Name: Antikor Bağımlı Hücresel Sitotoksisiteyi Modifiye Eden Bileşiklerin Tanımlanması için Yüksek İçerikli Tarama Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-18T14:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 59 s
Description: Keşfedin, yüksek içerikli tarama ile antikor bağımlı hücresel sitotoksisiteyi modifiye eden bileşikleri tanımlama yöntemini. Bu teknik, meme kanseri hücrelerinde NK hücre aracılı ilaç keşfi için güçlü bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

LV, Ulusal Araştırma, Geliştirme ve İnovasyon Ofisi'nden GINOP-2.3.2-15-2016-00010 TUMORDNS", GINOP-2.3.2-15-2016-00048-STAYALIVE ve OTKA K132193, K147482 hibelerinden fon aldı. CD16.176V.NK-92 hücreleri Dr. Kerry S. Campbell'den (Fox Chase Center, Philapedlphia, PA, Brink Biologics, lnc. San Diego, CA), dünya çapında patentlerle korunmaktadır ve Nantkwest, lnc tarafından lisanslanmıştır. Yazarlar, NK-92 hücre hattının kullanımı ve teknik tavsiyeler için György Vereb ve Árpád Szöőr'e teşekkür eder.

NOT: Tahlil iş akışının temel adımları Şekil 2'de sunulmuştur.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64485/64485fig02.jpg"> Şekil 2: ADCC ekranının iş akışı. 96 kuyucuklu HCS plakasına tohumlanan JIMT-1-EGFP hedef hücreleri, bileşik kütüphanesinin ilaçlarıyla muamele edilir. Buna karşılık, lekesiz NK (efektör) hücreleri ve trastuzumab eklenir ve plaka 0 zaman noktasında ve 3 saatlik inkübasyondan sonra görüntülenir. ADCC değerlendirmesi, canlı (yüzeye yapışkan) hedef hücrelerin sayısındaki değişime dayanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64485/64485fig02large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
1. HCS plakasının kaplanması
<ol><li>96 kuyucuklu yüksek içerikli tarama (HSC) plakasını 50 μL/kuyu JIMT-1 besiyeri (DMEM/F-12 besiyeri, fetal sığır serumu (FBS), 0.3 U/mL insülin (100 IU/mL, Humulin R ve %1 penisilin-streptomisin) ile kaplayın.</li>
	<li>Plakayı 1 saat boyunca bir CO2 inkübatörüne yerleştirin. NOT: JIMT-1 hücrelerini plakanın cam yüzeyine bağlamak için kaplama çok önemlidir.</li>
</ol>2. JIMT-1 Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein (EGFP) hücrelerinin tohumlanması
NOT: EGFP eksprese eden JIMT-1 hücreleri önceki çalışmamız18'de üretildi ve hücreler JIMT-1 ortamındaki T25 doku kültürü şişelerinde kültürlendi (adım 1.1'deki kompozisyona bakınız).
<ol><li>Hücreleri 2 mL steril PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Şişeye 1 mL tripsin-EDTA ekleyin ve şişeyi 10 dakika boyunca bir CO2 inkübatörüne geri koyun.</li>
	<li>Kuluçkadan sonra, JIMT-1 hücrelerinin ayrılıp ayrılmadığını kontrol etmek için şişeye dokunun.</li>
	<li>2 mL JIMT-1 ortamı ile sindirimi durdurun ve hücre süspansiyonunu 15 mL'lik bir tüpe toplayın.</li>
	<li>Bir Bürker odasında% 0.4 tripan mavisi (boyanın 80 μL'si + hücre süspansiyonunun 20 μL'si) olan hücreleri sayın ve hücre numarasını 133.000 hücre / mL'ye ayarlayın.</li>
	<li>Kaplama ortamını 96 kuyucuklu plakadan aspire edin (adım 1.2).</li>
	<li>HCS plakalarının her bir kuyucuğuna hücre süspansiyonunun 75 μL'lik pipetini alın (bkz.</li>
	<li>Bir CO2 inkübatöründe 37 ° C'de bir gece inkübasyonu sırasında hücrelerin bağlanmasına izin verin.</li>
</ol>3. JIMT-1 EGFP hücrelerinin bileşik kütüphanesi ile ön muamelesi
<ol><li>Ortamı JIMT-1 hücrelerinden aspire edin ve kuyucuklara 50 μL / kuyu taze JIMT-1 ortamı ekleyin. Plakayı yüksek verimli eleme laboratuvarına aktarın. NOT: Bir sıvı taşıma robotu kullanmak, bileşik kütüphanelerin eklenmesini daha verimli ve tekrarlanabilir hale getirir.</li>
	<li>Test bileşiklerini, 25 nL hacme kalibre edilmiş bir pim aleti ile bileşik kütüphane plakasından tahlil plakasına aktarın. Bunu dört kez gerçekleştirin. Dört transfer turu, 100 nL'lik bir son hacim (ve 20 μM nihai konsantrasyon) verir.</li>
	<li>Her adım arasında, pim aletini önce% 50 DMSO vedaha sonra% 70 etanol ile yıkayın.</li>
	<li>Plakaları 37 ° C'de bir CO2 inkübatörde 1 saat boyunca inkübe edin.</li>
</ol>4. Efektör hücreleri ekleyerek ADCC testinin başlatılması
NOT: CD16.176V.NK92 hücreleri (bundan böyle NK92 hücreleri olarak anılacaktır), FBS, %1 MEM-NEAA, %1 Na-piruvat, %1 glutamin, %1 penisilin-streptomisin ve 100 IU/mL IL-2 ile desteklenmiş α-MEM'de kültüre alınmıştır.
<ol><li>Tripan mavisi ile NK92 hücrelerini sayın (boyanın 80 μL'si + hücre süspansiyonunun 20 μL'si). Hücre numarasını 400.000 hücre/mL olarak ayarlayın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonunun 4 mL'sini oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 150 x g'de santrifüjleyin.</li>
	<li>JIMT-1 ortamına 20 μg / mL anti-HER2 antikoru (trastuzumab) ekleyerek ADCC ortamını hazırlayın.</li>
	<li>NK hücre peletini 5 mL ADCC ortamında yeniden askıya alın.</li>
	<li>Hedef JIMT-1 hücrelerine 50 μL ADCC ortamında 20.000 NK hücreyi pipetleyin. Son hacim 100 μL'dir ve nihai trastuzumab konsantrasyonu 10 μg / mL'dir.</li>
	<li>Tahlil plakasını, 37 °C'de ayarlanmış dahili bir inkübatöre sahip yüksek içerikli analiz ekipmanına yerleştirin.</li>
</ol>5. Görüntüleme
NOT: Plakalar, birincisi, efektör hücrelerin hedef hücrelere eklenmesinden hemen sonra ve ikincisi, NK hücrelerinin eklenmesinden 3 saat sonra olmak üzere iki zaman noktasında görüntülenmelidir. Görüntüleme için, yüksek içerikli analizör ve yazılımı veya uygun alternatifleri kullanılabilir (bkz.
<ol><li>Plakalar listesinden Plaka tipi (96 delikli hücre taşıyıcı ultra) seçeneğini belirleyin.</li>
	<li>Tahlil plakalarda gerçekleştiriliyorsa İki tepe otomatik odaklamasını seçin.</li>
	<li>Konfokal olmayan modda 10x objektif kullanın.</li>
	<li>Sinyal-gürültü oranını iki katına çıkarmak için Binning 2'yi seçin.</li>
	<li>650-760 nm'de parlak alan görüntüleri ve 488 nm (uyarım) ve 500-550 nm (emisyon) dalga boylarında EGFP dönüştürülmüş JIMT-1 hücrelerinin floresan görüntülerini çekin.</li>
	<li>Görüntüleme için alan sayısını ve zaman noktası sayısını seçin.</li>
</ol>6. Görüntü analizi
NOT: ADCC verimliliğini analiz etmek için, uygulanabilir JIMT-1 hücreleri sayılır. ADCC tarafından öldürülen hedef hücreler yüzeyden ayrılır ve mikroskobun odak düzleminden uzaklaşır. Bu nedenle, ADCC reaksiyonunun başlangıcındaki ve sonundaki canlı hücrelerin sayısı arasındaki fark, ADCC tarafından elimine edilen hedef hücrelere karşılık gelir. Değerlendirme dizisinin nasıl oluşturulacağını göstermek için, videoda bir kontrol ADCC kuyusu gösterilir.
<ol><li>Görüntüdeki hücrelere karşılık gelen bölgeleri algılamak için Hücreleri bul modülünü kullanın. NOT: Her hücre, görüntüde, çevresinden daha yüksek floresan yoğunluğuna sahip bir bölge olarak algılanır.</li>
	<li>Çapı en az 80 μm olan yerleşik M algoritmasını kullanarak hücreleri seçin.</li>
	<li>Büyük bir nesneyi daha küçük nesnelere ayıran Bölme duyarlılığını 0,5 olarak ayarlayın.</li>
	<li>Ortak eşiği (en düşük piksel yoğunluğu düzeyi) değerini 0 olarak ayarlayın.</li>
	<li>Yüksek EGFP floresan yoğunluğuna sahip arka plan alanının algılanmasını iki adımda hariç tutun.<ol><li>İlk olarak, önceden seçilen Hücreler bölgesindeki EGFP floresan yoğunluğunu belirlemek için Yoğunluk Özelliklerini Hesapla işlevini kullanın.</li>
		<li>Nüfus seç seçeneğini kullanarak minimum ve maksimum yoğunluk eşiğini ayarlayın.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Gupta, S. L., Basu, S., Soni, V., Jaiswal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunotherapy%3A+an+alternative+promising+therapeutic+approach+against+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+Reports%22%5BJournal%5D)">Immunotherapy: an alternative promising therapeutic approach against cancers.</a> Molecular Biology Reports. 49 (10), 9903-9913 (2022).</li>
<li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+past%2C+present%2C+and+future+of+non-viral+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The past, present, and future of non-viral CAR T cells.</a> Frontiers in Immunology. 13, 867013(2022).</li>
<li>June, C. H., O'Connor, R. S., Kawalekar, O. U., Ghassemi, S., Milone, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+immunotherapy+for+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CAR T cell immunotherapy for human cancer.</a> Science. 359 (6382), 1361-1365 (2018).</li>
<li>Ross, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HER-2+receptor+and+breast+cancer%3A+ten+years+of+targeted+anti-HER-2+therapy+and+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">The HER-2 receptor and breast cancer: ten years of targeted anti-HER-2 therapy and personalized medicine.</a> Oncologist. 14 (4), 320-368 (2009).</li>
<li>Shitara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+and+development+of+trastuzumab+deruxtecan+and+safety+management+for+patients+with+HER2-positive+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastric+Cancer%22%5BJournal%5D)">Discovery and development of trastuzumab deruxtecan and safety management for patients with HER2-positive gastric cancer.</a> Gastric Cancer. 24 (4), 780-789 (2021).</li>
<li>Gianni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+neoadjuvant+pertuzumab+and+trastuzumab+in+women+with+locally+advanced%2C+inflammatory%2C+or+early+HER2-positive+breast+cancer+%28NeoSphere%29%3A+a+randomised+multicentre%2C+open-label%2C+phase+2+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of neoadjuvant pertuzumab and trastuzumab in women with locally advanced, inflammatory, or early HER2-positive breast cancer (NeoSphere): a randomised multicentre, open-label, phase 2 trial.</a> Lancet Oncology. 13 (1), 25-32 (2012).</li>
<li>Barok, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trastuzumab+causes+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity-mediated+growth+inhibition+of+submacroscopic+JIMT-1+breast+cancer+xenografts+despite+intrinsic+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cancer+Therapy%22%5BJournal%5D)">Trastuzumab causes antibody-dependent cellular cytotoxicity-mediated growth inhibition of submacroscopic JIMT-1 breast cancer xenografts despite intrinsic drug resistance.</a> Molecular and Cancer Therapy. 6 (7), 2065-2072 (2007).</li>
<li>Gauthier, M., Laroye, C., Bensoussan, D., Boura, C., Decot, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+Killer+cells+and+monoclonal+antibodies%3A+Two+partners+for+successful+antibody+dependent+cytotoxicity+against+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">Natural Killer cells and monoclonal antibodies: Two partners for successful antibody dependent cytotoxicity against tumor cells.</a> Crit Rev Oncol Hematol. 160, 103261(2021).</li>
<li>Gruijs, M., Sewnath, C. A. N., van Egmond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+exploitation+of+neutrophils+to+fight+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic exploitation of neutrophils to fight cancer.</a> Semin Immunol. 57, 101581(2021).</li>
<li>Mando, P., Rivero, S. G., Rizzo, M. M., Pinkasz, M., Levy, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+ADCC%3A+A+different+approach+to+HER2+breast+cancer+in+the+immunotherapy+era%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Targeting ADCC: A different approach to HER2 breast cancer in the immunotherapy era.</a> Breast. 60, 15-25 (2021).</li>
<li>van der Haar Avila, I., Marmol, P., Kiessling, R., Pico de Coana, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+by+chromium+release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Evaluating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity by chromium release assay.</a> Methods in Molecular Biology. 1913, 167-179 (2019).</li>
<li>Broussas, M., Broyer, L., Goetsch, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+antibody-dependent+cell+cytotoxicity+using+lactate+dehydrogenase+%28LDH%29+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of antibody-dependent cell cytotoxicity using lactate dehydrogenase (LDH) measurement.</a> Methods in Molecular Biology. 988, 305-317 (2013).</li>
<li>Toth, G., Szollosi, J., Vereb, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitating+ADCC+against+adherent+cells%3A+Impedance-based+detection+is+superior+to+release%2C+membrane+permeability%2C+or+caspase+activation+assays+in+resolving+antibody+dose+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Quantitating ADCC against adherent cells: Impedance-based detection is superior to release, membrane permeability, or caspase activation assays in resolving antibody dose response.</a> Cytometry A. 91 (10), 1021-1029 (2017).</li>
<li>Chung, S., Nguyen, V., Lin, Y. L., Kamen, L., Song, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thaw-and-use+target+cells+pre-labeled+with+calcein+AM+for+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Thaw-and-use target cells pre-labeled with calcein AM for antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 447, 37-46 (2017).</li>
<li>Lee-MacAry, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+flow+cytometric+cell-mediated+cytotoxicity+assay+using+the+fluorophores+PKH-26+and+TO-PRO-3+iodide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a novel flow cytometric cell-mediated cytotoxicity assay using the fluorophores PKH-26 and TO-PRO-3 iodide.</a> Journal of Immunological Methods. 252 (1-2), 83-92 (2001).</li>
<li>Tanito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+natural+killer+cell-mediated+cell+killing+assay+based+on+the+leakage+of+an+endogenous+enzyme+or+a+pre-loaded+fluorophore%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Science%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of natural killer cell-mediated cell killing assay based on the leakage of an endogenous enzyme or a pre-loaded fluorophore.</a> Analytical Science. 37 (11), 1571-1575 (2021).</li>
<li>Lin, S., Schorpp, K., Rothenaigner, I., Hadian, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+high-content+screening+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Image-based high-content screening in drug discovery.</a> Drug Discovery Today. 25 (8), 1348-1361 (2020).</li>
<li>Guti, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multitargeted+receptor+tyrosine+kinase+inhibitor+sunitinib+induces+resistance+of+HER2+positive+breast+cancer+cells+to+trastuzumab-mediated+ADCC%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">The multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitor sunitinib induces resistance of HER2 positive breast cancer cells to trastuzumab-mediated ADCC.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 71 (9), 2151-2168 (2022).</li>
<li>Li, F., Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focusing+on+NK+cells+and+ADCC%3A+A+promising+immunotherapy+approach+in+targeted+therapy+for+HER2-positive+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Focusing on NK cells and ADCC: A promising immunotherapy approach in targeted therapy for HER2-positive breast cancer.</a> Frontiers in Immunology. 13, 1083462(2022).</li>
<li>Perussia, B., Loza, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+for+antibody-dependent+cell-mediated+cytotoxicity+%28ADCC%29+and+reverse+ADCC+%28redirected+cytotoxicity%29+in+human+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Assays for antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and reverse ADCC (redirected cytotoxicity) in human natural killer cells.</a> Methods in Molecular Biology. 121, 179-192 (2000).</li>
<li>Garcia-Alonso, S., Ocana, A., Pandiella, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trastuzumab+emtansine%3A+Mechanisms+of+action+and+resistance%2C+clinical+progress%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">Trastuzumab emtansine: Mechanisms of action and resistance, clinical progress, and beyond.</a> Trends in Cancer. 6 (2), 130-146 (2020).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını bildirmektedir.

ADCC reaksiyonu nispeten uzun zaman önce tanımlanmıştır. Sürecin anahtar moleküler olayları da tanımlanmıştır19. ADCC'yi ölçme yöntemleri, altın standart radyoaktif krom salınım testinden, sitoplazmik enzim salınım testlerinden birkaç floresan bazlı akış sitometrisine veya mikroplaka tahlillerinekadar uzanır 20. Bununla birlikte, bu testlerin ortak bir sınırlaması, yüksek verimli uygulamalara uygun olmamalarıdır. Daha önce, ADCC modifiye edici ilaçlar18</s...

Antikanser antikorları, immün kontrol noktası inhibitörleri veya kimerik antijen reseptörü eksprese eden T (CAR-T) hücreleri ile immünoterapi, kanser tedavisine güçlü bir yaklaşımı temsil eder 1,2,3. Trastuzumab, HER-2 pozitif erken evre veya metastatik meme kanserinin yanı sıra HER-2 pozitif metastatik mide kanseri 4,5,6 tedavisinde kullanılan insanlaştırılmış bir monoklonal anti-HER-2 (insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2) antikorudur. Öncelikle epidermal büyüme faktörü4'ün proliferasyon uyarıcı etkisini inhibe ederek etki eder. Bununla birlikte, trastuzumab'ın, kanser hücreleri HER-2 stimülasyonuna 7 yanıtlarını kaybetmiş olsalar bile, kanser hücresi ölümünü etkili bir şekilde tetiklediği bildirilmiştir. Antikorun bu paradoksal etkisi, antikor bağımlı hücre aracılı sitotoksisiteye (ADCC)7 bağlıdır. ADCC, topluca ADCC 8,9'un efektör hücreleri olarak bilinen doğal öldürücü (NK) hücreler, granülositler ve makrofajlar tarafından aracılık edilebilir. Trastuzumab gibi bir antikor tümör hücrelerine bağlanırsa, bu efektör hücreler antikorun sabit (Fc) bölgesini bağlamak için Fc reseptörlerini kullanırlar. Antikor, tümör hücreleri ile Fc reseptörü taşıyan efektör hücreler arasında köprü kurarak sitotoksik mediatörlerinin salınımını tetikler10. Doğal öldürücü hücreler, hedef hücre zarında gözenekler oluşturmak için perforin içeren granüllerinin sitotoksik yükünü ve granzimi (hücre ölümü sinyal yollarını tetikleyen) kanser hücrelerinin apoptozuna yol açan immün sinapsa salgılarlar (bkz. Şekil 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64485/64485fig01.jpg"> Şekil 1: ADCC'de efektör ve hedef hücre etkileşimleri. Efektör NK hücresinin hücre yüzeyi Fcγ reseptörü, tümör hücresinin yüzeyinde eksprese edilen HER2 molekülüne özgü anti-HER2 trastuzumab antikorunun Fc bölgesini tanır. Böylece, iki hücre arasında immünolojik sinaps adı verilen ve efektör hücrenin sitotoksik granüllerinin yönlendirilmiş ekzositozunu indükleyen sinaps kurulur. Salınan perforin ve granzim molekülleri sonunda hedef hücrenin apoptozu ile sonuçlanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64485/64485fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
ADCC de dahil olmak üzere sitotoksisiteyi ölçmek için daha önce çeşitli testler geliştirilmiştir. Altın standart, hedef hücrelerin radyoaktif 51Cr izotopu ile etiketlendiği radyoaktif krom salınım yöntemidir ve ADCC, lize edilmiş hedef hücrelerin süpernatantından radyoaktivite ölçülerek ölçülür11. Radyoaktif farmasötiklerin ve atıkların sıkı bir şekilde düzenlenmesi, depolanması ve bertaraf edilmesinden kaynaklanan bariz sorunlar nedeniyle, bu yöntem yaşam bilimcileri arasında giderek daha popüler hale gelmemiştir. Ayrıca, yüksek verimli uygulamalar için de uygun değildir. Öldürülen hedef hücrelerden salınan enzimlerin (örneğin, laktat-dehidrojenaz) aktivitesinin ölçülmesi, 51Cr testi12'ye radyoaktif olmayan bir alternatif sağlayabilir. Bununla birlikte, bu tahliller hedef ve efektör hücre ölümlerini ayırt etmekte başarısız olmaktadır. Elektrik Hücresi-substrat Empedans Algılama (ECIS), ADCC13'ün nicelleştirilmesi için uygun olduğunu kanıtladı, ancak ECIS ekipmanı çoğu laboratuvarda mevcut değildir ve teknik, yüksek verimli uygulamalar / tarama ile uyumlu değildir. Floresan olarak etiketlenmiş hücreler, birçok hücre biyolojisi tahlilinde popüler bir alternatiftir ve genellikle akış sitometrisinde veya plaka okuyucu tabanlı uygulamalarda kullanılır14,15,16. Bununla birlikte, bu testler genellikle yıkama adımları içerir veya yüksek verimli uygulamalarla (örneğin, akış sitometrisine dayalı teknikler) uyumsuzdur. Teoride ADCC nicelleştirmesi için uygun olması gereken bazı popüler sitotoksisite testleri, ADCC verimliliğini güvenilir bir şekilde belirleyememektedir13. Son zamanlarda, floresan konfokal mikroskopinin yayılmasıyla, görüntü tabanlı, yüksek içerikli analizler yaşam bilimlerinin çeşitli alanlarında giderek daha popüler hale gelmektedir17. Bir yandan, hücre görüntüleme ekipmanı artık oldukça yaygınken, diğer yandan, elde edilen görüntülerden neredeyse sonsuz morfolojik parametreler toplanabilir. Bu nedenle, yüksek içerikli tarama uyumlu bir ADCC testi geliştirmek ve bileşik kütüphane taramasına uygunluğunu göstermek için yola çıktık.
Burada, görüntü tabanlı bir ADCC testi sunuyoruz ve bu tahlilin ADCC modüle edici bileşikleri tanımlamak için Yüksek İçerik Taraması (HCS) için nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz. Model, JIMT-1 meme karsinomu hedef hücrelerine, CD16.176V.NK-92 efektör hücrelerine ve insanlaştırılmış monoklonal anti-HER2 antikoru trastuzumab'a dayanmaktadır. Bu yöntemle, NK hücrelerinin tümör öldürme etkisini artırabilecek ilaçları tanımlamak veya ADCC'ye müdahale eden küçük molekülleri tanımlayarak NK hücre aracılı ADCC'nin mekanizması hakkında fikir edinmek mümkündür. ADCC'ye özel olarak hücre aracılı sitotoksisiteyi ölçmeyi amaçlayan yaşam bilimcilerinin, bu tahlili keşif bilimi veya ilaç geliştirme için kullanmaktan fayda sağlayabileceğini öneriyoruz. Bu tahlil, bir laboratuvarın floresan görüntüleme ve kantitatif görüntü analizine erişimi ve bu konuda bazı deneyimleri varsa alternatif olabilir.

<table><tbody><tr><td>5-florourasil</td><td>Applichem</td><td>A7686</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>96 oyuklu Hücre Taşıyıcı Ultra plaka</td><td>PerkinElmer</td><td>LLC 6055302</td><td></td></tr><tr><td>Betulin</td><td>Sigma</td><td>B9757</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>CD16.176V.NK92 hücreleri</td><td>Nankwest Inc.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerulenin</td><td>ChemCruz</td><td>sc-396822</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>sc-200896</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Kolşisin</td><td>Sigma</td><td>C9754</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Concanavalin-A</td><td>Calbiochem</td><td>234567</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>içinde bileşik kitaplıkta</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 orta</td><td>Sigma</td><td>D8437</td><td>JIMT-1 EGFP ortamında</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td>bileşik kitaplıkta</td></tr><tr><td>Etoposide</td><td>Sigma</td><td>E1383</td><td>E1383</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td> <td>Biosera</td><td>FB-1090/500</td><td>JIMT-1 EGFP ve NK ortamı</td></tr><tr><td>Fisetin</td><td>Sigma</td><td>F4043</td><td>bileşik kitaplıkta</td></tr><tr><td>Freedom EVO sıvı taşıma robotu</td><td>TECAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gallotannin</td><td>Fluka Chemical Corp.</td><td>16201</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Gibco</td><td>35.050&ndash; 061</td><td>in NK medium</td></tr><tr><td>Harmony yazılımı&nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsancıllaştırılmış anti-HER2 monoklonal antikoru (Herzuma)</td><td>EGIS Pharmaceuticals, Budapeşte, Macaristan</td>, <td>N/A</td><td></td></tr>, <tr><td>Humulin R (insülin)</td><td>Eli Lilly</td>, <td>HI0219</td>, <td>JIMT-1, EGFP ortamı</td></tr>, <tr><td>IL-2</td>, <td>Novartis Hung&aacute; ria Kft.</td><td>NK ortamında</td> <td>PHC0026</td></tr><tr><td>Isatin</td><td>Sigma</td><td>114618</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler (MEM-NEAA)</td> <td>Gibco</td><td>11,140&ndash; 050</td><td>NK ortamında</td></tr><tr><td>Na-piruvat</td><td>Lonza</td><td>BE13-115E</td><td>NK ortamında</td></tr><tr><td>Naringenin</td><td>Sigma</td><td>N5893</td><td>bileşik kitaplığında</td></tr><tr><td>NQDI-1</td><td>Sigma</td><td>SML0185</td><td>bileşik kitaplığında</td></tr><tr><td>Opera Phoenix Yüksek İçerikli Analiz ekipmanı</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penisilin&ndash; streptomisin</td><td>Biosera</td><td>LM-A4118</td><td>JIMT-1 EGFP ve NK ortamı</td></tr><tr><td>Pentoksifillin</td><td>Sigma</td><td>P1784</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td> <td>Lonza</td><td>BE17-517Q</td><td>hücreleri yıkamak için</td></tr><tr><td>Podophyllotoxin</td><td>Sigma</td><td>P4405</td><td>bileşik kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Quercetin</td><td>Sigma</td><td>Q4951</td> bileşik <td>kütüphanesinde</td></tr><tr><td>Bileşik kitaplığında tanik asit</td><td>Sigma</td><td>T8406</td><td></td></tr><tr><td>Bileşik kitaplığında</td><td>Temozolomid</td><td>Sigma</td><td>T2577</td></tr><tr><td>Tripan mavisi hücre sayımı için %0.4 çözelti</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Vinkristin sülfat</td><td>Sigma</td><td>V0400000</td><td>bileşik kitaplığında</td></tr><tr><td>&-MEM</td><td>Sigma</td><td>M8042</td><td>NK ortamında</td></tr></tbody></table>

antikor bağımlı hücresel sitotoksisiteyi modifiye eden bileşiklerin tanımlanması için yüksek İçerikli tarama testi

High-Content Screening Assay for the Identification of Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Modifying Compounds

Antijene özgü antikorlar veya immün kontrol noktası inhibitörleri ile immünoterapi, meme kanseri tedavisinde devrim yaratmıştır. Epidermal büyüme faktörü reseptörü HER2'yi eksprese eden meme kanseri hücreleri, anti-HER-2 antikoru trastuzumab tarafından hedeflenebilir. Antikora bağımlı hücresel sitotoksisite (ADCC), HER-2'nin antitümör etkisinde rol oynayan önemli bir mekanizmadır. Kanser hücrelerine bağlı trastuzumab, ADCC efektör hücrelerinin (örneğin, doğal öldürücü (NK) hücreler, makrofajlar ve granülositler) Fc reseptörleri tarafından tanınabilir ve bu bağışıklık hücrelerinin sitotoksik aktivitesini tetikleyerek kanser hücresi ölümüne yol açar. Yüksek içerikli tarama ile yeni ADCC modülatör bileşiklerini tanımlamak için ADCC'nin nicelleştirilmesi için görüntü tabanlı bir tahlil geliştirmek üzere yola çıktık. Tahlilde, JIMT-1 meme kanseri hücrelerini aşırı eksprese eden HER2, trastuzumab varlığında NK-92 hücreleri ile birlikte kültürlenir ve hedef hücre ölümü otomatik mikroskopi ve kantitatif görüntü analizi ile ölçülür. Hedef hücreler, EGFP floresanlarına göre efektör hücrelerden ayırt edilir. ADCC modülatör ilaçlarını tanımlamak için bileşik kütüphanelerin tahlilde nasıl test edilebileceğini gösteriyoruz. Bu amaçla, laboratuvar rafından rastgele seçilmiş ince kimyasallar kullanılarak bir bileşik kütüphane test plakası kuruldu. NK hücre göçü ve degranülasyonuna müdahale etmesi beklenen üç mikrotübül destabilize edici bileşik (kolşisin, vinkristin, podofillotoksin) de test kütüphanesine dahil edildi. Test ekranı, üç pozitif kontrol bileşiğinin hepsini, kimyasal bir kütüphanede ADCC modifiye edici ilaçları tanımlamak için yöntemin uygunluğunu kanıtlayan isabetler olarak tanımladı. Bu tahlil ile, antikanser immünoterapileri alan hastaların tedavisinde adjuvan terapötik ajanlar olarak kullanılabilecek ADCC arttırıcı bileşikleri tanımlamak için bileşik kütüphane ekranları yapılabilir. Ek olarak, yöntem, kanser hastaları tarafından farklı endikasyonlar için alınan terapötik ilaçların istenmeyen ADCC inhibe edici yan etkilerini tanımlamak için de kullanılabilir.

Tahlilin gerçek hayatta nasıl çalıştığını göstermek için, laboratuvar raflarından rastgele seçilen 16 bileşikten oluşan bir test kütüphanesi oluşturduk (Şekil 3). Ek olarak, DMSO ayrıca negatif kontrol olarak ve pozitif kontroller olarak üç mikrotübül polimerizasyon inhibitörü bileşiği (kolşisin, vinkristin ve podofillotoksin) dahil edildi. İkincisinin, kanser hücrelerine NK hücre göçüne ve NK hücre degranülasyonuna müdahale ederek ADCC'yi inhibe etmesi bekleniyordu. Tüm test bileşikleri ve ...

Bu protokol, terapötik bir anti-HER-2 antikoru varlığında doğal öldürücü hücre aracılı meme kanseri hücresi öldürmeyi modüle eden bileşikleri tanımlamak için otomatik, görüntü tabanlı yüksek verimli bir teknik sunar.

Antikor Bağımlı Hücresel Sitotoksisiteyi Modifiye Eden Bileşiklerin Tanımlanması için Yüksek İçerikli Tarama Testi

Immunotherapy with antigen-specific antibodies or immune checkpoint inhibitors has revolutionized the therapy of breast cancer. Breast cancer cells ...

Antikora bağımlı hücresel sitotoksisite veya kısaca ADCC, NK hücreleri, granülositler ve makrofajlar olarak adlandırdığımız doğal öldürücü hücreler tarafından aracılık edilebilir. Bunlar ADCC'nin efektör hücreleridir. Epidermal büyüme faktörü reseptörü HER2'yi hedef alan trastuzumab gibi bir antikor tümör hücrelerine bağlanırsa, bu efektör hücreler antikorların sabit FC bölgesini bağlamak için FcyR reseptörlerini kullanırlar.Antikor, tümör hücrelerini ve FcyR reseptör taşıyan efektör hücrelerini birbirine bağlar ve sitotoksik granüllerinin salınımını tetikler. Bu, kanser hücrelerinin apoptozuna yol açar. ADCC, trastuzumabın anti-proliferatif etkilerine yanıt vermeyen tümörlere karşı etkili olabilir.ADCC sistemini kurmak için, anti-HER2 pozitif JIMT-1 meme karsinomu hücrelerini, anti-HER2 antikoru trastuzumab varlığında NK-92 hücre hattı ile birlikte inkübe etmemiz gerekir. Tahlil için kullandığımız JIMT-1 hücre hattı, yeşil floresan proteinini istikrarlı bir şekilde ifade eder. İlk olarak, 96 kuyucuklu yüksek içerikli eleme plakasını JIMT ortamıyla kodlayın.Plakanın her bir kuyucuğuna 50 mikrolitre ortam pipetleyin. Plakayı bir saat boyunca bir CO2 inkübatörüne yerleştirin. Kaplama, JIMT-1 hücrelerinin plakanın cam yüzeyine tutturulması için çok önemlidir.Kaplama adımı sırasında, JIMT-1 hücrelerini deneyin. Hücreleri iki mililitre steril PBS ile yıkayın. Ardından, şişeye bir mililitre Tripsin-EDTA ekleyin.Şişeyi 10 dakika boyunca bir CO2 inkübatörüne geri koyun. Kuluçkadan sonra, JIMT-1 hücrelerinin ayrılıp ayrılmadığını kontrol etmek için şişeye dokunun. İki mililitre JIMT-1 ortamı ile sindirimi durdurun ve hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik bir tüpe toplayın.Ardından, mavi bir döküm odasında tripan mavisi ile JIMT-1 hücrelerini sayın. Hücre numarasını ml başına 133.000 hücreye ayarlayın. Kaplama ortamını aspire edin ve ardından her bir kuyucuğa 75 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin.Hücrelerin bir CO2 inkübatöründe 37 santigrat derecede bir gece inkübasyonu sırasında bağlanmasına izin verin. Ertesi gün, ortamı aspire edin ve kuyucuklara 50 mikrolitre taze JIMT-1 ortamı ekleyin ve plakayı yüksek verimli tarama laboratuvarına aktarın. Robot, test bileşiklerini yüksek içerikli tarama mikroplakalarına aktarmak için kullanılır.Robot kolu ile robot, 25 nanolitre aktarmak için kalibre edilmiş pim alet ünitesini yakalar. Dört adımda toplam 100 nanolitre test bileşiğini bileşik kütüphane plakasından tahlil plakasına aktarın. Test bileşiklerinin nihai konsantrasyonunun 20 mikromolar olduğundan emin olun.Her adım arasında, önce pim aletini% 50 DMSO ve daha sonra% 70 etanol içinde yıkayın. Plakayı bir saat boyunca bir CO2 inkübatöründe 37 santigrat derecede inkübe edin. T25 doku kültürü şişelerindeki kültür NK hücreleri.JIMT-1 hücrelerinin ilaç tedavisi devam ederken, NK hücrelerini bir T25 şişesinden 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne toplayın. NK-92 hücrelerini mavi bir sayım odasında tripan mavisi ile sayın. Hücre numarasını ml başına 400.000 hücreye ayarlayın.Oda sıcaklığında üç dakika boyunca 150 g'da ml başına 400.000 hücre içeren NK hücre süspansiyonunun hacmini santrifüjleyin. JIMT-1 ortamına ml başına 20 mikrogram anti-HER2 antikor trastuzumab ekleyerek ADCC ortamını hazırlayın. Hedef JIMT-1 GFP hücrelerine 50 mikrolitre ADCC ortamında pipet 20.000 NK hücre.Son hacim 100 mikrolitredir ve nihai trastuzumab konsantrasyonu ml başına 10 mikrogramdır. Tahlil plakasını, 37 santigrat derece ayarlanmış yerleşik bir inkübatöre sahip yüksek içerikli analiz ekipmanına yerleştirin. Plakalar iki zaman noktasında görüntülenir.İlk olarak, efektör hücrelerin hedef hücrelere eklenmesinden hemen sonra görüntüler elde ederiz ve ikinci görüntü kümesi NK hücrelerinin eklenmesinden üç saat sonra alınır. İlk olarak, mikroplakanın türünü seçin. 96 kuyucuklu yüksek içerikli eleme plakaları kullanın.Odağı seçmek için seçin, çünkü tahlil konfokal olmayan modda 10x objektife sahip plakalarda gerçekleştirilir. Sinyal-gürültü oranını iki katına çıkarmak için iki bölmeyi seçin. Uygun kanalları, pozlama süresini, lazer gücünü, odak düzlemini ve dalga boyunu seçin.Parlak alan görüntülerini 650-760 nanometrede alın ve 488 nanometre uyarma ve 500-550 nanometre emisyon dalga boyu ile EGFP dönüştürülmüş JIMT-1 hücrelerini tespit edin. Ölçüme başlamadan önce, doğru ayarları kontrol etmek için anlık görüntü işleviyle örnek görüntüler çekin. Son olarak, görüntüleme için alan sayısını ve zaman noktası sayısını ayarlayın.Örneğin, dokuz alan ve iki zaman noktası seçin. ADCC verimliliğini analiz etmek için, kontrol ADCC'deki uygulanabilir JIMT-1 hücrelerini iyi sayın. Görüntüdeki hücrelere karşılık gelen bölgeleri algılamak için ince hücreler modülünü kullanın.Her hücreyi, görüntüde, çevresinden daha yüksek floresan yoğunluğuna sahip bir bölge olarak algılayın. Çapı 80 mikrometre olan yerleşik M algoritmasını kullanarak hücreleri seçin. Büyük bir nesneyi daha küçük nesnelere ayıran bölme duyarlılığı ayarını 0,5 değerine ayarlayın.En düşük piksel yoğunluğu düzeyi olan ortak eşiği sıfıra ayarlayın. Yüksek EGFP floresan yoğunluğuna sahip arka plan alanının algılanmasını iki adımda hariç tutun. İlk olarak, daha önce seçilen hücreler bölgesindeki EGFP floresan yoğunluğunu belirlemek için yoğunluk özelliklerini hesapla işlevini uygulayın.Daha sonra, popülasyon seç seçeneğini kullanarak minimum ve maksimum yoğunluk eşiği ayarlayın, böylece ADCC'nin sonunda uygulanabilir JIMT-1 GFP hedef hücrelerinin sayısını elde ederiz. Üç saat sonra algılanan hücre numarasını, sıfır zamanında algılanan hücre numarasına bölerek ADCC verimliliğini hesaplayın. Yöntemimizin pratik uygulamasını temsili sonuçlarla göstermek istiyoruz.Raflardan rastgele çıkarılan 16 bileşiğin bulunduğu bir test plakası kurduk. Ayrıca, beklenen ADCC inhibitör etkisine sahip üç bileşik, kolşisin, vinkristin, ve podofillotoksin dahil ettik. DMSO negatif kontrol olarak kullanıldı.Her ilaç plakada dört tekrarda kullanıldı. Şekil test ekranının sonucunu göstermektedir. Eksi NK grubunda, ilaçların JIMT-1 hücreleri üzerindeki toksisitesi test edildi.Artı NK grubunda, yaklaşık% 50 sitotoksisiteye neden olan NK hücreleri ve trastuzumab eklendi. Üç test bileşiğinin beklenen ADCC inhibitörü etkisi, tahlil ile tespit edilebilir. Meme kanseri hücreleri, NK hücreleri ve terapötik monoklonal antikor trastuzumab arasındaki klinik olarak ilgili etkileşimi modelleyen bir ko-kültür tahlil sistemi kurduk.Tahlil, görüntü analizi ile birleştirilmiş otomatik mikroskopiye dayanmaktadır ve ADCC modifiye edici ilaçları tanımlamak için kimyasal bileşik kütüphanelerini taramak için uygundur. Prosedür potansiyel olarak bir antitümör yanıtını güçlendiren adjuvan molekülleri tanımlamak veya olumsuz etkisi olan kimyasalları tanımlamak için kullanılabilir.

high-content-screening-assay-for-identification-antibody-dependent

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu video, anne sütü fagositleri tarafından antikora bağımlı hücresel fagositozu (ADCP) ölçmek için yapılan bir testi göstermektedir. Bir antijen-antikor kompleksine konjuge edilmiş floresan işaretli mikroküreler, fagositik lökositler tarafından antikora bağımlı hücresel fagositozu indüklemek için anne sütünden izole edilen bir hücre süspansiyonu ile birleştirilir. Hücreler ortak lökosit antijenine (CD45) karşı antikorlarla etiketlendikten sonra, ADCP aktivitesinin seviyesini gösteren mikroküre...

Fagositler tarafından Antikora Bağımlı Hücresel Fagositozu Ölçmek için İn Vitro Test

Bu video, CAR T hücrelerinin floresan proteinleri eksprese eden 3D tümör sferoidleri üzerindeki sitotoksik etkilerini değerlendiren bir in vitro testi göstermektedir. Bu değerlendirme, CAR T hücreleri ile etkileşimlerden sonra apoptotik kanser hücrelerinin dış broşüründeki açıkta kalan fosfatidilserin kalıntılarına bağlanan Annexin V kırmızı floresan probunu kullanır. Prob tarafından yayılan kırmızı floresan, bu hücreleri yeşil floresan yayan sağlıklı hücrelerden ayırt etmeye yardımcı olur.

Tümör Sferoidlerine Karşı CAR T Hücresi Sitotoksisitesini Değerlendirmek için İn Vitro Test

Bu tümör hedef hücreleri ile inkübe zaman T hücrelerinin sitotoksisiteye ölçmek için bir tek hücreli yüksek verim tahlil açıklanmaktadır. Bu yöntem, mekansal olarak tanımlanan oranlarda T hücreler ve hedef hücrelerin sınırlandırmak için alt nanolitre kuyular (~ 100.000 kuyu / dizi) ve bir yoğun, elastomerik dizisi kullanır ve efektör-hedef konjugasyon ve daha sonra apoptoz izlemek için flüoresan mikroskop ile birleştirilmiştir.

T Hücreleri İçin Kantitatif Yüksek throughput Tek hücreli Sitotoksisite Testi

Tam kan sitotoksisite deneyi (WCA), flüoresans mikroskopisi ve otomatik görüntü işleme ile yüksek verimli hücre konumlandırma teknolojisini içeren tarafından geliştirilmiş bir sitotoksisite analizidir. Burada, bir anti-CD20 antikoru ile tedavi edilen lenfoma hücrelerinin enfekte hücre sitotoksisitesi analiz sağlamak için insan kanında gerçek zamanlı olarak analiz edilebilir açıklar.

İnsan Tüm Kan gerçek zamanlı sitotoksisite deneyleri

Çalışmanın amacı, empedans tabanlı gerçek zamanlı hücre analizörü ve in vitro toksikolojik değerlendirme için yüksek içerikli tarama (HCS) tabanlı bir platformun bir kombinasyonunu kullanarak 15 sigara dumanı bileşeninin biyolojik etkisini değerlendirmekti. Bu çalışma, test edilen bileşiklerin etkili dozları, toksisitesi ve etki şekilleri hakkında bilgi sağlar.

Zararlı ve Potansiyel Zararlı Bileşenlerinin Toksikolojik etkilerinin değerlendirilmesi için yüksek İçerik Tarama Analizi (HPHC)

Burada nötralize antikorlar veya enzim replasman terapiler beyin omurilik sıvısı (BOS) veya insan serumu gibi insan bir matris hücresel alımını müdahale diğer faktörler tespit etmek için bir hücre tabanlı akış sitometresi Yöntem mevcut.

Enzim replasman terapileri ile hücre tabanlı tahlil hücresel alımını nötralize antikorların tespiti

Bu kağıt akış sitometresi-tabanlı bir tahlil kimyasal inhibitörleri ekran kitaplıklarına inhibitörleri ve T hücre reseptör sinyal etkileyen hedefleri tanımlaması için kullanır. Yöntem tanımlamak burada da yüksek üretilen iş gösterimleri için genişletilebilir.

T-hücre reseptör üzerinden tarama kimyasal inhibitörü kütüphanelerin sinyal arabulucu tanımlaması

Sıvı ve katı tümör hücrelerini hedefleyen kimerik antijen reseptör T hücrelerinin gücünü değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı in vitro sitoz ispat sistemini tanımlıyoruz. Bu protokol diğer bağışıklık etki hücreleri değerlendirmek için uzatılabilir, yanı sıra kombinasyon tedavileri.

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Burada, antitümör antikorların önemli bir kanser hücresi öldürme mekanizması olan ADCC mekanizmasını modüle eden bileşikleri tanımlamak için bir yöntem sunuyoruz. NK hücrelerinin sitotoksik etkisi, Trastuzumab varlığında meme kanseri hücre sferoidlerinde ölçülür. Görüntü analizi, sferoidlerdeki canlı ve ölü öldürücü ve hedef hücreleri tanımlar.

Bir Tümör Sferoid Modelinde Antikora Bağımlı Hücresel Sitotoksisitenin Ölçülmesi: İlaç Keşfi Uygulaması

Burada, bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanarak antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) testi için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, ADCC mekanizmasını aydınlatmak ve kanser immünoterapisinde antikorların terapötik potansiyelini değerlendirmek için değerli bir araç sunmaktadır.

Antikora Bağımlı Hücre Aracılı Sitotoksisite Raportörü Biyotahlil Kullanılarak Kanser Hücrelerinde Antikora Bağımlı, Hücre Aracılı Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

Burada, tek hücre düzeyinde hücre öldürmeyi incelemek için bir T hücresini ve bir kanser hedef hücresini kapsülleyen çift emülsiyon damlacıkları oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, büyük bir T hücresi popülasyonu içinde hem sitotoksik moleküllerin hem de hedef hücre apoptozunun ikili miktar tayinine izin verir.

Kimerik Antijen Reseptörü T hücrelerini Tek Hücre Düzeyinde Değerlendirmek için Damlacık Bazlı Sitotoksisite Testi

Keşfedin, yüksek içerikli tarama ile antikor bağımlı hücresel sitotoksisiteyi modifiye eden bileşikleri tanımlama yöntemini. Bu teknik, meme kanseri hücrelerinde NK hücre aracılı ilaç keşfi için güçlü bir platform sunar.

Antikor Bağımlı Hücresel Sitotoksisiteyi Modifiye Eden Bileşiklerin Tanımlanması için Yüksek İçerikli Tarama Testi

Daha fazla video keşfet