Name: Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T13:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Keşfedin, 3D baskılı ek parça kullanarak endotelyal hücre ve keratinositler arasındaki parakrin hücreler arası iletişimi nasıl araştırılır. Bu yöntem, hücre canlılığı ve göç analizleri ile çeşitli fizyopatolojilerin çalışılmasına yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma BASF Beauty Care Solutions ile işbirliği içinde yapılmıştır. Charlie Colin-Pierre, BASF /CNRS tarafından finanse edilen bir doktora bursiyeridir.
Sayın Mehdi Sellami'ye 3D baskılı eklerin konsepti için teşekkür etmek istiyoruz.

NOT: 3D ekler (Şekil 1A) ticari olarak temin edilir ve hücre kültürü ve otoklavlama ile biyouyumlu bir fotopolimer reçine kullanılarak basılır (Malzeme Tablosuna bakın). Bu bölümde, eklerle ko-kültür modelini oluşturmak için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır (bkz. Şekil 1B). Bazı uygulama örnekleri de verilmiştir.
1. Sterilize edilmiş ek parçanın 6 oyuklu plakalara yerleştirilmesi
<ol><li>Kitte verilen iki bileşeni (Malzeme Tablosuna bakın), gıda silikonunu (reaktif A) ve katalizörü (reaktif B) üreticinin talimatlarına göre 10:1 (v/v) oranında karıştırın. (Şekil 1Ba). İki bileşeni karıştırmak için %70 etanol ile sterilize edilmiş bir spatula kullanın. NOT: Hazırlanacak silikon karışımının hacmi, sabitlenecek ek parça sayısına bağlıdır. Fazla katalizör, silikon karışımının çok hızlı katılaşmasına neden olabilir.</li>
	<li>Karışımın uçların alt kenarında homojen bir şekilde dağılması için ekleri silikon karışımın üzerine cımbızla uygulayın (Şekil 1Bb). Ekleri 6 oyuklu bir plakanın kuyularına yerleştirin ve hücre kültürü ortamının herhangi bir sızıntısını önlemek için eklerin plaka ile yakın temas halinde olduğundan emin olmak için uçlara hafif bir baskı uygulayın (Şekil 1Bc).</li>
	<li>Silikonun katılaşma sürecini 1 saat desteklemek için plakayı 37 °C'ye koyun. NOT: Katılaşma süresi, eklenen katalizör miktarına bağlıdır.</li>
	<li>Katılaşmadan sonra, plakaları 30 dakika ila 1 saat boyunca% 70 etanol banyosuna daldırarak eklerle sterilize edin.</li>
	<li>Alkolü pipetleyerek atın ve plakayı bir hücre kültürü kapağında gece boyunca kurumaya bırakın (kapak açık). NOT: Hücre fiksasyonunu ve toksisiteyi önlemek için bir sonraki adımı gerçekleştirmeden önce alkol tamamen buharlaştırılmalıdır. Ekleri içeren kullanıma hazır plaka, oda sıcaklığında kuru ve steril koşullarda kullanılmadan önce birkaç gün saklanabilir.</li>
</ol>2. Poli-L-lizin veya poli-HEMA gibi kaplamalar (İsteğe bağlı adım)
NOT: Bu deneyde kaplama yapılmamıştır ve eklerin kaplanma olasılığı hakkında bilgi vermek için adımlar verilmiştir.
<ol><li>Kaplama çözeltisini üreticinin talimatlarına göre hazırlayın.</li>
	<li>Ek parçanın kaplanması için en büyük bölmeler için 200-400 μL'lik bir hacim ve en küçük bölmeler için 50-100 μL'lik bir hacim düşünün. Kaplama çözeltisini ayrı bölmelere ekleyin.</li>
	<li>Kaplamanın steril koşullar altında üretici tarafından belirtildiği şekilde kurumasını bekleyin.</li>
</ol>3. Hücrelerin tohumlanması
<ol><li>Dış kök kılıfının (KORS) keratinositlerini ve insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerini (HDMEC'ler) üretici tarafından önerildiği şekilde kültürleyin. Hücreler birleştiğinde hücre süspansiyonunu hazırlayın.<ol><li>Ortamı şişelerden atın ve hücreleri ayırmak için 5 mL tripsin ekleyin (bkz.</li>
		<li>KORS içeren şişeyi 37 °C'de %5 CO2 ile 5 dakika bekletin. HDMEC'leri içeren şişeyi oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.</li>
		<li>KORS içeren tripsin solüsyonunu,% 5 fetal sığır serumu (FBS) ve büyüme faktörleri (ek kit ile bazal besiyeri, bkz. Malzeme Tablosu) ile desteklenmiş 5 mL mezenkimal kök hücre ortamı (MSCM) ile karıştırın. HDMEC'leri içeren tripsin çözeltisini,% 5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş 5 mL endotel hücre ortamı (ECM) ile karıştırın (bkz.</li>
		<li>Hücreleri 15 mL'lik steril konik bir tüpe aktarın. KORS ve HDMEC süspansiyonlarını oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 200 x g'da santrifüjleyin.</li>
		<li>Süpernatanı atın ve hücreleri ilgili ortamın 2 mL'sinde yeniden süspanse edin.</li>
		<li>10 μL hücre süspansiyonunu 10 μL tripan mavisi boya ile karıştırın (bkz.</li>
		<li>Sayma slaytının haznesine 10 μL karışım ekleyin.</li>
		<li>Sayma slaytını hücre sayma sistemine yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakın) ve hücre numarasını ve canlılığını tespit edin.</li>
		<li>Hücre süspansiyonunu ilgili ortamda 0.5 x 105 hücre / mL konsantrasyonda hazırlayın. NOT: Farklı hücre tipleri farklı yapışma süreleri gerektiriyorsa ve/veya ideal birleşmeye ulaşmak için hücre tohumlaması hücre tiplerine göre farklı zaman noktalarında yapılabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>800 μL ila 1 mL hücre süspansiyonunu tek tek büyük bölmelere ve 100-150 μL'yi bir pipetle ayrı küçük bölmelere dağıtın.<ol><li>KORS'u 1 x 10 5 hücre/mL'de MSCM'de tohumlayın, büyük bölmelerden birinde%5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiştir.</li>
		<li>ECM'deki tohum HDMEC, küçük bölmelerde 2.5 x 103 hücre/mL'de ve diğer büyük bölmede 1.25 x 105 hücre/mL'de %5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiştir. NOT: Proliferasyon testi küçük bölmelerde, migrasyon ve canlılık deneyleri ise büyük bölmelerde gerçekleştirilebilir. Ekilen hücrelerin konsantrasyonu, üreticinin tavsiyelerine göre optimize edilmiştir. Bu konsantrasyon, 24-48 saatlik inkübasyondan sonra hücrelerin iyi bir şekilde yaşamasını sağlar.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücre kültürü plakasını 37 °C'de %5 CO2 ile veya hücre yapışmasına ve/veya olgunlaşmasına izin vermek için normal koşullar altında yerleştirin. NOT: Ortamı değiştirmeden hücreleri 24-48 saat inkübe edin. Gerekirse, bölmelerin ortamı bağımsız olarak değiştirilebilir.</li>
</ol>4. Ortak kültürün uygulanması (Şekil 1Bd)
NOT: Ortak kültürün uygulanması, ortak ortamın eklendiği zamana karşılık gelir. Farklı bölmelerdeki tüm hücre tipleri için benzersiz bir ortamın eklenmesi, iletişim pencerelerinin (3D baskılı eklerin duvarlarındaki oval delikler) varlığı nedeniyle hücreler arasında parakrin iletişim imkanı sağlar. Ortak kültürü uygulamak için 4.1-4.3 adımlarını izleyin.
<ol><li>Bir pipet kullanarak eklerin farklı bölmelerinin kültür ortamını boşaltın. 3D sferoid hücre kültürü durumunda, ortamı çok nazikçe atın.</li>
	<li>Hücreleri büyük bölmelerde 1 mL 37 °C sıcak PBS ve küçük bölmelerde 200 μL 37 °C sıcak PBS ile durulayın. Hücreleri ayırmamak için nazikçe yıkadığınızdan emin olun.</li>
	<li>Tüm hücre tipleri için uyumlu olacak şekilde seçilen ortak bir ortamdan 3 mL ekleyin. NOT: Bu çalışmada bazal ECM (FBS ve büyüme faktörleri olmadan) kullanılmıştır. Ortamın tüm bölmeleri kapladığından emin olun ( Şekil 1A'da gösterildiği gibi iletişim pencerelerinin [duvarlardaki oval delikler] üzerindeki seviye).</li>
	<li>Ko-kültürleri içeren plakayı 37 °C'de %5 CO2 ile 24-48 saat yerleştirin.</li>
</ol>5. Hücre gözlemi, sayma ve kazıma
<ol><li>Morfolojiyi gözlemleyin ve deney sırasında 24-48 saatlik inkübasyondan sonra optik mikroskop altında farklı bölmelerin hücre sayısını sayın. NOT: Beklenen hücre sayısı, kullanılan hücre tiplerine (boyut, morfoloji vb.) ve bölme boyutuna bağlıdır. Bu deneyde, büyük bölmelerde 0.5 x 10 6-1 x 10 6 KORS/mL arasında ve 0.25 x 10 6-0.75 x 10 6 HDMECs/mL arasında sayılmıştır.</li>
	<li>Hücre süspansiyonu sayımı için tripsin kullanarak hücreleri ayırın. NOT: Hücre ayırma çözümü için, en büyük bölmeler için 100-500 μL'lik bir hacim ve en küçük bölmeler için 10-50 μL'lik bir hacim düşünün.</li>
	<li>Tripan mavisi boyamayı kullanarak canlılığı kontrol edin (bkz. adım 3.1.6-3.1.8).</li>
</ol>6. Geri dönüşüm için temizlik ekleyin
<ol><li>Deneyin sonunda 6 oyuklu plakadan ekleri hafif bir bükülme ile çıkarın (Şekil 1Be).</li>
	<li>Silikonu çekerek eklerden çıkarın. Gerekirse, eklerin duvarlarına yapışmış kalan silikonu çıkarmak için bir spatula kullanın (Şekil 1Bf).</li>
	<li>Ekleri geleneksel hücre kültürü deterjanları ve temizlik malzemeleriyle yıkayın (örn.ampMalzeme Tablosunda verilmiştir).</li>
	<li>Ekleri ileride bir otoklavda (katı döngü, 20 dakika boyunca 121 °C) veya 1 saat boyunca %70 etanol banyosuna daldırarak kullanmak üzere sterilize edin. NOT: Bu adımdan, 3D baskılı ekler kullanılarak iki olası test örneği (proliferasyon ve migrasyon deneyleri) açıklanmaktadır (Şekil 1Bd).</li>
</ol>7. Hücre proliferasyon testi - WST-1 testi
<ol><li>Hücreleri kültürlemek için 1-3.1 arasındaki adımları izleyin. NOT: KORS sekretomunun HDMEC proliferasyonu üzerindeki etkisini araştırmak için ko-kültür sistemini uygulamak için bu bölümdeki adımı izleyin. KORS hücreleri, daha önce yayınlanan verileri karşılaştırmak için kullanılır8.<ol><li>KORS'u 1 x 10 5 hücre / mL'de mezenkimal kök hücre ortamında (MSCM) tohumlayın, büyük bölmelerde%5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiştir.</li>
		<li>Hücre kültürü plakasını 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C'ye yerleştirin.</li>
		<li>HDMEC'leri, küçük bölmelerde 2.5 x 103 hücre / mL'de% 5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş endotel hücre ortamında (ECM) tohumlayın.</li>
		<li>Hücre kültürü plakasını 24-48 saat boyunca %5 CO2 ile 37 °C'ye yerleştirin.</li>
		<li>Ortamı tüm bölmelerden atın ve 3 mL takviye edilmemiş bazal ECM (3D baskılı eklerin tüm bölmeleri için ortak hücre kültürü ortamı) ekleyerek ko-kültür sistemini uygulayın.</li>
	</ol></li>
	<li>WST-1 çözeltisini hazırlamak için WST-1'i ECM ortak hücre kültürü ortamında (1:10 son seyreltme) seyreltin. NOT: WST-1 çözeltisinin hacmi için, boşluk için en az 500 μL ekstra çözelti hazırlayın.</li>
	<li>Pipetleme yoluyla hücre kültürü ortamını çekirdekten atın.</li>
	<li>WST-1 solüsyonunu seçilen bölmelere ekleyin (küçük bölmeler için 150 μL ve büyük bölmeler için 600 μL). Plakayı %5 CO ile 37 °C'ye getirin2.</li>
	<li>Optimum 30 dakikalık hücre inkübasyon süresinden sonra, her koşuldan 100 μL inkübasyon ortamını 96 oyuklu bir plaka üzerine aktarın.</li>
	<li>420 nm ile 480 nm arasında bir mikroplaka okuyucu kullanarak kolorimetrik reaksiyonu değerlendirin.<ol><li>Plakayı mikroplaka okuyucuya koyun ve yeni bir protokol düzenle düğmesine tıklayın.</li>
		<li>Kullanılan 96 oyuklu plakanın özel tipini ( Malzeme Tablosuna bakın) ve 450 nm dalga boyunu seçin.</li>
		<li>Ölçümü başlat düğmesine tıklayın.</li>
	</ol></li>
</ol>8. Hücre migrasyon tahlili - iki migrasyon odası cihazı
<ol><li>Hücreleri kültürlemek için 1-3.1 arasındaki adımları izleyin. NOT: KORS sekretomunun HDMEC proliferasyonu üzerindeki etkisini araştırmak amacıyla ko-kültür sistemini uygulamak için bu bölümdeki adımları izleyin.<ol><li>KORS'u 1 x 10 5 hücre/mL'de MSCM'de tohumlayın, büyük bölmelerden birinde%5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiştir.</li>
		<li>Hücre kültürü plakasını 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C'ye yerleştirin.</li>
		<li>İki migrasyon haznesi cihazını diğer büyük ek bölmesine yerleştirin.</li>
		<li>İki migrasyon odası cihazının 7 x 10 5 hücresinde/kuyusunda%5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş ECM'deki HDMEC'leri tohumlayın.</li>
		<li>Hücre kültürü plakasını 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C'ye yerleştirin.</li>
		<li>Ortamı ve iki migrasyon odası cihazını 24 saat sonra veya taşınan hücre tipine göre en uygun zamanda atın. Ko-kültür sistemini, 3 mL takviye edilmemiş bazal ECM ilavesiyle uygulayın. NOT: Hücreleri ayırmamak için dikkatli bir şekilde ilerleyin. Hücreler, ortak ortamın eklenmesiyle indüklenen ayrılmaya karşı gerçekten hassassa, ortak ortamın eklenmesinden sonra iki migrasyon odası cihazını çekin.</li>
	</ol></li>
	<li>10x büyütmede faz kontrast mikroskobu altında farklı zaman noktalarında hücrelerin kapladığı yüzeyi gözlemleyin ve fotoğrafını çekin. NOT: Resimler faz kontrast mikroskobu ile çekilmiştir (bkz. Resimler bir USB anahtarına kaydedilir ve daha sonra yazılımın yara iyileştirme aracı eklentisi tarafından analiz edilir (bkz.</li>
	<li>Klasik kantitatif analiz yazılımını kullanarak ortaya çıkarılan yüzeyi ölçün.<ol><li>Görüntüyü yazılımda açın ve makro listesinde bulunan yara iyileştirme aracını etkinleştirin.</li>
		<li>Geçiş görüntüsünün açıkta kalan yüzeyini ölçmek için m düğmesine tıklayın.</li>
		<li>Ortaya çıkarılan yüzey aşağıdaki formüle göre hesaplanır: Kapsama yüzdesi = ([T0'da hücresiz ortalama alan − T zamanında hücresiz alan]/T0'da hücresiz ortalama alan) × 100. NOT: 3D baskılı ekler, hücre biyolojisi tekniklerinin çoğuna (psödotüp oluşum testi, 3D kültürler gibi) ve biyokimya deneylerine (DNA, RNA, protein ekstraksiyonu gibi) tamamen uyarlanmıştır.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Regier, M. C., Alarid, E. T., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+towards+understanding+heterotypic+interactions+in+multi-culture+models+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Progress towards understanding heterotypic interactions in multi-culture models of breast cancer.</a> Integrative Biology. 8 (6), 684-692 (2016).</li>
<li>Doğan, A., Demirci, S., Apdik, H., Apdik, E. A., Şahin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+isolation+from+pulp+tissue+and+co-culture+with+cancer+cells+to+study+their+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell isolation from pulp tissue and co-culture with cancer cells to study their interactions.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e58825(2019).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+UBE2CP3+enhances+HCC+cell+secretion+of+VEGFA+and+promotes+angiogenesis+by+activating+ERK1%2F2%2FHIF-1%CE%B1%2FVEGFA+signalling+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA UBE2CP3 enhances HCC cell secretion of VEGFA and promotes angiogenesis by activating ERK1/2/HIF-1α/VEGFA signalling in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 37 (1), 113(2018).</li>
<li>Soares, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+modulation+of+microglia-neuron+communication%3A+Anti-neuroinflammatory+and+neurotrophic+role%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide modulation of microglia-neuron communication: Anti-neuroinflammatory and neurotrophic role.</a> Molecular Neurobiology. 59 (2), 872-889 (2022).</li>
<li>Al Halawani, A., Abdulkhalek, L., Mithieux, S. M., Weiss, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tropoelastin+promotes+the+formation+of+dense%2C+interconnected+endothelial+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Tropoelastin promotes the formation of dense, interconnected endothelial networks.</a> Biomolecules. 11 (9), 1318(2021).</li>
<li>Mercatali, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+human+preclinical+model+of+osteoclastogenesis+from+peripheral+blood+monocytes+co-cultured+with+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Development of a human preclinical model of osteoclastogenesis from peripheral blood monocytes co-cultured with breast cancer cell lines.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56311(2017).</li>
<li>Orona, N. S., Astort, F., Maglione, G. A., Yakisich, J. S., Tasat, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+effect+of+air+particles+exposure+induce+Nrf2-dependent+cardiomyocyte+cellular+response+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect effect of air particles exposure induce Nrf2-dependent cardiomyocyte cellular response in vitro.</a> Cardiovascular Toxicology. 19 (6), 575-587 (2019).</li>
<li>Colin-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glypican-1%2FHGF%2FC-met+and+glypican-1%2FVEGF%2FVEGFR2+ternary+complexes+regulate+hair+follicle+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The glypican-1/HGF/C-met and glypican-1/VEGF/VEGFR2 ternary complexes regulate hair follicle angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 781172(2021).</li>
<li>Toubal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NC1+domain+of+type+XIX+collagen+inhibits+melanoma+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The NC1 domain of type XIX collagen inhibits melanoma cell migration.</a> European Journal of Dermatology. 20 (6), 712-718 (2010).</li>
<li>Wu, A. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+growth+factors+and+internal+limiting+membrane+constituents+in+m%C3%BCller+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Role of growth factors and internal limiting membrane constituents in müller cell migration.</a> Experimental Eye Research. 202, 108352(2021).</li>
<li>Oudart, J. -B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmin+releases+the+anti-tumor+peptide+from+the+NC1+domain+of+collagen+XIX%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Plasmin releases the anti-tumor peptide from the NC1 domain of collagen XIX.</a> Oncotarget. 6 (6), 3656-3668 (2015).</li>
<li>Martinotti, S., Ranzato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratch+wound+healing+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Scratch wound healing assay.</a> Methods in Molecular Biology. 2109, 225-229 (2020).</li>
<li>Cattin, S., Ramont, L., Rüegg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+in+vivo+validation+of+a+three-dimensional+multi-cellular+culture+model+to+study+heterotypic+interactions+in+colorectal+cancer+cell+growth%2C+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Characterization and in vivo validation of a three-dimensional multi-cellular culture model to study heterotypic interactions in colorectal cancer cell growth, invasion and metastasis.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 6, 97(2018).</li>
<li>Ma, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+spheroid+culture+of+adipose+stromal+vascular+cells+for+studying+adipogenesis+in+beef+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional spheroid culture of adipose stromal vascular cells for studying adipogenesis in beef cattle.</a> Animal. 12 (10), 2123-2129 (2018).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Dolaylı hücre iletişimi genellikle koşullu ortam veya ko-kültür sistemi cihazları kullanılarak araştırılır. Şartlandırılmış ortam hazırlama, deneylerde yukarı yönde zaman alıcıdır ve bu yöntem tek taraflı etki analizleriyle sınırlıdır. Colin-Pierre ve arkadaşları tarafından yapılan önceki çalışma.8 şartlandırılmış ortam kullanılarak, iki hücre tipi (HDMEC'ler ve KORS) arasındaki dolaylı hücre iletişimi üzerinde gerçekleştirilmiştir. Bu önceki çalışmanın verileri, KORS koşullu ortamın HDME...

İn vivo olarak, hücreler birbirleriyle doğrudan (hücre teması) veya dolaylı olarak (moleküllerin salgılanmasıyla) iletişim kurar. Hücre iletişimini incelemek için, doğrudan ko-kültür (farklı hücre tipleri aynı kuyuda doğrudan etkileşim halindedir) ve bölümlere ayrılmış ko-kültür (farklı hücre tipleri bir kültür sisteminin farklı bölmelerinde dolaylı etkileşim içindedir) gibi farklı ko-kültür modelleri geliştirilebilir1. Ayrıca, koşullu ortam, dolaylı etkileşimin, bir efektör hücre tipinin koşullu ortamında bulunan salgılanan moleküllerin bir yanıt veren hücre tip1'e aktarılmasıyla sağlandığı ko-kültür sistemleri için kullanılabilir.
Parakrin hücre iletişim çalışmaları söz konusu olduğunda, dolaylı ko-kültür sistemleri, hücre etkileşimlerini in vivo olarak güçlü bir şekilde yansıtan modeller sağlar. Dolaylı eş-kültür sistemleri geliştirilmiş ve ticarileştirilmiştir, bu da dolaylı eş-kültür modellerinin kurulmasına olanak sağlamıştır 2,3. Ne yazık ki, çoğu dolaylı ko-kültür sistemi sadece iki bölme sağlar. Diğer dolaylı ko-kültür sistemleri çoklu bölmeler sağlar, ancak bu makalede bildirilen sisteme kıyasla daha az ölçeklenebilirler. Bazıları mikroskop altında klasik bir görselleştirmeye izin vermez ve genellikle belirli uygulama yöntemleri sunarlar. Çeşitli çalışmalarda, farklı hücre tipleri arasındaki parakrin iletişim, koşullu ortam modeli 4,5,6,7 ile incelenmiştir. Bu, dolaylı ko-kültür sistemlerine kıyasla daha kolay bir araştırma yöntemidir, çünkü belirli yöntemlerin veya materyallerin oluşturulmasını gerektirmez1. Öte yandan, şartlandırılmış ortamın hazırlanması zaman alıcıdır ve yalnızca tek yönlü hücre sinyalizasyonu (efektörden yanıtlayıcıya) hakkında bilgi sağlar1.
Bu yazıda, hücre iletişimini araştırmak için yeni ve basit bir yol önerilmiştir. Doğrudan veya dolaylı etkileşimde ve 2D veya 3D formatlarında çeşitli hücre tiplerinin kombinasyonuna izin veren basılı ekler, ko-kültür modellerinin kolayca kurulması için çok sayıda avantaj sunar. 6 oyuklu plakaların kuyucuklarına yerleştirilmek üzere uyarlanmış olan 3D baskılı ek parça daireseldir ve kuyunun dört bölmeye ayrılmasına izin verir (iki büyük bölme ve iki küçük bölme; Şekil 1A). 3D baskılı ekler, bir tabanın olmaması ile karakterize edilir. Böylece hücreler, ekin yerleştirildiği plaka ile doğrudan temas halindedir. Ek olarak, her bölme diğerlerinden bağımsız olarak kaplanabilir. Ayrıca, hücre davranışı optik mikroskoplar altında kolayca takip edilebilir. Ek parçanın her duvarında iletişim pencerelerinin varlığı, farklı ortak kültür deneyleri yapmak için ortak bir ortamın en uygun zamanda eklenmesine izin verir. Çeşitli hücre tipleri arasındaki doğrudan ve/veya dolaylı iletişimi incelemek için çok sayıda ko-kültür kombinasyonu gerçekleştirilebilir. Örneğin, tek tabakalı ve/veya 3 boyutlu (sferoidler) dört farklı hücre tipi arasında dolaylı bir ko-kültür modeli tasarlanabilir. Doğrudan ve dolaylı ko-kültür modellerinin bir kombinasyonu, aynı bölmede farklı hücre tiplerinin karıştırılmasıyla da gerçekleştirilebilir. Karmaşık yapıların (organoidler, doku eksplantı vb.) farklı hücre tipleri üzerindeki etkisi, yapılabilecek modellere başka bir örnek olabilir. Ayrıca, 3D baskılı ekler, hücre biyolojisi fonksiyonel tahlilleri (proliferasyon, migrasyon, psödotüp oluşumu, farklılaşma vb.) ve biyokimya testleri (DNA, RNA, protein, lipitlerin ekstraksiyonu, vb.) ile uyumludur. Son olarak, 3D baskılı ekler, aynı deneyde aynı anda farklı tahlilleri farklı bölmelerde birleştirme imkanı ile çok çeşitli ko-kültür modellerinin deneysel şemalarını sağlar.
3D baskılı eklerin bazı kapasiteleri, bunları hızlı ve kullanımı kolay bir ortak kültür modeli olarak doğrulamak için sunulmuştur. Parakrin hücre iletişimi üzerine daha önce yayınlanmış bir çalışma ile karşılaştırıldığında, 3D baskılı eklerin değerli bir ko-kültür modeli olma yeteneği gösterilmiştir. Bu noktayı değerlendirmek için, keratinositler tarafından endotel hücre proliferasyonunun ve migrasyonunun düzenlenmesi, 3D baskılı insert sistemi ile şartlandırılmış ortam kullanan klasik sistem arasında karşılaştırıldı. 3D baskılı kesici uçlar, şartlandırılmış medya kullanan geleneksel sisteme kıyasla benzer sonuçların hızlı bir şekilde elde edilmesini sağlar. Gerçekten de, 3D baskılı ekler, şartlandırılmış ortam üretme zorunluluğu olmadan ve aynı deneyde proliferasyon ve migrasyon testlerini paralel olarak gerçekleştirme olasılığı ile her iki yönde hücre etkileşimlerini incelemek için sağlam bir model sağlar.
Sonuç olarak, bu yazıda hücre iletişimini incelemek için yeni ve kullanıma hazır bir model önerilmiştir. Tüm yapışık hücre tipleriyle uyumlu olan 3D baskılı ekler, in vivo koşullara daha yakın olmayı amaçlayan çok sayıda ko-kültür kombinasyonunun gerçekleştirilmesine olanak tanır.

<table><tbody><tr><td>Otoklav</td><td>Getinge</td><td>APHP</td><td>Katı döngüsü, 121 > 20 dakika boyunca C</td></tr><tr><td>Biomed Clear</td><td>Formlabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td><td>Impression, 3D-Morphoz şirketi (Reims, Fransa) tarafından gerçekleştirildi</td></tr> <tr><td>Hücre kültürü deterjanları&nbsp;</td><td>Tounett</td><td>A18590/0116</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Proliferasyon Reaktifi WST-1</td><td>Roche</td><td>11,64,48,07,001</td><td></td></tr><tr><td>Sayma slaydı</td><td>NanoEnTek</td><td>EVE-050</td><td></td></tr><tr><td>Kültür-Insert 2 Kuyu &mu;-Çanak 35 mm</td><td>Ibidi</td><td>80206</td><td>iki migrasyon odacıklı cihaz.&nbsp;</td></tr><tr><td>Endotel hücre ortamı</td><td>ScienCell</td><td>1001</td><td>Bazal ortam +/- 25 mL fetal sığır serumu (FBS, 0025), 5 mL endotel hücre büyüme takviyesi (EKGS, 1052) ve 5 mL penisilin / streptomisin çözeltisi (P / S, 0503).</td></tr><tr><td>EVE Otomatik hücre sayacı&nbsp;</td><td>NanoEnTek</td><td>NESCT-EVE-001E&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL Core</td><td>Fisher Scientific</td><td>AMEX1200</td><td>10x büyütme</td></tr><tr><td>Gıda silikon reaktifi ve katalizör kiti</td><td>Artificina</td><td>RTV 3428 A ve B&nbsp;</td><td>(10:1)</td></tr><tr><td>FORM 3B yazıcı</td><td>Formlabs</td><td>PKG-F3B-WSVC-DSP-BASIC</td><td>Impression 3D-Morphoz firması tarafından gerçekleştirilmiştir</td></tr><tr><td>İnsan Dermal Mikrovasküler Endotel Hücreleri (HDMEC)</td><td>ScienCell</td><td>2000</td><td></td></tr><tr><td>Dış Kök Kılıfının Keratinositleri (KORS)</td><td>ScienCell</td><td>2420</td><td></td></tr><tr><td>Makro Yara İyileşme Aracı Yazılımı</td><td>ImageJ</td><td></td><td>Açıkta kalan yüzeyin ölçümü için kullanılan yazılım ( migrasyon tahlilleri)</td></tr> <tr><td>mezenkimal kök hücre ortamı&nbsp;</td><td>ScienCell</td><td>7501</td><td>Bazal ortam +/- 25 mL fetal sığır serumu (FBS, 0025), 5 mL mezenkimal kök hücre büyüme takviyesi (MSCGS, 7552) ve 5 mL penisilin / streptomisin çözeltisi (P / S, 0503)</td></tr> <tr><td>Mikroplaka okuyucu SPECTRO yıldızı NANO</td><td>BMG Labtech</td><td></td><td>BMG LABTECH yazılımı</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Promocell</td><td>C-40232</td> Ca<td>2 + / Mg2 + </td></tr><tr><td>Tripan Mavi Leke Olmadan</td><td>NanoEnTek</td><td>EBT-001</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin / EDTA</td><td>Promocell</td><td>C-41020</td><td>KORS'un 37 ° C'de İnkübasyonu; 5 dakika boyunca% 5 CO2 ile C. HDMEC'lerin oda sıcaklığında 5 dakika inkübasyonu</td></tr><tr><td>96 oyuklu plaka Nunclon Delta Yüzey Termobilimsel</td><td></td><td>167008</td><td></td></tr></tbody></table>

basit 2d ve 3d hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3d baskılı ek parça

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

Farklı hücre tipleri arasındaki dolaylı iletişimin klasik analizleri, şartlandırılmış ortamların kullanılmasını gerektirir. Ayrıca, şartlandırılmış ortamın üretimi zaman alıcı ve fizyolojik ve patolojik koşullardan uzak kalmaktadır. Birkaç ko-kültür modeli ticari olarak mevcut olmasına rağmen, bunlar spesifik tahlillerle sınırlı kalır ve çoğunlukla iki tip hücre içindir. 
Burada, çok sayıda fonksiyonel tahlil ile uyumlu 3D baskılı kesici uçlar kullanılmaktadır. Ek parça, 6 oyuklu bir plakanın bir oyuğunun dört bölmeye ayrılmasına izin verir. Çok çeşitli kombinasyonlar ayarlanabilir. Ayrıca, bölmelerin her duvarında pencereler tasarlanmıştır, böylece her bölme arasında potansiyel hücreler arası iletişim, kültür ortamında hacme bağlı bir şekilde mümkün olur. Örneğin, parakrin hücreler arası iletişim, tek katmanlı, 3 boyutlu (sferoidler) veya her ikisini birleştirerek dört hücre tipi arasında incelenebilir. Ek olarak, farklı hücre tiplerinin bir karışımı aynı bölmede 2D veya 3D (organoidler) formatında ekilebilir. 3D baskılı eklerde bir tabanın olmaması, plaka üzerinde olağan kültür koşullarına, eki içeren plaka üzerinde olası kaplamaya ve optik mikroskopi ile doğrudan görselleştirmeye izin verir. Çoklu bölmeler, farklı hücre tiplerini bağımsız olarak toplama veya her bölmede RNA veya protein ekstraksiyonu için farklı reaktifler kullanma imkanı sağlar. Bu çalışmada, yeni 3D baskılı eki bir ko-kültür sistemi olarak kullanmak için ayrıntılı bir metodoloji sağlanmıştır. Bu esnek ve basit modelin çeşitli kapasitelerini göstermek için, daha önce yayınlanmış hücre iletişiminin fonksiyonel tahlilleri yeni 3D baskılı eklerde gerçekleştirildi ve tekrarlanabilir olduğu gösterildi. 3D baskılı ekler ve şartlandırılmış ortam kullanan geleneksel hücre kültürü benzer sonuçlara yol açtı. Sonuç olarak, 3D baskılı ek, yapışık hücre tiplerine sahip çok sayıda ko-kültür modeline uyarlanabilen basit bir cihazdır.

Bu çalışmada, şartlandırılmış ortamların kullanımı yoluyla klasik yöntemlerle karşılaştırılabilir sağlam, güvenilir ve anlamlı veriler elde etmek için optimize edilmiş bir ko-kültür sistemi tanımlanmıştır. 3D baskılı ekler, deneylerde zorlukların ve zaman alıcı koşullu ortam üretiminin üstesinden gelerek, etkileşim halindeki farklı hücre tiplerinin in vivo mikroçevre koşullarını taklit eder. Saç foliküllerinde bulunan iki hücre tipi arasındaki dolaylı etkileşimleri analiz etmek için daha önce yayınlanmış bir çal...

Bu yazıda, yeni tasarlanmış bir 3D baskılı ek, bir ko-kültür modeli olarak sunulmuş ve endotel hücreleri ile keratinositler arasındaki parakrin hücreler arası iletişimin incelenmesiyle doğrulanmıştır.

Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Bu protokol, çok sayıda kültür çalışmasını araştırmak ve doğrudan hücre iletişimini araştırmak için yeni bir araç sağlamak için kullanılabilir. Bu yeni cihaz, bir kültür modeli oluşturmada önemli ölçüde zaman kazandırır ve belirli bir kaplama gerektiren veya gerektirmeyen farklı hücre tiplerine uygulanabilir. Gerçekten de, 3D baskılı eklerin dört bölmesi, farklı hücre tiplerinin tek katmanlı veya 3D olarak farklı kombinasyonlarla aynı şekilde kültürlenmesine izin verir.3D baskılı ekler daha dayanıklı, esnek, ölçeklenebilirdir ve immünoloji veya androjenez gibi fizyopatolojilerin çalışmaları için deneysel modeller tasarlamak için kullanılabilir. Başlamak için, kitte sağlanan iki bileşeni, gıda silikonunu ve katalizörü, üreticinin talimatlarına göre %70 etanol ile sterilize edilmiş bir spatula kullanarak 10:1 oranında karıştırın. Karışımın alt kenarında homojen bir şekilde dağılması için ekleri silikon karışımın üzerine cımbızla uygulayın.Ekleri altı oyuklu bir plakanın kuyularına yerleştirin ve hücre kültürü ortamının herhangi bir sızıntısını önlemek için eklerin plaka ile yakın temas halinde olduğundan emin olmak için hafif bir basınç uygulayın. Silikonun katılaşma sürecini bir saat boyunca desteklemek için plakayı 37 santigrat dereceye koyun. Katılaşmadan sonra, plakaları 30 dakika ila bir saat boyunca% 70 etanol banyosuna batırarak eklerle sterilize edin.Ardından, alkolü pipetleyerek atın ve plakayı bir hücre kültürü kapağında gece boyunca kurumaya bırakın. Dış kök kılıfının ve insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerinin keratinositlerini kültürlemek için, ortamı şişelerden atın ve hücreleri ayırmak için beş mililitre tripsin ekleyin. Dış kök kılıfının keratinositlerini içeren şişeyi beş dakika boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat dereceye yerleştirin ve insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerini içeren şişeyi oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin.15 mililitrelik steril konik bir tüpte, dış kök kılıfının keratinositlerini içeren tripsin solüsyonunu% 5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş beş mililitre mezenkimal kök hücre ortamı ile karıştırın ve insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerini% 5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş beş mililitre endotel hücre ortamı ile karıştırın. Dış kök kılıfının keratinositlerini ve insan dermal mikrovasküler endotel hücresi süspansiyonlarını oda sıcaklığında beş dakika boyunca 200 G'de santrifüjleyin. Süpernatanı attıktan sonra, hücreleri kendi ortamlarının iki mililitresinde yeniden süspanse edin.10 mikrolitre hücre süspansiyonunu 10 mikrolitre tripan mavisi boya ile karıştırın ve 10 mikrolitre karışımı sayma slaytının haznesine ekleyin. Sayma slaytını hücre sayma sistemine yerleştirin ve hücre sayısını ve canlılığını tespit edin. Hücre süspansiyonunu ilgili ortamda mililitre başına 50.000 hücre konsantrasyonunda hazırladıktan sonra, 800 mikrolitre ila bir mililitre hücre süspansiyonunu tek tek büyük bölmelere ve 100 ila 150 mikrolitreyi bir pipetle ayrı küçük bölmelere dağıtın.%5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş mezenkimal kök hücre ortamındaki keratinositleri ve endotel hücre ortamındaki insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerini, küçük ve diğer büyük bölmelerde %5 FBS ve büyüme faktörleri ile desteklenmiş olarak görün. Hücre yapışması ve/veya olgunlaşmasına izin vermek için hücre kültürü plakasını %5 karbondioksit ile 37 santigrat dereceye veya normal koşullar altına yerleştirin. Bir pipet kullanarak eklerin farklı bölmelerinin kültür ortamını boşaltın.Daha sonra hücreleri büyük bölmelerde bir mililitre 37 santigrat derece ılık PBS ve küçük bölmelerde 200 mikrolitre ile durulayın. Tüm hücre tipleri için uyumlu olacak şekilde seçilen ortak bir ortamdan üç mililitre ekleyin. Ko-kültürleri içeren plakayı 24 ila 48 saat boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat dereceye yerleştirin.Hücre süspansiyonu sayımı için tripsin kullanarak hücreleri ayırın ve tripan mavisi boyamayı kullanarak canlılığı kontrol edin. Morfolojiyi gözlemledikten sonra, 24 ila 48 saatlik inkübasyondan sonra optik mikroskop altında deney sırasında farklı bölmelerin hücre sayısını sayın. İlk olarak, deneyin sonundaki altı oyuklu plakadan ekleri hafif bir bükülme ile çıkarın ve ardından silikonu çekerek eklerden çıkarın.Ekleri geleneksel hücre kültürü deterjanları ve temizlik malzemeleriyle yıkayın. Daha sonra ekleri ileride kullanmak üzere bir otoklavda veya bir saat boyunca% 70 etanol banyosuna batırarak sterilize edin. Fenotip ve hücre canlılığı karşılaştırıldı, burada altı kuyucuklu plakanın kuyucuklarında %90 canlılık gözlendi ve dış kök kılıfının keratinositleri için 3D baskılı eklerde %91 oranında gözlendi.İnsan dermal mikrovasküler endotel hücrelerinin canlılığı, altı oyuklu plakanın kuyucuklarında %85 iken, 3D baskılı eklerde %86 idi. 3D baskılı eklerdeki keratinositler ve endotel hücreleri arasındaki dolaylı hücre iletişimi, eklerdeki keratinositlerin varlığında, insan dermal mikrovasküler endotel hücrelerinin proliferasyonunun 24 saat sonra 1,5 kat ve 48 saat sonra 3,1 kat arttığını göstermiştir. Bununla birlikte, dış kök kılıfı durum ortamının keratinositinin, insan dermal mikrovasküler endotel hücre proliferasyonunu 24 saat sonra 1,5 kat ve 48 saat sonra 2,1 kat önemli ölçüde artırdığı gösterilmiştir.Keratinositlerin insan dermal mikrovasküler endotel hücre göçü üzerindeki etkisini belirlemek için 3D baskılı insert ko-kültür modeli test edildi. Kontrol durumunda, endotel hücreleri göç etti ve 24 saat sonra yara alanının yaklaşık% 44'ünü kapladı. Keratinosit varlığında, insan dermal mikrovasküler endotel hücre göçünde önemli bir artış gözlenmiştir, bu da yara alanının sırasıyla üç, 12 ve 24 saat sonra kaplandığını göstermektedir.Benzer şekilde, HDMEC'lerin göçü, dış kök kılıfı durum ortamının keratinositlerinin varlığında artar. Hücre ortamının bir bölmeden diğerine sızmasını önlemek için, ek parçanın plakaya sızdırmazlığını sağlamak çok önemlidir. Proliferasyon, migrasyon, sedatif oluşum tahlilleri DNA, RNA, protein ve diğer analizler gibi çeşitli uygulamalar yapılabilir.

an-innovative-3d-printed-insert-designed-to-enable-straightforward-2d

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz, mikro-biyoreaktörler hücrelerin üç boyutlu ekimi için çip tabanlı platform açıklar. Bir çip 10 milyon kadar ev. steril, kapalı bir dolaşım döngü içinde sıvı akışı, oksijen basıncı vb ilişkin kesin olarak tanımlanmış koşullar altında yetiştirilen hücreler.

Perfüze Mikro-biyoreaktörler Chip tabanlı üç boyutlu Hücre Kültürü

Biz hücreleri ve embriyolar incelemek için bir cihaz ve yeni bir yöntem sunulmuştur. Tek hücreler tam microcavity dizileri sıralanır. Onların 3D hapsi fizyolojik koşullarda karşılaşılan 3D ortamlarda yolunda atılmış bir adımdır ve organel yönünü verir. Hücre şekli kontrol ederek, bu kurulum standart deneylerde bildirilen değişkenlik en aza indirir.

Tek Hücreleri ve 3D Sınırlaması Tek Embriyolar Sipariş: Yüksek İçerik Tarama için Yeni Bir Cihaz

Çok hücreli organizmalarda, salgılanan çözünür faktörler, parakrin sinyalizasyonunun bir sonucu olarak farklı hücre tiplerinden yanıtlar ortaya çıkarır. Insert ko-kültür sistemleri, hücre-hücre temasının yokluğunda salgılanan çözünür faktörlerin aracılık ettiği değişiklikleri değerlendirmek için basit bir yol sunar.

Hücre-Hücre İletişim Yokluğunda iki Hücresel Türleri Ekleme Co-kültür Sisteminin Geliştirilmesi

Burada, hücre agregasyonu yoluyla 3B hücre sferoidlerinin oluşumu için hızlı ve esnek bir protokol açıklıyoruz. Bu, birden fazla hücre tipine kolayca uyarlanır ve hücre göçü, istila veya anoikis tahlilleri dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda ve hücre-matris etkileşimlerini görüntülemek ve ölçmek için uygundur.

3D Sfero Üretim için bir Verimli ve esnek Hücre Toplama Yöntemi

Bu iletişim kuralı kendi kendine monte doku yüzük değişken boyutları kullanarak özelleştirilmiş bir 3D Baskılı Plastik kalıp imalatı için bir platform açıklar. PDMS negatifleri 3D baskılı kalıp içinde tedavi; o zaman özel içinde tedavi PDMS negatif atıldı. Hücreleri nerede doku yüzük içine toplamak elde edilen özel kuyu içine numaralı seribaşı.

Hücre tohum için özel özel Wells ve kendinden montajlı 3D baskı kalıpları kullanarak doku yüzük imalatı

Biz bir bioprintable aljinat/jelatin bioink gömülü ölümsüzleştirdi tümör ve fibroblast hücreleri içeren türdeş olmayan meme kanseri modeli geliştirilmiştir. Model vivo içinde tümör microenvironment recapitulates ve çok hücreli tümör pulcuklarının, kavrama tumorigenesis sürüş mekanizmaları içine verimli oluşumunu kolaylaştırır.

Bioprintable aljinat/jelatin hidrojel 3D Vitro Model sistemleri hücre küresel oluşumu teşvik

Biz bir tekrarlanabilir model formasyonu elde etmek için 3D bir hücre dışı matriks ilk hücre kümesi şeklinde kontrol etmek için bir yordam mevcut. İki farklı hydrogels içeren bir küp aygıtı doku Desen oluşumu için çok yönlü görüntüleme elde etmek için istihdam edilmektedir.

İlk 3D hücre küme denetimi içinde a Hybrid jel küp aygıt için tekrarlanabilir model oluşumları

Biz 3D kültür ve hücreler ve çok hücreli organoids ile deney için cihazlar oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu cihaz, tanımlanan kemoçekici degradeler ile 3D mikro ortamlarda çözünür sinyallere hücresel tepkiler analizi sağlar. Organoids zayıf gürültülü girişleri tespiti tek hücrelerden daha iyidir.

Chemoattractant degradelere Multi-hücresel tepkiler 3D Analizi

Bu yazıda, organoidlerin yüksek çözünürlüklü mikroskopi kullanılarak kültürlenebildiği ve gözlemlenebildiğimm2 başına yüzlerce mikro konteynere sahip yeni bir kültür substratı türü için bir üretim protokolü sunulmaktadır. Hücre tohumlama ve immün boyama protokolleri de detaylandırılmıştır.

Organoidlerin kültürü ve 3D görüntülenmesi için yüksek verimli bir platform

Bu çalışma, agaroz kalıplarında mikro kuyular oluşturmak için damga tabanlı bir sistem kullanarak 3D hücre yapıları oluşturmak için uygun maliyetli ve verimli bir metodoloji sunmaktadır. Sistem, tek tip sferoidlerin/organoidlerin oluşumunu teşvik eder, böylece hücre etkileşimlerini iyileştirir. Bu yaklaşım deneysel değişkenliği azaltır ve ilaç testi ve doku mühendisliğindeki uygulamaları destekler.

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Keşfedin, 3D baskılı ek parça kullanarak endotelyal hücre ve keratinositler arasındaki parakrin hücreler arası iletişimi nasıl araştırılır. Bu yöntem, hücre canlılığı ve göç analizleri ile çeşitli fizyopatolojilerin çalışılmasına yardımcı olur.

Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça

Daha fazla video keşfet