Name: Kanserle İlgili Maddelerin Klinik Örneklerden Otomatik Olarak Ayrılması ve Toplanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-13T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Keşfedin, otomatik kan işleme protokolü ile kanserle ilişkili hücre dışı DNA ve dolaşımdaki tümör hücrelerinin yüksek saflıkta izolasyonunu. Bu kullanıcı dostu yöntem, kanser araştırmaları için kontaminasyonu en aza indirir ve güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu makale kısmen Kore Tıbbi Cihaz Geliştirme Fonu (KMDF, Hibe No. RS-2020-KD000019) ve Kore Sağlık Endüstrisi Geliştirme Enstitüsü (KHIDI, Hibe No. HI19C0521020020) tarafından desteklenmiştir.

Tüm tam kan örnekleri akciğer kanseri hastalarından alındı. Clinomics'teki araştırma ve analizler Kanser Genomiği Araştırma Enstitüsü tarafından yürütülmektedir ve hükümet tarafından IRB araştırma onayı, Clinomics'te araştırma için kayıtlı IRB numarası ile Asan Tıp Merkezi Kurumsal İnceleme Komitesi (IRB NO. 2021-0802) tarafından yönetilmektedir.
1. Numune hazırlama
<ol><li>Bir EDTA veya cfDNA stabil kan toplama tüpüne 9 mL tam kan toplayın.</li>
	<li>Tüpü yaklaşık 10 kez yukarı ve aşağı çevirerek iyice karıştırın.</li>
	<li>Numuneleri oda sıcaklığında (RT; kısa süreli depolama için) veya 4 °C'de (uzun süreli depolama için) saklayın. Donmayın ve çözmeyin.</li>
</ol>2. Cihaz hazırlama
<ol><li>Cihazı açmak için güç düğmesine basın. NOT: Dokunmatik yüzeyde bir yükleme ekranı görünür ve cihaz başlatılır. Başlatma sırasında ellerinizi cihazdan uzak tutun. Cihaz başlatma işlemi tamamlandıktan sonra kartuş seçim ekranı görüntülenir.</li>
	<li>Kullanılacak örnek modu seçin. Oka basarak örnek sayısını değiştirin.</li>
</ol>3. Cihaz çalışması ve örnek toplama
<ol><li>LBx-1 kartuşunun takılması<ol><li>Cihazın dokunmatik ekran panelinde kartuş türünü seçin. Ok düğmesine basarak örnek sayısını değiştirin.</li>
		<li>Cihazın kapağını açın ve kullanılacak tüm kartuşları kartuş tutucusundaki numara sırasına göre takın. Kartuşu ve kartuş tutucuyu doğru şekilde taktığınızdan emin olun. Kartuş doğru şekilde takılmazsa, cihazda önemli hasara neden olabilir.</li>
		<li>Toplam dört kartuş için, kukla kartuşu kartuş tutucunun boş alanına yerleştirin.</li>
		<li>Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın.</li>
		<li>Kapıyı kapatın ve dokunmatik yüzey ekranındaki RUN düğmesine basın. Cihaz, kartuşların üzerindeki valfleri kapatır ve bu da yaklaşık 30 s sürer.</li>
		<li>Kapıyı açmak, destek tekerleğini çıkarmak ve valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkarmak için mesajı izleyin.</li>
		<li>Kartuşu masaya yerleştirin ve tam kan örneğini enjekte etmeye hazırlanın. Serolojik pipet kullanarak maksimum 10 mL tam kan örneği pipetin. DİKKAT: Kan tutmanın tehlikeleri. Kan örneklerini ve reaktifleri kullanma prosedürünün tamamı boyunca, bir laboratuvar önlüğü ve laboratuvar eldiveni giymek önemlidir. Sağlanan MSDS, laboratuvar çalışanları tarafından kapsamlı bir şekilde incelenmelidir.</li>
		<li>Pipet ucunu kartuşun numune girişinin derinliklerine yerleştirin ve tüm kan örneğini yavaşça enjekte edin. NOT 9 mL'den fazla veya buna eşit tam kan örneği kullanıldığında, fosfat tamponlu salin (PBS) ilavesi gerekli değildir. 9 mL'den az tam kan örneği kullanırken, toplam hacmi 9 mL'ye çıkarmak için PBS ekleyin. Örneğin, 7,2 mL tam kan kullanırken, lütfen numune girişine 1,8 mL PBS ekleyin. Tam kan ve PBS enjeksiyonu için serolojik pipet veya pipet ucu kullanılabilir. 8 mL'den daha az tam kan örneği kullanıldığında, buffy ceket 1 mL PBS eklenerek bile geri kazanılamayabilir. GDNA hazırlığı için, bu adımdan önce ayrılmış olan 200 μL tam kan kullanın.</li>
		<li>Kullanılacak kartuşları, kartuş tutucu üzerindeki numara sırasına göre takın. Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın. Kapıyı kapatın ve OK düğmesine basın. NOT: Plazma ve buffy kat tam kandan otomatik olarak ayrılır ve bu yaklaşık 30 dakika sürer. DİKKAT Çalışma sırasında tehlike. Yüksek hızlı dönen işlemler sırasında kapıyı açmak veya cihaza dokunmak ciddi yaralanmalara neden olabilir. Rotorun asimetrik yüklenmesi nedeniyle yaralanma riski de vardır. Cihaz yardımlı hücre zenginleştirme veya uzman modunda başladığında olağandışı titreşimler ve sesler oluşursa, kartuş yerleşimi asimetrik olabilir. Kartuşu durdurmak ve düzgün bir şekilde takmak için hemen güç tuşuna basın.</li>
		<li>Plazma ve buffy ceketin ayrılması tamamlandığında ortaya çıkan bir alarm sesi eşliğinde ekrandaki mesajı arayın.</li>
		<li>Kapıyı açarak veya STOP düğmesine basarak alarmı durdurun . Kapıyı açın, kartuşu çıkarın ve masanın üzerine yerleştirin.</li>
		<li>1 mL'lik pipet ucu kullanarak plazma çıkışından 3 mL plazma geri kazanın. 1 mL'lik pipet ucu kullanarak 3 mL'lik buffy ceketi buffy kaplama çıkışından geri alın.</li>
	</ol></li>
	<li>LBx-2 kartuşunun takılması<ol><li>Cihazın dokunmatik ekran panelinde kartuş adını seçin. Ok düğmesine basarak örnek sayısını değiştirin.</li>
		<li>Kapağı açın ve kullanılacak kartuşları kartuş tutucu üzerindeki numara sırasına göre takın.</li>
		<li>Toplam dört kartuş için, kukla kartuşu kartuş tutucunun boş alanına yerleştirin.</li>
		<li>Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın. Kartuşu kartuş tutucusuna doğru şekilde taktığınızdan emin olun. Kartuş doğru şekilde takılmazsa, cihazda önemli hasara neden olabilir.</li>
		<li>Kapıyı kapatın ve dokunmatik yüzey ekranındaki RUN düğmesine basın. Cihaz, kartuş üzerindeki valfleri kapatır ve bu da yaklaşık 30 s sürer.</li>
