Name: Akustoakışkan Mikrocihaz Temelinde Hücre ve Çekirdeğin Sıkıştırılabilirliğinin Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Öğrenin akustoakışkan mikrocihaz kullanarak hücre ve çekirdek sıkıştırılabilirliğini hızlı ve yıkımsız ölçme yöntemini. Bu teknik tümör hücrelerinin mekanik özelliklerini kanser teşhisinde değerlendirmek için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe numaraları 12075330 ve U1932165) ve Çin'in Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe numarası 2020A1515010270) tarafından desteklenmiştir.

1. Akustoakışkan mikrocihazın imalatı ve montajı
<ol><li>Mikroakışkan çipin imalatı.<ol><li>Şekil 1'de gösterildiği gibi yalnızca bir giriş ve çıkışa sahip tek kanallı bir çip tasarlayın. Hücreleri ölçmek için, mikrokanalın dikdörtgen kesitini 740 μm genişliğinde ve 100 μm derinliğinde tutun. Hücre çekirdeğini ölçmek için, mikrokanalın genişliğini ve derinliğini sırasıyla 250 μm ve 100 μm olarak değiştirin.</li>
		<li>Reaktif iyon aşındırma yoluyla silikon gofret üzerindeki mikrokanalı hazırlayın. Mikrokanalın üst kısmını, anodik yapıştırma15 ile şeffaf ısıya dayanıklı bir cam parçası ile kapatın. Talaşları 10 dakika boyunca ultrasonik temizleyici ile yıkayın. Daha sonra kullanmak üzere 50 °C'de bir etüv fırınında kurulayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Polidimetilsiloksan (PDMS) blokları imal edin.<ol><li>100 mm (çapında) cam kaba 30 mL prepolimer ekleyin. Bir şırınga ile prepolimere 3 mL kürleme maddesi ekleyin. NOT: Kürleme maddesinin ve ön polimerin hacim oranı 1:10'dur.</li>
		<li>PDMS ön polimerini ve kürleme maddesini yaklaşık 10 dakika boyunca bir cam çubukla kuvvetlice karıştırın. Çözeltide, PDMS ön polimerinin ve kürleme maddesinin iyi karıştırıldığını gösteren küçük ve düzgün bir şekilde ayrılmış hava kabarcıkları arayın.</li>
		<li>Cam kabı vakumlu bir kurutucuya yerleştirin ve 15-25 s için tahliye edin. Karışımda hava kabarcığı kalmayana kadar bu işlemi tekrarlayın.</li>
		<li>Karışımın sertleşmesi için cam kabı 1 saat boyunca 50 °C'de ayarlanmış bir etüv fırınına yerleştirin. Kuluçkadan sonra, PDMS'yi yaklaşık 1,2 cm uzunluğunda ve 1 cm genişliğinde uygun boyutta bloklar halinde kesmek için bir neşter kullanın. NOT: PDMS bloğunun uzunluğu, çipin genişliği ile tutarlıdır ve çip üzerine iki PDMS bloğu yapıştırıldığında piezoelektrik seramik için ortada yeterli alan olduğundan emin olmak için genişlik seçilir.</li>
	</ol></li>
	<li>PDMS bloğunu çipe bağlayın.<ol><li>Giriş ve çıkış portları için PDMS bloğunda 1 mm çapında içi boş iğneli delikler açın. PDMS bloklarını ve çipi (arka tarafı yukarı) 1 dakika boyunca bir plazma temizleyiciye koyun.</li>
		<li>PDMS bloklarındaki delikleri çip girişi ve çıkışı ile hizalayın. PDMS bloklarını çipe 15 saniye boyunca yavaşça bastırın. Bu, PDMS blokları ile çipin yüzeyi arasında yapışmanın gerçekleşmesine neden olmalıdır.</li>
	</ol></li>
	<li>Politetrafloroetilen (PTFE) kateteri çipe bağlayın (Şekil 2B).<ol><li>İç çapı 0,8 mm ve uzunluğu 10 cm olan iki parça PTFE kateteri kesin. İç çapı 0,7 mm ve uzunluğu 1,5 cm x 90° olan paslanmaz çelik bir iğneyi L şeklinde bükün. Kateterin bir ucuna bağlayın. İğnelerle iki kateter hazırlayın.</li>
		<li>Paslanmaz çelik iğneleri PDMS bloklarının deliklerine yerleştirin. Giriş için, bir şırınga için bir konektör olarak kateterin diğer ucuna 19 G'lik bir dağıtım iğnesi bağlayın.</li>
		<li>Yukarıdaki adımları tamamladıktan sonra, genel kanalın sızdırmazlığını test etmek için deiyonize su enjekte edin. Suya karşı geçirimsiz, iyi bir sızdırmazlık anlamına gelir.</li>
	</ol></li>
	<li>Piezoelektrik seramik montaj (Şekil 2C)<ol><li>2 cm çapındaki piezoelektrik seramik levhaları 5 mm genişliğinde dört şerit halinde kesmek için bir elmas tel kesici kullanın.</li>
		<li>Piezoelektrik seramiğin rezonans frekansının çip mikrokanalının genişliğiyle eşleştiğinden emin olun. 740 μm ve 250 μm genişliğindeki mikro kanal için, sırasıyla 1 MHz ve 3 MHz rezonans frekanslarına sahip piezoelektrik seramikler kullanın.</li>
		<li>Piezoelektrik seramiğin her iki tarafındaki kaynak telleri bir ucunda.</li>
		<li>Piezoelektrik seramiği çipin arkasının ortasına siyanoakrilat yapıştırıcı ile yapıştırın.</li>
		<li>Yapıştırıcıyı eşit şekilde yaymak için, piezoelektrik seramiğe bir damla yapıştırıcı yerleştirin, yapıştırıcıyı bir kürdan ile pürüzsüzleştirin ve fazla yapıştırıcıyı çıkarın. Ardından, çipin üzerine hızlıca bastırın ve yaklaşık 1 dakika boyunca basmaya devam edin. Piezoelektrik seramiğin ve çipin sıkıca bağlandığından ve eşit şekilde temas ettiğinden emin olun.</li>
	</ol></li>
	<li>Mikro cihazı takın (Şekil 2D).<ol><li>Mikrocihazın tabanı olarak bir parça PDMS (yaklaşık 1,5 cm uzunluğunda ve 1 cm genişliğinde) kesin. Çift taraflı bant kullanarak, tabanın bir tarafını giriş ve çıkış PDMS bloklarına, diğer tarafını şeffaf bir cam kızağa yapıştırın. Çipi tek bir odak düzleminde tutmak için tüm mikro cihazı mikroskop aşamasına sabitleyin.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Numune hazırlama
<ol><li>Polistiren standart partikül çözeltilerinin hazırlanması.<ol><li>10 mL fosfat tamponlu saline (PBS) 0,05 mL polistiren partikül (6 μm çapında) çözeltisi (2,1 x 108 parçacık / mL) ekleyin ve iyice karıştırın. NOT: Akustik enerji yoğunluğunun değişmesinden kaynaklanan ölçüm hatasını azaltmak için, polistiren parçacık çözeltisi, kalibrasyon olarak her deneyde numune çözeltisi ile karıştırılmıştır.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre süspansiyonlarının hazırlanması.<ol><li>Yapışkan hücreleri (örneğin, MCF7, MDA-MB-231, HCT116) PBS ile% 90 akıcılıkta (~ 5 x 105 hücre) yıkayın. Oda sıcaklığında (25 °C) 1-2 dakika boyunca 500 μL %0,25 tripsin (1x) ekleyin. Tripsini çıkarın, 1 mL tam ortam ekleyin ve pipetleme ile bir hücre süspansiyonu oluşturun.</li>
