Generating and Imaging Mouse and Human Epithelial Organoids from Normal and Tumor Mammary Tissue Without Passaging

Serena L. Cornelius; Megan M. Colonnetta; Katherine E. Lake; Clayton A. Smith; Yu-An Zhang; Evanthia T. Roussos-Torres; Sangeetha M. Reddy; Elizabeth H. Chen; Isaac S. Chan

doi:10.3791/64626

Normal ve tümörlü meme dokusundan fare ve insan epitel organoidlerinin passiz olmadan üretilmesi ...

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

Generating and Imaging Mouse and Human Epithelial Organoids from Normal and Tumor Mammary Tissue Without Passaging

Normal ve tümörlü meme dokusundan fare ve insan epitel organoidlerinin passiz olmadan üretilmesi ve görüntülenmesi

Full Text

3,405 Views

08:57 min

November 11, 2022

DOI: 10.3791/64626-v

Serena L. Cornelius^1,2, Megan M. Colonnetta^2,3,4,5, Katherine E. Lake^1,2, Clayton A. Smith^1,2, Yu-An Zhang^1,2, Evanthia T. Roussos-Torres⁶, Sangeetha M. Reddy^1,2, Elizabeth H. Chen^2,3,4,5, Isaac S. Chan^1,2,3,4

¹Department of Internal Medicine, Division of Hematology and Oncology,University of Texas Southwestern Medical Center, ²Harold C. Simmons Comprehensive Cancer Center,University of Texas Southwestern Medical Center, ³Department of Molecular Biology,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁴Hamon Center for Regenerative Science and Medicine,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁵Department of Cell Biology,University of Texas Southwestern Medical Center, ⁶Division of Medical Oncology, Norris Comprehensive Cancer Center, Keck School of Medicine,University of Southern California

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu protokol, diferansiyel santrifüjleme yoluyla primer normal ve tümör meme dokusundan epitel organoidleri üretmek için bir yaklaşımı tartışmaktadır. Ayrıca, gömülü organoidlerin immünofloresan görüntülenmesinin yanı sıra üç boyutlu kültürleme için talimatlar da dahil edilmiştir.

Bu protokol, pasajsız üretilen hafıza epitel organoidlerinin üretimi için önemlidir. Bu tekniğin temel avantajı, organoidlerin enzimatik sindirimden sonra insan ve fare göğsünden ve hafıza dokusundan izole edilebilmesidir. Epitel organoidlerini hücrelerden geçmek zorunda kalmadan izole eden bir dizi diferansiyel santrifüjleme adımı gerçekleştiriyoruz.

Bu tekniği uygulayan bir kişi, dokuları kollajen veya matrise gömerken ve bunları 96 delikli bir plaka içine yerleştirirken zorluklarla karşılaşabilir. Ayrıca, düzgün polimerize kollajen kullanmak ve stabil kubbeleri kaplamak, istilayı görmenin anahtarıdır. Başlamak için, fare uzuvlarını oynatarak ve dört adet 19 gauge iğne kullanarak ötenazi yapılmış bir farenin meme dokusunu toplayın, fareyi pençelerinden ventral tarafı yukarı bakacak şekilde emici bir ped ile kaplı bir tahtaya sabitleyin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos