Japon Ensefaliti Aşılı Çocuklarda Lenfositlerin Tespiti için Akış Sitometreleri Arasında Laboratuvarlar Arasında Transferin Standardizasyonu
10 Şubat 2023
Bu çalışmada, Japon ensefalit aşılı çocuklarda lenfositlerin tespiti için iki laboratuvarda iki akış sitometresi arasında deneysel ortamların ve analiz şablonlarının transferini kolaylaştırmak için bir yöntem geliştirilmiştir. Akış sitometresi deneyleri için standardizasyon yöntemi, araştırma projelerinin birden fazla merkezde etkili bir şekilde yürütülmesini sağlayacaktır.
Akış sitometresinin standardizasyon yöntemi, laboratuvar sonuçlarının karşılıklı akreditasyonu için uygulanabilir bir yaklaşım sağlar ve sonuçların birden fazla merkezdeki araştırma projeleriyle tutarlılığını sağlar. Zaman tüketimini en aza indirgeme yönteminin yürütülmesi kolaydır, otomatikleştirmek için donatılmıştır, şablonu analiz eder ve veri analizi gereksinimini önemli ölçüde azaltabilir. Sitometre A yazılımında, aktarma laboratuvarından, sitometre düğmesine tıklayarak ve görünüm yapılandırmalarını seçerek yeni bir yapılandırma oluşturmaya başlayın.
Konfigürasyon listesinde temel konfigürasyonlar klasörüne sağ tıklayın, yeni klasörü seçin ve yeniden adlandırın. Ardından, temel yapılandırmayı sağ tıklatıp kopyalayarak yeni bir yapılandırma oluşturun. Yeni klasörü sağ tıklayın ve yeni yapılandırmayı yeniden adlandırmadan önce temel yapılandırmayı yapıştırın, Standartlaştırılmış yöntem aktarımı"Parametreler listesinden FETC gibi parametre adını uygun dedektör 530/30'a sürükleyin, ayrıca yeni yapılandırmaya ek parametreleri düzenleyin.
Aktarımı yapan laboratuvarda denemeyi standartlaştırmak için, bu sitometre A kurulumunu kullanarak bir performans kontrolü çalıştırın ve Sitometre A'nın iyi performans gösterdiğini doğrulamak için boncukları izleyin. Yazılım tarayıcı penceresinde sitometre A ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını seçerek bir çalışma sayfası oluşturun. Ardından, ileri saçılma alanının veya FSC'nin ve yan saçılma alanının veya SSC'nin ve tüm floresan parametrelerinin fotoğraf çarpan tüpünü veya PMT voltajlarını ayarlamak için lekesiz bir örnek kullanın.
Deneme sitometresi ayarlarına sağ tıklayıp uygulama ayarlarını seçerek uygulama ayarlarını kaydedin. Ücret kontrollerini otomatik olarak eklemek için, telafi denetimleri oluştur'u seçmeden önce deneme düğmesine tıklayın ve ücret ayarları menüsünü seçin. Tüm kompanzasyon kontrol boncukları için verileri kaydedin.
İşiniz bittiğinde, denemeye tıklayın ve kompanzasyon kurulumunu seçin, tek hücreli lekeli kontroller için verileri kaydetmeden önce telafiyi otomatik olarak hesaplayın. R7-18'in telafi değerini %15 APC'ye değiştirmek için CD45 RAA APC'yi, APC H7'nin telafi değerini %14 BB700'e değiştirmek için CD19 BB700'ü ve APC H7'nin ücret değerini %60 R7-18'e değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın. CST boncukları için verileri kaydettikten sonra, CST parlak boncukları için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun, bir kez bittiğinde, örnekleri akış sitometre dizisinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın.
Örnekler için analiz şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun ve deneysel şablonu sitometre A.CD-ROM'u kullanarak deneysel şablonu dışa aktarın. Deneysel şablonu test laboratuvarındaki sitometre B'ye aktarmak için, sitometre B'nin iyi performans gösterdiğini doğrulamak için CST boncuklarını kullanarak bir performans kontrolü yapın. Deneysel şablonu sitometre A'dan içe aktarın ve şablonu kullanarak B sitometresi için bir deney oluşturun.
Aynı sayıda CST boncuğu kullanılarak, her floresan kanalı için floresan parametre voltajları önceki MFI cihazıyla eşleşecek şekilde ayarlanır. Gerekirse, lekesiz numuneyi kullanarak FSC voltajını ayarlayın. Deneysel sitometre ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını kaydetmek için uygulama ayarlarını seçin.
Ardından, CD45 RA APC kullanarak R7-18 telafi değerini %15 APC olarak değiştirin. APC H7'nin telafi değerini %24 BB700 olarak değiştirmek için CD19 BB700 kullanın. APC H7'nin telafi değerini %60 R7-18 olarak değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın.
Telafi değeri modifikasyonundan sonra, örnekleri B akış sitometresinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın. Sitometre kurulumu ve takibi için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasında veya CST parlak boncuklarda, 10 floresan kanalının histogram grafikleri elde edildi, histogram kapıları içinde medyan gösterilerek her parametre için hedef değer görüntülendi. cihaz standardizasyonundan sonra A ve B sitometresi kullanılarak elde edilen numunenin nokta grafikleri, otomatik bir analiz şablonu kullanarak farklı cihazlar arasındaki verilerin tutarlılığını göstermiştir.