		<li>Hücre süspansiyonunu 5 dakika boyunca 100 x g'de santrifüj yapın. Süpernatantı çıkarın ve bir hücre süspansiyonu elde etmek için 0.5-1 mL PBS'de yeniden askıya alın. Hücreler hemositometre ile sayıldı ve konsantrasyon yaklaşık 3-5 x 105 hücre / mL idi.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre çekirdeği süspansiyonunun hazırlanması<ol><li>Adım 2.2'yi uygulayın. Daha sonra, süpernatantı çıkarın ve 20 μL hücre peleti (yaklaşık 5 milyon hücre) başına 200 μL sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifi A (% 1 PMSF ile desteklenmiş) ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
		<li>Yukarıdaki karışımı 5 s için 220 x g'da vorteks yapın ve ardından 10 dakika boyunca buz banyosuna koyun. Kuluçkadan sonra, çözeltiye 10 μL sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifi B ekleyin.</li>
		<li>5 s için 220 x g'de vorteks. 1 dakika boyunca buz banyosuna koyun ve 5 s için 220 x g'de tekrar vorteks. Ardından, son olarak, 4 ° C'de 5 dakika boyunca 1.000 x g'de santrifüj yapın. NOT: Sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifleri A ve B'nin hacim oranı 20: 1'dir.</li>
		<li>Süpernatantı çıkarın ve peleti 1 mL PBS içinde yeniden askıya alın. Ardından, 4 dakika boyunca 4 ° C'de 1.000 x g'de santrifüj yapın. Süpernatantı çıkarın ve hücre çekirdeği süspansiyonu olarak 100 μL PBS'de yeniden askıya alın.</li>
		<li>Yukarıdaki hücre çekirdeği süspansiyonuna tripan mavisi ekleyin ve oda sıcaklığında (25 ° C) 4 dakika boyunca lekeleyin. Tripan mavisi çözeltisinin çekirdek süspansiyonuna hacim oranı 1:1'dir. Ters çevrilmiş mikroskop altındaki çekirdek sayısını 10x hedefle sayın. NOT: Mikroskop altında hücre çekirdeklerini net bir şekilde tanımlamak için, tripan mavisi boyama gereklidir. Tripan mavisi çözeltisi, etkili boyama için kullanılmadan önce 10 dakika boyunca 37 ° C'lik bir su banyosunda olmalıdır.</li>
		<li>Yukarıdaki hücre çekirdeği süspansiyonunu PBS tamponu ile 2-3 x 105 çekirdek/mL konsantrasyonda seyreltin. Hücre çekirdeği süspansiyonunu 70 μm'lik bir elek ile filtreleyin.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Hücre ve çekirdeğin sıkıştırılabilirliğinin ölçülmesi
<ol><li>Ölçüm sistemini kurma (Şekil 3)<ol><li>Mikroskobun ışık kaynağını açın ve kamera yazılımını açın. Mikrokanalın orta konumunu, yani piezoelektrik seramiğin konumunu bulmak için 4x hedefini kullanın.</li>
		<li>Telleri bağlayın ve sırasıyla piezoelektrik seramik üzerindeki sinyal jeneratörü çıkışının pozitif ve negatif terminallerine kaynak yapın.</li>
		<li>Şırıngayı mikroenjeksiyon pompasına yerleştirin ve giriş kateterine bağlayın. Mikrokanaldan akan sıvıyı tutmak için çıkış kateterinin sonuna küçük bir kap yerleştirin.</li>
	</ol></li>
	<li>Ölçüm parametrelerini belirleme<ol><li>Polistiren partikül çözeltisini şırınga ile aspire edin ve çip mikrokanalına enjekte edin. Doğru ölçüm sağlamak için çip mikro kanalındaki hava kabarcıklarından kaçının. Parçacıkların çip mikro kanalında eşit olarak dağıtıldığından emin olun. NOT: Ölçüm akış veya şırınga pompası olmadan gerçekleştirilebilir. Gerekirse, mikroenjeksiyon pompasının akış hızı uygun bir değere ayarlanmalıdır. Burada, akış hızı aralığı 0-20 μL / s'dir.</li>
		<li>Sinyal üretecinin çıkışını 1 MHz (hücre çekirdeği ölçümü için 3 MHz) frekanslı ve 10 V'luk tepeden tepeye voltaja (Vpp) sahip bir sinüs sinyaline ayarlayın.</li>
		<li>Parçacıkların mikrokanalın orta hattına doğru hareket ettiği ve orta hatta ulaştıktan sonra orta hat boyunca ileri yönde hareket halinde kaldığı gözlemlenene kadar sinyalin frekansına ince ayar yapın (Şekil 4). NOT: Orta hatta doğru hareket eden parçacıkların hızı, 5 Vpp ile 20 Vpp arasında ayarlanabilen voltaj genliği ile belirlenir.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücreleri ve çekirdekleri ölçme<ol><li>1 mL hücre veya çekirdek süspansiyonunu standart parçacık çözeltisi ile 1: 1 oranında karıştırın ve bir şırınga ile mikrokanala enjekte edin.</li>
		<li>Hücreler veya çekirdekler görüş alanına girdiğinde CCD kamera ile kayda başlayın. Ardından, sinyal üretecini açın. Hücreler veya çekirdekler orta hatta ulaştığında kaydı durdurun.</li>
		<li>Mikrokanalı daha sonra kullanmak üzere sırayla deiyonize su,% 75 alkol ve deiyonize su ile durulayın.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Veri işleme
<ol><li>Parçacık veya hücre yörüngelerini eşleyin.<ol><li>Çekilen videoyu ImageJ yazılımına aktarın: Dosya &gt; Açık&gt; Klasör Seç. İlgilenilen hücreyi ve bitişik parçacığını seçmek için ImageJ yazılımının araç çubuğundaki elips şekline tıklayın (Şekil 5).</li>
		<li>Şekil 5'te gösterildiği gibi, ImageJ yazılımındaki ölçüm parametrelerini Analiz→ Set Ölçümü →Alan, Centroid, Ekran Etiketi olarak ayarlayın.</li>
		<li>Hedef hücrenin veya parçacığın uzunlamasına yer değiştirmeden geçtiği çerçeveyi başlangıç çerçevesi olarak almak; mikrokanalın orta çizgisine ulaşana kadar her karedeki hücrenin veya parçacığın piksel konumunu ve boyutunu kaydedin. Verileri bir elektronik tablo dosyası olarak dışa aktarın ve ilgilenilen tüm hücreler için yörüngeler elde edilene kadar adımı tekrarlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Dönüşümü ve düzeltmeyi koordine edin.<ol><li>Bu görüş alanındaki mikrokanalın dört köşesinin piksel koordinatlarını (0, y1), (0, y2), (x3, y3), (x4, y4) olarak kaydedin. Burada x3 = x4.</li>
		<li>Her ölçüm noktası (xi, yi) için, aşağıdaki formülleri kullanarak rotasyon düzeltmesinden sonra yeni koordinatı (xi', yi') hesaplayın: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq01.jpg" style="margin: auto;"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq02.jpg" style="margin: auto;"> <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq03.jpg" style="margin: auto;"></li>
		<li>Piksel koordinatlarını gerçek boyutlu koordinatlara dönüştürün. Gerçek koordinatlar, piksel koordinatlarının oranla çarpılmasıyla elde edilebilir. Oran, mikro kanalın gerçek genişliğinin, mikro kanalın piksel genişliğine (H) bölünmesiyle elde edilen orandı.</li>
		<li>Adım 4.1'de elde edilen hücrelerin ve parçacıkların piksel koordinatlarını son hareket yörüngesi verilerine dönüştürün ve düzeltin. Tüm koordinatlar sol alt köşenin koordinatlarını eksi alır, yani (0, y2). Videonun kare hızı saniyede 40 karedir, bu nedenle parçacık hareketinin zamanını elde etmek için her koordinata karşılık gelen kare sayısını 0,025 s ile çarpın, böylece konumun zamanla y yönünde değişmesini sağlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Akustik enerji yoğunluğunu hesaplayın (Şekil 6A,B).<ol><li>Hücrenin veya parçacığın Y yönündeki hareketi, akustik kuvvet F ac ve hidrodinamik kuvvet FD tarafından tahrik edilir. Aşağıdaki formülleri kullanarak hareket yörüngesini hesaplayın: <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq04.jpg" style="margin: auto;">(1) <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq05.jpg" style="margin: auto;">(2) <img alt="Equation 6" src="/files/ftp_upload/64225/64225eq06.jpg" style="margin: auto;">(3) burada r ve D , hücrenin veya parçacığın yarıçapı ve çapı, ρ ve β yoğunluk ve sıkıştırılabilirlik, ν hız vektörüdür. c ve f alt simgeleri sırasıyla hücreyi ve sıvıyı gösterir. d , en yakın akustik basınç düğümüne olan mesafedir, μ akışkanın dinamik viskozitesi, k dalga numarasıdır ve E akustik enerji yoğunluğudur. NOT: MCF7, HCT116, A549 ve hücre çekirdeklerinin yoğunluğu sırasıyla 1068 kg/m 3, 1077 kg/m 3, 1073 kg/m 3 ve 1155 kg/m 3 12,16,17 idi.</li>
		<li>Adım 4.3.1'de açıklanan formüllere göre, sonlu fark yöntemiyle akustik alan altındaki standart parçacık yörüngesi için sayısal çözümü elde etmek üzere MATLAB yazılımını kullanın.</li>
		<li>Önceden ayarlanmış akustik alan aralığında, akustik enerji yoğunluğunu değiştirin ve standart parçacık için sayısal çözeltiyi (adım 4.3.2'de elde edilen) ve ölçülen hareket yörüngesini (adım 4.2'de elde edilen) sığdırın. Montaj ortalama kare hatasına göre en uygun sonucu seçin. Burada elde edilen akustik enerji yoğunluğu, hücre sıkıştırılabilirliğinin daha sonraki hesaplanması için bir parametre olarak kullanılır.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre sıkıştırılabilirliğini hesaplayın (Şekil 6C,D).<ol><li>Akustik enerji yoğunluğunu adım 4.3.3'te elde edilen değere ayarlayın.</li>
		<li>Adım 4.3.1'de açıklanan formüllere göre, sonlu fark yöntemiyle akustik alan altındaki hücre yörüngesi için sayısal çözümü elde etmek için MATLAB yazılımını kullanın.</li>
		<li>Adım 4.3.3'e benzer şekilde, önceden ayarlanmış sıkıştırılabilirlik aralığında, sıkıştırılabilirliği değiştirin ve sayısal çözeltiyi (adım 4.4.2'de elde edilen) ve hücre için ölçülen hareket yörüngesini (adım 4.2'de elde edilen) sığdırın. Ölçülen hücre sıkıştırılabilirliği olarak en uygun sonuca karşılık gelen sıkıştırılabilirlik katsayısını kullanın.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews. Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).</li>
<li>Frame, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDAC+inhibitor+confers+radiosensitivity+to+prostate+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">HDAC inhibitor confers radiosensitivity to prostate stem-like cells.</a> British Journal of Cancer. 109 (12), 3023-3033 (2013).</li>
<li>Tseng, Y., Kole, T. P., Wirtz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micromechanical+mapping+of+live+cells+by+multiple-particle-tracking+microrheology%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Micromechanical mapping of live cells by multiple-particle-tracking microrheology.</a> Biophysical Journal. 83 (6), 3162-3176 (2002).</li>
<li>Möller, W., Brown, D. M., Kreyling, W. G., Stone, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafine+particles+cause+cytoskeletal+dysfunctions+in+macrophages%3A+role+of+intracellular+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Ultrafine particles cause cytoskeletal dysfunctions in macrophages: role of intracellular calcium.</a> Particle and Fibre Toxicology. 2, 7(2005).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+magnetic+tweezer+system+for+intraembryonic+navigation+and+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Robotics%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional magnetic tweezer system for intraembryonic navigation and measurement.</a> IEEE Transactions on Robotics. 34 (1), 240-247 (2018).</li>
<li>Machida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+manipulation+of+intracellular+stress+fibres+using+a+hook-shaped+AFM+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Direct manipulation of intracellular stress fibres using a hook-shaped AFM probe.</a> Nanotechnology. 21 (38), 385102(2010).</li>
<li>Bufi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+primary+immune+cells+exhibit+distinct+mechanical+properties+that+are+modified+by+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Human primary immune cells exhibit distinct mechanical properties that are modified by inflammation.</a> Biophysical Journal. 108 (9), 2181-2190 (2015).</li>
<li>Hogan, B., Babataheri, A., Hwang, Y., Barakat, A. I., Husson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+cell+adhesion+by+using+micropipette+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Characterizing cell adhesion by using micropipette aspiration.</a> Biophysical Journal. 109 (2), 209-219 (2015).</li>
<li>Jung, J. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionising+radiation+induces+changes+associated+with+epithelial-mesenchymal+transdifferentiation+and+increased+cell+motility+of+A549+lung+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Ionising radiation induces changes associated with epithelial-mesenchymal transdifferentiation and increased cell motility of A549 lung epithelial cells.</a> European Journal of Cancer. 43 (7), 1214-1224 (2007).</li>
<li>Hartono, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On-chip+measurements+of+cell+compressibility+via+acoustic+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab-on-a-Chip%22%5BJournal%5D)">On-chip measurements of cell compressibility via acoustic radiation.</a> Lab-on-a-Chip. 11 (23), 4072-4080 (2011).</li>
<li>Sitters, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acoustic+force+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Acoustic force spectroscopy.</a> Nature Methods. 12 (1), 47-50 (2015).</li>
<li>Augustsson, P., Karlsen, J. T., Su, H. -W., Bruus, H., Voldman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iso-acoustic+focusing+of+cells+for+size-insensitive+acousto-mechanical+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Iso-acoustic focusing of cells for size-insensitive acousto-mechanical phenotyping.</a> Nature Communications. 7 (1), 11556(2016).</li>
<li>Cushing, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+characterization+of+microbead+and+cell+suspensions+by+speed+of+sound+measurements+of+neutrally+buoyant+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ultrasound characterization of microbead and cell suspensions by speed of sound measurements of neutrally buoyant samples.</a> Analytical Chemistry. 89 (17), 8917-8923 (2017).</li>
<li>Riaud, A., Wang, W., Thai, A. L. P., Taly, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+characterization+of+cells+and+microspheres+sorted+by+acoustophoresis+with+in-line+resistive+pulse+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Review+Applied%22%5BJournal%5D)">Mechanical characterization of cells and microspheres sorted by acoustophoresis with in-line resistive pulse sensing.</a> Physical Review Applied. 13 (3), 034058(2020).</li>
<li>Petersson, F., Aberg, L., Swärd-Nilsson, A. -M., Free Laurell, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((flow+acoustophoresis%3A+microfluidic-based+mode+of+particle+and+cell+separation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">flow acoustophoresis: microfluidic-based mode of particle and cell separation.</a> Analytical Chemistry. 79 (14), 5117-5123 (2007).</li>
<li>Griwatz, C., Brandt, B., Assmann, G., Zänker, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunological+enrichment+method+for+epithelial+cells+from+peripheral+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">An immunological enrichment method for epithelial cells from peripheral blood.</a> Journal of Immunological Methods. 183 (2), 251-265 (1995).</li>
<li>Katholnig, K., Poglitsch, M., Hengstschläger, M., Weichhart, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+gradient+centrifugation%3A+a+flexible+method+for+the+isolation+of+nuclei+from+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysis gradient centrifugation: a flexible method for the isolation of nuclei from primary cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1228, 15-23 (2015).</li>
<li>Fu, Q., Zhang, Y., Huang, T., Liang, Y., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cell+compressibility+changes+during+epithelial-mesenchymal+transition+based+on+acoustofluidic+microdevice%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Measurement of cell compressibility changes during epithelial-mesenchymal transition based on acoustofluidic microdevice.</a> Biomicrofluidics. 15 (6), 064101(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionizing+radiation-induced+DNA+damage+responses+affect+cell+compressibility%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Ionizing radiation-induced DNA damage responses affect cell compressibility.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 603, 116-122 (2022).</li>
<li>Hao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+single+cells%3A+Measurement+methods+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of single cells: Measurement methods and applications.</a> Biotechnology Advances. 45, 107648(2020).</li>
<li>Yousafzai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+neighboring+cells+on+cell+stiffness+measured+by+optical+tweezers+indentation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Effect of neighboring cells on cell stiffness measured by optical tweezers indentation.</a> Journal of Biomedical Optics. 21 (5), 057004(2016).</li>
<li>Wei, M. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+living+cell+micromechanical+properties+by+oscillatory+optical+tweezers%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">A comparative study of living cell micromechanical properties by oscillatory optical tweezers.</a> Optics Express. 16 (12), 8594-8603 (2008).</li>
<li>Khan, Z. S., Vanapalli, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+mechanical+properties+of+brain+cancer+cells+using+a+microfluidic+cell+squeezer+device%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Probing the mechanical properties of brain cancer cells using a microfluidic cell squeezer device.</a> Biomicrofluidics. 7 (1), 011806(2013).</li>
<li>Hirawa, S., Masudo, T., Okada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acoustic+recognition+of+counterions+in+ion-exchange+resins%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Acoustic recognition of counterions in ion-exchange resins.</a> Analytical Chemistry. 79 (7), 3003-3007 (2007).</li>
<li>Joosse, S. A., Gorges, T. M., Biology Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((detection%2C+and+clinical+implications+of+circulating+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">detection, and clinical implications of circulating tumor cells.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (1), 1-11 (2015).</li>
<li>Martin, O. A., Anderson, R. L., Narayan, K., MacManus, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+mobilization+of+circulating+tumour+cells+during+cancer+therapy+cause+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Does the mobilization of circulating tumour cells during cancer therapy cause metastasis.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (1), 32-44 (2017).</li>
</ol>

Yazarların rakip finansal çıkarları veya diğer çıkar çatışmaları yoktur.

Yaygın olarak kullanılan hücre mekaniği ölçüm yöntemleri AFM, mikropipet aspirasyonu, mikroakışkanlar yöntemleri, paralel plaka tekniği, optik cımbız, optik sedye ve akustik yöntemlerdir20. Mikroakışkanlar yöntemleri üç yaklaşımla çalışabilir: mikro daralma, uzatma akışı ve kesme akışı. Bunlar arasında optik sedye, optik cımbız, akustik yöntemler, ekstansiyonel akış ve kesme akışı yaklaşımları temassız ölçümlerdir. Temas ölçümlerinin aksine, temassız ölçümler, temas veya lokal deformasyonun neden ...

Hücre mekanik özellikleri tümör metastazında, hücrelerin malign transformasyonunda ve radyosensitivitede önemli rol oynar 1,2. Yukarıdaki süreçte hücre mekanik özelliklerinin rolünü derinlemesine anlamak için, hücresel mekaniğin doğru ölçümü kritik öneme sahiptir ve ölçüm, sonraki kültür ve analiz için hücrelere zarar vermemelidir. Ölçüm işlemi mümkün olduğunca hızlı olmalıdır, aksi takdirde hücreler yetiştirme ortamından uzun süre çıkarılırsa hücre canlılığı etkilenebilir.
Mevcut hücre mekaniği ölçüm yöntemleri bazı sınırlamalarla karşı karşıyadır. Manyetik bükümlü sitometri, manyetik cımbız ve parçacık izleme mikroreolojisi gibi bazı yöntemler, parçacıkların hücrelere girmesi nedeniyle hücre hasarına neden olur 3,4,5. Atomik kuvvet mikroskobu (AFM), mikropipet aspirasyonu, mikro daralma ve paralel plaka tekniği gibi hücrelerle temas yoluyla ölçüm yapan yöntemler de hücre hasarına eğilimlidir ve verimin 6,7,8 oranında artması zordur. Ek olarak, iyonlaştırıcı radyasyon hücreleri düzleştirecek ve yapışmalarını artıracaktır9; bu nedenle süspansiyondaki tüm hücre mekaniğini ölçmek gerekir.
Yukarıdaki zorluklara yanıt olarak, akustoakışkan yöntem10,11,12,13,14'e dayanan bir hücre mekaniği ölçüm sistemi geliştirilmiştir. Kanal genişliği akustik yarım dalga boyuna eşleştirilir, böylece mikrokanalın orta hattında durağan bir dalga düğümü oluşturulur. Akustik radyasyon kuvvetinin etkisi altında, hücreler veya standart boncuklar akustik basınç düğümüne hareket edebilir. Standart boncukların fiziksel özellikleri (boyut, yoğunluk ve sıkıştırılabilirlik) bilindiğinden, akustik enerji yoğunluğu belirlenebilir. Daha sonra, akustik alandaki hücrelerin hareket yörüngelerinin kaydedilmesiyle hücre sıkıştırılabilirliği elde edilebilir. Süspansiyon durumundaki hücrelerin tahribatsız yüksek verimli ölçümü sağlanabilir. Bu yazıda mikroakışkan çipin tasarımı, sistemin kurulması ve ölçüm adımları tanıtılacaktır. Yöntemin doğruluğunu doğrulamak için çeşitli tümör hücrelerinin ölçümü yapılmıştır. Bu yöntemin uygulama kapsamı, piezoelektrik seramiğin rezonans frekansı ve mikrokanalın genişliği ayarlanarak hücre altı yapılara (çekirdek gibi) genişletilmiştir. Ek olarak, ilaca bağlı EMT veya farklı dozlarda X-ışını ışınlamasından sonra hücre sıkıştırılabilirliğindeki değişiklikler araştırılmıştır. Sonuçlar, bu yöntemin biyokimyasal değişiklikler ve hücresel mekanik özellikler arasındaki korelasyonu incelemek için güçlü bir araç olarak geniş uygulanabilirliğini göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>% 0.25 tripsin (1x)</td> <td>GIBCO</td><td>15050-065</td><td></td></tr><tr><td>502 tutkal</td><td>Evo bağı</td><td></td><td>siyanoakrilat tutkal</td></tr><tr><td>A549</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td>akciğer adenokarsinomu</td></tr><tr><td>Sitonükleoprotein ve sitoplazmik protein ekstraksiyon kiti</td><td>Beyotime</td><td>P0027</td><td>Sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifleri A ve B</td></tr><tr><td>Dulbecco' içerir s modifiye Eagle ortamı (DMEM)&nbsp;</td><td>corning</td><td>10-013-CVRC</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Srum (FBS)</td> <td>AUSGENEX</td><td>FBS500-S</td><td></td></tr><tr><td>HCT116</td><td>ATCC</td><td>CCL247</td><td>kolorektal karsinom</td></tr><tr><td>Isıya dayanıklı cam</td><td>Pyrex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz ' s L-15 orta&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22&nbsp;</td><td>meme Adenokarsinomu</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>ATCC</td><td>HTB-26&nbsp;</td><td>meme Adenokarsinomu</td></tr><tr><td>Minimum Esansiyel Orta (MEM)</td> <td>corning</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>GIBCO</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tampon</td><td>corning</td><td>21-040-cvc</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Beyotime</td><td>ST506</td><td>100mM</td></tr><tr><td>Polybead Polistiren Kırmızı Boyalı Mikroküre&nbsp;</td><td>polisciences</td><td>15714</td><td>Microshpere çapı 6.00 & mikro; m</td></tr><tr><td>propidyum iyodür (PI)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P4170</td><td></td></tr><tr><td>SYLGARD 184 Silikon ELASTOMER</td><td>Dow-Corning</td><td>1673921</td><td>Prepolimerler ve sertleştirici maddeler içerir</td></tr><tr><td>Tripan Mavisi</td><td>Beyotime</td><td>C0011</td><td></td></tr></tbody></table>

akustoakışkan mikrocihaz temelinde hücre ve Çekirdeğin sıkıştırılabilirliğinin Ölçülmesi

