Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Bu protokol, operant tabanlı bir orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı kullanılarak nöropatik orofasiyal ağrının bir sıçan modelinde mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesini açıklar.

Orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı veya OPAD, operant bir ödül çatışması paradigması kullandığı için klinik öncesi ağrı araştırmaları için değerli bir araçtır. Bu, insan ağrısı deneyiminde önemli olan ve translasyonel geçerliliği artıran nosiseptif, öğrenme ve motivasyonu kapsar. OPAD'ın geleneksel refleks tabanlı testlere göre önemli bir avantajı, ilgili stres etkilerini önleyen hayvanları kısıtlama ihtiyacını ortadan kaldıran ve aynı zamanda deneyci önyargısını azaltan tamamen otomatik olmasıdır.

İnfraorbital sinirin CCI ameliyatını gösteren, laboratuvarımdan bir laboratuvar teknisyeni olan Darrice Montgomery olacak. Süt damlama tepsilerini, pleksiglas kafesleri ve metal döşeme ızgaralarını yerleştirerek orofasiyal ağrı değerlendirme cihazını veya OPAD'ı kurmakla başlayın. Kabloları kafeslere takın ve şişe tutucuyu cihazın arkasındaki metal direğe kaydırın.

Ardından, ödül süt şişelerini şişe tutucuya, musluğa hayvan tarafından ulaşılabilecek şekilde yerleştirin. Şişeyi yerine sabitlemek için tutucunun sol tarafındaki düğmeyi sıkın. Ardından, ön paneli açın ve kafesleri açın.

Protokolü ayarlamak için yazılımı açın, parolayı girin ve Log Me On (Oturumumu Aç) seçeneğini tıklayın veya Enter tuşuna basın. Aygıt'ın altında, Adsız Protokol'ü tıklatın ve bu protokolün kullanacağı modu seçin.

Ekipmana Özel Modlar altında, OPAD Mekanik Kafes Modu'nu seçin ve protokolü adlandırın. Tüm kafeslerin açık olduğundan emin olduktan sonra, protokol bölmesinin üst kısmındaki Aparat ve Öğe Ekle'ye tıklayarak OPAD kafeslerini ekleyin, ardından Yeni OPAD Kafesi ve Tüm Bağlı OPAD Kafeslerini Ekle'yi seçin. Deneme testi aşamalarını eklemek için, aşamaları seçmek üzere Test sekmesine ve İlk Aşama sekmelerine gidin, ardından aşamayı adlandırın.

Test süresi olarak 10 dakika ekleyin. Öğe Ekle Sekmesi'ni ve ardından Yeni Aşama'yı tıklatarak daha fazla aşama ekleyin. Ardından, Ek Bilgiler ve Tedavi Grupları'na tıklayarak grupları atayın.

Kullanılan Tedavi Gruplarını Kontrol Edin ve ardından Kullanıcı Hayvanları Gruplarına Manuel Olarak Atayacak seçeneğini seçin. Protokol menüsüne tıklayarak hayvan tanımlamaları atayın. Ek Bilgiler altında, Hayvan Kimliği'ne tıklayın ve Hayvanlara Başvurmak için Kimliklerimi Kullan seçeneğini işaretleyin.

Denemeyi, Tedavileri Görüntüle'yi tıklayıp tedavi adlarını yazmadan önce deneme başlığını yazarak ayarlayın. Hayvanları ekleyin ve Hayvanları Görüntüle ve Hayvan Ekle'yi tıklayarak tedavileri ve hayvan kimliklerini atayın. Test edilecek hayvan sayısını ve ardından Tamam'ı girin.

Hayvan listesi göründüğünde, her sıçan için hayvan kimliği ve tedavi ekleyin. Protokol menüsünü ve ardından Protokolü Kaydet'i tıklatarak protokolü kaydedin. Dosya adını ve yazılım parolasını girin ve Kaydet'i tıklatın.

Ardından, dosyayı tıklatıp Kaydet'i, yazılım parolasını yazıp Kaydet sekmesini tıklatarak deneme dosyasını kaydedin. Kafesleri açtıktan sonra, kafesin test edilmeye hazır olduğunu gösteren kafes üzerindeki yeşil ışığı arayın. Kaydedilen deneme dosyasını çift tıklayarak açın.

Parolayı girin, Log Me On'u tıklayın veya Enter tuşuna basın. Ekranın sol tarafında, hayvan sayısını ve ilgili kafesi, o gün çalışan sahneyi ve test durumunu not edin. Kafesin ekranında test hayvanının kimliğini gözlemleyin.

Sıçanı kafese yerleştirin ve ilgili kafesteki düğmeye basın. Test başladıktan sonra yeşil ışığın turuncu ışığa dönüştüğünü unutmayın. Mekanik çivilerle yeterli temas kurarken hayvanın ödül şişesine erişebildiğinden emin olun.

Ekranın sağ tarafında, her hayvanın yalama ve temas sayılarını gösteren grafiğini gözlemleyin. Test oturumu bittiğinde bir uyarı sesi duyulur. Anestezi uygulanan sıçanı cerrahi bir tezgaha yerleştirin ve kısıtlayın.

Bir ısıtma yastığı kullanarak vücut ısısını 37 santigrat derecede tutun. Kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Sırt sakızı ve dudak arasında küçük bir kesi yapmak için neşter bıçağı 15 kullanın.

Neşter bıçağını kullanarak yumuşak dokuyu çıkarın ve infraorbital sinirlerin dalını veya ION'u ortaya çıkarın. Künt bükülmüş bir şırınga iğnesi yardımıyla, ION'un etrafına iki adet 5-O kromik bağırsak bağı yerleştirin, ardından doku yapıştırıcısı kullanarak yarayı kapatın. Tek bir CCI ION ve Sham ile ameliyat edilen sıçanın temas girişimleri ve yalama verileri, başlangıçtaki standart 10 dakikalık test oturumu sırasında ve ameliyattan iki hafta, dört hafta ve altı hafta sonra burada sunulmaktadır.

Model, zararlı olmayan dönemlerde sıçanların uzun içme seanslarına sahip olduklarını ortaya koydu. Yaralanmadan sonra, hayvan çivili çubuklarla yüz temasını uzun süre koruyamaz ve bu da yalama sayısının azalmasına neden olur. Şam grubunda, içme süresi için önemli değişiklikler gözlenmedi.

Başlangıçta CCI ION ve Sham ile çalışan sıçanlar arasındaki ortalama yalama sayısı anlamlı bir fark göstermedi. Bununla birlikte, CCI ION, ameliyattan dört hafta sonrasına kadar yalama sayılarını önemli ölçüde azalttı ve ameliyat sonrası hafta boyunca ve mekanik hiperaljeziyi gösteren sinir hasarından bir hafta sonra ilk yalama için gecikmeyi arttırdı. Şam tarafından ameliyat edilen sıçanlarda anlamlı bir değişiklik olmadı.

OPAD'ı kullanırken, süt şişesinin mesafesini ve sivri uçların genişliğini optimize edin. Veri toplama sırasındaki hataları azaltmak için bunu tutarlı tutmak önemlidir.