Name: Modifiye Otolog Şartlandırılmış Serum Üretimi ve Murin Kornea Epitelinde İyileşme Potansiyelinin Ex Vivo Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:15:00.000+00:00
Duration: 3 min 55 s
Description: Keşfedin modifiye otolog şartlandırılmış serum üretimini ve murin kornea epitelinde ex vivo iyileşme potansiyelini. Bu yöntem, konvansiyonel otolog seruma göre üstün yara iyileşmesi sağlar ve maliyetleri düşürür.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, mükemmel teknik yardım için Ya-Lan Chien ve Chia-Ying Lee'ye ve dilbilimsel baskı için OnLine English şirketine teşekkür eder. Bu çalışma kısmen Chang Gung Tıbbi Araştırma Projesi (Hibe No. CMRPG3L1491) tarafından finanse edilmiştir.

Araştırma, protokol bölümünün başında yer alan kurumsal kılavuzlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Tüm protokoller ve prosedürler Helsinki Deklarasyonu'na göre yürütüldü ve Chang Gung Tıp Vakfı Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından gözden geçirildi ve onaylandı. Tüm gönüllüler bu çalışmanın doğası hakkında bilgilendirildi ve dahil edilmeden önce bilgilendirilmiş bir onam formu imzaladı. Tüm deneysel prosedür için gerekli sarf malzemeleri Şekil 1 ve Şekil 2'de ve ayrıca Malzeme Tablosunda sunulmuştur.
1. mACS göz damlası üretmek için gerekli malzemelerin hazırlanması
<ol><li>250 mL% 10 gliserol çözeltisi hazırlayın ve 21 G kelebek kanatlı infüzyon seti, iğnesiz 3 mL şırınga ve heparin 158 USP ünitesi içeren altı adet 10 mL vakuminer tüpü hazır bulundurun (Şekil 1).</li>
	<li>21 G kan toplama iğnesini 3 mL şırıngaya bağlayın ve hazırlanan şırıngaya 3 mL% 10 gliserol çözeltisi çekin. NOT: İğne yerleştirilmeden önce tüm malzemeler sterilize edilmelidir.</li>
	<li>% 10 gliserol çözeltisini, her birinde yaklaşık 0.5 mL% 10 gliserol çözeltisi olacak şekilde vakuminer tüplerine sırayla dağıtın (Şekil 3A). NOT: Test tüpündeki negatif basınç nedeniyle, altı test tüpüne 3 mL gliserol çözeltisini eşit olarak dağıtmak için iğne içeri girdikten hemen sonra çıkmalıdır.</li>
	<li>Hastanın cildini %75 alkollü steril pamuklu çubuklarla sterilize edin. 18 G kan alma iğnesi ile hastanın üst ekstremitelerinin yüzeysel damarını delin. Yüzeysel damardan toplamda 60-70 mL venöz kan alın.</li>
</ol>2. mACS göz damlası için hazırlık
<ol><li>Çekilen venöz kanın 10 mL'sini altı vakumer tüpün her birine sırayla enjekte edin (Şekil 3B). NOT: Bu adım, tüpleri doldurmak için vakumun negatif basıncına dayanır. Kan hücresi bozulmasını ve hemolizi önlemek için, herhangi bir pozitif basınç uygulamayın.</li>
	<li>Altı vakumlayıcı tüpünü inkübatöre 4 saat boyunca 37 ° C sabit bir sıcaklıkta yerleştirin (Şekil 3C). NOT: Hipoksik durum, gliserol alan kapalı bir tüpte kalan negatif basınç ile korunur ve stabilize edilir.</li>
	<li>Tüpleri 4 saat sonra inkübatörden çıkarın ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 3.500 × g'da santrifüj edin.</li>
	<li>Bu noktada, sterilize edilmiş göz damlası şişeleri, iğneli 3 mL'lik bir şırınga, 0.22 μm filtre, 18 G iğne ve bir çift steril eldiven dahil olmak üzere mACS ekstraksiyonu için malzemeleri hazırlayın (Şekil 2). NOT: Aseptik bir ortam sağlamak için ameliyat masası %75 alkol ile silinmelidir. Süpernatant, santrifüjlemeden sonra, zaten mACS'nin yarı mamul bir ürünüdür.</li>
	<li>Altı tüpü tüp rafına yerleştirin ve tam santrifüjlemeden sonra kapakları açın (Şekil 3D). NOT: Bu adımda sterilite gerekli değildir.</li>
	<li>Steril eldivenler giyin ve 18 G iğneli 3 mL'lik bir şırınga kullanarak mACS'yi tek tek çıkarın. NOT: Bu adım sırasında alt kan hücresi tabakasını çizmemeye dikkat edin (Şekil 3E).</li>
	<li>İğneyi çıkarın, 0.22 μm filtreye bağlayın ve 23 G, 1.5 kan toplama iğnesini orijinal 3 mL şırınga ile aşağıdaki çıkışa bağlayın (Şekil 3F).</li>
	<li>İğneyi 0,22 μm filtreden yavaşça hazırlanan steril göz damlası şişelerine itin (Şekil 3G).</li>
	<li>Tüm mACS filtrelenene ve göz damlası şişelerinde saklanana kadar yukarıdaki adımları tekrarlayın (Şekil 3H).</li>
	<li>Hemen kullanım için mACS göz damlalarını 4 ° C'de saklayın; Uzun süreli koruma için -20 °C'de saklayın. NOT: 4 °C'de 2 haftadan fazla veya -20 °C 9,19'da 3 aydan uzun süre saklamayın.</li>
</ol>3. Murin kornea epitelinin Ex vivo yara iyileşme modeli
NOT: Aşağıdaki ex vivo hayvan modeli, kornea epitelinin mekanik yaralanmaları üzerine Hung ve ark.'nın önceki deneyimlerine dayanmaktadır20. İyi sınırlanmış ve tutarlı bir kornea epitel yarası oluşturmak için mikroskop altında aşağıdaki adımlar gerçekleştirilmelidir.
<ol><li>C57BL/6 fareleri %3-%4 izofluran ile uyuşturun. Cilt biyopsisinin murin merkezi kornea üzerine yumruk atması, epitel üzerinde düzgün bir yara marjı olarak sığ bir daire bırakması. NOT: Göz küresi yırtılmasını önlemek için nazik olun.</li>