Altı numuneden elde edilen sonuçlar iki farklı cihaz modelinde karşılaştırıldığında anlamlı bir fark gözlenmedi. Standartlaştırılmış yöntem kullanılarak farklı aletlerden elde edilen 15 lenfoid alt setin sonuçları oldukça karşılaştırılabilir veriler elde etmiştir. Aynı konfigürasyon adı, şablonun oluşturulması ve güvenlik boncuklarının ekoteknoloji değerlerinin farklı enstrümanlarda yapılması bu protokoldeki kritik adımlardır.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, farklı laboratuvarlardaki akış sitometri cihazları arasında deneysel ayarları ve analiz şablonlarını aktarmayı sağlayan standartlaştırılmış bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, Japon ensefaliti aşılanmış çocuklarda lenfositlerin tespitini artırmayı ve çok merkezli araştırma projelerini kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Akış Sitometrisi
- İmmünoloji
- Standardizasyon Yöntemleri
Arka Plan
- Akış sitometrisi, lenfosit popülasyonlarını analiz etmek için kritik bir araçtır.
- Standardizasyon, laboratuvarlar arasında tutarlı sonuçlar elde etmek için gereklidir.
- Japon ensefaliti aşılaması halk sağlığı için önemlidir.
- Laboratuvarlar arasındaki iş birliği araştırma sonuçlarını artırabilir.
Çalışmanın Amacı
- Akış sitometrisi deneylerini standartlaştırmak için bir yöntem geliştirmek.
- Deneysel ayarların laboratuvarlar arasında aktarımını kolaylaştırmak.
- Aşılanmış çocuklarda lenfosit tespitinin güvenilirliğini artırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Akış sitometrisi yazılımında yeni yapılandırmaların oluşturulması.
- Temel yapılandırmaların laboratuvarlar arasında aktarımı.
- Standartlaştırılmış analiz için parametrelerin düzenlenmesi.
- Veri analiz süreçlerinin otomasyonu.
Ana Sonuçlar
- Yöntem, laboratuvar sonuçlarının karşılıklı kabul edilebilirliğini sağlar.
- Zaman tüketimini en aza indirir ve uygulamayı basitleştirir.
- Otomatik analiz, kapsamlı veri işleme ihtiyacını azaltır.
- Standartlaştırılmış yapılandırmalar, merkezler arasında tutarlılığı artırır.
Sonuçlar
- Standartlaştırılmış yöntem, laboratuvarlar arasında iş birliğini geliştirir.
- Lenfositleri içeren araştırmalar için güvenilir sonuçlar sağlar.
- Bu yaklaşım, lenfosit tespiti ötesinde çeşitli çok merkezli çalışmalara uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Multi-center immunology studies require robust standardization to ensure data comparability and reproducibility across diverse flow cytometry platforms. This method enables the transfer of experimental settings and analysis templates between different instruments and laboratories, directly supporting portfolio-wide immune monitoring and cross-site data integration. Standardized workflows reduce biological and operational variability, strengthening predictive confidence in immune function assessments for vaccine research and beyond.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables consistent immune cell phenotyping across sites for target validation studies.
- Reduces mechanistic ambiguity by harmonizing instrument setup and gating strategies.
- Supports predictive confidence in immunological endpoints for early-stage programs.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of validated flow cytometry assays for multi-site screening campaigns.
- Improves assay reproducibility and quantitative comparability through standardized templates.
- Enables reliable evaluation of immune responses in diverse cohorts and settings.
Translational & Preclinical Research
- Aligns immune monitoring protocols for translational biomarker studies in vaccine development.
- Ensures continuity of immune function data from discovery through preclinical validation.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by minimizing inter-lab variability.
Pipeline & Workflow Integration
This standardization method integrates into the discovery-to-preclinical continuum, enabling seamless immune monitoring from early research through multi-center validation.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by ensuring consistent lymphocyte detection.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility for immune cell subset analysis across platforms.
- Analytics: Provides quantitative fluorescence intensity and compensation outputs for robust data comparison.
- Translational Research: Maintains biomarker alignment and data integrity in multi-site vaccine studies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable standardization protocol for future multi-center immunology projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in immune monitoring.
- Operational Value: Streamlines assay setup, minimizes manual adjustments, and enhances reproducibility.
- Strategic Value: Enables reliable go/no-go decisions and efficient resource allocation in multi-site studies.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and cross-study data integration for vaccine and immunology programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in flow cytometry configuration and compensation adjustment.
- Needs compatible software and access to standardized fluorescence beads for calibration.
- Demands cross-team agreement on template design and gating strategies.
- Adaptation may be needed for different instrument models or sample types.
- Dependent on consistent reagent lots and instrument maintenance for optimal comparability.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:05
Introduction
0:57
Create Identical Configuration with the Same Name on Different Cytometers
1:45
Standardizing Experiment Using Cytometer A in the Transferring Lab
3:48
Transferring the Experimental Template to Cytometer B in the Test Method Lab
5:02
Results: A Rapid and Feasible Standardization Method to Transfer Parameters Across Different Flow Cytometers
5:50
Conclusion