		<li>Kapıyı açmak, destek tekerleğini çıkarmak ve valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkarıp masanın üzerine yerleştirmek için mesajı izleyin.</li>
		<li>Kartuşu masaya yerleştirin ve yoğunluk gradyanı çözeltisini ve tam kan örneğini enjekte etmeye hazırlanın. Tam kan örneğinin hacmine bağlı olarak enjekte edilecek yoğunluk gradyanı çözeltisinin ve PBS'nin hacmini kontrol edin (Ek Tablo 1).</li>
		<li>Serolojik pipet kullanarak yoğunluk gradyanı çözeltisini pipetleyin. Pipet ucunu kartuşun girişinin derinliklerine yerleştirin ve yoğunluk gradyanı çözeltisini yavaşça enjekte edin.</li>
		<li>Yoğunluk gradyanı çözeltisini enjekte ettikten sonra, serolojik bir pipet kullanarak tüm kan örneğini pipetleyin. Pipet ucunu kartuşun numune girişinin derinliklerine yerleştirin ve tüm kan örneğini yavaşça enjekte edin. NOT: Tam kan örneğinin 9 mL'den daha azını kullanırken, bu tabloya başvurarak PBS ekleyin (Ek Tablo 1).</li>
		<li>Kullanılacak kartuşları, kartuş tutucu üzerindeki numaraya göre sırayla takın. Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın. Kapıyı kapatın ve OK düğmesine basın.</li>
		<li>Plazma ve PBMC tam kandan otomatik olarak ayrılır, bu da yaklaşık 30 dakika sürer. Plazma ve PBMC'nin ayrılması tamamlandığında alarm sesiyle birlikte görünen mesajı arayın.</li>
		<li>Kapıyı açarak veya STOP düğmesine basarak alarmı durdurun . Kapıyı açın, kartuşu çıkarın ve masanın üzerine yerleştirin.</li>
		<li>1 mL'lik pipet ucu kullanarak plazma çıkışından 3 mL plazma geri kazanın. 1 mL'lik pipet ucu kullanarak PBMC çıkışından PBMC'nin 3 mL'sini geri kazanın.</li>
	</ol></li>
	<li>HIZLI otomatik kartuşun takılması<ol><li>Cihazın dokunmatik ekran panelindeki kartuşu seçin. Ok düğmesine basarak örnek sayısını değiştirin.</li>
		<li>Kapağı açın ve kullanılacak kartuşları kartuş tutucu üzerindeki numara sırasına göre takın. Toplam dört kartuş için, kukla kartuşu kartuş tutucunun boş alanına yerleştirin.</li>
		<li>Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın.</li>
		<li>Kapıyı kapatın ve dokunmatik yüzey ekranındaki RUN düğmesine basın. Cihaz, kartuş üzerindeki valfleri kapatır ve bu da yaklaşık 30 s sürer.</li>
		<li>Kapıyı açmak, destek tekerleğini çıkarmak ve valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkarmak için mesajı izleyin.</li>
		<li>Kartuşu masaya yerleştirin ve PBS çözeltisini ve tam kan örneğini enjekte etmeye hazırlanın. Serolojik pipet kullanılarak 6 mL PBS çözeltisi pipet. Pipet ucunu kartuşun PBS girişinin derinliklerine yerleştirin ve 6 mL'lik PBS çözeltisini yavaşça enjekte edin.</li>
		<li>PBS çözeltisi enjekte edildikten sonra, kalıntının yapışmasını önlemek için daha önce% 1 BSA ile durulanan serolojik bir pipet kullanılarak LBx-2'den 3 mL tam kan veya PBMC numunesi elde edilen pipet. Pipet ucunu kartuşun numune girişinin derinliklerine yerleştirin ve tüm kan örneğini yavaşça enjekte edin.</li>
		<li>Kullanılacak kartuşları, kartuş tutucu üzerindeki numara sırasına göre takın. Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın. Kapıyı kapatın ve OK düğmesine basın.</li>
		<li>CTC'ler otomatik olarak tam kandan zenginleştirilir, bu da yaklaşık 15 dakika sürer. CTC'lerin zenginleştirilmesi tamamlandığında alarm sesiyle birlikte görünen bir mesaj arayın. Kapıyı açarak veya STOP düğmesine basarak alarmı durdurun .</li>
		<li>Kapıyı açın, kartuşu çıkarın ve masanın üzerine yerleştirin. Arka plaka sökücüyü (BPR) kartuşun önündeki dört deliğe takın. Koyu mavi kanadı iki elinizin baş parmaklarıyla bastırın ve ardından açık mavi gövdeyi tıklayana kadar bastırın.</li>
		<li>Kartuş gövdesini yukarı kaldırarak dikkatlice çıkarın. Bir cımbız kullanarak filtre zarını kenardan çok nazikçe alın. Lütfen filtre membranını sıkıştırmak ve tutmak için filtre zarının dış kenarını (1 mm genişliğindeki kenar kısmı) kullandığınızdan emin olun.</li>
		<li>Filtre membranını (zenginleştirilmiş CTC'lerin bulunduğu) nükleik asit preparasyonu için 1,5 mL'lik bir tüpe dikkatlice yerleştirin. Gerekirse, filtrelenmiş kanı 1 mL'lik bir pipet ucu kullanarak kan çıkışına geri kazanın.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Sistemin bakımı
<ol><li>Cihazın temizlenmesi ve dezenfeksiyonu için hazırlık<ol><li>Cihazın ve aksesuarların erişilebilir tüm yüzeylerini haftada bir kez etanol ve kuru doku kullanarak ve ayrıca kontamine olduğunda hemen temizleyin.</li>
		<li>Kaseyi ve rotor milini alkol (etanol ve izopropanol) veya alkol bazlı dezenfektanlar kullanarak düzenli olarak temizleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Cihazın temizlenmesi ve dezenfekte edilmesi NOT: Genel sorun giderme ve makineyle ilgili diğer notlar için Ek Tablo 2'ye bakın.<ol><li>Ana güç düğmesini kullanarak cihazı kapatın. Güç fişini güç kaynağından çıkarın.</li>
		<li>Kapıyı açın ve güç kablosu da dahil olmak üzere cihazın erişilebilir tüm yüzeylerini nemli bir bez ve önerilen temizlik maddeleri kullanarak temizleyin ve dezenfekte edin.</li>
		<li>Rotor milinde hasar olup olmadığını kontrol edin. Cihazı korozyon ve hasar açısından kontrol edin.</li>
		<li>Cihazı güç kaynağına yalnızca içi ve dışı tamamen kuruysa bağlayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ana güç fişini çıkarın ve sigorta tutucuyu çıkarın. Sigorta tutucu elektrik prizinin üzerinde bulunur. Kullanılmış sigortayı kaptan yedek bir sigorta ile değiştirin.</li>
</ol>

<ol><li>Babayan, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+liquid+biopsy+approaches+for+early+detection+and+monitoring+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advances in liquid biopsy approaches for early detection and monitoring of cancer.</a> Genome Medicine. 10 (1), 21(2018).</li>
<li>Crowley, E., Di Nicolantonio, F., Loupakis, F., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy%3A+monitoring+cancer-genetics+in+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy: monitoring cancer-genetics in the blood.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 10 (8), 472-484 (2013).</li>
<li>Bardelli, A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%2C+what+we+do+not+know+%28yet%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies, what we do not know (yet).</a> Cancer Cell. 31 (2), 172-179 (2017).</li>
<li>Mattox, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+liquid+biopsies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Applications of liquid biopsies for cancer.</a> Science Translational Medicine. 11 (507), (2019).</li>
<li>Heitzer, E., Perakis, S., Geigl, J. B., Speicher, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+liquid+biopsies+for+the+early+detection+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precision+Oncology%22%5BJournal%5D)">The potential of liquid biopsies for the early detection of cancer.</a> NPJ Precision Oncology. 1 (1), 36(2017).</li>
<li>Scudellari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myths+that+will+not+die%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myths that will not die.</a> Nature. 582 (7582), 322-326 (2015).</li>
<li>Prasad, V., Fojo, T., Brada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+oncology%3A+origins%2C+optimism%2C+and+potential%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Precision oncology: origins, optimism, and potential.</a> The Lancet Oncology. 17 (2), 81-86 (2016).</li>
<li>Prasad, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective%3A+The+precision-oncology+illusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Perspective: The precision-oncology illusion.</a> Nature. 537 (7619), 63(2016).</li>
<li>Siravegna, G., Marsoni, S., Siena, S., Bardelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+liquid+biopsies+into+the+management+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Integrating liquid biopsies into the management of cancer.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (9), 531-548 (2017).</li>
<li>Bettegowda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+DNA+in+early-and+late-stage+human+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor DNA in early-and late-stage human malignancies.</a> Science Translational Medicine. 6 (224), 24(2014).</li>
<li>Udomruk, S., Orrapin, S., Pruksakorn, D., Chaiyawat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+distribution+of+cell-free+DNA+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Size distribution of cell-free DNA in oncology.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 166, 103455(2021).</li>
<li>Paterlini-Brechot, P., Benali, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+detection%3A+clinical+impact+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions.</a> Cancer Letters. 253 (2), 180-204 (2007).</li>
<li>Loeian, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsy+using+the+nanotube-CTC-chip%3A+capture+of+invasive+CTCs+with+high+purity+using+preferential+adherence+in+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsy using the nanotube-CTC-chip: capture of invasive CTCs with high purity using preferential adherence in breast cancer patients.</a> Lab on a Chip. 19 (11), 1899-1915 (2019).</li>
<li>Rikkert, L. G., Van Der Pol, E., Van Leeuwen, T. G., Nieuwland, R., Coumans, F. A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centrifugation+affects+the+purity+of+liquid+biopsy-based+tumor+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Centrifugation affects the purity of liquid biopsy-based tumor biomarkers.</a> Cytometry Part A. 93 (12), 1207-1212 (2018).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation%2C+culture%2C+and+downstream+molecular+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+advances%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation, culture, and downstream molecular analysis.</a> Biotechnology advances. 36 (4), 1063-1078 (2018).</li>
<li>Bennett, C. W., Berchem, G., Kim, Y. J., El-Khoury, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA+and+next-generation+sequencing+in+the+service+of+personalized+medicine+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA and next-generation sequencing in the service of personalized medicine for lung cancer.</a> Oncotarget. 7 (43), 71013(2016).</li>
<li>Lowes, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+%28CTC%29+and+cell-free+DNA+%28cfDNA%29+workshop+2016%3A+scientific+opportunities+and+logistics+for+cancer+clinical+trial+incorporation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells (CTC) and cell-free DNA (cfDNA) workshop 2016: scientific opportunities and logistics for cancer clinical trial incorporation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1505(2016).</li>
<li>Bryzgunova, O. E., Konoshenko, M. Y., Laktionov, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+cell-free+DNA+in+different+tumor+types%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Molecular+Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Concentration of cell-free DNA in different tumor types.</a> Expert Review of Molecular Diagnostics. 21 (1), 63-75 (2021).</li>
<li>Park, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumour+cells+as+an+indicator+of+early+and+systemic+recurrence+after+surgical+resection+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Circulating tumour cells as an indicator of early and systemic recurrence after surgical resection in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-12 (2021).</li>
<li>Heidrich, I., Ačkar, L., Mossahebi Mohammadi, P., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+biopsies%3A+Potential+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Liquid biopsies: Potential and challenges.</a> International Journal of Cancer. 148 (3), 528-545 (2021).</li>
<li>Celec, P., Vlková, B., Lauková, L., Bábíčková, J., Boor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+DNA%3A+the+role+in+pathophysiology+and+as+a+biomarker+in+kidney+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Reviews+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell-free DNA: the role in pathophysiology and as a biomarker in kidney diseases.</a> Expert Reviews in Molecular Medicine. 20, 1(2018).</li>
<li>Thierry, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+quantification+of+circulating+DNA+in+mice+with+human+colorectal+cancer+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Origin and quantification of circulating DNA in mice with human colorectal cancer xenografts.</a> Nucleic Acids Research. 38 (18), 6159-6175 (2010).</li>
<li>Moreira, V. G., de la Cera Martínez, T., Gonzalez, E. G., Garcia, B. P., Menendez, F. V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+and+clearance+of+cell-free+plasma+DNA+in+hemodialysis+quantified+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28CCLM%29%22%5BJournal%5D)">Increase in and clearance of cell-free plasma DNA in hemodialysis quantified by real-time PCR.</a> Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM). 44 (12), 1410-1415 (2006).</li>
<li>Gauthier, V. J., Tyler, L. N., Mannik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+kinetics+and+liver+uptake+of+mononucleosomes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blood clearance kinetics and liver uptake of mononucleosomes in mice.</a> Journal of Immunology. 156 (3), 1151-1156 (1996).</li>
<li>Meng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+in+patients+with+breast+cancer+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy.</a> Clinical Cancer Research. 10 (24), 8152-8162 (2004).</li>
<li>Alix-Panabières, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+circulating+tumour+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Challenges in circulating tumour cell research.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+circulating+tumor+cells+in+non-small-cell-lung-cancer+patients+using+a+multi-flow+microfluidic+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Microsystems+%26+Nanoengineering%22%5BJournal%5D)">Isolation of circulating tumor cells in non-small-cell-lung-cancer patients using a multi-flow microfluidic channel.</a> Microsystems & Nanoengineering. 5 (1), 8(2019).</li>
<li>Sajay, B. N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+an+optimal+and+unbiased+approach+for+tumor+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Towards an optimal and unbiased approach for tumor cell isolation.</a> Biomedical Microdevices. 15 (4), 699-709 (2013).</li>
<li>Bailey, P. C., Martin, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+CTC+biology+and+clinical+impact+emerging+from+advances+in+capture+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on CTC biology and clinical impact emerging from advances in capture technology.</a> Cells. 8 (6), 553(2019).</li>
<li>Ahn, S. M., Simpson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+fluid+proteomics%3A+Prospects+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics-Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">Body fluid proteomics: Prospects for biomarker discovery.</a> Proteomics-Clinical Applications. 1 (9), 1004-1015 (2007).</li>
</ol>