	<li>Onaylanmış bölgedeki kornea epiteli, 0.5 mm'lik bir çapak ile donatılmış bir kornea pas halkası sökücü ile Bowman tabakasına kadar sürün.</li>
	<li>Mekanik kornea yarasının ex vivo hayvan modelini oluşturmak için, göz küresini toplayın ve kültürü iyi hazırlayın.<ol><li>Önce fareleri ötenazi yapın; Daha sonra, farelerin üstün ve alt yörüngesel kenarlarına hafifçe bastırın, forsepsin ucunu retrobulbar boşluğunun üzerine sokun, göz küresini dışarı çıkarın ve forsepsler tarafından tutun.</li>
		<li>Göz küresini mükemmel bir şekilde izole etmek için optik siniri ve periorbital yumuşak dokuyu kornea makası ile kesin.</li>
		<li>İçinde erimiş balmumu bulunan 96 delikli bir plaka hazırlayın. Forseps uçlarını kullanarak hızlı bir şekilde yuvarlak bir delik oluşturun ve ardından katılaşmayı bekleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Test edilecek ortamı hazırlayın: %0,5 mACS, karşılaştırma için %0,5 AS, negatif kontrol olarak normal salin ve Dulbecco'nun modifiye edilmiş Kartal ortamı (DMEM). NOT: mACS, yukarıda belirtilen protokol kullanılarak elde edilir.</li>
	<li>Ex vivo kültürü için, hasat edilen göz küresini hazırlanan 96 delikli plakaya yerleştirin. 96 delikli plakaya her ortamdan 200 μL ekleyin.</li>
	<li>96 delikli kültür plakasını %5 CO2 ile 37 °C'de inkübatöre yerleştirin. Kültür ortamının her 24 saatte bir değiştirildiğinden emin olun.</li>
	<li>Sıralı yara iyileşmesi etkisini doğrulamak için, floresein boyama ile epitel yara alanını mikroskop altında her 8 saatte bir izleyin.<ol><li>Floreseini floresein kağıdı üzerinde normal salin ile çözün.</li>
		<li>Floresein boyasını murin merkezi korneanın üzerine bırakın, ardından mikroskop altında gözlemleyin ve belgeleyin. Tipik bir sonuç Şekil 4'te gösterilmiştir. NOT: Gözlem için bir damla (yaklaşık 0,05 mL) floresein boyası yeterlidir.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+artificial+tears+made+with+autologous+serum+in+patients+with+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca.</a> Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).</li>
<li>Noble, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+autologous+serum+eye+drops+with+conventional+therapy+in+a+randomised+controlled+crossover+trial+for+ocular+surface+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Comparison of autologous serum eye drops with conventional therapy in a randomised controlled crossover trial for ocular surface disease.</a> The British Journal of Ophthalmology. 88 (5), 647-652 (2004).</li>
<li>Bradley, J. C., Bradley, R. H., McCartney, D. L., Mannis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+growth+factor+analysis+in+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Serum growth factor analysis in dry eye syndrome.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (8), 717-720 (2008).</li>
<li>Alshammari, T. M., Al-Hassan, A. A., Hadda, T. B., Aljofan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+serum+sample+extraction+methods+and+their+suitability+for+mass+spectrometry+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+Pharmaceutical+Journal%22%5BJournal%5D)">Comparison of different serum sample extraction methods and their suitability for mass spectrometry analysis.</a> Saudi Pharmaceutical Journal. 23 (6), 689-697 (2015).</li>
<li>Tsubota, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+dry+eye+by+autologous+serum+application+in+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Treatment of dry eye by autologous serum application in Sjögren's syndrome.</a> The British Journal of Ophthalmology. 83 (4), 390-395 (1999).</li>
<li>Urzua, C. A., Vasquez, D. H., Huidobro, A., Hernandez, H., Alfaro, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+double-blind+clinical+trial+of+autologous+serum+versus+artificial+tears+in+dry+eye+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome.</a> Current Eye Research. 37 (8), 684-688 (2012).</li>
<li>Cui, D., Li, G., Akpek, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+serum+eye+drops+for+ocular+surface+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Autologous serum eye drops for ocular surface disorders.</a> Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 21 (5), 493-499 (2021).</li>
<li>Jirsova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+autologous+serum+eye+drops+in+severe+dry+eye+patients%3B+subjective+and+objective+parameters+before+and+after+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The application of autologous serum eye drops in severe dry eye patients; subjective and objective parameters before and after treatment.</a> Current Eye Research. 39 (1), 21-30 (2014).</li>
<li>Pan, Q., Angelina, A., Marrone, M., Stark, W. J., Akpek, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+serum+eye+drops+for+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+of+Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">Autologous serum eye drops for dry eye.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 2 (2), (2017).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+serum+eye+drops+versus+artificial+tear+drops+for+dry+eye+disease%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Autologous serum eye drops versus artificial tear drops for dry eye disease: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials.</a> Ophthalmic Research. 63 (5), 443-451 (2020).</li>
<li>Soni, N. G., Jeng, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-derived+topical+therapy+for+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Blood-derived topical therapy for ocular surface diseases.</a> The British Journal of Ophthalmology. 100 (1), 22-27 (2016).</li>
<li>Solomon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((anti-inflammatory+forms+of+interleukin-1+in+the+tear+fluid+and+conjunctiva+of+patients+with+dry-eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">anti-inflammatory forms of interleukin-1 in the tear fluid and conjunctiva of patients with dry-eye disease.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 42 (10), 2283-2292 (2001).</li>
<li>Meijer, H., Reinecke, J., Becker, C., Tholen, G., Wehling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+anti-inflammatory+cytokines+in+whole+blood+by+physico-chemical+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">The production of anti-inflammatory cytokines in whole blood by physico-chemical induction.</a> Inflammation Research. 52 (10), 404-407 (2003).</li>
<li>Bielory, B. P., Shah, S. P., O'Brien, T. P., Perez, V. L., Bielory, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+therapeutics+for+ocular+surface+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Emerging therapeutics for ocular surface disease.</a> Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (5), 477-486 (2016).</li>
<li>Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease%3A+an+immune-mediated+ocular+surface+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder.</a> Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).</li>
<li>Yang, J., Guo, A., Li, Q., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+attenuates+interleukin-1%CE%B2-induced+apoptosis+and+inflammation+in+chondrocytes+through+targeting+hypoxia-inducible+factor-2%CE%B1%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+and+Cell%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma attenuates interleukin-1β-induced apoptosis and inflammation in chondrocytes through targeting hypoxia-inducible factor-2α.</a> Tissue and Cell. 73, 101646(2021).</li>
<li>Shakouri, S. K., Dolati, S., Santhakumar, J., Thakor, A. S., Yarani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+conditioned+serum+for+degenerative+diseases+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Growth+Factors%22%5BJournal%5D)">Autologous conditioned serum for degenerative diseases and prospects.</a> Growth Factors. 39 (1-6), 59-70 (2021).</li>
<li>Gull, M., Pasek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+glycerol+and+its+derivatives+in+the+biochemistry+of+living+organisms%2C+and+their+prebiotic+origin+and+significance+in+the+evolution+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Catalysts%22%5BJournal%5D)">The role of glycerol and its derivatives in the biochemistry of living organisms, and their prebiotic origin and significance in the evolution of life.</a> Catalysts. 11 (1), 86(2021).</li>
<li>Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+dry+eye+syndrome+treatment%3A+therapeutic+role+of+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reflections on dry eye syndrome treatment: therapeutic role of blood products.</a> Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).</li>
<li>Hung, K. H., Yeh, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+and+in+vivo+animal+models+for+mechanical+and+chemical+injuries+of+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e63217(2022).</li>
<li>Geerling, G., Maclennan, S., Hartwig, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+serum+eye+drops+for+ocular+surface+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Autologous serum eye drops for ocular surface disorders.</a> The British Journal of Ophthalmology. 88 (11), 1467-1474 (2004).</li>
<li>Rutgers, M., Saris, D. B., Dhert, W. J., Creemers, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+of+autologous+conditioned+serum+for+treatment+of+osteoarthritis%2C+in+vitro+effects+on+cartilage+metabolism+and+intra-articular+levels+after+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile of autologous conditioned serum for treatment of osteoarthritis, in vitro effects on cartilage metabolism and intra-articular levels after injection.</a> Arthritis Research & Therapy. 12 (3), R114(2010).</li>
<li>Antebi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+physiological+hypoxia+potentiates+the+therapeutic+function+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Short-term physiological hypoxia potentiates the therapeutic function of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 265(2018).</li>
<li>Chen, Y. M., Wang, W. Y., Lin, Y. C., Tsai, S. H., Lou, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+autologous+serum+eye+drops+with+contact+lenses+in+the+treatment+of+chemical+burn-induced+bilateral+corneal+persistent+epithelial+defects%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Use of autologous serum eye drops with contact lenses in the treatment of chemical burn-induced bilateral corneal persistent epithelial defects.</a> BioMed Research International. 2022, 6600788(2022).</li>
<li>Diaz-Valle, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+efficacy+of+topical+insulin+with+autologous+serum+eye+drops+in+persistent+epithelial+defects+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Comparison of the efficacy of topical insulin with autologous serum eye drops in persistent epithelial defects of the cornea.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (4), e912-e919 (2022).</li>
<li>Metheetrairut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+epitheliotrophic+factors+in+platelet-rich+plasma+versus+autologous+serum+and+their+treatment+efficacy+in+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Comparison of epitheliotrophic factors in platelet-rich plasma versus autologous serum and their treatment efficacy in dry eye disease.</a> Scientific Reports. 12 (1), 8906(2022).</li>
<li>NaPier, E., Camacho, M., McDevitt, T. F., Sweeney, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophic+keratopathy%3A+current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neurotrophic keratopathy: current challenges and future prospects.</a> Annals of Medicine. 54 (1), 666-673 (2022).</li>
<li>Garcia-Conca, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+treatment+of+hyposecretory+dry+eye+with+platelet-rich+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of treatment of hyposecretory dry eye with platelet-rich plasma.</a> Acta Ophthalmologica. 97 (2), e170-e178 (2019).</li>
<li>Gholian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+autologous+conditioned+serum+dressings+in+hard-to-heal+wounds%3A+a+randomised+prospective+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Use of autologous conditioned serum dressings in hard-to-heal wounds: a randomised prospective clinical trial.</a> Journal of Wound Care. 31 (1), 68-77 (2022).</li>
<li>Raeissadat, S. A., Rayegani, S. M., Jafarian, N., Heidari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+conditioned+serum+applications+in+the+treatment+of+musculoskeletal+diseases%3A+a+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Science+OA%22%5BJournal%5D)">Autologous conditioned serum applications in the treatment of musculoskeletal diseases: a narrative review.</a> Future Science OA. 8 (2), 776(2022).</li>
<li>Tokawa, P. K. A., Brossi, P. M., Baccarin, R. Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+conditioned+serum+in+equine+and+human+orthopedic+therapy%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Autologous conditioned serum in equine and human orthopedic therapy: A systematic review.</a> Research in Veterinary Science. 146, 34-52 (2022).</li>
<li>Evans, C. H., Chevalier, X., Wehling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+conditioned+serum.+Physical+Medicine+and+Rehabilitation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Autologous conditioned serum. Physical Medicine and Rehabilitation.</a> Clinics of North America. 27 (4), 893-908 (2016).</li>
<li>Coskun, H. S., Yurtbay, A., Say, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+rich+plasma+versus+autologous+conditioned+serum+in+osteoarthritis+of+the+knee%3A+clinical+results+of+a+five-year+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Platelet rich plasma versus autologous conditioned serum in osteoarthritis of the knee: clinical results of a five-year retrospective study.</a> Cureus. 14 (4), e24500(2022).</li>
</ol>

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Bu çalışmada, mACS'nin hazırlanması için bir protokol tarif edilmiş ve mACS göz damlalarının hayvan modellerinin yara iyileşmesindeki yararı daha da gösterilmiştir. Bu mACS protokolünün en önemli modifikasyonu, her test tüpüne yaklaşık 0.5 mL% 10 gliserol çözeltisinin eklenmesidir ve bu da 37 ° C'de 4 saatlik inkübasyon sırasında uygun hipoksik koşullar yaratır. Bu ayar, AS'ye uygun stres sağlar ve hücreleri yara iyileşmesine yardımcı olan gerekli büyüme faktörlerini salgılamaya teşvik eder. 0.22 μm filtre, makromolekül...

Kuru göz hastalıklarında otolog serumun (AS) terapötik etkileri ilk olarak 1980'lerde Fox ve ark.1 tarafından bildirilmiştir. Hem yağlama özelliğinin hem de AS'deki doğal gözyaşlarını taklit eden temel epitelyotropik biyokimyasal bileşenlerin kornea epitel hücrelerinin çoğalmasına fayda sağladığına inanılmaktadır. Geçtiğimiz on yıllar boyunca, bu temelde çeşitli çalışmalar yapılmıştır. Trofik bileşenler epidermal büyüme faktörü (EGF), A vitamini, dönüştürücü büyüme faktörü β (TGF-β) ve diğer sitokinleri içerir. İlginç bir şekilde, serum, epidermal proliferasyonda önemli bir rol oynadığına inanılan TGF- β ve A vitamini bakımından zengindir 2,3,4,5. Ek olarak, oküler yüzey hastalıkları olan hastaları tedavi ederken, çeşitli çalışmalar AS göz damlalarının hasta tarafından bildirilen sonuçlarda, diğer objektif kuru göz parametrelerinde 6,7 ve hücre yoğunluğu8 gibi mikroskobik bulgularda bazı avantajları olduğunu göstermiştir. Meta-analiz çalışmaları, AS göz damlası tedavisi ile hasta sendromlarının iyileştirilmesinde bazı faydalar olabileceğini ortaya koymuştur, ancak uzun vadeli sonuçlar ve gözlemler hala 9,10'dan yoksundur.
AS'den farklı olarak, trombositten zengin plazma (PRP), trombositlerin daha fazla diferansiyel santrifüjlenmesi ve kimyasal aktivasyonu ile hazırlık sırasında bir antikoagülan eklenmesinden elde edilir. AS ile karşılaştırıldığında, PRP'de TGF-β, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve EGF gibi çok sayıda kimyasal madde ve büyüme faktörü mevcuttur. Ayrıca semptom hafifletmede klinik yararları olan oküler yüzey hastalıklarına da uygulanmıştır11.
Epitel defektleri ve inflamasyon arasındaki çapraz bağlantı karmaşıktır. Özellikle immünopatofizyoloji oküler yüzey hastalıklarında bir diğer önemli konudur. IL-1β ve IFN-γ gibi pro-inflamatuar sitokinlerin, inflamatuar kaskadlar12'de pivotal mediatörler olduğuna inanılmaktadır. Böylece bağışıklık mekanizmasının anlaşılmasına dayalı yeni tedavi yolları açılır. İnterlökin-1 reseptör antagonisti (IL-1Ra) ve diğer anti-enflamatuar sitokinlerin üretimi de dahil olmak üzere bu enflamatuar süreci durdurma stratejileri de oküler yüzey hastalıklarında önemli bir rol oynayabilir13,14,15.
1998 yılından bu yana, ticarileştirilmiş otolog şartlandırılmış serum (AKS) olan Orthokin, osteoartrit (OA), romatoid artrit (RA) ve omurga rahatsızlıklarından muzdarip ortopedik hastalarda klinik olarak kullanılmaktadır13. AS ve PRP ile karşılaştırıldığında, kimyasal olarak kaplanmış cam boncuklarla muamele ve monositleri aktive etmek için hipoksik inkübasyon ACS16'nın spesifik özellikleridir. Teorik olarak, hücrelere hayatta kalma stresi eklenerek daha fazla anti-enflamatuar faktör salgılanabilir, bu da IL-1Ra dahil olmak üzere esansiyel bağışıklık modüle edici bileşenlerin daha yüksek konsantrasyonuna neden olur. OA'da AKS'nin AS ile karşılaştırıldığında geliştirilmiş terapötik yararları da bildirilmiştir17. Oküler yüzey hastalıkları, bazı açılardan ortopedik inflamatuar hastalıklarla benzer bağışıklık geçmişlerini paylaşır. Bu nedenle, ortopedik alanda insan kanından türetilmiş tedavinin başarılı sonuçlarına dayanarak, AKS'nin epitelyotropik ve immün modüle edici özellikleri ile klinik pratikte konvansiyonel tedavilere göre avantajları olabilir. AKS, ortopedik inflamatuar hastalıklarda yaygın olarak kullanılmasına rağmen, oftalmolojideki klinik uygulamalarının hala araştırılması gerekmektedir, bu da yüksek maliyeti, literatür desteğinin eksikliği ve hazırlık sürecinin standardizasyonunun olmaması nedeniyle engellenebilir ve bu da farklı performanslara neden olabilir.
Bu video makalesinde, modifiye ACS'yi (mACS) veya büyüme faktörleri bakımından zengin plazmayı (PRGF) üretmek için yeni, uygun maliyetli ve kullanışlı bir yöntem gösterildi ve ticarileştirilmiş ACS'lerle karşılaştırılabilir pratik değere sahip bir göz damlası çözeltisi üretildi. Antikoagülanların eklenmesi ve kan hücrelerinin stresli inkübasyon yoluyla anti-enflamatuar sitokinler salgılaması için tetiklenmesi konusundaki temel fikirler korunmuştur, ancak CrSO4 kaplı cam boncuklara ve ticari kitlere dayananlar gibi kimyasal olarak indüklenen yöntemlerin aksine, kritik stres durumu bu yöntemde hipoksik inkübasyon tarafından fiziksel olarak indüklenir. Ayrıca, kan hücrelerinin zarının stabilitesinde bir artış, uygun bir ozmotik hücre dışı sıvı basıncınınkorunması 18 ve hipoksik koşullarda hücreleri aşırı strese sokmaktan kaçınan uygun bir besin kaynağı da dahil olmak üzere ekstra faydalar sağlamak için gliserol eklenmiştir.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 96 oyuklu kültür plakası</td><td>Merck KGaA, Almanya</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Barraquer kapak spekulumu</td><td>katena</td><td>K1-5355</td><td>15 mm</td></tr><tr><td>Barraquer iğne tutucu</td><td>Katena</td><td>K6-3310</td><td>kilitsiz&nbsp;</td></tr><tr><td>Barron Vakum Zımbası 8.0 mm</td><td>katena</td><td>K20-2108</td><td>filtre kağıdını kesmek için</td></tr><tr><td>BD 10.0 mL heparin içeren vakum tüpleri 158 USP birimleri</td><td>Becton, Dickinson and Company, US</td><td>367880</td><td>Sonraki deneyler için kan toplamak ve kan aglütinasyonunu önlemek için gerekli olan en az 6 tüp</td></tr><tr><td>BD 21 G kelebek kanatlı infüzyon seti</td><td>Becton,Dickinson and Company, ABD</td><td>367281</td><td>Gliserol çözeltisi</td></tr><tr><td>C57BL / 6 farenin eşit dağılımı için&nbsp;</td><td>Fare modeli için</td> <td>Ulusal Laboratuvar Hayvanları Merkezi</td><td>RMRC11005</td></tr><tr><td>Castroviejo forseps 0.12 mm</td><td>katena&nbsp;</td><td>K5-2500</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf, Almanya</td><td>5811000428</td><td>10 dakika boyunca 3.500 x g</td></tr><tr><td>Cheng Yi 10.0 mL sterilize damlalık şişesi</td><td>Cheng Yi Chemical, Tayvan</td><td>CP405141</td><td>Steril olmalı ve nihai ürün için saklama kabı olarak</td></tr> kullanılmalıdır <tr><td>0,5 mm çapaklı kornea pas halkası sökücü</td><td>Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td><td>CHI-675</td><td>kornea epitelinin debridmanı için</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun modifiye edilmiş minimal esansiyel ortamı</td><td>Merck KGaA, Almanya</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı&nbsp;</td><td>Toyo Roshi Kaisha, Ltd.</td><td>1.11</td><td></td></tr><tr><td>Floresein sodyum oftalmik şeritler U.S.P</td><td>OPTITECH</td><td></td> OPTFL100 <td>kornea epitel defekti için boyama&nbsp;</td></tr><tr><td>Kuluçka Makinesi</td><td>Firstek, Tayvan</td><td>S300S</td><td>37 > 4 saat için C</td></tr><tr><td>Kanam steril eldivenler</td><td>Kanam Lateks Endüstrileri, Hindistan</td><td>EN455</td><td>Aseptik çalışma için</td></tr><tr><td>Merck 0.22 & mikro; m filter</td><td>Merck KGaA, Almanya</td><td>PR05359</td><td>mACS filtrasyonu için en az 2 filtre</td></tr><tr><td>Nang Kuang 250 mL %10 gliserol çözeltisi</td><td>Nang Kuang Pharmaceutical, Tayvan</td><td>19496</td><td>Kan hücreleri için uygun membran stabilizasyon etkisi ve hücre dışı ozmotik basınç sunmak için</td></tr><tr><td>Normal tuzlu</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>100-120-1101</td><td></td></tr><tr><td>Deri biyopsi punch 2mm</td><td>STIEFEL</td><td>22650</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA</td><td>SV11</td><td>ameliyat mikroskobu</td></tr><tr><td>Terumo 18 G iğne</td><td>Terumo, Tayvan</td><td>Santrifüjlemeden sonra süpernatanı çıkarmak için 18 G iğneli SMACF0120-18BX 3.0 mL şırınga</td><td></td></tr><tr><td>Terumo 20.0 mL şırınga</td><td>Terumo, Tayvan</td><td>MDSS20ES</td><td>İlk santrifüjlemeden sonra serum toplamak ve ikincil santrifüjleme için kullanmak için kullanılabilir.</td></tr><tr><td>23 G iğneli Terumo 3.0 mL şırınga</td><td>Terumo, Tayvan</td><td>MDSS03S2325</td><td>3.0 mL şırınga, santrifüjlemeden sonra süpernatanı çıkarmak için kullanılır. Ardından filtreyi ve enjeksiyon için 23 G iğneyi göz damlası şişelerine bağlayın.</td></tr><tr><td>Westcott Tenotomi Makas Orta</td><td>katena</td><td>K4-3004</td><td></td></tr></tbody></table>

modifiye otolog Şartlandırılmış serum Üretimi ve murin kornea epitelinde İyileşme potansiyelinin ex vivo değerlendirilmesi

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

İnsan kanından türetilen topikal tedaviler son yıllarda klinisyenler için bir nimet olmuştur. Otolog serum (AS) ve trombositten zengin plazma (PRP), kornea yara iyileşmesinde önemli olan epitelyotropik büyüme faktörleri açısından zenginleştirilmiştir. AS'den farklı olarak PRP, daha fazla trombosit kaynaklı büyüme faktörü sağlayan diferansiyel bir santrifüjleme sistemine dayanır. Otolog şartlandırılmış serum (AKS) sadece AS ve PRP'nin hazırlanmasını korumakla kalmaz, aynı zamanda enflamatuar hastalıklarda önemli olan bağışıklık modüle edici özelliklere de odaklanır.
Standartlaştırılmış protokollerin eksikliği ve yüksek hazırlık maliyetleri, AKS'nin klinik uygulaması için sınırlamalardır. Bu video deneyi, modifiye otolog koşullu serum (mACS) göz damlası hazırlamak için standart bir çalışma prosedürünü göstermektedir. İlk olarak, hipoksik inkübasyon sırasında kan hücresi stabilizatörü olarak heparin şırıngalarına gliserol eklendi. Kan hücrelerini aktive etmek için, 37 ° C'de 4 saatlik bir inkübasyon başlatıldı. Daha sonra, kan örnekleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 3.500 × g'da santrifüj edildi. Süpernatantın 0.22 μm'lik bir filtreden filtrelenmesinden sonra, mACS göz damlaları tamamen hazırlandı.
mACS'nin terapötik etkisinin geçici bir denemesi, ex vivo fare gözlerinde kornea yara iyileşmesinde geleneksel AS'ye göre rekabet avantajlarına sahip olabileceğini göstermiştir. Bu çalışmada kullanılan AS, yayınlanan çalışmalara ve hastanemizdeki klinik uygulamaya göre hazırlanmıştır. Bu nedenle, mACS'nin oküler yüzey hastalıkları üzerindeki etkinliği, in vivo hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalar yoluyla gelecekteki araştırmalarda değerlendirilebilir.

Şekil 1 ve Şekil 2, deney için gerekli malzemeleri gösterir ve Şekil 3, mACS'nin hazırlanması sırasında sıralı adımları ve başarılı ara ürünleri gösterir. İlk olarak, her 10 mL steril test tüpüne 0.5 mL% 10 gliserol çözeltisi eklendi (Şekil 3A). Daha sonra hastadan 60-70 mL venöz kan elde edildi ve her tüpe 10 mL kan enjekte edildi (Şekil 3B). Hastanın kanı, kanın kalitesin...

Bu makalede, süreci basitleştirmek ve otolog şartlandırılmış serum (AKS) hazırlanmasını daha ucuz hale getirmek için bir protokol açıklanmaktadır. Özel şırıngalara veya yüzey kaplamalı cam boncuklara gerek yoktur. Ayrıca, modifiye ACS (mACS), murin gözlerin ex vivo kornea yara iyileşmesinde konvansiyonel otolog seruma göre rekabet avantajına sahiptir.

Modifiye Otolog Şartlandırılmış Serum Üretimi ve Murin Kornea Epitelinde İyileşme Potansiyelinin Ex Vivo Değerlendirilmesi

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...

Bu süreç, herhangi bir karmaşık teknik işlem gerektirmeyen mACS adı verilen yenilikçi bir kan türevi ürün sunar. Ayrıca yara iyileşmesini geleneksel otolog serumdan daha büyük ölçüde hızlandırır. Standart bir hazırlık süreci sağlamanın yanı sıra, bu teknik aynı zamanda serum göz damlalarının maliyetini düşürebilir ve hastanın daha uygun fiyatlı bir tedavi seçeneğine erişilebilirliğini artırabilir.Bu teknik, yara veya doku rejenerasyonu, onarımı ve anti-inflamasyonu teşvik etmeyi gerektiren alanlarda uygulanabilir. Bu teknik, iyileşmesi zor yaralar ve ciddi oküler yüzey hastalıkları gibi kronik enflamatuar hastalıklar için büyük bir avantaj olacaktır. Başlamak için, altı vakumer tüpün her birine daha önce çekilmiş insan venöz kanının 10 mililitresini enjekte edin.Tüpleri dört saat boyunca 37 santigrat derecede bir inkübatöre yerleştirin ve ardından tüpleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 3.500 G'de santrifüj edin. Tüpleri rafa yerleştirdikten sonra kapağını açın. Steril eldivenleri giydikten sonra, mACS'yi her tüpten çıkarmak için 18 gauge iğne ile donatılmış üç mililitrelik bir şırınga kullanın.İğneyi dışarı çekin ve 0.22 mikrometrelik bir filtre takın. 23 gauge, 1,5 inç kan top

production-modified-autologous-conditioned-serum-ex-vivo-assessment

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz hücre davranışlarını incelemek için hangi electrospun zarlar içinde mikrocepler imalatı için bir teknik rapor. Özellikle, PLGA (poli (laktid-ko-glikolid)) microfeatures ile donatılmış kornea biyomalzeme cihazların üretimi için microstereolithography ve üretebilmektedir bir kombinasyonunu tarif eder.

Microstereolithography ve ELEKTROÜRETİM kombinasyonu Kornea Yenilenme Nişli ile donatılmış Membranlarını Üretiliyor

İnsan diyabetik organ kültürü yapılmış kornealarda adenoviral gen tedavisinin bir örneği, bu kornealarda gecikmiş yara iyileşmesinin normalleşmesine ve belirgin şekilde azalmış epitelyal kök hücre belirteç ekspresyonuna yönelik olarak sunulmuştur. Ayrıca, kök hücre ile zenginleştirilmiş limbal epitel kültürlerinde bu sürecin optimizasyonunu da açıklar.

Diyabetik Keratopatide için adenoviral Gen Tedavisi: İnsan Organ-kültürlü kornealar ve Limbal Epitel Hücreleri Yara İyileşmesi Üzerine Etkileri ve Hücre Marker İfade Kök

sığır endotel hücrelerinin ana bir kültürü kornea endotelial-mezenkimal geçiş mekanizmasını araştırmak için kullanıldı. Ayrıca, bir fare endotel cryoinjury modeli in vivo olarak endotel-mezenkimal geçiş göstermek için kullanılmıştır.

Vitro ve in vivo Modelleri Kornea Endotel-mezenkimal Geçiş Çalışması için

Eski bir protokol vivo kornea organ kültür model çalışmaları şifa yara açıklanan için yararlı. Bu modeli sistem rejeneratif iyileşmesine katkıda bulunmak üzere ajanlar veya ilaç toksisitesi organize 3D çok hücreli ortamında etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Ex vivo kornea Organ kültür modeli için yaranın çalışmaları

Burada kornea endotel hücrelerinin (MSK) neodimyum kullanarak Descemet zarından (DM) ayrılması için bir protokol sunuyoruz:YAG (Nd:YAG) lazer, büllöz keratopati (BK) için eksvivo hastalık modeli olarak.

Kornea Endotel Hücre Kaybının Noninvaziv, Lazer Destekli Deneysel Modelinin Geliştirilmesi

Bu protokol, insan veya koyun dokusu eksbitkilerinden kornea endotel hücre kültürleri kurmak ve büyümek için gerekli kritik adımları açıklar. Membranöz biyomalzemeler üzerinde kornea endotel hücrelerinin subculturing için bir yöntem de sunulmaktadır.

Biyomalzeme Membranlar Üzerinde İnsan ve Koyun Korneal Endotel Hücre Tabakalarının Büyümesi

Burada, kornea epitelinin mekanik ve kimyasal hasarı için fare ve tavşana dayalı hayvan modelleri, yeni terapötikleri ve altta yatan mekanizmayı taramak için geliştirilmiştir.

Kornea Epitelinin Mekanik ve Kimyasal Yaralanmaları için Ex Vivo ve In Vivo Hayvan Modelleri

Descemet's Stripping Only, Fuchs Endotelyal Kornea Distrofisinden kaynaklanan merkezi kornea guttası olan hastalarda, periferik hücrelerin endotel tabakasını yenilemesi için Descemet'in zarının sıyrıldığı deneysel bir prosedürdür. Bu yazıda, eFGF1 (NM141) tarafından uyarılan hızlandırılmış iyileşme ile distrofik insan kornealarında ex vivo'da DSO'yu simüle eden yeni metodoloji sunulmaktadır.

Descemet'in Sadece Mühendislik Fibroblast Büyüme Faktörü 1 Tarafından Uyarılan Hızlandırılmış İyileşme ile Sıyırılmasının İnsan Kornea Organ Kültürü Modeli

Kornea sütürleri ile birlikte kornea epitel küretajı yoluyla şiddetli kornea iltihabının bir sıçan modeli geliştirdik. Çalışma, enflamatuar koşullar altında kornea iltihabı paternlerini, epitel proliferasyonunu ve limbal kök hücrelerdeki değişiklikleri değerlendirdi.

Kornea Sütürleri ile Kombine Kornea Epitel Küretajına Dayalı Sıçanlarda Şiddetli Kornea İnflamasyonu Modelinin Oluşturulması

Domuz korneasının ex vivo organ kültürü ve epitelyal yara iyileşmesi, kimyasalların oküler toksisitesini test etmek için ekonomik, etik, tekrarlanabilir ve kantitatif bir araç sağlar. Ayrıca, epitelizasyon ve doku onarımının düzenlenmesinin altında yatan mekanizmaların aydınlatılmasına ve diyabetik keratopati ve gecikmiş yara iyileşmesinin tedavisi için terapötiklerin değerlendirilmesine yardımcı olurlar.

Organ Kültürü Domuz Korneaları Kullanılarak Terapötik ve Kimyasal Toksisitenin Değerlendirilmesi ve Epitel Yara İyileşmesi

Tavşanlarda kornea stromal yara onarımı için yerinde mavi ışık-çapraz bağlanabilir jelatin–riboflavin hidrojelinin hazırlanması, zenginleştirilmesi ve uygulanması için tekrarlanabilir bir protokol sunulur; bu süreç cerrahi müdahale, kısmi tarsorrafi ve ameliyat sonrası bakım için prosedürel adımlar içerir.

Tavşanlarda Korneal yara onarımı için zenginleştirilmiş foto-çapraz bağlı jelatin–riboflavin hidrojellerin üretimi ve cerrahi uygulaması

Keşfedin modifiye otolog şartlandırılmış serum üretimini ve murin kornea epitelinde ex vivo iyileşme potansiyelini. Bu yöntem, konvansiyonel otolog seruma göre üstün yara iyileşmesi sağlar ve maliyetleri düşürür.

Modifiye Otolog Şartlandırılmış Serum Üretimi ve Murin Kornea Epitelinde İyileşme Potansiyelinin Ex Vivo Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet