Akıllı Yüksek Verimli Antimikrobiyal Duyarlılık Testi / Faj Tarama Sistemi ve Lar Antimikrobiyal Direnç İndeksinin Uygulanması
July 21st, 2023
Burada akıllı, yüksek verimli antimikrobiyal duyarlılık testi/faj tarama sisteminin prensibini, yapısını ve talimatını tanıtıyoruz. Uygulaması, örnek olarak Çin'in Shandong kentindeki kümes hayvanlarından izole edilen Salmonella kullanılarak gösterilmiştir. Lar indeksi hesaplanır ve antimikrobiyal direncin değerlendirilmesindeki önemi kapsamlı bir şekilde tartışılır.
Bu protokol, hem EST tespiti hem de faj figürü için çok düzeyli bir yöntem sunar. Ayrıca, farklı kontrol teknolojilerinin EMR seviyelerini karşılaştırmak için tasarruflar için büyük bir endeks tanıttı. Bu uygun maliyetli teknik akıllı, yüksek verimli ve çok işlevlidir.
20.000 salgın gen ve analitik faj toplayan bir veteriner izleme ağı olan VAMS'ın kurulmasını sağlamıştır. Bu yöntem aynı zamanda tıpta, tarımda, hayvan kalp pilinde ve balıkçılıkta patojenik bakterilerin izlenmesi ve kontrol edilmesi için de kullanılabilir. Bu protokol ve bu şirket belgesinin bir olmasını sağlamalıdır.
Teknik eğitim rehberi ile biz. Bunu takip etmek, herkesin kısa sürede tekniğe hakim olmasına yardımcı olacaktır. Kalite kontrol organizması E.coli'yi ve 93 test salmonella suşunu Mueller-Hinton agar plakalarında inkübe ederek başlayın.
Daha sonra, her bir suşun hazırlanan aşısını 10 kez seyreltin. 200 mikrolitre steril normal salini, negatif kontrol olarak 96 oyuklu bir plakanın a-1 kuyusuna aktarın. Daha sonra iki E.coli süspansiyonunu sırasıyla pozitif ve kalite kontrolleri olarak a-2 ve a-3 kuyularına pipetleyin.
Kalan 93 kuyucuğa, 200 mikrolitre seyreltilmiş test suşu ekleyin. Antimikrobiyal agar plakalarının hazırlanması için. İlk olarak, LAR indeksine göre test edilen farklı antibakteriyel ajanlar için konsantrasyon aralıklarını ayarlayın.
CLSI standart agar seyreltme yöntemini izleyerek antibiyotik çözeltisi için bir log-iki ikiye katlama seyreltme şeması gerçekleştirin. Şimdi 18 mililitre erimiş Mueller-Hinton agar ortamı içeren sterilize edilmiş bir cam şişeye iki mililitre antimikrobiyal çözelti ekleyin. İyice karıştırdıktan sonra, bir biyo güvenlik kabini içindeki plakalara dökün.
Agarın oda sıcaklığında katılaşmasına izin verin. Agar yüzeyinin kurumasını sağlamak için plakaların kapağının altında bir boşluk bıraktığınızdan emin olun. İnkübe edilmiş plakaların alt tarafında antimikrobiyal ajan türlerini ve ilgili konsantrasyonlarını etiketleyin.
Her bir antimikrobiyal ajan için çoklu inkübe edilmiş plakaları, log iki katına çıkan seyreltme sırasına göre düzenlenmiş bir yığın halinde düzenleyin. Son olarak, her ajan için kontrol görevi görecek iki ilaçsız agar plakası hazırlayın. Bir biyo güvenlik kabini içindeki 96 noktalı matrisli bir aşılayıcının desteğine sterilize edilmiş bir aşılama pimi plakası takın.
Daha sonra, hazırlanan tohum bloğunu test edilmiş suşlar ve mobil taşıyıcı üzerinde bir agar inkübe plakası ile düzenleyin. Mobil taşıyıcıyı, tohum bloğu aşılama pimi plakasının altına gelene kadar itin. Şimdi çalıştırma koluna basın ve 96 pimi tohum bloğunun 96 kuyusundaki aşıya doğru yönlendirerek aşılama pimi plakasını indirin.
Çalıştırma kolunu kontrollü bir şekilde serbest bırakın ve her bir aşıyı iyice karıştırmak ve daldırmak için aşılama pimi plakasını otomatik olarak sıfırlayın, çalıştırma kolunu iki ila üç kez itin. Daha sonra, inkübasyon plakası aşılama pimi plakasının altında olacak şekilde taşıyıcı plakayı kaydırın ve konumlandırın. Çalıştırma kolunu aşağı bastırın, aşılama pimi plakasını indirin ve inkübe edilmiş plakanın yüzeyi ile tam teması sağlamak için bir ila iki saniye bırakın.
Bir tur aşılamayı tamamlamak için çalıştırma kolunu bırakın. İnkübe edilmiş plakayı değiştirin ve antimikrobiyal agar plakaları partisi tamamlanana kadar işlemi tekrarlayın. Başka bir test edilmiş suş grubunu aşılamak için yeni bir aşılama pimi plakasına ve tohum bloğuna geçin.
Aşılanmış antimikrobiyal agar plakalarını, aşı noktalarından gelen nem tamamen agar içine emilene kadar oda sıcaklığında inkübe edin. İnkübasyondan sonra, plakaları ters çevirin ve inhibe edilmemiş bakterilerin koloniler oluşturmasına izin vermek için inkübasyona devam edin. Görüntü toplama ve veri istatistiklerini gerçekleştirmek için, programı başlatmak için 96 nokta vuruşlu AST görüntü alma sistemine tıklayarak başlayın.
Görev çubuğundan test bilgileri'ni seçin. Yeni bir test görevi oluşturmak için yeni'ye tıklayın ve gerekli ayrıntıları doldurun. Ardından, yeni oluşturulan görevi seçmek için veri toplamaya ve ardından fotoğraf ve test öğesine basın.
Antibiyotiğin başlangıç konsantrasyonunu seçmek için antibiyotik adını ve gradyanını seçmek için antibiyotikleri seçin. Son olarak, görüntü alma dönüştürücüsü ile bağlantı kurmak için bağlan'a tıklayın. Ardından, inkübe edilmiş plakaları algılama plakası tabanına yerleştirin ve bunları görüntü elde etme dönüştürücüsüne yerleştirin.
Plakaların görüntülerini çekmek için koleksiyona tıklayın. Antibiyotiklere basın ve bir sonraki plaka setini seçin. Başlangıç gradyanını belirlemek için gradyanı seçin, ardından bir sonraki görüntü toplama turuna geçin.
Koloni oluşumunu belirlemek ve görüntüleri minimum inhibitör konsantrasyonlara, yani MIC değerlerine dönüştürmek için gönder'e tıklayarak prosedürü sonlandırın. Tüm MIC sonuçlarına erişmek için sorguya tıklayın. Farklı fajlar üretmek için çift katmanlı agar yöntemini kullanarak başlayın.
Fajları uygun bir paralel konsantrasyona seyreltin ve 96 kuyulu tohum bloğuna 200 mikrolitre faj aşısı ekleyin. Daha sonra, incelenecek her suş için çift katmanlı bir inkübe plakası hazırlayın. Kurumasını sağlamak için çift katmanlı plakanın kapağının altında bir boşluk bırakın.
Hazırlanan faj tohum bloğunu ve çift katmanlı plakayı 96 nokta vuruşlu inokülatörün mobil taşıyıcısına yerleştirin. Tüm fajları yarı agar yüzeyine aktarın. Tüm inoküler nem yarı agar içine emilene kadar plakaların oda sıcaklığında kalmasına izin verin.
Şimdi test edilen suşlar için plakaları 37 santigrat derecede dört ila altı saat inkübe edin. Her bir çift katmanlı plakanın deneysel sonucunun görüntüsünü elde etmek ve kaydetmek için görüntü elde etme dönüştürücüsünü kullanın. Elde edilen görüntülere dayalı olarak farklı nokta şekillerinin sayısını ve morfolojilerini bir elektronik tabloya kaydedin ve farklı faj türlerinin ilgili oranlarını hesaplayın.
Ampisilinli plakalarda salmonella büyümesinin morfolojik çalışması, a-1'deki negatif kontrolün büyüme göstermediğini gösterdi. A-4'teki salmonella suşunun MIC'si mililitre başına 64 mikrogram iken, a-5'inki mililitre başına 16 mikrogram idi. Ampisilin, siprofloksasin ve amoksisilin-klavulanik asidin yüzde direnç değerleri %50'den yüksekken, doksisiklin, florfenikol, sefotaksim ve enrofloksasin %30 ila %50 arasında idiGentamisin, amikasin ve meropenem %30'dan az yüzde direnç değerleri gösterdiSiprofloksasin ve amoksisilin-klavulanik asidin LAR indeksleri önemli ölçüde ertelendi.
Çift katmanlı plakalar üzerinde salmonella büyümesinin morfolojik analizleri, fajların dört ana nokta morfolojisinin gözlendiğini göstermiştir. Yuvarlak berrak litik nokta, plakadaki konakçıyı güvenilir bir şekilde öldürebilen, ancak o konakçının pahasına başarılı bir şekilde çoğalabilen veya çoğalamayan bir fajdan geliyordu. Plakların toplanması gerçek plaklardan oluşmuştur.
Bulanık litik nokta, plakadaki konakçıyı güvenilir bir şekilde öldürmeyen ve bu konakçının pahasına başarılı bir şekilde çoğalabilen veya çoğalamayan bir fajdan kaynaklandı. Litik olmayan nokta, litik olmayan doğayı gösterdi. Bu teknik, 96 agar lensi bir kerede kolayca verimli bir şekilde aktarır ve cihazlar görüntüleri otomatik olarak tanır ve ardından çizgi zarını hesaplar.
Bu teknolojinin, fajların araştırılmasını ve sanayileşmesini teşvik etmesi bekleniyor ve fajların uygulanması, AMR problemini azaltmanın ve çözmenin şaşırtıcı yollarından biri.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu protokol, akıllı yüksek verimli antimikrobiyal duyarlılık testi/faj tarama sistemi sunar. Çin, Shandong'da kümes hayvanlarından izole edilen Salmonella kullanarak uygulamasını gösterir ve antimikrobiyal direnç değerlendirmesinde Lar indeksinin önemini tartışır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Mikrobiyoloji
- Veteriner Bilimi
- Antimikrobiyal Direnç
Arka Plan
- Etkili antimikrobiyal duyarlılık testine duyulan ihtiyaç.
- Patojenik bakterilerin izlenmesinde karşılaşılan zorluklar.
- Araştırmada yüksek verimli yöntemlerin önemi.
- Veteriner izleme ağlarının geliştirilmesi.
Çalışmanın Amacı
- Antimikrobiyal duyarlılık testi için uygun maliyetli bir yöntem tanıtmak.
- Patojenik bakterilerin izlenmesi ve kontrolü için bir sistem kurmak.
- Antimikrobiyal dirençte Lar indeksinin önemini değerlendirmek.
Kullanılan Yöntemler
- Yüksek verimli antimikrobiyal duyarlılık testi.
- Faj tarama teknikleri.
- Lar indeksinin hesaplanması.
- Veteriner izleme ağı (VAMS) kurulması.
Ana Sonuçlar
- Sistemin Salmonella izolatları üzerinde başarılı uygulaması.
- 20.000 epidemik gen ve analitik fajın toplanması.
- Sistemin çeşitli alanlarda etkinliğinin gösterilmesi.
- Antimikrobiyal direnç değerlendirmesi üzerine kapsamlı tartışma.
Sonuçlar
- Akıllı yüksek verimli sistem, antimikrobiyal test için etkilidir.
- Antimikrobiyal direnç hakkında değerli bilgiler sağlar.
- Yöntemin tıp, tarım ve balıkçılıkta geniş uygulamaları vardır.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
High-throughput antimicrobial sensitivity testing and phage screening are critical for accelerating resistance profiling and therapeutic candidate evaluation in infectious disease pipelines. The integration of automated inoculation, image-based MIC quantification, and the Lar index enables more granular, quantitative assessment of antimicrobial resistance (AMR) across large strain collections. This system supports portfolio-level decision-making by improving predictive confidence in resistance trends and phage efficacy for translational and preclinical research.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables systematic interrogation of resistance mechanisms in diverse bacterial isolates.
- Supports functional validation of antimicrobial and phage targets using quantitative MIC and lysis data.
- Facilitates biological de-risking by clarifying resistance profiles and phage-host interactions.
- Improves predictive confidence for prioritizing antimicrobial and phage candidates.
Screening & Assay Development
- Delivers standardized, high-throughput MIC and lysis spectrum data for robust assay development.
- Automates inoculation and image analysis to enhance reproducibility and throughput.
- Enables scalable screening of compound and phage libraries against resistant strains.
- Provides quantitative outputs suitable for downstream analytics and cross-study comparison.
Translational & Preclinical Research
- Aligns resistance and lysis data with translational biomarker strategies for AMR monitoring.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation of antimicrobial and phage interventions.
- Enables risk-adjusted advancement decisions based on quantitative resistance and efficacy metrics.
- Facilitates integration with regional or enterprise AMR surveillance networks.
Pipeline & Workflow Integration
This intelligent system bridges early discovery, screening, and translational research by providing standardized, quantitative AMR and phage efficacy data across large sample sets.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and mechanistic de-risking by quantifying resistance and lytic activity.
- Screening: Delivers reproducible, high-throughput MIC and lysis spectrum outputs for assay readiness.
- Analytics: Enables statistical comparison of resistance levels and phage efficacy using the Lar index and MIC distributions.
- Translational Research: Connects laboratory findings to surveillance and intervention strategies in veterinary and clinical settings.
- Enterprise Reuse: Provides a scalable, reusable platform for ongoing AMR and phage research across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in AMR profiling and phage candidate selection.
- Operational Value: Standardizes and automates high-throughput testing for efficiency and reproducibility.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and reduces late-stage risk in antimicrobial and phage development.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of candidates based on robust, quantitative resistance and efficacy data.
Implementation Considerations
- Requires expertise in microbiology, AMR analytics, and phage biology.
- Needs access to automated inoculation, image acquisition, and data analysis infrastructure.
- Demands cross-team standardization of protocols and data interpretation criteria.
- Adaptable to various bacterial species and phage libraries with protocol optimization.
- Dependent on adherence to established resistance breakpoints and quality controls.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:04
Introduction
1:16
Inoculum and Antimicrobial Agar Plate Preparation
3:05
Inoculation Steps for the 96‐Dot Matrix Inoculator and Plate Incubation
4:49
Image Acquisition and Data Statistics
6:14
Intelligent High‐Throughput Phage Screening System
7:33
Results: Analysis of Antimicrobial Resistance Through High‐Throughput Antimicrobial Sensitivity Testing
9:10
Conclusion
