Name: Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Öğrenin farelerde akut miyeloid lösemi modeli oluşturma yöntemini, intra-peritoneal enjeksiyon kullanarak. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha pratik ve ekonomiktir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Huck Enstitüsü'nün Akış Sitometri Çekirdek Tesisi'ne ve Pennsylvania Eyalet Üniversitesi, Veterinerlik ve Biyomedikal Bilimler Bölümü, Hayvan Teşhis Laboratuvarı'nın Histopatoloji Çekirdek Tesisi'ne zamanında teknik destek sağladıkları için teşekkür eder. Bu çalışma, Amerikan Kanser Araştırmaları Enstitüsü (KSP), Penn State Tarım Bilimleri Koleji, Penn State Kanser Enstitüsü, USDA-NIFA projesi 4771, K.S.P. ve R.F.P.'ye 00000005 katılım numarası ile desteklenmiştir.

<ol><li>Dohner, H., Weisdorf, D. J., Bloomfield, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (12), 1136-1152 (2015).</li>
<li>Fortier, J. M., Graubert, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Murine models of human acute myeloid leukemia.</a> Cancer Treatment and Research. 145, 183-196 (2010).</li>
<li>Ernst, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+hematopoiesis+requires+the+mixed-lineage+leukemia+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Definitive hematopoiesis requires the mixed-lineage leukemia gene.</a> Developmental Cell. 6 (3), 437-443 (2004).</li>
<li>Fisher, J. N., Kalleda, N., Stavropoulou, V., Schwaller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Impact+of+the+cellular+origin+in+acute+myeloid+leukemia%3A+learning+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Hemasphere%22%5BJournal%5D)">The Impact of the cellular origin in acute myeloid leukemia: learning from mouse models.</a> Hemasphere. 3 (1), 152(2019).</li>
<li>Zhan, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+transplant+in+mice+by+intra-femoral+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell transplant in mice by intra-femoral injection.</a> Methods in Molecular Biology. 430, 161-169 (2008).</li>
<li>Price, J. E., Barth, R. F., Johnson, C. W., Staubus, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+cells+and+monoclonal+antibodies+into+mice%3A+comparison+of+tail+vein+and+retroorbital+routes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Injection of cells and monoclonal antibodies into mice: comparison of tail vein and retroorbital routes.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology. 177 (2), 347-353 (1984).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).</li>
<li>Suckow, M. A., Danneman, P., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSuckow%2C+MA+%22The+Laboratory+Mouse%22">The Laboratory Mouse</a>. , CRC Press Inc. (2001).</li>
<li>Barr, J. E., Holmes, D. B., Ryan, L. J., Sharpless, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+the+chronic+cannulation+of+the+jugular+vein+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%2C+Biochemistry%2C+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Techniques for the chronic cannulation of the jugular vein in mice.</a> Pharmacology, Biochemistry, and Behavior. 11 (1), 115-118 (1979).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods in Molecular Biology. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Nungestee, W., Wolf, A., Jourdonais, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+gastric+mucin+on+virulence+of+bacteria+in+intraperitoneal+injections+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of gastric mucin on virulence of bacteria in intraperitoneal injections in the mouse.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 30 (2), 120-121 (1932).</li>
<li>Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+anesthesia%2C+analgesia%2C+and+part+I%3A+anesthetic+considerations+in+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+journal%22%5BJournal%5D)">Mice anesthesia, analgesia, and part I: anesthetic considerations in preclinical research.</a> ILAR journal. 53 (1), 55-69 (2012).</li>
<li>Leong, S. -K., Ling, E. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+neurons+with+fluorescent+dyes+administered+via+intravenous%2C+subcutaneous+or+intraperitoneal+route%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Labelling neurons with fluorescent dyes administered via intravenous, subcutaneous or intraperitoneal route.</a> Journal of Neuroscience Methods. 32 (1), 15-23 (1990).</li>
<li>Ma, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+magnetic+Fe3O4-nanoparticle+induces+hepatic+and+renal+tissue+injury+via+oxidative+stress+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of magnetic Fe3O4-nanoparticle induces hepatic and renal tissue injury via oxidative stress in mice.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 4809-4918 (2012).</li>
<li>Schwarze, S. R., Ho, A., Vocero-Akbani, A., Dowdy, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+protein+transduction%3A+delivery+of+a+biologically+active+protein+into+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo protein transduction: delivery of a biologically active protein into the mouse.</a> Science. 285 (5433), 1569-1572 (1999).</li>
<li>Muench, M. O., Chen, J. C., Beyer, A. I., Fomin, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+therapies+supplement%3A+the+peritoneum+as+an+ectopic+site+of+hematopoiesis+following+in+utero+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Cellular therapies supplement: the peritoneum as an ectopic site of hematopoiesis following in utero transplantation.</a> Transfusion. 51, Suppl_4 106-117 (2011).</li>
<li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+is+effective+in+treating+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Intravenous injection of mesenchymal stem cells is effective in treating liver fibrosis.</a> World Journal of Gastroenterology. 18 (10), 1048(2012).</li>
<li>Yousefi, F., Ebtekar, M., Soleimani, M., Soudi, S., Hashemi, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+in+vivo+immunomodulatory+effects+of+intravenous+and+intraperitoneal+administration+of+adipose-tissue+mesenchymal+stem+cells+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Comparison of in vivo immunomodulatory effects of intravenous and intraperitoneal administration of adipose-tissue mesenchymal stem cells in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).</a> International Immunopharmacol. 17 (3), 608-616 (2013).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+bone+marrow-derived+MSCs+improves+cisplatinum-induced+renal+injury+through+paracrine+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transplantation of bone marrow-derived MSCs improves cisplatinum-induced renal injury through paracrine mechanisms.</a> Experimental and Molecular Pathology. 94 (3), 466-473 (2013).</li>
<li>Castelo-Branco, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+but+not+intravenous+cryopreserved+mesenchymal+stromal+cells+home+to+the+inflamed+colon+and+ameliorate+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal but not intravenous cryopreserved mesenchymal stromal cells home to the inflamed colon and ameliorate experimental colitis.</a> PLoS One. 7 (3), 33360(2012).</li>
<li>Bazhanov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneally+infused+human+mesenchymal+stem+cells+form+aggregates+with+mouse+immune+cells+and+attach+to+peritoneal+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneally infused human mesenchymal stem cells form aggregates with mouse immune cells and attach to peritoneal organs.</a> Stem Cell Research & Therapy. 7, 27(2016).</li>
<li>Liu, Q., Chen, L., Atkinson, J. M., Claxton, D. F., Wang, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atg5-dependent+autophagy+contributes+to+the+development+of+acute+myeloid+leukemia+in+an+MLL-AF9-driven+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Atg5-dependent autophagy contributes to the development of acute myeloid leukemia in an MLL-AF9-driven mouse model.</a> Cell Death & Disease. 7 (9), 2361(2016).</li>
<li>Wognum, A. W., Eaves, A. C., Thomas, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+isolation+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Identification and isolation of hematopoietic stem cells.</a> Archives of Medical Research. 34 (6), 461-475 (2003).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+population+of+cells+in+the+bone+marrow+that+phenotypically+mimics+hematopoietic+stem+cells%3A+resting+stem+cells+or+mystery+population%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Characterization of a population of cells in the bone marrow that phenotypically mimics hematopoietic stem cells: resting stem cells or mystery population.</a> Stem Cells. 16 (1), 38-48 (1998).</li>
<li>Gott, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+Cs-137+gamma+rays+and+320-kV+X-rays+in+a+mouse+bone+marrow+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dose+Response%22%5BJournal%5D)">A comparison of Cs-137 gamma rays and 320-kV X-rays in a mouse bone marrow transplantation model.</a> Dose Response. 18 (2), 1559325820916572(2020).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Applied Microbiology. 17 (2), 250-251 (1969).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Ronan, J. L., Wu, W., Crabtree, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+neural+development+to+cognition%3A+unexpected+roles+for+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Genetics%22%5BJournal%5D)">From neural development to cognition: unexpected roles for chromatin.</a> Nature Review Genetics. 14 (5), 347-359 (2013).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-4+treatment+reduces+leukemia+burden+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Interleukin-4 treatment reduces leukemia burden in acute myeloid leukemia.</a> FASEB Journal. 36 (5), 22328(2022).</li>
<li>Krivtsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+from+committed+progenitor+to+leukaemia+stem+cell+initiated+by+MLL-AF9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transformation from committed progenitor to leukaemia stem cell initiated by MLL-AF9.</a> Nature. 442 (7104), 818-822 (2006).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+initiated+by+Mll-AF9%3A+gene+dosage+and+critical+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation initiated by Mll-AF9: gene dosage and critical target cells.</a> Cancer Cell. 13 (5), 432-440 (2008).</li>
<li>Somervaille, T. C. P., Cleary, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+leukemia+stem+cells+in+murine+MLL-AF9+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of leukemia stem cells in murine MLL-AF9 acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 10 (4), 257-268 (2006).</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Yukarıda tarif edilen bu çalışmalar, Lin- hücrelerinin transplantasyonunun 1 ° murin AML oluşumundaki LSK hücreleri ile karşılaştırılabilir olduğuna dair destekleyici kanıtlar sunmaktadır. Ek olarak, mevcut veriler ayrıca i.p. enjeksiyonunun, intravenöz (veya ro) enjeksiyona kıyasla murin AML'yi oluşturmak için etkili ve uygun bir yöntem olduğunu göstermektedir.
LSK hücrelerine ek olarak, granülosit-monosit progenitör (GMP), ortak lenfoid progenitör (CLP) ve ortak miyeloid progenitö...