Measurement of the Compressibility of Cell and Nucleus Based on Acoustofluidic Microdevice

Hücre mekaniği tümör metastazında, hücrelerin malign transformasyonunda ve radyosensitivitede önemli rol oynamaktadır. Bu işlemler sırasında, hücrelerin mekanik özelliklerini incelemek genellikle zordur. Sıkıştırma veya germe gibi temasa dayalı geleneksel ölçüm yöntemleri, hücre hasarına neden olmaya, ölçüm doğruluğunu ve ardından hücre kültürünü etkilemeye eğilimlidir. Yapışkan durumdaki ölçümler, özellikle ışınlamadan sonra doğruluğu da etkileyebilir, çünkü iyonlaştırıcı radyasyon hücreleri düzleştirir ve yapışmayı arttırır. Burada akustoakışkan yönteme dayalı bir hücre mekaniği ölçüm sistemi geliştirilmiştir. Hücre sıkıştırılabilirliği, askıya alınmış durumda hızlı ve tahribatsız ölçüm yapabilen akustik kuvvetin etkisi altında hücre hareket yörüngesinin kaydedilmesiyle elde edilebilir. Bu yazıda çip tasarımı, numune hazırlama, yörünge kaydı, parametre çıkarma ve analiz protokolleri ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. Farklı tipte tümör hücrelerinin sıkıştırılabilirliği bu yönteme dayanarak ölçüldü. Çekirdeğin sıkıştırılabilirliğinin ölçülmesi, piezoelektrik seramiğin rezonans frekansını ve mikrokanalın genişliğini ayarlayarak da sağlandı. İmmünofloresan deneylerinin moleküler düzeyde doğrulanması ile birlikte, ilaca bağlı epitelden mezenkimal geçişe (EMT) öncesi ve sonrası hücre sıkıştırılabilirliği karşılaştırıldı. Ayrıca, farklı dozlarda X-ışını ışınlamasından sonra hücre sıkıştırılabilirliğinin değişmesi ortaya çıkmıştır. Bu yazıda önerilen hücre mekaniği ölçüm yöntemi evrensel ve esnektir ve bilimsel araştırma ve klinik uygulamada geniş uygulama beklentilerine sahiptir.

Burada, çalışma, akizoakışkan mikrocihaza dayanan hızlı ve tahribatsız bir hücre sıkıştırılabilirlik ölçüm sisteminin inşası için bir protokol sundu ve farklı durumlarda hücre ve çekirdeğin ölçülmesinde avantajlarını gösterdi. Şekil 1 , mikroakışkan kanalın şemasını göstermektedir. Akustoakışkan mikrocihazın bileşenleri ve montajı Şekil 2'de gösterilmiştir. Şekil 3 , ölçüm sisteminin kurulumunu göstermektedir. Akustik alan kuvvetini...

Burada, akustoakışkan mikrocihaza dayalı hücre veya çekirdek sıkıştırılabilirliğini ölçmek için hızlı ve tahribatsız bir sistem oluşturmak için bir protokol sunulmaktadır. Epitelyal-mezenkimal geçiş veya iyonlaştırıcı radyasyon sonrası tümör hücrelerinin mekanik özelliklerinde meydana gelen değişiklikler araştırılarak bu yöntemin bilimsel araştırma ve klinik pratikte uygulama olasılığı ortaya konmuştur.

Akustoakışkan Mikrocihaz Temelinde Hücre ve Çekirdeğin Sıkıştırılabilirliğinin Ölçülmesi

Cell mechanics play an important role in tumor metastasis, malignant transformation of cells, and radiosensitivity. During these processes, studying the ...

Hücre mekaniği tümör metastazında, hücrelerin malign transformasyonunda ve radyosensitivitede önemli rol oynamaktadır. Akustoakışkan yöntem, askıya alınmış durumlarda hızlı ve tahribatsız ölçüm gerçekleştirebilir. Bu teknik, epitelyalden mezenkimal geçişe geçişte kendi kendine sıkıştırılabilirliğin değişimini yansıtmak ve dolaşımdaki tümör hücrelerini ayırmak, kanser teşhisinde uygulama umutlarını göstermek için kullanılabilir.Başlamak için, bir milimetre çapında içi boş bir iğne ile giriş ve çıkış portları için PDMS bloğunda delikler açarak PDMS bloğunu çipe bağlayın. Ardından PDMS bloklarını yerleştirin ve arka tarafı yukarı bakacak şekilde bir dakika boyunca plazma temizleyiciye yerleştirin. PDMS bloklarındaki delikleri çip giriş ve çıkışı ile hizaladıktan sonra, PDMS bloklarını çipe 15 saniye boyunca hafifçe bastırın, böylece PDMS blokları ile çipin yüzeyi arasında yapışma meydana gelir.PTFE kateterini çipe bağlamak için, iç çapı 0,8 milimetre ve uzunluğu 10 santimetre olan iki parça kateter kesin. İç çapı 0,7 milimetre ve uzunluğu 1,5 santimetre olan paslanmaz çelik iğneyi 90 derece L şeklinde bükün ve kateterin bir ucuna bağlayın. Paslanmaz çelik iğneleri PDMS bloklarının deliklerine yerleştirin.Giriş için, bir şırınga için bir konektör olarak kateterin diğer ucuna 19 gauge dağıtım iğnesi bağlayın. Daha sonra, genel kanalın sıkılığını test etmek için deiyonize su enjekte edin. Piezoelektrik seramik tertibatı için, beş milimetre genişliğinde önceden kesilmiş piezoelektrik seramik levhaları seçin.Daha sonra piezoelektrik seramiğin her iki tarafındaki telleri bir ucunda kaynaklayın. Piezoelektrik seramiğin üzerine bir damla siyanoakrilat yapıştırıcı yerleştirerek piezoelektrik seramiği çipin arkasının ortasına yapıştırın. Tutkalı kürdan ile pürüzsüzleştirin ve fazla yapıştırıcıyı çıkarın.Ardından çipin üzerine hızlıca bastırın ve yaklaşık bir dakika boyunca basmaya devam edin. Mikro cihazı monte etmek için, mikro cihazın tabanı olarak bir parça PDMS kesin ve tabanın bir tarafını giriş ve çıkış PDMS bloklarına, diğer tarafını ise çift taraflı bant kullanarak şeffaf bir cam slayda yapıştırın. Çipi tek bir odak düzleminde tutmak için tüm mikro cihazı mikroskop aşamasına sabitleyin.Polistiren standart partikül çözeltilerini hazırlamak için 10 mililitre PBS'ye 0.05 mililitre polistiren partikül çözeltisi ekleyin ve iyice karıştırın. Daha sonra yapışkan hücreleri PBS ile% 90 oranında yıkayarak hücre süspansiyonlarını hazırlayın. Oda sıcaklığında bir ila iki dakika boyunca 500 mikrolitre 0.25 Tripsin ekleyin.Tripsini çıkardıktan sonra, bir mililitre tam ortam ekleyin ve pipetleme ile bir hücre süspansiyonu oluşturun. Daha sonra hücre süspansiyonunu beş dakika boyunca 100 G'de santrifüj edin. Süpernatantı çıkarın ve bir hücre süspansiyonu elde etmek için 0,5 ila bir mililitre PBS'de yeniden askıya alın.Daha sonra hücreler bir hemositometre ile sayıldı ve konsantrasyon mililitre başına yaklaşık 300 ila 500.000 hücre idi. Daha önce gösterildiği gibi hücre çekirdeği süspansiyonunu hazırladıktan sonra, süpernatantı çıkarın ve 20 mikrolitre hücre paleti başına 200 mikrolitre sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifi A ekleyin ve iyice karıştırın. Daha sonra yukarıdaki karışımı beş saniye boyunca 220 G'de vorteks yapın ve 10 dakika boyunca buz banyosuna koyun.Daha sonra, inkübasyondan sonra çözeltiye 10 mikrolitre sitoplazmik protein ekstraksiyon reaktifi B ekleyin. Girdaptan sonra, bir dakika boyunca buz banyosuna yerleştirin ve beş saniye boyunca 220 G'de tekrar vorteks yapın. Ardından, son olarak, dört santigrat derecede beş dakika boyunca 1000 G'de santrifüj yapın.Süpernatantı çıkarın ve paleti bir mililitre PBS içinde yeniden askıya alın. Daha sonra dört dakika boyunca dört santigrat derecede 1000 G'de santrifüj yapın. Süpernatan çıkarıldıktan sonra, hücre çekirdeği süspansiyonu olarak 100 mikrolitre PBS'de yeniden askıya alın.Yukarıdaki hücre çekirdeği süspansiyonuna tripan mavisi ekleyin ve oda sıcaklığında dört dakika boyunca lekeleyin. Ardından, ters çevrilmiş mikroskop altındaki çekirdek sayısını 10x hedefle sayın. Yukarıdaki hücre çekirdeği süspansiyonunu PBS tamponu ile mililitre başına 200 ila 300.000 çekirdek konsantrasyonuna kadar seyreltin.Daha sonra hücre çekirdeği süspansiyonunu 70 mikrometrelik bir elek ile filtreleyin. Ölçüm sistemini kurmak için mikroskobun ışık kaynağını açın ve kamera yazılımını açın. Mikrokanalın orta konumunu, yani piezoelektrik seramiğin konumunu bulmak için 4x hedefini kullanın.Telleri bağladıktan sonra, sırasıyla piezoelektrik seramiğin sinyal üreteci çıkışının pozitif ve negatif terminallerine kaynak yapın. Daha sonra şırıngayı mikroenjeksiyon pompasına yerleştirin ve giriş kateterine bağlayın. Sıvıyı mikrokanaldan toplamak için, çıkış kateterinin sonuna küçük bir kap yerleştirin.Ölçüm parametrelerini belirlemek için, polistiren partikül çözeltisini şırınga ile aspire edin. Ardından, doğru ölçümü sağlamak için hava kabarcıklarından kaçınırken ve çip mikrokanalında çözeltiyi çip mikrokanalına enjekte edin. Sinyal üretecinin çıkışını, parçacıkların mikrokanalın orta hattına doğru hareket ettiği ve orta hatta ulaştıktan sonra orta hat boyunca ileri yönde hareket ettiği gözlemlenene kadar bir megahertz frekanslı ve 10 voltluk tepeden tepeye voltajlı bir işaret sinyaline ayarlayın.Bir mililitrelik hücre veya çekirdek süspansiyonunu standart parçacık çözeltisi ile bire bir oranında karıştırdıktan sonra, hücreleri ve çekirdekleri ölçmek için bir şırınga ile mikrokanala enjekte edin. Hücreler veya çekirdekler görüş alanına girdiğinde CCD kamera ile kayda başlayın ve sinyal üretecini açın. Daha sonra mikrokanalı daha sonra kullanmak üzere sırayla deiyonize su,% 75 alkol ve deiyonize su ile durulayın.Hücrelerin ve parçacıkların hareketi, akustik alan kuvvetinin etkisi altında farklı zaman aralıklarında mikrokanalın orta hattına doğru gözlendi. Enerji, yoğunluk ve hücre sıkıştırılabilirliğinin hesaplanması yapıldı ve akustik enerji yoğunluğu ve parçacık için ölçülen hareket yörüngesi en uygun sonuçtan elde edildi. Yüksek saflıkta ve bozulmamış çekirdekler hücrelerden izole edildi ve çekirdeğin hareket yörüngesi elde edilerek çekirdek sıkıştırılabilirlik ölçümü yapıldı.İlaca bağlı EMT veya röntgen ışınlamasından sonra farklı tipte kanser hücrelerinin ve hücrelerinin farklı dozlarla sıkıştırılabilirliği ölçüldü ve karşılaştırıldı. Ölçülen hücreler toplandı ve 48 saatlik kültürden sonra tedavi edilmeyen gruba kıyasla hücre proliferasyonu ve canlılığında anlamlı bir fark olmadığı bulundu. Sıkıştırılabilirlik ölçümünün hücre çoğalması ve sağkalımı üzerinde hiçbir etkisi olmadığını gösterir.En önemli şey, parçacıkların mikrokanalın orta hattına doğru hareket ettiği gözlemlenene kadar sinyalin frekansına ince ayar yapmaktır.

measurement-compressibility-cell-nucleus-based-on-acoustofluidic

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Biz, küresel ya da lokalize gerginlik uygulama yanıt tek, yaşayan yapışık hücrelere kaynaklı nükleer ve iskelet deformasyonları ölçmek için, iki bağımsız, mikroskop tabanlı araçlar sunuyoruz. Bu teknikler, nükleer sertliği belirlemek için (yani, deformabilitesi) ve, çekirdek ve hücre iskeletinin arasındaki hücre içi kuvvet iletim prob kullanılır.

Fazlararası Hücre Çekirdek Mekanik Özellikleri Probe Biyofiziksel Tahliller: Yüzey Gerilme Uygulama ve Microneedle Manipülasyon

Bu kağıt bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) kullanarak microindentation ile canlı hücrelerin mekanik özelliklerini karakterize etmek için bir protokol göstermektedir.

Atomik Kuvvet Mikroskobu kullanarak Yaşam Hücrelerinin Mekanik Özellikleri Ölçme

Bu mikron çaplı daralması bir düzeni sekansından geçerken hücre için gereken süreden daha ölçmek için mikroflüidik bazlı analiz göstermektedir.

Mikroakışkan Tekniği Hücre deformabilitesi Probe

Bu protokol, bir mikroakışkan cihaz kullanarak otomatik küçük hacimli (0,15–1,5 ml) parçacık ayırma işlemleri gerçekleştirmek için bir sistem mimarisini tanımlar ve akustoakışkan cihaz performansını ve çalışmasını optimize etme yöntemlerini tartışır.

Bir mikroakışkan Hassas Küçük hacimli Numune İşleme Platformu ve Akustik mikrocihazda Ayrı Biyolojik Parçacıklar Boyutu Kullanımı

Bu protokol için doğrudan bir yaşam Hücre çekirdeğinde kontrollü bir kuvvet uygulamak için micropipette yöntemi açıklanmaktadır. Bu tahlil sorgulama yaşayan, yapisan hücredeki nükleer mekanik özellikleri sağlar.

Çekirdek ve sitoiskeleti mekanik bütünleşmesi ölçmek için bir doğrudan kuvvet sonda

Bu protokol, ultrason kontrast ajanları tarafından indüklenen sonoporasyon yoluyla hücrelere hızlı moleküler teslimat için düşük maliyetli bir akostofluidik cihazın montajını ve çalışmasını açıklar.

Moleküler Bileşiklerin Hücrelere Daha İyi Teslimi İçin Akostofluidik Bir Cihazın Montajı ve çalışması

Burada, izole embriyonik zebra balığı hücrelerinin hücre içi mekanik özelliklerini optik bir tuzakla doğrudan kuvvet ölçümü ile üç boyutlu hapsetmede araştırmak için bir protokol sunuyoruz.

Optik Cımbız Kullanarak Hapsetmede Hücre Altı Mekaniğinin Doğrudan Kuvvet Ölçümleri

İğnesiz su jeti teknolojisi ile hücre enjeksiyonu yöntemini, hücresel canlılık, proliferasyon ve elastikiyet ölçümleri açısından doğum sonrası araştırmaların bir sekeli ile birlikte sunuyoruz.

Domuz Yağ Dokusundan Türemiş Stroma Hücrelerinin Su Jeti Teknolojisi ile Enjeksiyonu

Bu çalışma, sitoplazmaya verilen manyetik mikroboncuklar yoluyla hücre çekirdeğine doğrudan mekanik kuvvet uygulamak ve eşzamanlı canlı hücre floresan görüntülemesi yapmak için yeni bir protokol sunmaktadır.

Çekirdek Mekanobiyolojisini Incelemek için 3D Manyetik Kuvvet Aktüatörü ve Çok Fonksiyonlu Floresan Görüntülemeyi Birleştirmek

Bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) prob ucu tarafından bir numune yüzeyine uygulanan temas alanının ve kuvvetin ölçülmesi, nano ölçekli mekanik özellik belirlemeyi mümkün kılar. Elastik modülü veya diğer nanomekanik özellikleri ölçmek için yumuşak ve sert numunelerde havada veya sıvıda AFM konsol bazlı nanogirinti uygulamak için en iyi uygulamalar tartışılmaktadır.

Atomik Kuvvet Mikroskobu Konsol Tabanlı Nanogirinti: Hava ve Sıvıda Nanoölçekte Mekanik Özellik Ölçümleri

Burada sunulan, mekano-düğüm-gözenek algılama (mekano-NPS) adı verilen elektronik tabanlı bir mikroakışkan platform kullanarak tek hücreleri mekanik olarak fenotiplemek için bir yöntemdir. Bu platform, hücrelerin hem elastik hem de viskoz biyofiziksel özelliklerini ölçerken 1-10 hücre / s'nin ılımlı verimini korur.

Mekano-Düğüm-Gözenek Algılama: Çok Parametreli Tek Hücreli Viskoelastik Ölçümler için Hızlı, Etiketsiz Bir Platform

Öğrenin akustoakışkan mikrocihaz kullanarak hücre ve çekirdek sıkıştırılabilirliğini hızlı ve yıkımsız ölçme yöntemini. Bu teknik tümör hücrelerinin mekanik özelliklerini kanser teşhisinde değerlendirmek için uygundur.

Akustoakışkan Mikrocihaz Temelinde Hücre ve Çekirdeğin Sıkıştırılabilirliğinin Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet