Name: Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T12:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin, fare modellerinde yumurtalık ameliyatı ve yapay desidualizasyon protokolleri kullanarak uterusun gebelik oluşumuna katkılarını incelemeyi. Bu yöntem üreme biyolojisi ve HPG aks düzenlemesi araştırmaları için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Victoria Eyalet Hükümeti Operasyonel Altyapı Desteği ve Avustralya Hükümeti Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) IRIISS aracılığıyla mümkün olmuştur. Bu çalışma, Monash Üniversitesi Tıp Fakültesi, Hemşirelik ve Sağlık Bilimleri Platformu Erişim Hibesi tarafından A.L.W.'ye (Winship-PAG18-0343) Monash Üreme Hizmetleri Platformu'na erişim için desteklenmiştir. A.L.W., Avustralya Araştırma Konseyi'nden (ARC) DECRA fonu DE21010037 tarafından desteklenmektedir. J.N.H. ve L.R.A., Avustralya Hükümeti Araştırma Eğitim Programı Bursu ile desteklenmektedir. L.R.A. Monash Graduate Excellence Bursu ile desteklenmektedir. K.J.H. ARC Future Fellowship FT190100265 tarafından desteklenmektedir.

<ol><li>Szamatowicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+reproductive+medicine+-+Possibilities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Ginekologia+Polska%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations.</a> Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).</li>
<li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertile+ground%3A+Human+endometrial+programming+and+lessons+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Fertile ground: Human endometrial programming and lessons in health and disease.</a> Nature Reviews. Endocrinology. 12 (11), 654-667 (2016).</li>
<li>Norwitz, E. R., Schust, D. J., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+the+survival+of+early+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Implantation and the survival of early pregnancy.</a> The New England Journal of Medicine. 345 (19), 1400-1408 (2001).</li>
<li>Zinaman, M. J., Clegg, E. D., Brown, C. C., O'Connor, J., Selevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+human+fertility+and+pregnancy+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">Estimates of human fertility and pregnancy loss.</a> Fertility & Sterility. 65 (3), 503-509 (1996).</li>
<li>Kupka, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+Europe%2C+2010%3A+Results+generated+from+European+registers+by+ESHRE%E2%80%A0%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in Europe, 2010: Results generated from European registers by ESHRE†.</a> Human Reproduction. 29 (10), 2099-2113 (2014).</li>
<li>Gleicher, N., Kushnir, V. A., Barad, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+decline+of+IVF+birth+rates+and+its+probable+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Worldwide decline of IVF birth rates and its probable causes.</a> Human Reproduction Open. 2019 (3), (2019).</li>
<li>Diaz-Gimeno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+diagnostic+tool+for+human+endometrial+receptivity+based+on+the+transcriptomic+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature.</a> Fertility & Sterility. 95 (1), 50-60 (2011).</li>
<li>Amin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+outcomes+in+recurrent+implantation+failure+patients+following+endometrial+receptivity+array+with+pre-implantation+genetic+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer outcomes in recurrent implantation failure patients following endometrial receptivity array with pre-implantation genetic testing.</a> Cureus. 14 (6), e26248(2022).</li>
<li>Patel, J. A., Patel, A. J., Banker, J. M., Shah, S. I., Banker, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+helps+in+improving+in+vitro+fertilization%2FICSI+outcomes+in+patients+with+recurrent+implantation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer helps in improving in vitro fertilization/ICSI outcomes in patients with recurrent implantation failure.</a> Journal of Human Reproductive Sciences. 12 (1), 59-66 (2019).</li>
<li>Khan, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+differences+between+functionalis+and+basalis+endometria+in+women+with+and+without+adenomyosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Obstetrics%2C+Gynecology%2C+and+Reproductive+Biology%22%5BJournal%5D)">Biological differences between functionalis and basalis endometria in women with and without adenomyosis.</a> European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 203, 49-55 (2016).</li>
<li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment%2C+differentiation%2C+and+impact+on+fertility%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocrine Reviews. 39 (1), 1-20 (2018).</li>
<li>Corciulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+administration+for+physiological+estrogen+replacement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Pulsed administration for physiological estrogen replacement in mice.</a> F1000Research. 10, 809(2021).</li>
<li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li>
<li>Griffiths, M. J., Alesi, L. R., Winship, A. L., Hutt, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+embryo+transfer+model+to+study+uterine+contributions+to+pregnancy+in+vivo+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+%26+Fertility%22%5BJournal%5D)">Development of an embryo transfer model to study uterine contributions to pregnancy in vivo in mice.</a> Reproduction & Fertility. 3 (1), 10-18 (2022).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+from+a+mouse+model+that+epithelial+cell+migration+and+mesenchymal-epithelial+transition+contribute+to+rapid+restoration+of+uterine+tissue+integrity+during+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence from a mouse model that epithelial cell migration and mesenchymal-epithelial transition contribute to rapid restoration of uterine tissue integrity during menstruation.</a> PLoS One. 9 (1), e86378(2014).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+regulate+scarless+repair+of+the+endometrial+%26%2334%3Bwound%26%2334%3B+in+a+mouse+model+of+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Androgens regulate scarless repair of the endometrial &#34;wound&#34; in a mouse model of menstruation.</a> FASEB Journal. 30 (8), 2802-2811 (2016).</li>
<li>Fullerton, P. T., Monsivais, D., Kommagani, R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follistatin+is+critical+for+mouse+uterine+receptivity+and+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Follistatin is critical for mouse uterine receptivity and decidualization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), E4772-E4781 (2017).</li>
<li>Rowland, R. R., Reyes, E., Chukwuocha, R., Tokuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosteroid+and+immune+responses+of+mice+following+mini-osmotic+pump+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticosteroid and immune responses of mice following mini-osmotic pump implantation.</a> Immunopharmacology. 20 (3), 187-190 (1990).</li>
<li>Barton, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+steroid+hormones+in+oviductal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Roles of steroid hormones in oviductal function.</a> Reproduction. 159 (3), R125-R137 (2020).</li>
<li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+regulates+embryonic+survival+during+delayed+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autophagy regulates embryonic survival during delayed implantation.</a> Endocrinology. 152 (5), 2067-2075 (2011).</li>
<li>Hamatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+identifies+molecular+pathways+distinguishing+blastocyst+dormancy+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis identifies molecular pathways distinguishing blastocyst dormancy and activation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (28), 10326-10331 (2004).</li>
<li>Cui, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcervical+embryo+transfer+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Transcervical embryo transfer in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar rakip finansal veya diğer çıkarları beyan etmemektedir.

Bu makale, OVX'in nasıl gerçekleştirileceği ve uterusun hamilelik ve doğurganlığa katkılarını anlamaya odaklanan çalışmalar için eksojen hormonların nasıl sağlanacağı konusunda adım adım talimatlar sunmaktadır. Bu yöntemlerin iki deneysel uygulamasında, embriyo transferinin gerçekleştirilmesi ve desidualizasyonun yapay olarak indüklenmesi de dahil olmak üzere iki ayrıntılı protokol sağlanmıştır.
OVX'i gerçekleştirmek başlangıçta zor olsa da - özellikle kemirgen modellerinde yeni olan araştırma...

Son yıllarda yardımcı üreme teknolojilerinin kullanımının artmasıyla birlikte, gebe kalmanın önündeki birçok engel aşılmış ve birçok çiftin doğurganlık sorunlarına rağmen aile kurmasına izin verilmiştir1. Oosit veya sperm eksiklikleri genellikle in vitro fertilizasyon veya intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu kullanılarak atlanabilir; Bununla birlikte, uterus ve endometriyal alıcılık ile ilgili konular, üreme potansiyelinin zor bir "kara kutusu" olmaya devam etmektedir2.
Hamilelik, yüksek kaliteli bir embriyo alıcı bir endometriyum (uterus astarı) ile başarılı bir şekilde etkileşime girdiğinde kurulur. Herhangi bir adet döngüsünde başarılı hamilelik şansı düşüktür, yaklaşık% 30'dur3,4. Başarılı olanların sadece% 50-60'ı gebeliğin 20. haftasını geçerek ilerler ve implantasyon başarısızlığı 20 haftaya ulaşmayan gebeliklerin% 75'inden sorumludur3. 1990'ların sonlarına kadar uzanan bu rakamlara rağmen, alan henüz yetersiz alıcı bir endometriyumun neden olduğu sınırlamaların üstesinden gelememiştir. Bu, son yıllarda IVF başarı oranlarının durgunlaşmasına ve bazen de düşmesine neden olmuştur 5,6.
Açıklanamayan infertilitesi olan kadınlar genellikle yer değiştirmiş bir alıcılık penceresine sahiptir veya bilinmeyen nedenlerden dolayı alıcılığa ulaşamazlar. Son zamanlarda, embriyo transferinin zamanlamasını bireyin alıcılık penceresine uyarlamak amacıyla yüzlerce genin ekspresyonunu değerlendiren endometrial reseptivite dizisi geliştirilmiştir 7,8,9. Bununla birlikte, implantasyon süreci tamamlandıktan sonra ortaya çıkan gebelik komplikasyonlarının patogenezi hala anlaşılamamıştır.
Kadın üreme sistemi oldukça dinamiktir ve sıkı hormonal kontrol altındadır. Hipotalamik-hipofiz-gonadal (HPG) ekseni, folikül olgunlaşması ve östrojen ve progesteron aktivitesi dahil olmak üzere yumurtalık döngüsünün yönlerini düzenleyen luteinize edici hormon ve folikül uyarıcı hormonun salınımını kontrol eder. Buna karşılık, uterus adet döngüsü östrojenler ve progesteron10,11 tarafından düzenlenir. Bu nedenle, uterus biyolojik mekanizmalarının incelenmesi yumurtalık etkisi ile karmaşıktır. Örneğin, kanser tedavilerinin uterusu nasıl etkileyebileceğini incelerken, gözlemlenen herhangi bir uterus fenotipinin (gebelik kaybı veya adet aklikliği gibi) uterusa doğrudan bir hakaretin sonucu mu yoksa yumurtalıklara verilen hasardan kaynaklanan bir sonuç mu olduğunu ayırt etmek zor olabilir.
Doğurganlığı kapsamlı bir şekilde anlamak için, gebeliğe uterus katkıları karakterize edilmelidir. Önemli olarak, bu anlayış yumurtalık kontrolü altında uterus fonksiyonunun ötesine geçmelidir. Bu insanlarda incelenemez; Bu nedenle, hayvan modelleri sıklıkla kullanılır. Bu nedenle, ovariektomi (OVX), araştırmacıların eksojen olarak hormon sağlayarak kemirgen östrus döngülerini (adet döngüsüne benzer) düzenlemelerini sağlamak için yaygın olarak kullanılır. Ek olarak, OVX, uterus yanıtlarının yumurtalık etkisinden bağımsız olarak incelenmesine izin verir12. Bununla birlikte, hormonlar OVX sonrası hemen sağlanmazsa, araştırmacılar tarafından dikkatlice düşünülmesi gereken bir menopoz fenotipi ortaya çıkacaktır.
OVX, 13,14,15,16,17 kemirgen modellerinde sıklıkla kullanılır ve yeterli eğitimden sonra gerçekleştirilmesi nispeten kolaydır. Yöntemler, tek başına yumurtalığın mı yoksa yumurtalık ve yumurta kanalının mı çıkarıldığına ve hayvanın yaşına bağlı olarak değişir (yetişkin, bisiklete binen hayvanlar, yüzeylerinde görünür bir korpus luteum bulunan daha büyük yumurtalıklara sahiptir, yani yumurtalıklarının görselleştirilmesi daha kolaydır). Benzer şekilde, deri altı enjeksiyonları14, yavaş salınımlı peletler 15, ozmotik mini pompalar18 ve yumurtalık aşılaması dahil olmak üzere birçok hormon takviyesi yöntemi mevcuttur.
Bu makalede, yumurtalık ameliyatının nasıl yapılacağı ve deri altı enjeksiyonları, yavaş salınımlı peletler ve ozmotik mini pompalar dahil olmak üzere üç tip hormon takviyesinin nasıl hazırlanacağı hakkında ayrıntılı talimatlar verilmiştir. OVX'ten yararlanan deneysel sonlanım noktaları için iki ayrıntılı protokol ve ardından eksojen hormon takviyesi (embriyo transferi ve yapay desidualizasyon) sağlanmıştır. Bu makalede, özellikle hamilelik ve doğurganlık araştırma alanlarında, rahim üzerindeki etkileri izole etmek için çalışmaların nasıl yapılacağı konusunda araştırmacılara rehberlik etmek amacıyla her yaklaşımın güçlü ve zayıf yönleri tartışılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>ALZET 1002 mini ozmotik pompalar</td><td>BioScientific</td><td>1002</td><td>0,25 & 14 gün boyunca L / h. Bölüm 7 (Deneysel prosedür - Embriyo transferi) için kullanın.</td></tr><tr><td>ALZET 1003D mini ozmotik pompalar</td><td>BioScientific</td><td>1003D</td><td>1 & 14 gün boyunca L / h. Bölüm 8 için kullanın (Deneysel prosedür - Yapay desidualizasyon).</td></tr><tr><td>ALZET Reflex 7 mm klipsler</td><td>BioScientific</td><td>0009971</td><td>Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsler veya Michel klipsler kullanılabilir</td></tr><tr><td>ALZET Refleks klips aplikatörü</td><td>BioScientific</td><td>0009974</td><td>Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsleri veya Michel klipsleri kullanılabilir</td></tr><tr><td>ALZET Refleks klips çıkarıcı</td><td>BioScientific</td><td>0009976</td><td>Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsler veya Michel klipsler kullanılabilir</td></tr><tr><td>Bupivicaine enjeksiyonu</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>Stock% 0.5. Tuzlu</td></tr><tr><td>su Estradiol Sigma</td><td></td><td>E8875</td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam</td><td>Ilium</td><td>NA</td><td>Aktif bileşen 0.5 mg / mL içinde% 0.05'te kullanın. 400 mL'lik kafes su şişesi başına 3,5 mL veya kurumunuzun veterinerinin reçete ettiği şekilde kullanın.</td></tr><tr><td>Michel klipsleri</td><td>Daniels</td><td>NS-000242</td><td></td></tr><tr><td>Çok amaçlı dolgu macunu</td><td>Dow Corning</td><td>732</td><td></td></tr><tr><td>Ameliyatsız embriyo transferi (NSET) cihazı</td><td>ParaTechs</td><td>60010</td><td>6 mm spekulum içerir. Tek kullanımlıktır.</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Etanolde çözünür. İçin kullanın&nbsp; bölüm 3 (Hormon hazırlama - deri altı enjeksiyonu) ve&nbsp; bölüm 4 (Hormon hazırlama - yavaş salınan peletler)</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P7556</td><td>Suda çözünür. Bölüm 5 için kullanın (Hormon hazırlama - ozmotik mini pompalar)</td></tr><tr><td>Göz merhemini yenileyin</td>: <td>Allergan</td><td>NA</td><td>%42,5 w/v sıvı parafin, %57,3 w/v yumuşak beyaz parafin</td></tr><tr><td>Rimadyl Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>NA</td><td>Stok 50 mg/mL. 1 mg / ml'de kullanın (5 mg / kg doz için)</td></tr> <tr><td>Kauçuk boru</td><td>Dow Corning</td><td>508-008</td><td>% 100 etanolde yıkanır ve 1 cm'lik parçalar halinde kesilir. İç çap 1.57 mm &plusmn; &nbsp; 0,23 mm; Dış çap 3.18 mm &plusmn; 0,23 mm; duvar 0.81 mm.</td></tr><tr><td>Susam yağı</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk İpek sütürler boyut 3-0</td><td>Covidien</td><td>GS-832</td><td></td></tr></tbody></table>

yumurtalık ameliyatlı fare modelinde gebelik oluşumuna uterus katkılarını İnceleme yöntemleri

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

Gebeliğin oluşması için, uygulanabilir bir blastosist, implantasyonu ve plasenta oluşumunu kolaylaştırmak ve devam eden hamileliği sağlamak için alıcı bir uterus astarı (endometriyum) ile başarılı bir şekilde etkileşime girmelidir. Embriyonik defektlerin neden olduğu gebelik başarısındaki sınırlamalar iyi bilinmektedir ve son yıllarda in vitro fertilizasyon (IVF) ve yardımcı üreme teknolojilerinin yükselişiyle büyük ölçüde aşılmıştır. Bununla birlikte, henüz, alan, yetersiz alıcı bir endometriyumun neden olduğu sınırlamaların üstesinden gelmemiştir, bu nedenle IVF başarı oranlarının durgunlaşmasına neden olmuştur. Yumurtalık ve endometriyal fonksiyonlar yakından iç içe geçmiştir, çünkü yumurtalık tarafından üretilen hormonlar endometriyumun adet siklikliğinden sorumludur. Bu nedenle, gebeliğin kemirgen modellerini kullanırken, gözlemlenen bir sonucun yumurtalık veya uterus eksikliğinden kaynaklanıp kaynaklanmadığını belirlemek zor olabilir. Bunun üstesinden gelmek için, gebeliğe uterusa özgü katkıların incelenmesine izin vermek için embriyo transferi veya yapay desidualizasyon ile yumurtalık ameliyatı yapılmış bir fare modeli geliştirilmiştir. Bu makalede, yumurtalık ameliyatının nasıl yapılacağına dair talimatlar verilecek ve sağlıklı donörlerden embriyo transferini takiben başarılı yapay desidualizasyonu veya hamileliği desteklemek için eksojen hormonların temini için çeşitli teknikler hakkında bilgi verilecektir. Bu teknikler arasında deri altı enjeksiyonu, yavaş salınımlı peletler ve ozmotik mini pompalar bulunur. Her yöntemin temel avantajları ve dezavantajları tartışılacak ve araştırmacıların kendi araştırma soruları için en iyi çalışma tasarımını seçmelerini sağlayacaktır.

İyi karakterize edilmiş bir yapay desidualizasyon modeli bu protokol belgesinde açıklanmaktadır (Şekil 1A). Burada, genç yetişkin dişi farelere (8 haftalık) bölüm 1 ve bölüm 2'de tarif edildiği gibi cerrahi ovariektomi uygulandı. Fareler daha sonra, endojen yumurtalık hormonlarının, bölüm 3-7 ve bölüm 9'da açıklandığı gibi eksojen hormonlarla desteklenmeden önce dağılmasını sağlamak için 2 hafta dinlendirildi. Yapay desidualizasyon, susam yağının intravajinal enjeksiyon...

Gebelik oluşumu, kompleks embriyo ve uterus çapraz ilişkisini içeren dinamik bir süreçtir. Maternal uterin ortamın bu süreçlere kesin katkıları aktif bir araştırma alanı olmaya devam etmektedir. Burada, bu araştırma sorularını ele almak için in vivo hayvan modellerinin tasarlanmasına yardımcı olacak ayrıntılı protokoller sağlanmaktadır.

Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

Bu nedenle, uterus ve yumurtalık hormonal etkilerinin gebelik kuruluşu üzerindeki rolünü ayırmak zordur, çünkü her ikisi de yakından bağlantılıdır. Yani bu protokol uterus katkılarını doğrudan incelememizi sağlar. Ovariektomi gibi bu tekniklerin bazıları oldukça invaziv olsa da, uygulama ve eğitimden sonra gerçekleştirilmesi nispeten basittir, bu da onları fare modellerinde yeni olan araştırmacılar için uygun hale getirir.Bu nedenle, bu yöntem, HPG ekseninin daha geniş düzenlemesini anlamak için kullanılabilir, çünkü hem yumurtalıklar hem de uterus bu eksenin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar. Bu teknikleri daha önce hiç uygulamadıysanız, eğitim ve destek için enstitünüzün veteriner ekibine danışın. Başlamak için, anestezi altındaki küçük bir alanı tıraş ettikten sonra gözün üzerine hafifçe sürerek anestezi altındaki bir fareye cömertçe göz kayganlaştırıcı uygulayın.0.1 mililitre karprofeni deri altından boynun tırnağına enjekte edin. Hayvanın anestezi uygulanıp uygulanmadığını arka ayak parmağını sıkıştırarak ve bir refleks olup olmadığını kontrol ederek test edin. Ardından, Betadine'i cerrahi bölgeye uygulayın.Sonra cerrahi bir örtü ile örtün. Sıçan dişli forseps kullanarak, kamburdaki cildi yukarı doğru çekin ve beş milimetre uzunlamasına bir kesi yapın. Daha sonra, künt forseps kullanarak, cildi altta yatan kas tabakasından bir tarafa doğru böbreğe doğru disseke edin.Böbrek, yumurtalık ve yumurtalık yağ yastığını kas duvarından tanımlayın. Forseps ile kas tabakasını tutun ve kaldırın. Daha sonra, makas kullanarak, 0.5 ila bir santimetre uzunluğunda bir kesi yapın ve yumurtalık pedini bir çift künt forseps ile insizyondan çekin.Daha sonra, kavisli bir iğne tutucu kullanarak, uterus boynuzunun distal ucundaki yumurtalık ve yumurta kanalının altına kelepçeleyin ve yumurtalığı makasla çıkarın. 30 saniye sonra, kelepçeyi çıkarın ve steril gazlı bezle dablayın. Kas duvarı insizyonunu kapatmak için, forseps kullanarak insizyonun üstünü kaldırın.Daha sonra ipek dikişler kullanarak kesiyi bir cerrahın düğümü ile bağlayın. Topikal olarak, iğne eki olmayan bir mililitrelik bir şırınga kullanarak birkaç damla bupivakain uygulayın ve fazlalığı steril gazlı bezle temizleyin. Benzer şekilde yumurtalık ameliyatını diğer taraftan da gerçekleştirdikten sonra, cildin iki tarafını birbirine bastırarak ve birkaç yedi milimetrelik cerrahi klips uygulayarak cilt insizyonunu kapatın ve yara şişmesi için yer bırakın.Gerekli tüm ekipmanı laminer akış veya Sınıf II biyogüvenlik başlığı içindeki bir folyoya yerleştirin ve UV sterilize edin 20 dakika boyunca sterilize edin. Silastik boruyu% 100 desinol içinde yıkayın ve davlumbazın içinde hava kurumasını bekleyin. Kuruduktan sonra, boruyu bir neşter kullanarak bir santimetre uzunluğunda parçalara ayırın.Daha sonra, yaklaşık 200 mikrolitre sızdırmazlık maddesini pistonsuz bir şırıngaya sıkın. Pistonu değiştirin ve az miktarda sızdırmazlık maddesini dışarı itin. Sızdırmazlık maddesini borunun bir ucuna uygulayın, eldivenli bir parmağınızla düzeltin.Sızdırmazlık maddesinin gece boyunca veya UV ışığı altında davlumbazda 30 dakika kurumasını bekleyin. Daha sonra, progesteron tozunu sterilize edilmiş bir Petri kabına dökün. Forseps yardımıyla tozu peletlere koyun.Tozu yoğunlaştırmak için peletin kapalı ucunu davlumbaz yüzeyinden aşağı doğru dokunun. Daha sonra açık ucu sızdırmazlık maddesi ile kapatın. Peletleri içeren Petri kabını ışıktan korumak için folyoya sarın.Subkutan yerleştirmeden yaklaşık 72 saat önce, peletleri kömürden arındırılmış FCS'de inkübe ederek aktive edin. Bu prosedürü gösteren, Hudson Tıbbi Araştırma Enstitüsü'nden erken kariyer araştırma bilimcisi Dr. Fiona Cousins olacaktır. Hayvanları deri altı östradiol enjeksiyonları ile hormon astarladıktan sonra, hayvanları yapay desidualizasyondan iki gün önce deri altı progesteron peletleri ile hazırlayın.Ameliyattan önce fareyi uyuşturun ve ayak parmağı sıkışma refleksini kontrol ederek anestezinin derinliğini test edin. Ardından fareyi eğilimli bir konuma getirin, kuyruğunu kaldırın ve yavaşça vajinasına altı milimetrelik bir spekulum yerleştirin. Farenin alt gövdesini baskın olmayan elin ilk iki parmağının arasına yerleştirin.Ardından, işaret parmağınızı kullanarak, daha iyi vajinal erişilebilirlik sağlamak için kuyruğu yavaşça yukarı doğru itin. 20 mikrolitre susam yağını cerrahi olmayan bir embriyo transfer ucuna aktarın ve ucu vajina ve serviks yoluyla uterus boynuzuna yerleştirin. Yağı yavaşça dışarı atın.İşiniz bittiğinde, spekulumu vajinadan çıkarın. Bu çalışmada, farelerin% 80'ine başarılı bir ondalıklaştırma yapılırken,% 20'si yapılmamıştır. Bu nedenle, tüm cerrahi ekipmanlarınızı ve çalışma alanlarınızı steril tutmak ve NSAID cihazını rahim ağzından farenin uterus boynuzuna yerleştirirken hastalara sahip olmak önemlidir.Yapay desidualizasyonu indükledikten sonra, menstrüasyonu taklit etmek ve endometriyal bozulmayı incelemek için progesteron damak çıkarılabilir. Bu yöntemi kullanarak, uterus biyolojisini ve düzenlemesini yumurtalıkların etkisinden bağımsız olarak inceleyebiliriz. Bu, doğurganlık ve genel olarak kadın sağlığı alanında gerçekten heyecan verici.

methods-for-studying-uterine-contributions-to-pregnancy-establishment

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Fare ve sıçanlarda barsak mezenter arter kaskad rahim dokusundaki otomatik nakli endometriozis cerrahi indüksiyon açıklaması.

Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Bu videoda, bir fare modelinden sağlam yumurtalık çıkarmak için uygulanan cerrahi bir prosedürü anlatıyoruz.

Fareden Sağlam Yumurtalık Alımı: Tam Yumurtalığı Murin Modelinden İzole Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Bu protokol, farelerde hamilelik sırasında maternal vaskülatürdeki değişiklikleri değerlendirmek için bir tekniği tanımlar. Stereolojik yöntemler kullanılarak, desidual spiral arterlerin yeniden şekillenmesi kantitatif olarak değerlendirildi ve sonuçlar immünohistokimya kullanılarak kalitatif olarak doğrulandı.

Fare Uterus içinde Gebelikte maternal Vasküler Yaptırma Değerlendirilmesi

Rahim kasılmaları dişilerin refahı için önemlidir. Ancak, patolojik olarak artan kontraktilite dismenore neden olabilir, özellikle genç kadınlarda. Burada, dismenore tedavisinde kullanılabilecek düz kas gevşeticilerin etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlayan basit bir ex vivo hazırlık tarif ediyoruz.

Fare Üreme Yolu Spontan Hareketliliği Değerlendirmek için Ex Vivo Yöntemi ve Veri Analizi için MATLAB tabanlı Rahim Hareket Takip Algoritması

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Burada, endometrial desidualizasyon araştırma alanında klasik bir endometrial desidualizasyon deneyi olan ovariektomize fareyi kullanarak yapay bir desidualizasyon modeli oluşturma yöntemini açıklıyoruz.

Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Çeşitli ekstragonadal doku ve organlarda folikül stimüle edici hormon (FSH) birçok hastalığın patogenezi ile ilişkilidir. Yumurtalıklı ve FSH ile tedavi edilmiş fare modeli (OVF), FSH'nin ekstragonadal etkilerini araştırmak için kullanılabilir.

Folikül Uyarıcı Hormonun Bağımsız Etkilerinin Bir Fare Modelinde İn Vivo Olarak Araştırılması

Bu çalışma, endometriozisin klinik olarak anlamlı bir alt tipi olan endometrioma'yı simüle etmek için özel olarak tasarlanmış yeni bir fare modelini tanıtmaktadır. Model, C57BL / 6J farelerini kullanarak, endometrioma ile ilişkili infertilitenin altında yatan patofizyolojik mekanizmaları aydınlatmayı ve üreme tıbbındaki mevcut bilgi boşluğunu kapatmak için rafine bir araç sunmayı amaçlamaktadır.

Endometrioma ile İlgili İnfertiliteyi İncelemek için Deneysel Bir Fare Modelinin Kurulması

Bu makale, fare rahmine 1-3 dakika içinde %95 etanol enjekte ederek çok düşük mortalite oranı ve minimal intrauterin adezyonlara sahip güvenilir ve tekrarlanabilir bir ince endometriyum üretmek için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır.

İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

Bu protokol, bir fare modelinde uterus hasarını indüklemek için bir prosedürü ve ardından sonraki bir hamilelik sırasında aşağı akış analizlerini açıklar.

Cerrahi Uterus Yaralanması ve Sonraki Gebelik Sonuçlarının Fare Modeli

Öğrenin, fare modellerinde yumurtalık ameliyatı ve yapay desidualizasyon protokolleri kullanarak uterusun gebelik oluşumuna katkılarını incelemeyi. Bu yöntem üreme biyolojisi ve HPG aks düzenlemesi araştırmaları için değerlidir.

Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri

Daha fazla video keşfet