Name: Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Keşfedin, insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu ile kemik metastazı ksenograft fare modeli oluşturma yöntemini. Bu teknik, metastaz mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini in vivo ortamda araştırmak için değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2018YFC1704300 ve 2020YFE0201600), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973877 ve 82174408), Şangay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (2021LK047) bütçesi dahilindeki araştırma projeleri ve Şangay İşbirliği İnovasyon Merkezi Hastane TCM Hazırlığı Endüstriyel Dönüşüm Merkezi tarafından desteklenmektedir.

Altı ila sekiz haftalık erkek BALB / c atimik fareler (n = 10), SPF yemine ve steril suya serbest erişime sahip, 12 saatlik aydınlık / karanlık döngü koşulları altında spesifik patojen içermeyen (SPF) bir hayvan odasında ayrı ayrı havalandırılan farelerin kafeslerine (5 fare / kafes) yerleştirildi. Fareler, deneylerden önce bir hafta boyunca uyarlanabilir bir şekilde beslendi. Tüm hayvan deneyleri, Şangay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi hayvan refahı komitesi tarafından onaylandı.
1. Hücre hazırlığı
<ol><li>Prostat kanseri hücresi enjeksiyonu gününde, soğuk öncesi steril PBS (pH 7.4) ile 10 cm'lik bir hücre kültürü kabında kültürlenmiş% 80-90 konfluent lusiferaz etiketli PC-3 hücrelerini (PC-3-lusiferaz) iki kez yıkayın. 1.5 mL% 0.25 tripsin ile 3 dakika boyunca deneyin ve tripsini% 10 serum içeren 6 mL F-12 ortamı ile söndürdükten sonra hücreleri 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne toplayın. NOT: PC-3-lusiferaz hücre hattı, pLV-lusiferaz vektörü15 ile transfekte edildikten sonra PC-3 hücre hattından türetilir.</li>
	<li>Otomatik bir hücre sayacı kullanın ve hücre süspansiyonunun 20 μL'sini hücre sayım plakasına aktararak hücre konsantrasyonunu hesaplayın (bkz.</li>
	<li>Hücreleri oda sıcaklığında (RT) 800 x g'de 5 dakika boyunca santrifüj edin.</li>
	<li>Süpernatantı atmak için bir pipet kullanın ve hücre peletini F-12 ortamında ( Malzeme Tablosuna bakınız) 1 x 107 hücre/mL'lik nihai hücre yoğunluğuna geri askıya alın.</li>
	<li>Enjeksiyona kadar hücreleri her zaman buz üzerinde tutun.</li>
	<li>Hücreleri ameliyathaneye getirin ve hücre enjeksiyonunu 2 saat içinde bitirin. NOT: Doğru enjeksiyon dozlarını sağlamak için (örneğin, şırıngaların içindeki ölü boşlukları önlemek için) ek hücre süspansiyonları (genellikle gerektiğinde iki katına çıkarılmış hacimler) hazırlayın.</li>
</ol>2. İnsan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için cerrahi
NOT: İntrakardiyak enjeksiyon için kullanılan cerrahi aparat 1 mL'lik bir şırıngadır (Şekil 1). Hayvanın anesteziden kurtulmasına kadar prosedür boyunca termal destek sağlayın.
<ol><li>Fareyi SPF hayvan odasında tutun. Tüm prosedürleri aseptik bir kabin içinde sterilize edilmiş aparatlarla gerçekleştirin.</li>
	<li>2 L/dak oksijen akış hızının altında %2 izofluran ve %98 oksijen kullanarak fareyi uyuşturun. NOT: Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için farenin gözlerine az miktarda oftalmik merhem sürün. Tüm ameliyatı iyi havalandırılan bir alanda gerçekleştirin. Hücre enjeksiyonundan önce farenin ayak parmaklarını sıkıştırarak farenin derin anestezi aldığından emin olun. Yanıtlar (örneğin, bir sarsıntı veya seğirme) kalırsa, anestezinin etkili olması için ek süre bekleyin.</li>
	<li>Fareyi bir sırtüstü pozisyona yerleştirin ve orta çizgiden dikey olarak gerilmiş her iki üst ekstremiteyi de hareketsiz hale getirin (Şekil 2A).</li>
	<li>Fareyi cerrahi yapışkan bantla karnından aşağı doğru hareketsiz hale getirin. Sert bastırmaktan ve iç organları yerinden oynatmaktan kaçının (Şekil 2B). NOT: Topografik anatominin korunması (yani, yapışkan bantla sabitleme) esastır, çünkü kalp içi enjeksiyon kör (yani, kalpteki doğru enjeksiyon bölgesi çıplak gözle görülemez).</li>
	<li>Toraksın cildini% 70 etanol çubukla dezenfekte edin.</li>
	<li>Orta sternumun en alt ucundaki depresyondaki fare ksifoid sürecini, ön göğüs duvarının ortasından palpe ederek tanımlayın. Manubriumun üst sınırındaki merkezi çöküntüdeki fare juguler çentiğini, ön göğüs duvarının ortasından palpe ederek tanımlayın.</li>
	<li>Ksifoid işlemin en alt noktasını ve juguler çentiği bir işaretleyici kalemle etiketleyin (Şekil 2A). Bu iki işaretin ortasında ve üçüncü interkostal alanda kalbin hemen üzerinde hafifçe sağa (hayvanın solunda) üçüncü bir işaret yapın. NOT: Enjeksiyon bölgesi orta hattın 1-2 mm solundadır ve enjeksiyon noktası farenin üçüncü ve dördüncü kaburgaları arasındadır (Şekil 2A).</li>
	<li>Hücre süspansiyonunun 200 μL'sini 1 mL'lik bir şırıngaya yükleyin. NOT: Kanın titreştiğinden emin olmak için şırıngada Şekil 2C'de gösterildiği gibi bir hava kabarcığı bulundurun. Hücre süspansiyonu, yüklemeden önce iyice karıştırılmalıdır.</li>
	<li>Enjeksiyon bölgesinden dikey olarak 26 G'lık bir iğne yerleştirin (Şekil 2D).</li>
	<li>Şırıngayı masanın üzerinde sabit tutan elinizi tutun veya sabit tutmak için diğer elinizi kullanın. Şırınganın uzun ekseninin enjeksiyon bölgesine dik olduğundan emin olun ve şırıngayı deri altından yaklaşık 2 mm yerleştirin.</li>
	<li>Parlak kırmızı kan pulsasyonu, iğne ucu sol ventriküle doğru şekilde yerleştirildiğinde iğne göbeğinde ve / veya hücre süspansiyonunda görülebilir. Kan atışı görünmezse, iğne ucu kalpte değildir. İğneyi geri çekin ve değiştirin (iğnenin içindeki kanın pıhtılaşmasının kan nabzını durdurması durumunda). İğneyi bir kez daha yerleştirin.</li>
	<li>Hücreleri enjekte edin. Hücre süspansiyonunu (100 μL) 40-60 sn üzerinde çok yavaş bir şekilde enjekte edin ve şırıngayı tutan eli her zaman sabit tutun. NOT: Şırıngadaki hücre süspansiyonunu yakından takip edin ve şırınganın içindeki hava kabarcığını kalbe enjekte etmeyin.</li>
	<li>İğne geri çekildiğinde hemostazı sağlamak için enjeksiyon bölgesine 15 sn boyunca kuru bir pamuklu çubukla basınç uygulayın.</li>
	<li>Fareyi temiz kafese geri döndürün ve anesteziden tamamen iyileşene kadar hayvanı izleyin.</li>
	<li>Kanser hücrelerinin sistemik dolaşıma girdiğinden emin olmak için fareyi enjeksiyondan sonraki 24 saat içinde in vivo biyolüminesans sistemi ile görüntüleyin. NOT: Doğru şekilde enjekte edilen kanser hücreleri, vücudun her yerinde görülebilen biyolüminesans sinyali ile görülen sol kalp ventrikülü yoluyla arteriyel dolaşıma girer (örneğin, bkz. Şekil 3A).</li>
	<li>İn vivo biyolüminesans görüntüleme gerçekleştirin.<ol><li>Cihazı ve bilgisayarı açın. Cihazdaki ve bilgisayardaki güç göstergesi aydınlandığında yazılımı açın ve ardından Görüntü Yakalama penceresini açın.</li>
		<li>Aygıt bölmesinde bilgisayara bağlı in vivo görüntüleme sistemini tanımlayın. Görüntülenecek fareyi sırtüstü pozisyonda görüntüleme odasına yerleştirin. Ardından görüntüleme odasının kapısını kapatın.</li>
		<li>Görüntü Alma penceresinde sağlanan Ayar bölmesinde parametreleri ayarlayın.<ol><li>Görüntüleri netleştirmek için parametreleri Lens > Zoom > 1x, Lens > Focus > 108 ve Lens > Iris > F 2.8 ile ayarlayın.</li>
			<li>Çekim kanalını Filtre ve Işık: Filtre ve Işık > Filtre > Lüminesans, Filtre ve Işık > Işık > KAPALI ve Filtre ve Işık > Işık Yoğunluğu > Orta olarak ayarlayın.</li>
			<li>Çekilecek görüntünün türünü ayarlayın: Görüntüleme > Türü > Tek Kare, Görüntüleme > Pozlama Süresi > 500 ms, HDR Modu > Görüntüleme > Düşük Kazanç Modu. Görüntüyü elde etmek için Al düğmesine tıklayın.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Metastatik kanser büyümesini in vivo biyolüminesans ile görselleştirin. NOT: Görselleştirmenin her zaman noktasında, intraperitoneal olarak 20 g lusiferin substratının 200 μL'sini 20 g'lık bir fareye (150 mg / kg) enjekte edin ve anesteziden önce 15 dakika bekleyin (bir indüksiyon odasında% 98 oksijen ile karıştırılmış% 2 izofluran). Fareyi biyolüminesans görüntüleme sistemi platformuna yerleştirin. Anesteziyi% 2 izofluran içeren bir burun maskesi ile koruyun.</li>
</ol>3. Patolojik araştırma
<ol><li>Hücre enjeksiyonundan dört hafta sonra, fareyi CO2 inhalasyonu ve ardından servikal çıkık ile feda edin.</li>
	<li>Fareyi sırtüstü pozisyonda hareketsiz hale getirin. Karın ve torakstaki tüm organları kanserli lezyonlar ve / veya patolojik değişiklikler açısından ortaya çıkarmak ve büyük ölçüde incelemek için cerrahi makasla karından toraksa dikey bir kesi (yaklaşık 6 cm) yapın. NOT: Bir intra-kardiyak kanser hücresi enjeksiyon çalışması için, kalbe bitişik mediastendeki kanser lezyonları, yanlış enjekte edilmiş kanser hücrelerini (sol kardiyak ventriküle enjekte edilmeyen hücreler) önermektedir; Bu nedenle, bu fareler nihai veri koleksiyonuna dahil edilmez.</li>
	<li>Metastatik tümörleri makasla tüketin. V = 1/2 × a × b2 formülünü kullanarak tümör hacmini (V) hesaplamak için kumpaslar kullanarak tümörün uzun çaplarını (a) ve kısa çaplarını (b) ölçün ve tümörü elektronik bir ölçek kullanarak tartın.</li>
	<li>Tümör dokularını% 10 formalin çözeltisine sabitleyin ve ardından parafine gömün. Alternatif olarak, tümörleri sıvı azot içinde tutturun-dondurun.</li>
	<li>Metastatik lezyonlarla kemikleri (arka bacaklarda, omurlarda ve/veya kaburgalarda) eksize edin. Her farenin örneğini, cildi ve kasları çıkardıktan sonra 24 saat boyunca 20 mL% 10 formalin çözeltisi içeren 50 mL'lik bir tüpe sabitleyin, ardından sık tampon değişimi ile (her 3 günde bir) % 10 EDTA çözeltisinde 14 gün boyunca dekalsifikasyon yapın.</li>
	<li>Numuneyi parafine gömün ve rutin histolojik inceleme için örnekleri kesitleyin16.</li>
</ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Cancerstatistics%2C+2021%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li>
<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+complications+of+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li>
<li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+metastases%3A+An+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321(2017).</li>
<li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research%3A+From+xenograft+to+PDX%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795(2016).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li>
<li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li>
<li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%3A+BCR%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li>
<li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models%3A+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li>
<li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Musculoskeletal+%26+Neuronal+Interactions%22%5BJournal%5D)">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal & Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li>
<li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li>
<li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176(2018).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+prostate+cancer+cell+line+%28Probasco%29+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li>
<li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP%2FTAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response%2Fendoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li>
<li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li>
<li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556(2022).</li>
<li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li>
<li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , Chapter 14, Unit 14.15 (2010).</li>
<li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804(2016).</li>
<li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cachexia%3A+mediators%2C+signaling%2C+and+metabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li>
<li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excess+TGF-%CE%B2+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li>
<li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint%3A+a+critical+appraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li>
<li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li>
<li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li>
<li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li>
<li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Urologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li>
</ol>

Tüm yazarlar birbiriyle çelişen finansal çıkarlar olmadığını beyan eder.

Kemik metastazı oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu, prostat kanseri kemik metastazının fonksiyonlarını ve mekanizmalarını araştırmak ve terapötik etkinliği değerlendirmek için ideal bir fare modelidir. Çalışmalar, kemik hasarının büyük olasılıkla proksimal tibia ve distal femur17'de meydana geldiğini ve bunun da yüksek vaskülarizasyon ve metabolik aktivitelerinden kaynaklanabileceğini göstermiştir.
Kemik metastazı meme kanseri h...

Prostat kanseri, 112 ülkede erkeklerde en sık görülen kanserdir ve yüksek insani gelişme endeksi ülkelerinde ölüm oranı açısından ikinci sırada yer almaktadır 1,2. Prostat kanseri hastalarında ölümlerin çoğu metastazdan kaynaklanır ve vakaların yaklaşık% 65-75'inde kemik metastazı gelişir 3,4. Bu nedenle, prostat kanseri hastalarının klinik sonuçlarını iyileştirmek için prostat kanseri kemik metastazlarının önlenmesi ve tedavisine acilen ihtiyaç vardır. Kemik metastazının hayvan modeli, prostat kanseri kemik metastazının her aşamasında yer alan çok aşamalı süreci ve moleküler mekanizmaları keşfetmek, böylece terapötik hedefleri belirlemek ve yeni terapötikler geliştirmek için vazgeçilmez bir araçtır5.
Prostat kanseri kemik metastazının deneysel hayvan modellerini oluşturmak için en yaygın yöntemler, ortotopik, intra-diyafiz (intra-tibial gibi) ve prostat kanseri hücrelerinin intra-kardiyak enjeksiyonunu içerir. Ortotopik enjeksiyonlu kemik metastazı modeli, prostat kanseri hücrelerinin bir farenin prostatına doğrudan enjekte edilmesiyle oluşturulur 6,7. Bu deneysel hayvan modeli, prostat kanseri kemik metastazı ile çok benzer klinik özelliklere sahiptir. Bununla birlikte, metastaz esas olarak kemikte değil, aksiller lenf nodu ve akciğerde gerçekleşir 8,9. Prostat kanseri için intra-tibial enjeksiyon modeli, prostat kanseri hücrelerini kemikte yüksek tümör oluşum hızına sahip tibiaya doğrudan enjekte eder (tibia)10,11; Bununla birlikte, kemik korteksi ve kemik iliği boşluğu kolayca zarar görebilir. Ek olarak, tibial enjeksiyon yöntemi, kanser hücrelerinin dolaşım yoluyla kemiği kolonize ettiği prostat kanseri kemik metastazının patolojik sürecini uyaramaz. Kanser hücrelerinin dolaşımını, vasküler ekstravazasyonunu ve daha yüksek kemik metastazı oranı ile uzak metastazlarını araştırmak için, prostat kanseri hücrelerinin farenin sol ventrikülüne doğrudan enjekte edilmesiyle intrakardiyak enjeksiyon tekniği geliştirilmiştir 8,12,13. Bu, onu kemik metastazı araştırması için değerli bir hayvan modeli yapar8. İntrakardiyak enjeksiyon yöntemi, ortotopik enjeksiyon yönteminden çok daha yüksek olan yaklaşık %759,14'lük bir kemik metastazı oranı göstermektedir. Bu nedenle, intra-kardiyak enjeksiyon, prostat kanseri kemik metastazı olan bir hayvan modeli oluşturmak için ideal bir yöntemdir.
Bu çalışma, prostat kanseri kemik metastazlarının fare modelini oluşturma sürecini tanımlamayı ve okuyucuların model kuruluşunu görselleştirmelerini sağlamayı amaçlamaktadır. Mevcut çalışma, atimik farelerde insan prostat kanseri hücrelerinin intra-kardiyak enjeksiyonu yoluyla bir kemik metastazı ksenograft modeli oluşturmak için ayrıntılı süreçler, önlemler ve açıklayıcı resimler sunmaktadır. Bu yöntem, prostat kanseri kemik metastazının moleküler mekanizmalarını ve in vivo terapötik etkilerini daha fazla araştırmak için etkili bir araç sağlar.

<table><tbody><tr><td>1 mL şırınga ve iğneler</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td><td>20200411</td><td>Hücreler farelerin ventriküllerine enjekte edildi</td></tr><tr><td>Anestezi makinesi</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IP</td><td>Fareleri uyuşturmak için ekipman</td></tr><tr><td>Otomatik hücre sayacı</td><td>Şangay Simo Biyolojik Technology Co, Ltd</td><td>IC1000</td> <td>ve nbsp; Hücreleri saymak için</td></tr><tr><td>BALB/c atimik fareler</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>Erkek</td><td>6-8 haftalık, erkek fareler</td></tr><tr><td>Biyolüminesans görüntüleme sistemi</td><td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td><td>Vieworks Enjekte</td><td>edilen hücreler lusiferaz ile işaretlenmişse tümör büyümesini ve pulmoner metastazı izlemek için</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü (15 mL, 50 mL)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>&nbsp; 430790, Corning</td><td></td></tr><tr><td>EDTA çözümü</td><td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1105</td><td>&nbsp; Kemik tissürünün dekalsifikasyonu için</td></tr><tr><td>F-12 ortamı</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>21700075, GIBCO</td><td>Hücre kültürü ortamı</td></tr><tr><td>Formalin çözeltisi</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>BL539A</td><td>Her farenin örneğini sabitlemek için</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>VETEASY</td><td>Anestezi için&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofektamin 2000</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>11668027, Thermo fisher</td><td>Plazmid transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>PC-3 hücre hattı</td><td>Çin Bilimler Akademisi Hücre Bankası</td><td>TCHu 158</td><td>Prostat kanseri hücre hattı</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Beyotime Biyoteknoloji</td><td>ST447</td><td>İnsan osteosarkom hücrelerini yıkayın</td></tr><tr><td>Tripsin (% 0.25)</td> <td>Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd</td><td>25200056, Gibco</td><td>Hücreleri ayırmak için</td></tr><tr><td>Vektör (pLV-lusiferase)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>VL3613</td><td>Transfeksiyon</td></tr><tr><td>X-ışını görüntüleme sistemi</td> için plazmid <td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td><td>FX PRO</td><td>Tümör büyümesini tespit etmek için x-ışını görüntüleri elde etmek için</td></tr><tr><td>&mu; CT80</td><td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td><td>Scanco Medical AG, İsviçre</td><td>Kemik yıkımının tespiti için. Miko-CT, 3DCalc, koni rekonstrüksiyonu ile donatılmıştır. ve &mu; CT Ray V3.4A model görselleştirme yazılımı.</td></tr></tbody></table>

kemik metastazı ksenograft fare modeli oluşturmak için İnsan prostat kanseri hücrelerinin İntrakardiyak enjeksiyonu

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

En sık görülen erkek malignitesi olan prostat kanseri (PK), esas olarak %65-75 kemik metastazı oranı nedeniyle mortalitede ikinci sırada yer almaktadır. Bu nedenle, prostat kanseri kemik metastazının sürecini ve ilgili mekanizmalarını anlamak, yeni terapötiklerin geliştirilmesi için esastır. Bunun için, kemik metastazının bir hayvan modeli önemli bir araçtır. Burada, prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu yoluyla bir kemik metastazı fare modeli oluşturmak için ayrıntılı prosedürler sunuyoruz. Bir biyolüminesans görüntüleme sistemi, prostat kanseri hücrelerinin kalbe doğru bir şekilde enjekte edilip edilmediğini belirleyebilir ve metastatik lezyon gelişimini izlemede büyük avantajlara sahip olduğu için kanser hücresi metastazını izleyebilir. Bu model, kemikte mikro-metastaz oluşturmak için yayılmış kanser hücrelerinin doğal gelişimini çoğaltır ve prostat kanseri kemik metastazının patolojik sürecini taklit eder. Moleküler mekanizmaların ve bu hastalığın in vivo terapötik etkilerinin daha fazla araştırılması için etkili bir araç sağlar.

Biyolüminesans görüntüleme, intrakardiyak enjeksiyon modeli için metastatik lezyon gelişiminin izlenmesinde muazzam avantajlar sunmaktadır. Kanser hücresi enjeksiyonundan kısa bir süre sonra (24 saat içinde), genel dolaşıma giren kanser hücrelerini görselleştirmek için biyolüminesans görüntüleme kullanıldı (Şekil 3A). Vücudun her yerinde belirgin biyolüminesans sinyali, kanser hücreleri arteriyel dolaşıma düzgün bir şekilde enjekte edildiğinde görülecektir. Sadece enjeksiyon bölgesinde (kalp...

Burada, kemik metastazı lezyonları olan bir fare modeli oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Bu yöntem, prostat kanseri hücrelerinin kemik metastazının doğal ilerlemesini in vivo olarak yakından taklit eden ideal bir model üretmeye yardımcı olabilir. Bu teknik, kemik metastazı avantajına sahiptir ve in vivo prostat kanseri hücrelerinin doğal kemik metastazı sürecini temsil eder. Bu teknik, moleküler mekanizmaların araştırılmasına ve prostat kanseri kemik metastazı için in vivo terapötik etkilerin araştırılmasına fayda sağlar.Enjeksiyon gününde, 10 santimetrelik bir hücre kültürü kabında kültürlenmiş% 80 ila% 90 oranında birleşen lusiferaz etiketli PC3 hücrelerini alın ve hücreleri soğuk steril PBS ile iki kez yıkayarak enjeksiyon için hazırlamaya başlayın. Yıkanmış hücreleri üç dakika boyunca 1.5 mililitre% 0.25 tripsin ile tripsin yapın, ardından% 10 serum içeren altı mililitre F12 ortamı ekleyerek tripsini söndürün ve hücreleri 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne toplayın. Toplanan hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini bir hücre sayma plakasına aktarın ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu hesaplayın.Daha sonra, hücreleri oda sıcaklığında 800 G'de beş dakika boyunca santrifüj edin.Bir pipet kullanarak süpernatantı atın ve istenen nihai hücre yoğunluğunu elde etmek için hücre peletini F12 ortamında yeniden askıya alın. Şimdi hücreleri ameliyathaneye taşıyın ve hücre enjeksiyonunu iki saat içinde gerçekleştirin. Enjeksiyona kadar hücreleri buz üzerinde tutun.Ameliyata başlamak için, anestezi uygulanan fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve her iki üst ekstremiteyi de orta hattan dik olarak uzatarak hareketsiz hale getirin. Cerrahi yapışkan bant kullanarak, sert bastırmadan ve iç organları yerinden oynatmadan fareyi karnından aşağı doğru hareketsiz hale getirin. Toraksın cildini% 70 etanol çubukla dezenfekte edin.Daha sonra, orta sternumun en alt ucundaki depresyondaki fare ksifoid sürecini bulmak için ön göğüs duvarının ortasından palpe edin. Ksifoid işlemin en aşağı noktasını etiketleyin. Daha sonra ön göğüs duvarının ortasından palpe ederek, fare juguler çentiğini manubriumun üst sınırındaki merkezi depresyonda bulun ve juguler çentiğin en alt noktasını işaretleyin.Şimdi önceki iki işaret arasındaki orta noktayı, hafifçe sağa doğru ve üçüncü interkostal alanda kalbin hemen üzerinde bulun ve işaretleyin. Bu enjeksiyon noktasıdır. Süspansiyonun 200 mikrolitresini 26 gauge iğne ile monte edilmiş bir mililitrelik bir şırıngaya yüklemeden önce hücre süspansiyonunu iyice karıştırın.Enjeksiyon sırasında titreşen kanın girmesine izin vermek için piston ile süspansiyon arasındaki şırıngada biraz hava bırakın. Enjeksiyonu gerçekleştirmek için, iğneyi enjeksiyon bölgesinden dikey olarak yerleştirin. İğne ucu sol ventriküle doğru şekilde yerleştirilirse, iğne göbeğinde parlak kırmızı titreşen kan görünecektir.Kan pulsasyonu görünmüyorsa veya kan pıhtılaşıyorsa enjekte etmeyi tekrar deneyin. İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini sabit bir el ile 40 ila 60 saniye boyunca çok yavaş bir şekilde enjekte edin. Enjeksiyonun tamamlanmasından sonra, hemostazı sağlamak için enjeksiyon bölgesine kuru bir pamuklu çubukla 15 saniye boyunca basınç uygularken iğneyi geri çekin.Fareyi temiz kafese geri döndürün ve anesteziden tamamen iyileşene kadar hayvanı izleyin. Lusiferaz etiketli PC3 hücrelerinin fareye enjekte edilmesinden 24 saat sonra yapılan biyolüminesans görüntüleme, hayvanın tüm vücudundan sistemik dolaşımda kanser hücrelerinin varlığını gösteren sinyaller gösterdi. Metastatik lezyonlar, enjeksiyondan iki hafta sonra farenin arka bacaklarında ortaya çıktı.Metastatik lezyonlar zaman ilerledikçe büyüdü ve diğer bölgelerde görünmeye başladı. Kemiklerdeki prostat kanseri hücresi kaynaklı metastatik lezyonlar, hayvanın proksimal tibiasında kemik yıkımını gösteren x-ışını görüntüleme kullanılarak daha da tespit edildi. Aynı şey mikro BT taraması ile de doğrulandı.Metastatik lezyonlar parafin gömülü dokularda hematin ve eozin boyaması ile daha da doğrulandı. Doğru enjeksiyon bölgesi, bu modelin başarı oranını sağlamak için çok önemlidir. Bu pratik ile başarılabilir.

intra-cardiac-injection-human-prostate-cancer-cells-to-create-bone

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Hayvan modelleri sık kemik kanseri metastazı araştırmak için kullanılmaktadır. Bu protokolü biz kemik metastazı çalışmaları için tümör inokülasyonu iki genel metot tanımlamak ve kısaca bu modeller izlemek ve ölçmek için kullanılan analizler bazı anlatacağız.

Kemik Metastaz Modelleri

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Bu videoda, prostat kanseri hücrelerinin bir fare modeline intra-prostat enjeksiyonu uygulama prosedürünü gösteriyoruz. Ortotopik murin modelleri, non-invaziv ve klinik olarak ilgili bir ortamda hastalığın kökenini ve tedavi tedavilerine yanıtı incelemek için kullanılabilir.

Kanser Hücrelerinin İntraprostat Enjeksiyonu: Ortotopik Prostat Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Insan prostat kanser ortotopik bir model akciğer tümör hücreleri ve farklı metastaz oluşumu dolaşan tümör boyutu ölçümü sağlar. Hücreler birincil organı kaçmak gerekir gibi, kan dolaşımına girerek, ve bir ikincil site içine implant, bu modeli etkin insanlarda senaryo tartışıldı.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Bu makale, dolaşımdaki tümör hücrelerinden (CTC'ler) prostat kanseri hastasından türetilen ksenogreftler (PDX'ler) oluşturmak için kullanılan bir yöntemi detaylandırmaktadır. CTC'lerden PDX modellerinin oluşturulması, prostat kanserini incelemek için alternatif bir deneysel model sağlar; En sık teşhis edilen tümör ve erkeklerde kanserden sık görülen bir ölüm nedenidir.

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Bu iletişim kuralı, prostat kanseri hücreleri, sonraki kastrasyon içi Prostatik enjeksiyon göstermek için hedeftir. Orthotopic önceden klinik androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri hastalığı klinik tümör microenvironment ve immün bir ana bilgisayar bağlamında incelemek için kritik modellerdir.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Santral sinir sistemi metastazı PDX modelleri, insan metastazının fenotipik ve moleküler özelliklerini temsil eder ve bu da onları klinik öncesi çalışmalar için mükemmel modeller haline getirir. Burada PDX modellerinin nasıl oluşturulacağı ve klinik öncesi çalışmalar için en iyi kullanılan aşılama yolları açıklanmaktadır.

Santral Sinir Sistemi Metastazının Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Kurulması ve Kullanılması

Bu protokol, ortopik osteosarkom ve pulmoner metastaz lezyonlarını taşıyan fare modelleri oluşturmak için intratibia osteosarkom hücre enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

Keşfedin, insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu ile kemik metastazı ksenograft fare modeli oluşturma yöntemini. Bu teknik, metastaz mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini in vivo ortamda araştırmak için değerli bir araçtır.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

Daha fazla video keşfet