Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Linlin Zhang; Mengjia Liu; Meng Zhang; Junhong Ai; Jiao Tian; Ran Wang; Zhengde Xie

doi:10.3791/64212

Enfeksiyöz Mononükleozlu Çocuklardan Periferik Kan Örneklerinde İmmün Hücre Alt Popülasyonlarının...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Enfeksiyöz Mononükleozlu Çocuklardan Periferik Kan Örneklerinde İmmün Hücre Alt Popülasyonlarının Ayrılması

Full Text

2,933 Views

08:44 min

September 7, 2022

DOI: 10.3791/64212-v

Linlin Zhang^1,2, Mengjia Liu^1,2, Meng Zhang^1,2, Junhong Ai^1,2, Jiao Tian^1,2, Ran Wang^1,2, Zhengde Xie^1,2

¹Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infectious Diseases, Key Laboratory of Major Diseases in Children, Ministry of Education, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Laboratory of Infection and Virology, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children's Hospital,Capital Medical University, National Center for Children's Health, ²Research Unit of Critical Infection in Children, 2019RU016,Chinese Academy of Medical Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Periferik kan mononükleer hücrelerinin (monositler, CD4 + T hücreleri, ^CD8 ⁺ T hücreleri, B hücreleri ve doğal öldürücü hücreler) tanımlanmış bağışıklık hücresi alt popülasyonlarını izole etmek ve analiz etmek için immünomanyetik boncukları ve floresan ile aktive edilmiş hücre sıralamasını birleştiren bir yöntem tanımladık. Bu yöntemi kullanarak, manyetik ve floresan olarak etiketlenmiş hücreler saflaştırılabilir ve analiz edilebilir.

Bu yöntem, IM'li bireylerin aynı hastalık durumlarında farklı bağışıklık hücrelerinin karakterizasyonunu sağlayacak ve bu da EBV enfeksiyonunun mekanizması hakkındaki anlayışımızı genişletecektir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan bir doktor olan Linlin Zhang olacak. Başlamak için, daha önce 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde izole edilmiş PBMC'leri alın ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 G'de döndürün.

Süper natantı atın ve hücreleri hazırlanan tamponun 80 mikrolitresi ile yeniden askıya alın. Daha sonra, hücre süspansiyonuna 20 mikrolitre CD 14 mikroboncuk ekleyin, pipetle iyice karıştırın ve tüpü buz üzerinde 15 dakika inkübe edin. Daha sonra PBMC'leri bir mililitre tampon kullanarak yıkayın ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 G'de santrifüj yapın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos