Name: Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: Öğrenin, farelerde floresan anjiyografi görüntüleri kullanarak retina damar çapını otomatik ölçme yöntemini. MATLAB tabanlı bu teknik, retinal hastalıkların ilerlemesini izlemek ve tedavi etkinliğini değerlendirmek için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, İzlanda Araştırma Fonu (217796-052) (AGL) ve Helga Jónsdóttir ve Sigurlidi Kristjánsson Anma Fonu'ndan (AGL ve TE ) Doktora Sonrası Burs hibesi ile desteklenmiştir. Yazarlar, fareleri sağladığı için Prof. Eiríkur Steingrímsson'a teşekkür ediyor.

Tüm deneyler İzlanda Gıda ve Veterinerlik Kurumu (MAST lisansı No. 2108002) tarafından onaylandı. Tüm hayvan çalışmaları, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı Bildirimi'ne göre yürütülmüştür. Bu çalışmada erkek ve dişi C57BL/6J ve Mitfmi-vga9/+ fareler kullanıldı. Kontrol olarak C57BL/6J fareleri (n = 7) kullanıldı. Yabani türler ticari olarak elde edildi (Malzeme Tablosuna bakınız), ancak tüm mutant fareler (n = 7) İzlanda Üniversitesi'ndeki Biyomedikal Merkezi'ndeki hayvan tesislerinde yetiştirildi ve yetiştirildi. Bu çalışmada 3 aylık hayvanlar; Bununla birlikte, protokol 1 aylık ve daha yaşlı hayvanlar için bile geçerlidir.
1. Deneysel hazırlık
<ol><li>Anestezi karışımını hazırlayın. Ketamin / ksilazin karışımının (25 mg / mL ketamin ve 20 mg / mL ksilazin) çalışma çözeltisini hazırlamak için 2 mL ketamin stok çözeltisinden (25 mg / mL) ve 250 μL ksilazin stok çözeltisinden (% 2) bir ampul alın (bkz.</li>
	<li>Fareyi, farenin vücut ağırlığının dört katı olan bir sıvı hacmiyle ketamin / ksilazin karışımının intraperitoneal enjeksiyonu ile uyuşturun; örneğin, 20 g ağırlığındaki bir fare, çalışma dozu ksilazin (4 mg / kg vücut ağırlığı) ve ketamin (40 mg / kg vücut ağırlığı) karışımı elde etmek için 35 μL ksilazin / ketamin çalışma çözeltisine ihtiyaç duyar.</li>
	<li>Anesteziden hemen sonra göz damlası% 10 fenilefrin hidroklorür ve% 1 tropikamid ile göz bebeklerini genişletin.</li>
	<li>Hayvan tamamen uyuşturulana ve göz bebekleri geniş ölçüde genişleyene kadar bekleyin.</li>
	<li>Floresein tuzu çözeltisi hazırlayın. 1 mL floresein çözeltisine (100 mg / mL stok konsantrasyonu) 9 mL fosfat tamponlu salin (PBS; 1x) ekleyin (bkz. Malzeme Tablosu). Nihai konsantrasyon çalışma çözeltisi 10 mg / mL'dir.</li>
</ol>2. Kemirgen retina görüntüleme sistemi kullanılarak retina damar sisteminin in vivo görüntülenmesi
<ol><li>Anestezi uygulanmış hayvana floresein çalışma solüsyonunu intraperitoneal olarak (5 μL / g vücut ağırlığı) uygulayın.</li>
