SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>4367659</td><td> Toplu solucan örneklerinden qPCR</td></tr><tr><td>Saf Parlak antiseptik ultra ağartıcı&nbsp;</td><td>KIK Uluslararası LLC.</td><td>59647210143</td><td>%6 ev tipi çamaşır suyu Solucan yumurtası hazırlama için</td></tr><tr><td>Dokuz çöküntülü Pyrex nokta plakası</td><td>Sigma</td><td>CLS722085-18EA</td><td>Solucanları incelemek için saat camı</td></tr><tr><td>RNaseZap RNase Dekontaminasyon Çözeltisi</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorid (NaCl)</td> <td>Sigma</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit (NaOH)</td> <td>Sigma</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik heptahidrat (Na2HPO4&middot; 7H2O)</td><td>Sigma</td><td>S9390-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R Santrifüj</td><td>Thermo</td><td>7500-4337</td><td>Bakteri toplama için</td></tr><tr><td>Thermo Sorvall ST 8 santrifüj</td><td>Thermo</td><td>7500-7200</td><td>Solucan yumurtası hazırlama için</td></tr><tr><td>TRIzol Reaktifi</td><td>TheroFisher</td><td>15596018</td><td>RNA ekstraksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>Turbo DNA içermeyen kit</td><td>ThermoFisher</td><td>AM1907</td><td>RNA ekstraksiyonlarında DNA kontaminasyonunu gidermek için</td></tr><tr><td>Vortexer 59</td><td>Denville Scientific INV</td><td>S7030</td><td></td></tr><tr><td>VWR Tek Kullanımlık Pelet Karıştırıcılar ve Akülü Motor</td><td>VWR</td><td>47747-370</td><td>Trizol</td></tr><tr><td>VWR Kinetik Enerji 26 Joule Mini Santrifüj ile solucan öğütme için 26 Joule Mini Santrifüj C1413 V-115</td><td>VWR</td><td>N/A</td><td>Solucan toplama için. Üretimi durdurulan model, Cat # 76269-064</td></tr><tr><td>Solucan seçici</td><td>WormStuff</td><td>59-AWP</td><td></td></tr> ile VWR'de bulunan benzer bir model</tbody></table>

caenorhabditis elegans'ta uzun Ömürlülük ve gen transkripsiyonel analizi için lipid takviyesi

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

Yaşlanma, hem çevresel hem de genetik katkılardan kaynaklanan ilerleyici fizyolojik değişikliklerle karakterize karmaşık bir süreçtir. Lipitler, hücre zarlarının yapısal bileşenlerini oluşturmada, enerji depolamada ve sinyal molekülleri olarak çok önemlidir. Lipid metabolizmasının ve sinyalizasyonun düzenlenmesi, farklı uzun ömürlü yolları aktive etmek için esastır. Yuvarlak kurt Caenorhabditis elegans , lipid metabolizmasının ve sinyalizasyonun uzun ömür regülasyonuna katkısını incelemek için mükemmel ve güçlü bir organizmadır. Çok sayıda araştırma çalışması, spesifik lipit moleküllerinin diyet takviyesinin C. elegans ömrünü nasıl uzatabileceğini açıklamıştır; Bununla birlikte, takviye koşullarındaki küçük farklılıklar, farklı laboratuvarlardaki bilim adamları arasında tekrarlanabilirlik sorunlarına neden olabilir. Burada, C. elegans için iki ayrıntılı takviye yönteminin, plakalara tohumlanmış bakterilerle veya sıvı kültürde bakteriyel süspansiyonla lipit takviyesi kullanıldığı bildirilmiştir. Burada ayrıca, ömür boyu lipit takviyesi ve bütün bir solucan lizatı veya birkaç solucandan türetilen disseke dokular kullanılarak qRT-PCR analizi ile ömür boyu tahliller yapmak için detaylar verilmiştir. Uzunlamasına çalışmaların ve lipit takviyesi üzerine transkripsiyonel araştırmaların bir kombinasyonunu kullanarak, beslenme analizleri, lipitlerin uzun ömürlülüğü ve sağlıklı yaşlanmayı nasıl etkilediğini incelemek için güvenilir yaklaşımlar sağlar. Bu metodoloji ayrıca, az sayıda disseke doku veya birkaç hayvan kullanarak transkriptlerin bir alt kümesindeki değişiklikleri değerlendirmek için çeşitli beslenme tarama yaklaşımları için uyarlanabilir.

Lipid takviyesi üzerine birkaç bütün solucan kullanılarak transkripsiyonel değişikliklerin doğrulanması RNA'yı birkaç bütün solucandan cDNA'ya çıkarma ve retrotranskripsiyon protokolünün çoğaltılabilir olup olmadığını ve toplu solucanlardan elde edilen verilerle karşılaştırılabilir olup olmadığını araştırmak için, bağırsakta lizozomal asit lipaz lipl-4'ü aşırı eksprese eden uzun ömürlü bir solucan suşu 7,8,33,35<...

Mevcut protokol, Caenorhabditis elegans için sıvı ve plaka üstü kültürlerde lipit takviyesi yöntemlerini, uzunlamasına çalışmalar ve toplu veya birkaç solucan ve solucan dokusundan gen transkripsiyonel analizi ile birlikte tanımlamaktadır.

Caenorhabditis elegans'ta Uzun Ömürlülük ve Gen Transkripsiyonel Analizi için Lipid Takviyesi

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

Bu protokol, model organizma C.elegans'ta uzunlamasına ve transkripsiyonel analizin bir kombinasyonu ile iki lipit takviyesi stratejisini açıklamaktadır. Teknik, birkaç solucan veya disseke edilmiş solucan dokusu kullanarak transkripsiyonel değişikliklerin nasıl inceleneceğini ve bir böcek popülasyonu için sıvı beslemenin hidro tekniklerle nasıl birleştirilebileceğini açıklar. Bu tekniği uygulayan bireyler, yeterli transkripsiyonel analiz elde etmek için deneyi gerçekleştirmek için kısa zaman penceresi nedeniyle doku diseksiyonu uygulamalıdır.Başlamak için, gece boyunca yetiştirilen kültürü oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 4.000 G'de santrifüj ederek OP50 bakterilerini toplayın. Süper natantı atın. Bakteriyel peleti vorteks yoluyla 20 mililitre bakteriyel seyreltme, diyet kısıtlaması veya BDR baz içinde askıya alın ve tekrar santrifüjlemeyi 10 dakika tekrarlayın.Süper natantı attıktan sonra, 20 X BDR bakteri stoğu hazırlamak için bakteriyel peleti BDR ortamında tekrar askıya alın. Kullanmadan önce bir BDR ortamı kullanarak bakteri stoğunu 5X'e kadar seyreltin. Çözücü olarak etanol veya dimetil sülfoksit kullanarak, yeni bir otoklavlanmış cam şişede bir lipit stok çözeltisi hazırlayın ve oksidasyonu önlemek için cam şişeyi argon veya azotla doldurun.Besleme koşullarında istenen nihai konsantrasyonu elde etmek için lipit stok çözeltisini BDR bakteri çözeltisine aktarın. 20 saniye boyunca vorteks yaparak iyice karıştırın. Aynı hacimlerde filtrelenmiş etanol veya dimetil sülfoksitin BDR bakterileriyle karıştırılmasıyla kontrol edilen aracı hazırlayın.İstenilen miktarda lipit veya araç kontrolünü, her besleme koşulu için üç ila dört kopya içeren 12 kuyucuklu bir plakanın her bir kuyucuğuna aktararak lipit takviyesi ve sıvı kültürü gerçekleştirin. Senkronize Caenorrhabditis elegans solucan süspansiyonunu 5X BDR bakterileriyle bire bir oranında karıştırarak mililitre başına 1.500 solucan ve bakteriler için 2.5X nihai konsantrasyon elde edin. Daha sonra solucan bakteri karışımının iki mililitresini 12 kuyucuk plakasının her bir kuyucuğuna aktarın.Tamamlandığında, 12 kuyucuklu plakayı folyo ile sarın ve plakayı istenen inkübasyon uzunluğu için 100 RPMM'de 20 santigrat derecelik bir inkübatörde çalkalayın. Plakalarda lipit takviyesi için, lipit şartlandırılmış bakterilerin bir mililitresini 10 santimetrelik bir nematod büyüme ortamının veya NGM agar plakasının merkezine tohumlayın. Çok sayıda plaka ile çalışırken nihai çalışma çözeltisinin iki plakanın tohumlanması arasında birkaç kez girdap halinde yapıldığından emin olun.Plakayı karanlıkta bir biyogüvenlik başlığının içinde kurulayın. Senkronize solucan kültüründen 3000 solucanı 10 santimetrelik plakaya aktarın. Lipit takviyeli plakalar üzerinde yüzen solucanlar emeklemeye başlayana kadar plakayı bir biyogüvenlik başlığında kurutun.Kurutulduktan sonra, lipit şartlandırılmış plakayı istenen süre boyunca 20 santigrat derecelik bir inkübatörde inkübe edin ve çoklu doymamış lipitler kullanılıyorsa plakayı ışıktan koruyun. Bir PCR tüpünde 0,2 mikrolitre DNaz I ile 19,8 mikrolitre lizis çözeltisi karıştırarak her numune için 20 mikrolitre nihai lizis çözeltisi hazırlayın ve beş kez yukarı ve aşağı pipetleyerek iyice karıştırın. RNA'yı az sayıda bütün solucandan çıkarmak için, bakteri çimlerinden 15 ila 20 solucanı taze tohumlanmamış bir NGM plakasına aktararak bakterileri çıkarın.Tohumlanmamış NGM plakasından 15 ila 20 solucanı, minimum bakteri sayısı ile taze hazırlanmış son lizis çözeltisinin 20 mikrolitresini içeren PCR tüpüne aktarın ve lizis reaksiyonunu oda sıcaklığında beş dakika boyunca inkübe edin. Kuluçka bittikten sonra, numuneyi güzel bir soğuk su banyosunda tutun ve sonda, solucanları dört kez, her seferinde beş saniye% 30 genlik ve her sonikasyon zamanı arasında 15 saniye boyunca nabız ile sonikleştirin. Lizis reaksiyonuna iki mikrolitre durdurma çözeltisi eklemeden önce tüpü oda sıcaklığında beş dakika boyunca inkübe edin ve hafifçe dokunarak karıştırın.Reaksiyonu oda sıcaklığında iki dakika boyunca inkübe edin ve ardından tüpü buz üzerine ayarlayın. RNA'yı solucan dokusundan çıkarmak için, bakteri çimlerinden yaklaşık 20 solucan toplayın ve bakterileri solucanlardan çıkarmak için taze bir tohumlanmamış NGM plakasına yerleştirin. Mümkün olduğunca az bakteri içeren 20 solucanı, dört mikromolar levamisol içeren 500 mikrolitre M9 çözeltisi içeren bir saat camına aktarın.Solucanlar hareketsiz hale getirildiğinde, bir mililitrelik şırıngaya tutturulabilen 25 gauge iğne kullanarak germline veya bağırsağı diseke edin. Otoklavlanmış bir cam pipet kullanarak, disseke edilmiş dokuları PCR tüpüne aktarın ve tüpü iki dakika boyunca buz üzerine yerleştirin ve malzemenin altta birikmesine izin verin. 20 mikrolitre nihai lizis çözeltisi eklemeden önce süpernatantı PCR tüpünden çıkarın ve dokunarak iyice karıştırın.Lizis reaksiyonunu beş dakika inkübe ettikten sonra, iki mikrolitre durdurma çözeltisi ekleyin ve tüpe birkaç kez dokunun. Ters transkripsiyona geçmeden önce tüpü iki dakika boyunca inkübe edin. Doğrulama çalışmasında, büyük bir popülasyondan ekstrakte edilen RNA ve birkaç solucan, nöropeptit işleme genlerinin, egl-3 ve egl-21'in benzer indüksiyonunu gösterdi.Birkaç solucandan RNA ekstraksiyonunun, büyük popülasyonlardan standart CDNA sentez tekniklerine geçerli bir alternatif olabileceğini düşündürmektedir. Lipl-4 transgen solucanlarının disseke edilmiş bağırsağında, dihomo-gama-linolenik asit veya DGLA ile desteklenmiş, nöronal nöropeptit işleme genleri indüklenmemiştir. Farklı konsantrasyonlarda DGLA takviyesi, yağ-3 nakavtı üzerine solucanlarda yaşam süresinin uzamasını kurtardı.Lipid takviyeli solucanlar, bu spesifik koşullar altında ek fenotipleri tanımlamak için RNA dizilimi, proteomik, metabolomik ve davranışsal çalışmalar için de işlenebilir. Bu metodoloji, yaşlanma araştırmalarına, lipit biyolojisine ve belirli bir fenotip ile beslenme faktörü veya metabolit arasında bir ilişki kurmayı amaçlayan diğer araştırma alanlarına uygulanabilir.

lipid-supplementation-for-longevity-gene-transcriptional-analysis

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada plaka tabanlı katı diyet kısıtlaması yapmak için bir protokol...

Katı Plaka tabanlı Diyet Kısıtlama Caenorhabditis elegans</em

&lt;em&gt; Caenorhabditis elegan &lt;/ em&gt; geliştirme ve fizyolojisi çok-doymamış yağlı asitlerin fonksiyonlarını keşfetmek için uygun bir modeldir. Bu protokol &lt;em&gt; C tamamlayan etkili bir yöntem tarif elegans &lt;/ em&gt; çoklu doymamış yağ asitleri ile diyet.

Çoklu doymamış yağ asitlerinin Diyet takviyesi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Galaxy ve DAVID biyoinformatik eğitim olmadan araştırmacılar analiz etmek ve RNA-Seq verileri yorumlamak için izin popüler araçlar olarak ortaya çıkmıştır. C. elegans araştırmacılar RNA-Seq deneyler, erişimi gerçekleştirmek ve Galaxy kullanarak veri kümesi işlemek ve DAVID kullanarak gen listelerinden anlamlı biyolojik bilgi elde etmek için biz bir protokol açıklar.

arasında Transkriptomik Analizi<em&gt; C</em&gt;.<em&gt; elegans</emGalaxy Projesi Smokin Suite sayesinde&gt; RNA Sıralama Veri

Burada, bir çerçeve geniş menzilli diyet kısıtlaması gen ekspresyonu ve ömrü ile ilgili mevcut. Biz iletişim kuralları bu paradigma altında gen ekspresyonu kantitatif görüntüleme ve geniş menzilli diyet kısıtlaması için açıklar. Daha fazla bilgi işleme özellikleri genetik devrelerin temel gıda algılamalı içinde söz konusu ortaya çıkarmak için hesaplama analizleri anahat.

C. elegans gen ifade seviyeleri sırasında ömrü modülasyon altında geniş menzilli diyet kısıtlama tarafından kodlanmış bilginin bir miktar

Burada biz hızla nematodunun büyüme medya agar, yüzlerce Caenorhhabditis elegans tutarlı numaraları iyi başına 96-şey kültür plakaların üretimi için basit bir protokol tanımlamak. Bu kültürler tüm canlıların fenotipik tarama için yararlıdır. Yanlısı uzun ömürlü efektleri için ekran kimyasallara bu kültürler kullanarak üzerinde odaklanabilir.

Yüksek işlem hacmi Caenorhabditis Elegans kimyasal tarama için basit bir yöntem

Burada biz yineleme kümesi yöntemi, bir yaklaşım kantitatif ölçmek C. elegans ömrü/hayatta kalma ve healthspan yüksek üretilen iş ve sağlam bir şekilde böylece veri kalite ödün vermeden birçok koşullar tarama izin tanımlamak. Bu iletişim kuralı strateji detayları ve yineleme kümesi veri çözümlemesi için bir yazılım aracı sağlar.

Yineleme kümesi yöntemi: Bir yüksek-den geçerek yaklaşım kantitatif ölçü Caenorhabditis elegans ömrü

Burada, varyasyon azaltmak, tekrarlanabilirlik geliştirmek ve yorumların kolaylaştırmak amacıyla bir protokol RNA, DNA ve protein aynı örnekten izolasyonu için mevcut.

Kombine nükleotit ve Caenorhabditis elegans Protein çekimi

Proteostatik düşüş, nörodejeneratif hastalıkların başlangıcını kolaylaştıran yaşlanmanın ayırt edici bir özelliğidir. İki farklı Caenorhabditis elegans dokularındaki proteostazları, floresan bir muhabire kaynaşmış poliglutamin tekrarlarının heterolog ifadesiyle ölçülebilir bir şekilde ölçmek için bir protokol özetliyoruz. Bu model proteostazın hızlı in vivo genetik analizine izin verir.

Caenorhabditis eleganlarında Dokuya Özgü Proteostatik Düşüşün Ölçülmesi

Uyarılmış Raman saçılma (SRS) mikroskopisi, spesifik kimyasal moieties'in seçici, etiketsiz görüntülenmesini sağlar ve lipit moleküllerini in vivo olarak görüntülemek için etkili bir şekilde sunulmuştır. Burada, SRS mikroskopi prensibine kısa bir giriş sağlıyoruz ve Caenorhabditis elegans'talipid depolama görüntülemede kullanımı için yöntemleri açıklıyoruz.

Uyarılmış Raman Saçılma Mikroskopisi Kullanılarak Caenorhabditis elegans Lipid Depolama Dinamiklerinin Etiketsiz Görüntülenmesi

Caenorhabditis elegans, sağlık süresini, ömrünü ve strese karşı dayanıklılığı araştırmak için sağlam ve düşük maliyetli yöntemlerle mükemmel bir model sistem olarak hizmet eder.

Caenorhabditis elegans'ta Yaşam Süresini ve Sağlık Süresini Ölçmek için Düşük Maliyetli Yöntemlerin İncelenmesi

Laboratuvarda Caenorhabditis elegans için besin kaynağı canlı Escherichia coli'dir. Bakteriler metabolik olarak aktif olduklarından, metabolik ve ilaç çalışmalarında karıştırıcı bir değişken sunarlar. Paraformaldehit kullanarak bakterileri metabolik olarak etkisiz hale getirmek için ayrıntılı bir protokol burada açıklanmaktadır.

Caenorhabditis elegans Araştırmaları için Bakterileri Metabolik Olarak İnaktive Etme Metodolojisi

Öğrenin Caenorhabditis elegans'ta lipid takviyesi ve gen transkripsiyonel analizi yöntemlerini. Sıvı besleme ve doku diseksiyonu ile yaşlanma araştırmalarında gen ifadesi değişikliklerini inceleyin.

Caenorhabditis elegans'ta Uzun Ömürlülük ve Gen Transkripsiyonel Analizi için Lipid Takviyesi

Daha fazla video keşfet