Akut miyeloid lösemi (AML), kötü prognozlu1 etiyolojisi olan çeşitli hematolojik malignitelerin bir türüdür. AML hayvan modellerinin oluşturulması, yeni tedavileri keşfetme çabasıyla karmaşık varyasyonlarının ve patobiyolojisinin anlaşılması için temel oluşturur2. Farelerde lösemigenez, insanlarda hastalığı taklit etmek için AML'yi güçlü bir şekilde indüklemek için karışık soy lösemi (MLL) genini içeren füzyonlar da dahil olmak üzere füzyon onkoproteinlerini eksprese eden donör hücrelerin transplantasyonunu içerir3. MLL geni ile ilişkili AML4'ün transplantasyonunda donör hücrelerin çeşitli hücresel kökenleri bildirilmiştir ve hastalığın kökeninden sorumlu hücreler hakkında çok az şey bilinmektedir.
Farelerde transplantasyon için birçok yol geliştirilmiştir; Mutant donör hücreleri doğrudan kemik iliği5'e sokan bir intra-femoral enjeksiyon yerine, venöz sinüs pleksus, kuyruk veni ve juguler veni kullanan intravenöz bir enjeksiyon, murin AML modelleri 6,7,8,9'u üretmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Retro-orbital (r.o.) enjeksiyon durumunda, hacim sınırlaması, yüksek teknik talep, tekrarlanan girişimler veya hatalar için az şans ve potansiyel oküler yaralanmalar gibi çeşitli doğal dezavantajlar, sınırlı veya hiç uygulanabilir alternatifi olmayan büyük tökezleyen bloklar olmuştur7. Kuyruk damarı enjeksiyonunda lokal yaralanmaların yanı sıra benzer sorunlar da olabilir; Prosedürü kolaylaştırmak için, farelerin kuyruk damarlarını genişletmek için genellikle ısıtılması gerekir10. Kuyruk damarını, özellikle C57BL / 6 fare suşunda, ek bir ışık kaynağı olmadan bulmak da zordur. Juguler ven enjeksiyonu için, araştırma personeli damarı bulmak ve olası komplikasyonları sınırlamak için yeterli eğitim gerektirir. Ek olarak, hem venöz sinüs hem de juguler ven enjeksiyonlarının anestezi altında yapılması gerekir, bu da başka bir karmaşıklık seviyesi ekler. Bu nedenle, AML murin modellerinin oluşturulmasını kolaylaştırmak için transplantasyon için yeni yollar araştırmak caziptir.
İntra-peritoneal (i.p.) enjeksiyon yaygın olarak ilaçları, boyaları ve anestezikleri uygulamak için kullanılır 11,12,13,14,15; Ayrıca ektopik hematopoez16 için hematopoetik hücreleri tanıtmak ve çeşitli fare modellerinde kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücreleri nakletmek için kullanılmıştır17,18,19,20,21. Bununla birlikte, farelerde hematopoetik maligniteler oluşturmak için, özellikle AML hastalığının ilerlemesini incelemek için nadiren kullanılmıştır.
Bu çalışma, AML fare modellerinin üretiminde i.p. enjeksiyonunun fizibilitesini açıklamanın yanı sıra, soy negatif (Lin-) ve Lin-Sca-1 + c-Kit + (LSK) popülasyonlarının donör hücreler olarak transplantasyon verimliliğini karşılaştırmaktadır. Bu bulgular, AML ve ilişkili miyeloid lösemilerin deneysel modellerini oluşturmak için basit ve etkili bir yol sağlar. Böyle bir yöntem, hastalık mekanizmalarını daha iyi anlamamızın yanı sıra deneysel tedavileri test etmek için nispeten kolay bir model sağlama potansiyeline sahiptir.

<table><tbody><tr><td>a-Yetkili hücreleri seçin&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum klorür (NH4Cl)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>Cat # A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Sigma Aldrich Cat</td><td># A0797</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA), Fraksiyon V & mdash; Düşük Endotoksin Sınıfı</td><td>İkizler biyo-ürünleri</td><td>Kedi # 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Siprofloksasin HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Kedi # C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz, glutamin yok</td><td>Gibco</td><td>Kedi # 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)</td> <td>Corning</td><td>Cat # 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, Disodyum Tuzu (EDTA-2Na), Dihidrat, Moleküler Biyoloji Sınıfı</td><td>Calbiochem</td><td>Cat # 324503</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat # S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holo-transferrin, sığır</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat # T1283</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin çözeltisi insan</td><td>Sigma</td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Orta (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin 200 mM (100&kez;) çözümü</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB et suyu, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>Agarlı LB Suyu (Miller)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-fare CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Kedi # 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>Fare İnterlökin-3 (IL-3)</td><td>İkizler biyo-ürünleri</td><td>Kedi # 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>Fare İnterlökin-6 (IL-6)</td><td>İkizler biyo-ürünleri</td><td>Kedi # 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Fare Kök Hücre Faktörü (SCF)</td><td>İkizler biyo-ürünleri</td><td>Kedi # 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin Çözeltisi, 100x</td><td>Corning</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Phoenix-Eco (pECO) hücreleri</td><td>ATCC</td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Bikarbonat (KHCO3), Granül</td><td>JT. Fırıncı</td><td>Kedi # 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan anti-fare CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>Kedi # 105812</td><td></td></tr><tr><td>Sıçan anti-fare Ly-6A / E (Sca-1) (PE-Cy7)</td> <td>BD Pharmingen</td><td>Kedi # 558162</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Murin Flt3-Ligand</td><td>Pepro Tech, INC.</td><td>Kedi # 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin Rekombinant İnsan Fibronektin Fragmanı</td><td>TaKaRa</td><td>Cat # T100A</td><td></td></tr><tr><td> Trans IT-293 Reaktif</td><td>MirusBio</td><td>Cat # MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reaktif</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat # T9424</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi Çözeltisi,% 0.4</td> <td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25), fenol kırmızısı</td><td>Gibco</td><td>Cat # 25200-056</td><td></td></tr> <tr><td>& beta ; -Merkaptoetanol (BME)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>Cat # M3148</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü> Ticari Tahliller&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep Fare Hematopoietik Progenitör Hücre İzolasyon Kiti&nbsp;</td><td>Kök Hücre teknolojileri</td><td>Cat# 19856A</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti&nbsp;</td><td>Termo Balıkçı&nbsp;</td><td>Kedi # 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR SuperMix</td><td>Quanta Bio</td><td>Kedi # 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>Plazmid Maxi Kiti (25)</td> <td>Qiagen</td><td>Kedi #: 12163</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Hayvanlar < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>>< Ai14 TdTomato< > Fareler</td><td>Jackson Laboratuvar</td><td>Suşu # 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6 / J fareler ve nbsp;</td><td>Jackson Laboratuvar</td><td>Suşu # 002014</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2 C57BL6 / J fareler&nbsp;</td><td>Jackson Laboratuvar</td><td>Zorlanması # 000664</td><td></td></tr><tr><td>Aletler ve Yazılımlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>Sürüm 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD accuri C6 akış sitometresi</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys yazılım programı&nbsp;</td><td>Sürüm 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism sürüm 6&nbsp;</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemavet 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 Gerçek zamanlı PCR sistemi</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G:BOX Chemi XR5 Kemilüminesans Floresan Görüntüleme</td><td>G:Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Akut miyeloid lösemiyi (AML) ve kalıcı lösemi kök hücrelerini (LSC'ler) içeren ilişkili nüksleri tedavi etmek için yeni tedavilere karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Alıcı farelerde retro-orbital enjeksiyonlar yoluyla bu hücrelerin başarılı bir şekilde nakledilmesine dayanan terapileri test etmek için deneysel bir AML kemirgen modeli, zorluklarla doludur. Bu çalışmanın amacı, intraperitoneal bir yol kullanarak sağlam bir murin AML modeli oluşturmak için kolay, güvenilir ve tutarlı bir yöntem geliştirmektir. Mevcut protokolde, kemik iliği hücreleri, insan MLL-AF9 füzyon onkoproteinini eksprese eden bir retrovirüs ile dönüştürüldü. Primer AML gelişiminde donör LSC'ler olarak soy negatif (Lin-) ve Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) popülasyonlarının etkinliği test edilmiş ve AML üretmek için yeni bir yöntem olarak intra-peritoneal enjeksiyon benimsenmiştir. Seri transplantasyonlarda intraperitoneal ve retro-orbital enjeksiyonlar arasında karşılaştırma yapılarak iki yöntemin karşılaştırılması ve karşılaştırılması sağlandı. İnsan MLL-AF9 virüsü ile transdübe edilen hem Lin- hem de LSK hücreleri, alıcıların kemik iliğine ve dalağına iyi aşılanmış ve tam gelişmiş bir AML'ye yol açmıştır. Donör hücrelerin intraperitoneal enjeksiyonu, seri transplantasyon üzerine alıcılarda AML oluşturdu ve akım sitometrisi, qPCR ve histolojik analizlerle AML hücrelerinin infiltrasyonu alıcıların kan, kemik iliği, dalak ve karaciğerinde tespit edildi. Bu nedenle, intraperitoneal enjeksiyon, donör lösemik hücrelerin seri transplantasyonu kullanılarak AML indüksiyonunun etkili bir yöntemidir.

Murin AML hücrelerinin transplantasyon etkinliğinin r.o. ve i.p. transplantasyon yolları kullanılarak karşılaştırılması Daha önce, MLL-AF9-transdüse LSK hücreleri ile retro-orbital olarak nakledilen alıcı farelerde 1° AML oluşumu bildirilmiş ve 1° AML hücrelerinin nakledilebilirliği seri transplantasyon30 ile gösterilmiştir. Bu çalışma, transplantasyon gerçekleştirmek için kemik iliği Lin-hücrelerinin kullanılma olasılığını değerlendiren ilk çalışmadır. Anormal lökos...

Burada, farelerde akut miyeloid lösemiyi (AML) oluşturmak ve yaymak için lösemi hücrelerinin intra-peritoneal enjeksiyonu kullanılır. Bu yeni yöntem, AML hücrelerinin seri transplantasyonunda etkilidir ve farelerde intravenöz enjeksiyon ile zorluk ve tutarsızlık yaşayabilecek kişiler için bir alternatif olarak hizmet edebilir.

Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Bu protokol önemlidir, çünkü aynı donör farelerden izole edilen lin-negatif hücreler ve SK hücreleri, MLL-AF9 ile indüklenen AML oluşumunda belirgin bir fark göstermemiştir. Ayrıca, lösemik hücrelerin IP enjeksiyonu, AML'nin bir fare modelini başarıyla geliştirebilir. Geleneksel transplantasyon yöntemlerine kıyasla, bu teknik daha uygun ve daha ucuzdur.Başlamak için, 8 ila 10 haftalık CD45.1 dişi C57BL/6J fareyi %70 etanol ile sterilize edin. Fareyi strafor bir tahta üzerindeki steril bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin ve bacakları fare pençesi pedlerinden geçirin. Cildi orta hatta karın boşluğunun üzerinde kesin ve deri altı boşluğunu keskin uçlu steril makasla arka bacaklara doğru genişletin.Kesi karın orta hattından ayak bileklerine kadar uzatın ve keskin uçlu makas bıçaklarıyla arka bacakların altındaki deri altı boşluğunu genişletin. Aşil tendonunu keskin uçlu makasla kesin. Tendonu dişlerle forseps kullanarak tutun ve gastroknemius kasını çıkarmak için femura bağlı diğer ucu kesin.Diz üzerine tutturulmuş kuadriseps tendonunu keskin uçlu makasla kesin. Tendonu tutun ve gastroknemius kasını çıkarmak için femura bağlı kas kafasını kesin. Tibiaya bağlı sonunda femuru çevreleyen diğer kasları kesin.Daha sonra, ayak bileğini keskin uçlu makasla kesin ve tibianın bozulmadan kalmasını sağlayın. Femurun distal ucunu tutun ve kalça eklemini keskin uçlu makasla kesin, femur başının sağlam kalmasını sağlayın. Tibias ve femurları 15 mililitrelik bir tüpteki bir akış tamponuna aktarın.Tibia ve femuru diz elle kırarak ayırın. Tibial plato ve distal femuru ortaya çıkarmak için patella, kıkırdak ve femoral kondilleri çıkarın. Steril gazlı bez kullanarak kasları çıkarın ve kemikleri bir akış tamponuna batırın.Femur boynunu kesin ve kemik iliği hücrelerini, 23 gauge iğneli 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak femurun her iki ucundan akış tamponu ile yıkayın. Daha sonra, tibial malleolusu kesin ve kemik iliği hücrelerini tibianın her iki ucundan akış tamponu ile yıkayın. 18 gauge iğneli 10 mililitrelik bir şırınga kullanarak yukarı ve aşağı pipetleme yaparak hücreleri dağıtın.Tek hücreli süspansiyonu üç dakika boyunca dört santigrat derece ve 400 G'de santrifüjleyin. Süpernatantı atın ve RBC'leri üç dakika boyunca lize etmek için hücreleri beş mililitre kırmızı kan hücresi veya RBC, lizis tamponunda yeniden askıya alın. Lizisi durdurmak için beş mililitre akış tamponu ekleyin.Daha sonra hücre süspansiyonunu santrifüj edin ve peletleri beş mililitre akış tamponunda yeniden askıya alın. 50 mililitrelik bir tüpe 70 mikronluk bir hücre süzgeci yerleştirin ve hücreleri toplamak için süspansiyonu süzgeçten geçirin. Akış tamponu ile hücre konsantrasyonunu, yuvarlak tabanlı polipropilen tüplerde mililitre başına bir kez 10 ila sekiz arasında ayarlayın.Üreticinin talimatlarına göre bir fare hematopoetik hücre izolasyon kiti kullanarak soy negatif hücreleri seçin. Bir kez yapıldıktan sonra, sıralanmış hematopoetik kök hücreleri ve sıralanmamış soy-negatif hücreleri santrifüj edin ve retro-redüktan kaplı bir tabakta üç mililitre 2X sitokin, IMDM ortamı ve üç mililitre viral süpernatantta yeniden askıya alın. Çanağı nemlendirilmiş% 5 karbondioksit inkübatörde 37 santigrat derecede 6 veya 24 saat boyunca inkübe edin.Transdüksiyondan sonra, hücreleri santrifüjleme ile toplayın. Gerekirse, çanak tabanına bağlı hücreleri toplamak için tripsin kullanın. Supernatant'ı atın ve peleti önceden ısıtılmış PBS'de yeniden askıya alın.Hücreleri birincil alıcı fareye retro-orbital veya intraperitoneal olarak 27 gauge yarım iğne ile enjekte edin. Fareyi günlük olarak izleyin. Bir ay sonra, bir HEMAVET'teki tam kan sayımını değerlendirerek lökositozu izlemek için retro-orbital kanama ile haftalık kan toplayın.Gözü başparmak ve işaret parmağıyla proptozlayın, daha sonra venöz sinüs pleksusuna steril bir hematokrit kılcal tüp ile iç kanthustan nüfuz edin. Bir EDTA kan toplama tüpüne 20 ila 25 mikrolitre kan toplayın ve kanamayı durdurmak için göz kapaklarını kapatın. Göze bir damla gentamisin sülfat oftalmik çözeltisi uygulayın.Beyaz kan hücreleri mikrolitre başına dört kez 10'a ulaştığında, femurları ve tibiaları akış tamponu ile yıkayarak kemik iliği hücrelerini izole edin, ardından daha önce açıklandığı gibi RBC lizisi izleyin. Daha sonra, splenositleri hasat etmek için, fareyi strafor bir tahta üzerindeki steril bir cerrahi pedin üzerine yerleştirin ve bacakları fare pençesi pedlerinden geçirin. Fareyi %70 etanol ile sterilize edin.Karın boşluğunu keskin uçlu steril makasla ortaya çıkarmak için orta hattaki cildi ve kası kesin. Dalağı izole edin ve 15 mililitrelik bir tüpte bir akış tamponuna koyun. Dalağı, üç mililitre akış tamponuna sahip altı santimetrelik bir tabakta 70 mikronluk bir süzgeçten geçirin.Hücreleri çanaktan 15 mililitrelik bir tüpe aktarın, ardından tek hücreli süspansiyonu santrifüj edin, süpernatanı atın ve peleti üç dakika boyunca beş mililitre RBC lizis tamponunda yeniden askıya alın. Lizisi durdurmak ve hücre süspansiyonunu santrifüj etmek için beş mililitre akış tamponu ekleyin. Peletleri beş mililitrelik bir akış tamponunda tekrar askıya alın, karıştırın ve hücreleri 50 mililitrelik bir tüpe toplamak için 70 mikronluk bir hücre süzgecinden geçirin.Primer akut miyeloid lösemi veya AML hücrelerini, splenositleri ve kemik iliği hücrelerini FITC konjuge anti-fare CD45.1 antikoru ile boyayarak ve bir akış sitometresinde tespit ederek tanımlayın. Hücreler ilk önce FSC-A, FSC-H ve FSC-A SSC-A üzerine kapılıdır. CD45.1 pozitif popülasyonu, FL1 grafiği üzerinde, lekelenmemiş hücrelerle karşılaştırılarak kapılıdır.Sekonder transplantasyon için, PBS'deki birincil retro-orbital alıcılardan CD45.1 AML splenik hücrelerini yeniden askıya alın ve bunları CD45.2 erkek fareye retro-orbital olarak enjekte edin. Anormal lökositoz varlığı ve kemik iliği ve dalakta lösemik hücrelerin artmış infiltrasyonu, primer AML üretmek için kemik iliği soy-negatif hücrelerin kullanılmasının fizibilitesini desteklemektedir. LSK veya soy-negatif hücrelerle çevrilen primer alıcılarda anlamlı bir fark gözlenmedi.AML hücreleri, primer alıcıların karın boşluğunda karışık soy lösemisi veya MLL-AF9 transdüe soy-negatif hücreler tarafından yayılır. Bu sonuçlar aynı zamanda lökositoz şeklinde MLL-AF9 transdüe kemik iliği soy-negatif hücrelerinin intraperitoneal enjeksiyonu yoluyla primer AML'nin oluşumunu ve alıcı farelerin kemik iliği ve dalağında AML hücrelerinin varlığını doğrulamıştır. Bununla birlikte, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla yapılan primer transplantasyonun, eşit sayıda donör hücreye rağmen AML'yi geliştirmesi, retro-orbital enjeksiyondan daha uzun sürdü.Sekonder alıcılarda transplantasyon sonrası bir aydan kısa bir sürede lökositoz ve belirgin hepatosplenomegali saptandı. AML hücreleri ayrıca periferik kan, kemik iliği ve dalakta ve ayrıca periton boşluğunda tespit edildi. Beş AML hücresine sekiz kez 10 intraperitoneal enjeksiyon, beş AML'ye sekiz kez 10'luk retro-orbital enjeksiyonla karşılaştırılabilir engraftmana ulaştı.Üçüncül alıcı fareler akut olarak lökositoz ve hepatosplenomegali, kan, kemik iliği ve dalakta lösemik hücrelerin varlığı, femur ve dalağın histolojik gözlemi gibi AML bulguları sergiledi ve lösemik hücrelerin infiltrasyonunu gösterdi. Sekonder ve üçüncül transplantasyonlarla karşılaştırıldığında üçüncül transplantasyon sekonder transplantasyondan çok daha hızlı ilerlemiştir. Geçerli model için LSK hücrelerini sıralamak gereksizdir.Lin-negatif hücreler AML virüsü ile 6 saat veya 24 saat boyunca dönüştürülebilir. Model kurulumunun verimliliğini etkilemeyecektir.

intra-peritoneal-transplantation-for-generating-acute-myeloid

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, peritoneal yağ dokularında yumurtalık kanseri hücrelerinin kolonizasyonunu ve müteakip metastazlarını incelemek için bir fare modelinde yumurtalık kanseri hücresi süspansiyonunun intraperitoneal enjeksiyonunu gerçekleştiriyoruz.

Hücrelerin İntraperitoneal Enjeksiyonu: Murin Modelinin Peritoneal Yağ Dokusuna Kanser Hücrelerinin Verilmesi İçin Bir Yöntem

Bu video, allojenik hematopoietik kök hücreler ve GvHD'yi indükleyen splenik alloreaktif T lenfositleri kullanılarak letoral ışınlanmış bir alıcı farede bağırsak greftine karşı konak hastalığının (GvHD) indüksiyonunu göstermektedir. Bu protokol, hastalığın mekanizmasını anlamak ve yenilikçi terapötik seçenekler geliştirmek için ciddi bir akut intestinal GvHD modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Allojenik Kemik İliği ve Splenik Hücre Nakli ile Fare Modellerinde Graft Versus Host Hastalığının İndüksiyonu

Busulfan koşullandırmasının, bir alıcı farenin kemik iliğinin, ışınlamanın yokluğunda her yerde yeşil floresan proteini eksprese eden donör farelerden alınan kemik iliği hücreleri ile değiştirilmesine izin veren bir protokolü açıklıyoruz. Bu teknik, merkezi sinir sistemindeki kemik iliği hücresi birikimini incelemek için yararlıdır.

Farelerde Kararlı Yüksek seviyeli Kemik İliği Kimerizm Yaratma için miyelosupresif Ajan olarak Busulfan

İntravital Floresans mikroskobu (IVFM) hasta, posta ve kemik iliği (BM) niş içine hematopoetik hücrelerin engraftment çalışmaya genetik hayvan modelleri ile birlikte uygulanır.

Intravital floresan mikroskobu (IVFM) kemik iliği nişler hematopoetik hücrelerin Engraftment Dynamics çalışmaya genetik modelleri ile birleştirerek

Bu el yazması, transdüksiyon-transplantasyon fare modelleri oluşturmak için kullanılan metodolojinin bir tanımını sağlar. Kemik iliği nakli yapılırken kaçınılması gereken teknik hataların ayrıntılı bir açıklaması yapılır. Yüksek viral titre, transfeksiyon / transdüksiyon ve ışınlamanın önemi hakkında net bir anlayış kazanılmalıdır.

Myeloproliferatif tümörün İletimi-Transplantasyon Fare Modeli

Burada, akut lenfoblastik lösemi hastası kaynaklı ksenogreft modelinin, CD19 hedefli kimerik antijen reseptörü T hücresi ile ilişkili toksisiteleri değerlendirmek ve izlemek için bir strateji olarak kullanıldığı bir protokol tanımlanmıştır.

Akut Lenfoblastik Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenogreft Fare Modeli Kullanılarak Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi İlişkili Toksisitelerin Değerlendirilmesi

Bu protokol, gen düzenlenmiş hücreler de dahil olmak üzere birkaç hematopoietik veya lösemik kök hücrenin murin ksenogreft modellerinde intrafemoral enjeksiyonunu tanımlar, bu da sadece hücrelerin hızlı ve güvenli bir şekilde nakledilmesini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda kemik iliğinin seri analizlerini de sağlar.

Canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir

İntrafemoral enjeksiyonlar, hücreleri doğrudan kemik iliği boşluğuna yerleştirerek az sayıda hematopoietik kök ve progenitör hücrenin (HSPC'ler) aşılanmasına izin verir. Burada, insan HSPC'lerinin immün yetmezliği olan farelere intrafemoral enjeksiyonunun deneysel bir protokolünü açıklıyoruz.

İnsan Hematopoietik Kök ve Progenitör Hücrelerinin İmmün Kuvvetlenmiş Farelere İntrafemoral Enjeksiyonu 

Burada, farelere ksenogreftlenmiş ve kemik iliği aspiratlarından elde edilen akut insan miyeloid lösemi hücrelerinde mTORC1, JAK/STAT5 ve MAPK yollarının aşağı akışındaki sinyalleri analiz etmek için fosfoflow sitometri tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 ve p-ERK1/2 seviyeleri, yüksek duyarlılığa sahip yeni nesil spektral akış sitometresi kullanılarak eş zamanlı olarak ölçülür.

Akut Miyeloid Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenotransplantların Hücre İçi Fosfoflow Sitometrisi

Protokol, indüksiyon kemoterapisine yanıtın dinamiklerine dayalı olarak akut lenfoblastik löseminin nüksetmesine neden olan bir fare modelini tanımlamayı amaçlamaktadır.

Akut Lenfoblastik Lösemi için İndüksiyon Kemoterapisine Nüks Löseminin Murin Modeli

Bu protokol, pediatrik kanser hücrelerinin yenidoğan farelere damar içi iletini göstererek, erken yaşamda kansere karşı bağışıklık yanıtlarının kesin ve tekrarlanabilir modellenmesini mümkün kılar. Bu yöntem, yenidoğan döneminde uygulandığında immünomodülasyon veya terapi gibi müdahalelerin etkisinin değerlendirilmesini sağlar.

Kanser Hücrelerine Karşı Erken Yaşamda Bağışıklık Aktivitelerinin Değerlendirilmesi İçin Yenidoğan Damar Nakli Modeli

Öğrenin farelerde akut miyeloid lösemi modeli oluşturma yöntemini, intra-peritoneal enjeksiyon kullanarak. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha pratik ve ekonomiktir.

Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

Daha fazla video keşfet