Yazarların bu çalışma ile ilgili çıkar çatışması yoktur.

CfDNA ve CTC'nin miktarı ve konsantrasyonu kanserin bireyine, evresine ve türüne bağlıdır. Aynı zamanda hastanın durumuna da bağlıdır 2,4,5,10,20. Özellikle, kanserin erken veya kanser öncesi evrelerinde, kanserle ilişkili maddelerin konsantrasyonları çok düşüktür, bu nedenle tespit edilememesi olasılığı yüksektir. Bununla birlikte, erken teşhisin hasta sağkal...

Kanser de dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların erken ve doğru tespiti, bir tedavi stratejisinin oluşturulmasında en önemli faktördür 1,2,3,4. Özellikle, kanserin erken teşhisi, hastanın 5,6,7,8 sağkalım şansının artmasıyla yakından ilişkilidir. Son zamanlarda, sıvı biyopsiler kanserin erken teşhisi için spot ışığında olmuştur. Solid tümörler anjiyogeneze uğrar ve çeşitli maddeleri kana salgılar. Özellikle kanser hastalarının kanında dolaşımdaki DNA'lar (ctDNA'lar), dolaşımdaki RNA'lar (ctRNA'lar), proteinler, eksozomlar gibi veziküller ve dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC'ler) bulunmuştur 2,9. Bu maddelerin miktarında farklılıklar olmasına rağmen, sadece erken evrelerde değil, sonraki aşamalarda da sürekli olarak gözlenirler 6,10. Bununla birlikte, bu bireysel farklılıklar çok yüksektir; Örneğin, ctDNA içeren hücresiz DNA (cfDNA) miktarı 1.000 ng'den azdır ve CTC'lerin sayısı 10 mL'lik tam kanda 100'den azdır11,12,13. Birçok çalışma, daha az miktarda bulunan bu maddeleri (yani, cfDNA, ctDNA ve CTC'ler) kullanarak kanseri karakterize etmiştir. Doğru sonuçlar elde etmek için, yüksek saflıkta az miktarda maddenin doğru bir şekilde ayrılması önemlidir13,14. Geleneksel santrifüjleme yöntemleri yaygın olarak kullanılır, ancak kullanımı zordur ve kullanıcının becerisine bağlı olarak düşük saflığa sahiptir. CTC'lerin keşfinden bu yana, santrifüjleme veya yoğunluk derecesi ayırma, immünoboncuk ve mikroakışkan yöntemler gibi çeşitli ayırma teknikleri geliştirilmiştir. CTC'lerin keşfinden bu yana çeşitli muhafaza teknikleri geliştirilmiştir. Bununla birlikte, bu teknikler, hücreleri izole etmek için kullanılan çeşitli çiplerden ve zarlardan izole etmek gerektiğinde genellikle sınırlıdır15. Ayrıca, etiketleme yöntemleri FACS gibi ekipmanlar gerektirir ve etiketleme kontaminasyonu nedeniyle çıkış yönündeki prosesin sınırları vardır.
Son zamanlarda, sıvı biyopsilerin kullanımı artmıştır ve kanserin erken teşhisi için çeşitli çalışmalar yapılmaktadır. Bu yöntem basit olmasına rağmen, aşağı akış analizinde hala zorluklar vardır ve çeşitli çalışmalar bu zorlukların üstesinden gelmeye çalışmaktadır16,17. Buna ek olarak, hastaneler de dahil olmak üzere birçok site, kullanımı uygun, otomatik, yeniden üretilebilir ve yüksek saflıkta yöntemler gerektirir. Burada, sıvı biyopsi sonrasında maddelerin kan örneklerinden otomatik olarak ayrılması için bir disk üzerinde laboratuvar geliştirdik. Bu cihazlar santrifüjleme, mikroakışkanlar ve gözenek büyüklüğünde hücre yakalama prensibine dayanmaktadır. Üç tip disk vardır: LBx-1 plazma ve buffy kat elde edebilirken, LBx-2 10 mL'den daha az hacimli tam kandan plazma ve PBMC elde edebilir; FAST-auto, diskten çıkarılabilir bir membran kullanarak CTC'leri de alabilir. Bir çalıştırmada her diskten en fazla dört adet kullanılabilir. Her şeyden önce, bu cihazın ve yöntemin avantajı, az miktarda kan kullanarak aynı numuneden çeşitli kanser kaynaklı maddeler elde edebilmesidir. Bu, hastanın kanının sadece bir kez alınması gerektiği anlamına gelir. Ayrıca kan örnekleme periyodundaki farklılıklardan kaynaklanan hataları dışlama avantajına sahiptir. Bu platformun kullanımı kolaydır ve sıvı biyopsiler ve aşağı akış uygulamaları için doğru sonuçlar sağlar. Bu protokolde, cihazın ve kartuşun kullanımı tanıtılır.

<table><tbody><tr><td>% 1 BSA (Sığır Serum Albümini)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL Mikrosantrifüj Tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Konik Tüp</td><td>SPL</td><td>50015</td><td></td></tr><tr><td>4150 TapeStation Sistemi</td><td>Agilent</td><td>G2992AA</td><td>Hücresiz DNA Ekran Bandı (Agilent, 5067-5630), Hücresiz DNA Örnek Tamponu (Agilent, 5067-5633)</td></tr><tr><td>Apostle MiniMax Yüksek Verimli Hücresiz DNA İzolasyon Kiti&nbsp;</td><td>Havari</td><td>A17622-250</td><td>5 mL X 50 hazırlık versiyonu</td></tr><tr><td>BD Vacutainer kan alma tüpleri</td><td>BD</td><td>367525</td><td>EDTA Kan Alma Tüpü (10 mL)</td></tr><tr><td>BioViewCCBS</td><td>Clinomics</td><td></td><td>BioView Clinomics-Özelleştirilmiş Bioview Sistemi. Allegro Plus mikroskop tabanlı özelleştirme ekipmanı</td></tr><tr><td>CD45 Monoklonal Antikor (HI30), PE-Alexa Fluor 610</td><td>Invitrogen</td><td>MHCD4522</td><td></td></tr><tr><td>HIZLI Otomatik kartuş</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M3001</td><td></td></tr><tr><td>LBx-1 kartuş</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M4101</td><td></td></tr><tr><td>LBx-2 kartuş</td><td>Clinomics</td><td>CLX-M4201</td><td></td></tr><tr><td>OPR-2000 cihaz</td><td>Clinomics</td><td>CLX-I2001</td><td></td></tr><tr><td>Kapak Camı</td><td>Marienfeld Superior</td><td>HSU-0101040</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag 2 Mıknatıs Standı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Paque Çözümü</td><td>GE healthcare</td><td>17-1440-03</td><td>yoğunluk gradyan çözümü</td></tr><tr><td>Filtre Ucu, 10 & L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-10</td><td>Çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olmak için aerosol bariyerli pipet uçları önerilir.</td></tr><tr><td>Filtre Ucu, 200 & L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-200</td><td>Çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olmak için aerosol bariyerli pipet uçları önerilir.</td></tr><tr><td>Filtre Ucu, 100 & L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-100</td><td>Çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olmak için aerosol bariyerli pipet uçları önerilir.</td></tr><tr><td>Filtre Ucu, 1000 & L</td><td>Axygen</td><td>AX-TF-1000</td><td>Çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olmak için aerosol bariyerli pipet uçları önerilir.</td></tr><tr><td>FITC anti-insan CD326 (EpCAM) Antikor</td><td>BioLegend</td><td>324204</td><td></td></tr><tr><td>FITC Fare Anti-İnsan Sitokeratin</td><td>BD Biosciences</td><td>347653</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit çözeltisi (H2O'da ağırlıkça %35)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>433284</td><td></td></tr><tr><td>Kimtech Bilim Silecekleri</td><td>Yuhan-Kimberly</td><td>41117</td><td></td></tr><tr><td>Lateks eldiven</td><td>Microflex</td><td>63-754</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Boncuk Ayırma Rafı</td><td>V & P Scientific</td><td>VP 772F2M-2</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Pipetleme&nbsp; (0.5-10 & mikro; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000020</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Pipetleme&nbsp; (2-20 & mikro; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000038</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Pipetleme&nbsp; (10-100 ve mikro; L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000046</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Pipetleme&nbsp; (20-200 & L)</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>Manuel Pipetleme&nbsp; (100-1000 & mikro; L)</td> <td>Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>DAPI ile Montaj Ortamı&nbsp;- Sulu, Fluoroshield</td><td>abcam</td><td>ab104139</td><td></td></tr><tr><td>Normal İnsan IgG Kontrolü</td><td>R& D Systems</td><td>1-001-A</td><td></td></tr><tr><td>OLYMPUS BX-UCB</td><td>Olympus</td><td>9217316</td><td></td></tr><tr><td>Pan Sitokeratin Monoklonal Antikoru (AE1 / AE3), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53-9003-82</td><td></td></tr><tr><td>PBS (Fosfat Tamponlu Salin Çözeltisi)</td> <td>Corning</td><td>21-040CVC</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir Pipet Yardımı</td><td>Drummond</td><td>4-000-201</td><td></td></tr><tr><td>Sürgülü Cam</td><td>Marienfeld Üstün</td><td>HSU-1000612</td><td></td></tr><tr><td>StainTray Boyama kutusu</td><td>Simport</td><td>M920</td><td></td></tr><tr><td>Steril Serolojik Pipet (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Triton&nbsp; X-100 çözümü</td><td>Sigma Aldrich</td><td>93443</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN&nbsp; 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P7949</td><td></td></tr><tr>4-8 ° C'de Saklanan<td>Tam Kan</td><td></td><td></td><td> EDTA veya cfDNA stabil tüpte toplanarak C : Tam kan 9 mL'de yetersiz ise gerektiği kadar PBS (fosfat tamponlu salin) ekleyin.</td></tr><tr><td>X-Cite 120Q (Floresan Lamba Aydınlatıcı)</td><td>Excelitas</td><td>010-00157</td><td></td></tr></tbody></table>

kanserle İlgili maddelerin klinik Örneklerden otomatik olarak ayrılması ve toplanması

Automatic Separation and Collection of Cancer-Related Substances from Clinical Samples

Son zamanlarda, sıvı biyopsiler kanser de dahil olmak üzere çeşitli hastalıkları teşhis etmek için kullanılmıştır. Vücut sıvıları, normal dokulardan kaynaklanan hücreler, proteinler ve nükleik asitler de dahil olmak üzere birçok madde içerir, ancak bu maddelerin bazıları da hastalıklı bölgeden kaynaklanır. Vücut sıvılarındaki bu maddelerin araştırılması ve analizi, çeşitli hastalıkların teşhisinde çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu nedenle, gerekli maddeleri doğru bir şekilde ayırmak önemlidir ve bu amaçla kullanılmak üzere çeşitli teknikler geliştirilmiştir.
CD-PRIME adlı bir disk üzerinde laboratuvar tipi cihaz ve platform geliştirdik. Bu cihaz otomatiktir ve numune kontaminasyonu ve numune kararlılığı için iyi sonuçlara sahiptir. Ayrıca, iyi bir satın alma verimi, kısa bir çalışma süresi ve yüksek tekrarlanabilirlik avantajlarına sahiptir. Ek olarak, monte edilecek diskin türüne bağlı olarak, hücresiz DNA içeren plazma, dolaşımdaki tümör hücreleri, periferik kan mononükleer hücreleri veya kabarık katlar ayrılabilir. Böylece, vücut sıvılarında bulunan çeşitli malzemelerin elde edilmesi, omiklerin incelenmesi de dahil olmak üzere çeşitli aşağı akış uygulamaları için yapılabilir.

Bu tekniğin amacı, kanserle ilişkili maddeleri tam kandan kolayca ve otomatik olarak izole etmektir. Özellikle, herkes bu tekniği uygun tüm araştırma ve analiz alanlarında kullanabilir. Tek bir kan örneğinde birden fazla maddenin eşzamanlı ve tekrarlanabilir şekilde ayrılması, sıvı biyopsilerde önemlidir. LBx-1 ve LBx-2 diskleri, plazma ve buffy coat veya PBMC'yi tam kandan izole etmek için kullanılır. Şekil 1 , bu cihazın uygulanmasıyla ayrılan malzemeleri göstermektedir. İlk olarak, plazma...

Bu makalede, hücresiz DNA ve dolaşımdaki tümör hücreleri gibi maddeleri tam kandan kolayca ve verimli bir şekilde ayırmak ve toplamak için otomatik ekipmanın uygulanması açıklanmaktadır.

Kanserle İlgili Maddelerin Klinik Örneklerden Otomatik Olarak Ayrılması ve Toplanması

Recently, liquid biopsies have been used to diagnose various diseases, including cancer. Body fluids contain many substances, including cells, proteins, ...

Protokolümüz kullanıcı dostudur. Bu tekniği kullanarak, herkes bileşeni kandan kolayca izole edebilir. Kontaminasyon en aza indirilebilir ve malzemeler doğru bir şekilde ayrılabilir.Otomasyon ve bu protokolün kurulmasıyla, araştırmacılar kanserle ilgili maddeleri yüksek saflıkta kolayca elde edebilirler, bu da çeşitli aşağı akış çalışmaları için yararlıdır. Özellikle son kullanıcı araştırmaları için önemli avantajlar sağlaması beklenmektedir. Prosedürlerini gösteren, Kanser Genomik Araştırma Enstitüsü'nde kıdemli bir araştırmacı ve müdür yardımcısı olan Jay Jeong olacak.Başlamak için, cihazın dokunmatik ekran panelinde kartuş türünü seçerek LBx 1 kartuşunu yükleyin. Örnek sayısını değiştirmek için ok düğmesine basın. Ardından, cihaz kapağını açın ve kullanılacak tüm kartuşları kartuş tutucusundaki numaraya göre takın.Toplam dört kartuş için, kukla kartuşu kartuş tutucunun boş alanına yerleştirin. Kartuşu monte etmek için destek tekerleğini kullanın ve sabitlemek için kilit somununu sıkın. Kapıyı kapatın ve dokunmatik yüzey ekranındaki çalıştır düğmesine basın.Cihaz, kartuşların üzerindeki valfleri kapatır ve bu işlem yaklaşık 30 saniye sürer. Kapıyı açmak için mesajı takip edin. Destek tekerleğini çıkarın ve valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkarın.Serolojik pipet kullanarak maksimum 10 mililitre tam kan örneği pipetin. Pipet ucunu kartuşun numune girişinin derinliklerine yerleştirin ve tüm kan örneğini yavaşça enjekte edin. Kartuşları cihaza taktıktan sonra, cihazın kapağını kapatın ve OK düğmesine basın.Plazma ve buffy katlar otomatik olarak tam kandan ayrılır ve bu da yaklaşık 30 dakika sürer. Plazma ve buffy ceket ayrıldıktan sonra, ekranda alarm sesinin eşlik ettiği bir mesaj görünecektir. Kapıyı açarak veya durdurma düğmesine basarak alarmı durdurun.Kapıyı aç. Kartuşu çıkarın ve masanın üzerine yerleştirin. Bir mililitrelik pipet ucu kullanarak plazma çıkışından üç mililitre plazma geri kazanın.Ardından, bir mililitrelik pipet ucu kullanarak buffy ceketin üç mililitresini buffy ceket çıkışından geri kazanın. Ardından, cihazın dokunmatik ekran panelinde kartuş adını seçerek LBx 2 kartuşunu yükleyin. Numune sayısını değiştirmek için ok düğmesine basın ve kartuşu kartuş tutucusuna takmak üzere LBx 1 kartuşu için gösterilen prosedürün aynısını izleyin.Kartuşu taktıktan ve kapağı kapattıktan sonra, dokunmatik yüzey ekranındaki çalıştır düğmesine basın. Valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkarmak ve masanın üzerine yerleştirmek için daha önce gösterilen prosedürü izleyin. Serolojik pipet kullanarak yoğunluk gradyanı çözeltisini pipetleyin.Pipet ucunu kartuşun girişinin derinliklerine yerleştirin ve çözeltiyi yavaşça enjekte edin. Ardından, tüm kan örneğini pipetleyin ve yavaşça numune girişine enjekte edin. Kartuşu takıp sabitledikten sonra, kapağı kapatın ve OK düğmesine basın.Plazma ve PBMC otomatik olarak tam kandan ayrıldıktan sonra, alarm sesinin eşlik ettiği bir mesaj görünecektir. Kapağı açın ve kartuşu çıkarın. Bir mililitrelik pipet ucu kullanarak plazma çıkışından üç mililitre plazmayı geri kazanın ve ardından PBMC çıkışından üç mililitre PBMC'yi geri kazanın.Benzer şekilde, FAST-auto kartuşu için, valf kapalı kartuşu kartuş tutucusundan çıkardıktan sonra, kartuşun PBS girişine altı mililitre PBS çözeltisi enjekte edin. Daha sonra, LBx 1'den elde edilen üç mililitre tam kan veya kabarık kat veya LBx 2'den elde edilen PBMC numunesi pipet ve numuneyi kartuşun numune girişine yavaşça enjekte edin. Kartuşu takıp sabitledikten sonra, kapıyı kapatın ve OK düğmesine basın.CTC'lerin otomatik zenginleştirilmesi tamamlandığında, alarmı durdurun. Kartuşu çıkarın ve arka plaka sökücüyü veya BPR'yi kartuşun önündeki dört deliğe takın. Koyu mavi kanadı her iki elinizin baş parmaklarıyla bastırın ve ardından tıklayana kadar açık mavi gövdeye basın.Kartuş gövdesini kaldırarak dikkatlice çıkarın. Çok nazikçe, bir cımbız kullanarak filtre zarını kenardan alın ve membranı nükleik asit hazırlanması için 1,5 mililitrelik bir tüpe veya boyama için bir slayt camına yerleştirin. Gerekirse, filtrelenmiş kanı bir mililitrelik pipet ucu kullanarak kan çıkışına geri kazanın.Ekstrakte edilen cfDNA'lar Biyoanalizör kullanılarak değerlendirildi ve cfDNA tarama bantları elektronik merdivenle birlikte kullanıldı. Merdiveni ve numuneyi hizalamak için yeşil çizgi kullanıldı. Üçgen işaretleri DNA bandını gösterir.Çoğu cfDNA'nın uzunluğu 166 baz çiftidir ve bazıları uzunluğun tamsayı katlarında bulunur. Genellikle, cfDNA konsantrasyonu 50 ila 700 baz çifti boyutuna kadar ölçülür. Her bir numuneden elde edilen miktarda, mililitre başına 8.47 nanogram ve mililitre başına 5.2 nanogram gibi bir fark olmasına rağmen, cfDNA ekstraksiyonunun sonuçları her durumda hem konsantrasyon hem de boyut dağılımı için iyiydi.Bu sonuçlar, LBx 1 yönteminin cfDNA içeren plazmayı doğru bir şekilde ayırdığını göstermektedir. FAST-auto'da, zar çıkarıldı ve CTC'leri ve beyaz kan hücrelerini tespit etmek için floresan antikorlarla boyandı. Cam slaytlara yerleştirilen vitray membran, floresan mikroskop altında gözlemlendi.Membran boyamasından sonra, hücreler DAPI veya nükleer-pozitif sinyalleri mavi renkte gösterirken, EpCAM ve CK veya CTC'ler pozitif yeşil renkle vurgulanır ve CD45 veya WBC pozitif kırmızı renkle vurgulanır. Membranı çıkarmak zor değildir. Bununla birlikte, CTC'lerin kaybı ve kontaminasyonu konusunda dikkatli olmak gerekir.Tam kan, PBMC ve buffy ceket hepsi mevcuttur. Bunun yerine, tüm ses seviyesini ayarlamanız yeterlidir. Diğer sıvılar da kullanılabilir, ancak test gerekli olacaktır.Bu teknik doğrudan hastanelerde ameliyat edilebilir ve madde hızlı bir şekilde elde edilebilir.

automatic-separation-collection-cancer-related-substances-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Dolaşımdaki tümör hücreleri hücresel hasara maruz kalmadan kanserli hastaların kandan izole edilir. Tümör hücrelerinin izolasyonu epiteliyal belirteçler karşı antikorların yanısıra E-selektin bir iki moleküllü yüzey kullanılarak gerçekleştirilir. Bir nanotüp kaplama özellikle yüksek yakalama saflık sonuçlanan kanser hücre adezyon teşvik etmektedir.

Hasta Kan Örneklerinden Canlı Dolaşımdaki Tümör Hücreleri Rapid İzolasyonu

Sirkülasyon tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) birçok metastatik kanser prognostik bulunmaktadır. Bu el yazması altın standart CellSearch sistemi (CSS) CTC sayım platformu ve golleri ortak yanlış sınıflandırma hatalar açıklanır. Buna ek olarak, iki uyarlanmış protokolleri bu teknolojiyi kullanarak metastaz klinik öncesi fare modellerinde kapalı zaman eğrilerinin ve CTC numaralandırma kullanıcı tanımlı işaretleyici karakterizasyonu için tarif edilmiştir.

Klinik ve Klinik Öncesi Araştırma Uygulamaları Tümör Hücre (CTC) Tahliller Sirkülasyon semiautomated adaptasyon

Kanser hücresi proteomlarının derinlemesine analizleri, yeni ilaç hedeflerinin ve tanısal biyobelirteçlerin tanımlanmasını kolaylaştırır. Sıvı ve katı tümörlerden türetilen kanser hücresi alt popülasyonlarındaki (fosfo-) proteomların kantitatif analizi için deneysel bir iş akışı açıklıyoruz. Bu, hücresel zenginleştirme stratejilerinin kantitatif Super-SILAC tabanlı kütle spektrometresi ile birleştirilmesiyle elde edilir.

Sıvı ve Katı Tümörler Kaynaklanan Kanser hücre Proteomlar Kantitatif Kitle Spektrometrik Profil

Kutanöz tümörler genellikle Mohs mikrografik ameliyattan sonra atılır. Klinik destek personelinin klinik operasyonlara müdahale etmeden, aşağısındaki laboratuvar uygulamaları için kutanöz tümörün ( örn., Skuamöz hücreli karsinoma, bazal hücreli karsinoma ve melanom) örneklerini etkili bir şekilde işleyip saklayabilmesini sağlayan bir protokol açıklanmaktadır.

Kliniğe Dayalı Biyorepositoryum Kurulması

Dolaşımdaki tümör hücrelerinin (CtCs) karakterizasyonu çeviri araştırmalarında popüler bir konudur. Bu protokol, küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC) hasta örneklerinde PD-L1 karakterizasyonu ve KTK'ların numaralandırılması için yarı otomatik immünoresans (IF) tahtını tanımlar.

İmmünfluoresans Ile Küçük Hücreli Olmayan Akciğer Kanseri Hastalarından Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin Yarı Otomatik PD-L1 Karakterizasyonu ve Numaralandırılması

El yazması, katı faz mikroekstraksiyonu ile insan beyin tümörlerinin yerinde örneklemesini ve ardından biyobelirteçlerin keşfine yönelik biyokimyasal profillemelerini sunmaktadır.

Metabolomik ve Lipidomik Analizler için Beyin Tümörlerinin Yerinde Örnekleme sivesi ve ekstraksiyonu

Biyobankalar biyomedikal araştırmalar için çok önemli kaynaklardır ve Avrupa Onkoloji Enstitüsü'ndeki Translasyonel ve Dijital Tıp Birimi için Biyobanka bu alanda bir modeldir. Burada, biyobankaların farklı insan biyolojik numunelerinin yönetimi için standart çalışma prosedürlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz.

Translasyonel Tıp için Biyobanka: Optimal Numune Yönetimi için Standart Çalışma Prosedürleri

Sıvı biyopsi, onkoloji translasyonel çalışmalarına yaklaşımımızda devrim yarattı ve örnek toplama, kalite ve depolama, başarılı klinik uygulaması için çok önemli adımlardı. Burada, çoğu translasyonel araştırma laboratuvarında uygulanabilecek aşağı akış dolaşımsız DNA uygulamaları için standartlaştırılmış ve doğrulanmış bir protokolü açıklıyoruz.

Aşağı Akış Dolaşımsız DNA Uygulamaları için Standartlaştırılmış Bir Sıvı Biyopsi Preanalitik Protokolü

Klinik mikroakışkan çip, klinik hasta kan numunesinin ön işlenmesini basitleştiren ve çip üzerinde yerinde dolaşan tümör hücrelerini (CTC'ler) yerinde boyayarak tek bir CTC'nin hızlı bir şekilde tespit edilmesini ve tanımlanmasını sağlayan önemli bir biyomedikal analiz tekniğidir.

Çok Yönlü Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin İzolasyonu için Klinik Mikroakışkan Çip Platformu

Bu protokol, nanopartiküller üzerinde kişiselleştirilmiş protein korona profili için SDS-PAGE analizini standartlaştırır ve kansere özgü imzaların tekrarlanabilir, ölçeklenebilir ve düşük maliyetli tespitini sağlar. Pankreas kanaltel adenokarsinomunun erken teşhisi için tasarlanmış olan bu cihaz, hem araştırma hem de klinik ortamlarda karmaşık proteomik yöntemlere pratik, GÜVEN uyumlu bir alternatif sunar.

Erken Kanser Tespitinde Kişiselleştirilmiş Protein Korona Profilleme için Standartlaştırılmış SDS-PAGE İş Akışı

Keşfedin, otomatik kan işleme protokolü ile kanserle ilişkili hücre dışı DNA ve dolaşımdaki tümör hücrelerinin yüksek saflıkta izolasyonunu. Bu kullanıcı dostu yöntem, kanser araştırmaları için kontaminasyonu en aza indirir ve güvenilir sonuçlar sağlar.

Kanserle İlgili Maddelerin Klinik Örneklerden Otomatik Olarak Ayrılması ve Toplanması

Daha fazla video keşfet