Çay Numunelerinde Pirrolizidin Alkaloid Kontaminasyonunun Kaynağı ve Yolu

Yabancı ot, toprak, taze çay yaprakları ve kuru çay numunesinde 15 pirolizidin alkaloidinin tespit yönteminin geliştirilmesi, çaydaki pirolizidin alkaloidlerinin kontaminasyonunun kaynağını araştırmak için teknik destek sağlayabilir. Katı faz ekstraksiyonu ile karşılaştırıldığında, toprak numunesi için adsorban yöntemi, pirolizidin alkaloidleri analizi için zamandan tasarruf sağlayabilir, maliyeti düşürebilir ve daha iyi geri kazanımlar sağlayabilir. Önceden ısıtılmış kurutulmuş çay ürünleri, taze çay yaprakları veya yabani otlar üzerinde ekstraksiyona başlamak için, 50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde bir gram numuneyi tartın ve tüpe litre sülfürik asit çözeltisi başına 10 mililitre 0.1 mol ekleyin.

Daha sonra, katı faz ekstraksiyonu kullanılarak analiz edilecekse numuneyi iki dakika boyunca vorteks, aynı şey adsorban temizleme kullanılarak analiz edilecekse bir dakika boyunca vorteks. Daha sonra numuneyi 15 dakika boyunca ultrasonik ekstraksiyona, ardından oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 9, 390 G'de santrifüjlemeye tabi tutun. Daha sonra plastik uçlu bir damlalık kullanarak, süpernatant çözeltisini 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.

Ekstraksiyonu iki kez gerçekleştirdikten sonra, süpernatantları tüpte birleştirin. Hazırlanan toprakta ekstraksiyona başlamak için, 50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde bir numunenin bir gramını tartın. Toprak pH'ını 6.0'a ayarlamak için litre trisodyum sitrat çözeltisi başına 0.1 mililitre 0.1 mol ekleyin ve numunenin iki dakika beklemesine izin verin.

Daha sonra tüpe litre sülfürik asit metanol çözeltisi başına 10 mililitre 0.1 mol ekleyin ve numuneyi iki dakika boyunca vorteks, ardından 30 dakika çalkalayın. Ardından, daha önce gösterildiği gibi 30 dakika boyunca ultrasonik ekstraksiyon gerçekleştirin. Daha sonra numuneyi 10 dakika boyunca 9.390 G'de santrifüj edin.

Plastik uçlu bir damlalık kullanarak, süpernatantı 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Ekstraksiyonu iki kez gerçekleştirdikten sonra, süpernatantları birleştirin. Katı faz ekstraksiyonunu veya SPE kartuşunu beş mililitre metanol ve ardından beş mililitre deiyonize su ile etkinleştirin.

Etkinleştirmeden sonra, numune ekstraksiyonundan önceden etkinleştirilmiş kartuşa 10 mililitre süpernatant ekleyin. Numune çözeltisi seviyesi kartuşların üst katmanına ulaştıktan sonra, numune matrisini beş mililitre% 1 formik asit çözeltisi, ardından beş mililitre metanol ile boşaltın ve elüentleri atın. Daha sonra, analitleri% 0.5 amonyak suyu içeren beş mililitre metanol ile boşaltın.

UPLC-MS/MS ile analiz etmek için elüenti 0,22 mikron membran filtreden geçirin. Adsorban kullanarak numune temizliği yapmak için, 10 ila 20 ila 15 miligram oranında GCB, PSA ve C18'den ödün veren adsorbanla 10 mililitrelik bir santrifüj tüpü hazırlayın. Daha sonra numune tedavisinden sonra elde edilen süpernatantın iki mililitresini ekleyin.

Daha sonra, numune ve adsorban karışımını bir dakika boyunca vorteks edin ve oda sıcaklığında sekiz dakika boyunca 9.390 G'de santrifüjleyin. Elde edilen süpernatantın bir mililitresini 0,22 mikronluk bir membran filtresinden geçirerek UPLC-MS/MS ile analiz etmeden önce bir numune şişesine filtreleyin. Çalışmada, taze çay yaprakları, kurutulmuş çay örnekleri ve yabancı otlardan elde edilen 15 pirolizidin alkaloidinin SPE kartuş yöntemine kıyasla adsorban saflaştırma tekniği kullanılarak daha yüksek oranda geri kazanımı elde edilmiştir.

Adsorban saflaştırma kullanılarak topraktaki alkaloitlerin geri kazanımları% 79 ila% 111 idi Beş örnekleme bölgesinden toplanan taze çay yapraklarında, senecionine'den daha yüksek intermedine N-oksit içeriği tespit edildi. Senecionine, bir ve iki örnekleme bölgesinden olgun yapraklarda tespit edilmedi. 11 pirolizidin alkaloidi arasında, toprakta sadece ara N-oksit tespit edilirken, çay bitkilerinin farklı kısımlarında seneksiyonin ve ara N-oksit tespit edildi.

Ek olarak, iki yapraklı bir tomurcuktaki Intermedine N-oksit içeriğinin en yüksek olduğu bulunmuştur. Bunu ilk önce denerken, en önemli şey, toprak pH'ınızı 6.0'a ayarlamak için litre trisodyum sitrat çözeltisi başına 0.1 mililitre 0.1 mol eklemektir. Bu yöntem, diğer yenilebilir bitkilerdeki alkaloitlerin analizine uygulanabilir ve aynı zamanda içlerindeki alkaloitlerin kaynağını keşfetmek için doğal teknik sağlar.