	<li>Kornea yüzeyine bir damla% 2 metilselüloz jel uygulayın ve ardından hayvanı görüntüleme sisteminin konumlandırma aşamasına yerleştirin (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>Retina görüntüleme fundus kamera merceğini, farenin korneasına doğrudan ve nazikçe dokunacak şekilde konumlandırın. Optik sinir başını görme alanının ortasına yerleştirmek için hizalamayı hafifçe ayarlayın.</li>
	<li>Fundus kamerasındaki yeşil floresan kanalına geçin.</li>
	<li>Görüntü almak için retina damarlarına odaklanın.</li>
	<li>İdeal zaman noktasını bulmak için, floresein enjeksiyonunu takiben 1, 3, 5 ve 10 dakikada (ancak 10 dakikadan fazla olmamak üzere) bir dizi fotoğraf çekin. NOT: FA tedavisi 10 dakika içinde tamamlanmalıdır, çünkü bu süreden sonra floresein çok dağınık hale gelebilir ve damarlar tespit edilemez hale gelebilir.</li>
	<li>Görüntülemenin tamamlanmasının ardından, fare hala uyuşturulurken, servikal çıkık ile ötenazi yapın.</li>
</ol>3. Retina damarının çapının analizi
<ol><li>MATLAB programını açın (Malzeme Tablosuna bakınız).</li>
	<li>"fundusDiameter.m" kodunu indirin ve kaydedin (bkz. Ek Kodlama Dosyası 1, Ek Kodlama Dosyası 2 ve Ek Kodlama Dosyası 3).</li>
	<li>Kodun kaydedildiği klasörü açın. Kodu sürükleyin ve MATLAB'daki Geçerli Klasörün üzerine bırakın.</li>
	<li>FFA görüntüsünü (fundus floresan anjiyografi görüntüsü) veya analiz etmek istediğiniz görüntüleri MATLAB'daki Geçerli Klasör üzerine sürükleyip bırakın.</li>
	<li>MATLAB araç çubuğundan Çalıştır aracına basın.</li>
	<li>Bir açılır pencere görünecektir. İlgilendiğiniz görüntünün dosya adını Dosya adını girin kutusuna yazın ve Tamam'a basın. NOT: Parametrelerin geri kalanını değiştirmeyin veya değiştirmeyin.</li>
	<li>Optik diskin merkezini seçin ve ardından optik diskin kenarını seçin. Yazılım şimdi, optik diskin merkezinden saat yönünde, optik diskin iki katı yarıçaplı bir yarıçapa sahip bir daire içindeki fare fundus görüntülerindeki piksellerin yoğunluğunu hesaplıyor (Şekil 1).</li>
	<li>Ardından, yazılımın fundustaki her bir damarın ortalama damar çapını (piksel cinsinden) damar sayısının bir fonksiyonu olarak çizdiğinden emin olun (Şekil 2).</li>
	<li>Bunu takiben, yazılımın her bir tekne için ölçüm verilerini, bu değerlerin ortalama, medyan ve standart sapmasının hesaplandığı bir Excel belgesine aktardığından emin olun (Tablo 1 ve Tablo 2).</li>
	<li>Tablodaki tüm değerleri seçerek sonuçlar tablosundaki değerleri bir elektronik tablo programına taşıyın. Değerleri e-tabloya yapıştırın.</li>
	<li>Grafikleri çizin ve tercih edilen bir elektronik tablo programına yapıştırılan verileri kullanarak istatistiksel analiz yapın (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir çıkar bulunmadığını beyan ederler.

Bu makale, fare FA görüntülerinden retina damar çapını ve retina vaskülatürünü analiz etmek için bir yöntem sunan ilk makaledir. Retina damar sisteminin görüntülerini yakalamak için sadece fundus görüntüleme kullanıldığından, yöntemin birkaç dezavantajı vardır, bunlardan biri, bu çalışmada incelenen farelerde retina damar sisteminin yalnızca yüzeysel katmanlarındaki değişikliklerin çıkarılabilmesidir; Daha derin katmanlardaki herhangi bir farklılık henüz bilinmemektedir. 
Otomatik damar takibi...

Muhtemelen vücutta en çok araştırılan damar yatağı retina damar sistemidir. Giderek gelişen teknik gelişmişlik ile retina damar sistemi, yaşayan hastalarda kolayca fotoğraflanmakta ve birçok araştırma alanında kullanılmaktadır1. Ek olarak, gelişim sırasında fare retinal damar sisteminin, vasküler büyümenin temel biyolojisine yönelik araştırmalar için çok etkili bir model sistem olduğu kanıtlanmıştır. Retina damar sisteminin birincil amacı, nöral dokuya nüfuz eden laminer bir kılcal ağ örgüsü yoluyla retinanın iç kısmına metabolik destek sağlamaktır2. Bununla birlikte, retinanın durumu ve sonuç olarak herhangi bir işlev bozukluğu veya atrofi, hem retina damar sisteminin çatallanması hem de arterlerin çapı üzerinde önemli etkilere sahip olabilir ve bu da retina hücreleri ile damar sistemi arasında bir etkileşim olduğunu gösterir 3,4. Prematüre retinopatisi (ROP), diyabetik retinopati (DR), yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), glokom ve kornea neovaskülarizasyonu dahil olmak üzere çok sayıda göz rahatsızlığının anormal oküler anjiyogenez ile sonuçlanabileceği bilinmektedir5. Retina damar sistemi söz konusu olduğunda, retina dejenerasyonunun fare modelleri genellikle insan vasküler hastalıklarında görülenlerle karşılaştırılabilir değişiklikler sergiler 6,7. Temel sarmal-döngü-sarmal-fermuar transkripsiyon faktörlerinin Myc süpergen ailesi, retina pigment epitelinde (RPE) eksprese edilen mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (Mitf) genini içerir8,9,10.
Göz, kulak, bağışıklık sistemi, merkezi sinir sistemi, böbrek, kemik ve deri dahil olmak üzere çok sayıda organın Mitf 9,11,12,13 tarafından düzenlendiği gösterilmiştir. Mitf geninde çeşitli mutasyonlar taşıyan farelerde RPE'nin yapısının ve işlevinin etkilendiğini, bunun da bazı retina dejenerasyonu vakalarına ve nihayetinde görme kaybına neden olduğunu keşfettik10. Son zamanlarda, Mitf mutantı ve vahşi tip fareler arasında damar sayısı ve damar çapının önemli ölçüde farklılık gösterdiği gösterilmiştir14. Araştırmacılar ve doktorlar artık retina görüntüleme gelişmeleri nedeniyle retina damar sistemini in vivo olarak kesin olarak ölçebilirler. 1800'lerden bu yana, araştırmacılar ve doktorlar retina damar sistemini görselleştirmenin yararından yararlandılar ve floresein anjiyografi (FA) hem retinal kan akışını hem de kan-retinal bariyerin bozulmasını gösterdi15.
Bu makale, MATLAB yazılımında özel olarak yazılmış bir kodla fare FA görüntülerinden retina damar çapının nasıl analiz edileceğini göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>%1 Tropikamid (Midriasil)</td><td>Alcon Inc Laboratuvarları</td><td></td><td>Midriatik ajan</td></tr><tr><td>%2 Methocel</td><td>OmniVision Göz Bakımı</td><td></td><td>Hidroksipropril metilselüloz jel</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>000664</td><td>Vahşi tip fareler</td></tr><tr><td>Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td>. <td>için Excel Yazılım paketi</td></tr><tr><td>Floresein sodyum tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>28803-100G</td><td>Floresan anjiyografi</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>MathWorks, Inc.</td><td></td><td>Yazılım paketi</td></tr><tr><td>Micron IV kemirgen fundus kamera</td><td>Phoenix-Micron</td><td>40-2200</td><td>Fundus fotoğrafçılığı</td></tr><tr><td>Fenilefrin %10 w / v</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>Midriatik ajan</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su - 100 tablet</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Seyreltme</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel Bilimsel Yazılım</td><td></td><td>Yazılım paketi</td></tr><tr><td>S-Ketamin, 25 mg / mL</td><td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>Anestezi IP</td></tr></tbody></table>

fare floresan anjiyografi görüntülerinden retina damar Çapının Ölçülmesi

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

Anormal damar büyümesinin sonuçta görme kaybına yol açabileceği retinopatilerde retinal vaskülatür gelişimini incelemek önemlidir. Mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (Mitf) genindeki mutasyonlar hipopigmentasyon, mikroftalmi, retina dejenerasyonu ve bazı durumlarda körlüğü gösterir. Fare retinasının noninvaziv yollarla in vivo görüntülenmesi göz araştırmaları için hayati önem taşır. Bununla birlikte, küçük boyutu göz önüne alındığında, fare fundus görüntülemesi zordur ve özel araçlar, bakım ve eğitim gerektirebilir. Bu çalışmada, MATLAB ile yazılmış otomatik bir program ile farelerde retina damar çapının analiz edilmesini sağlayan benzersiz bir yazılım geliştirdik. Fundus fotoğrafları, floresein tuzu solüsyonunun intraperitoneal enjeksiyonunu takiben ticari bir fundus kamera sistemi ile elde edildi. Kontrastı artırmak için görüntüler değiştirildi ve MATLAB programı, ortalama vasküler çapın optik diskten önceden tanımlanmış bir mesafede otomatik olarak çıkarılmasına izin verdi. Yabani tip farelerde ve Mitf geninde çeşitli mutasyonlara sahip farelerde retina damar çapı analiz edilerek vasküler değişiklikler incelendi. Burada geliştirilen özel olarak yazılmış MATLAB programı pratiktir, kullanımı kolaydır ve araştırmacıların ortalama çapı ve ortalama toplam çapı ve ayrıca fare retinal damar sisteminden gelen damar sayısını rahat ve güvenilir bir şekilde analiz etmelerini sağlar.

Şekil 1, test edilen tüm farelerden alınan fare FFA görüntülerine uygulanan retina damar sistemini analiz etmek için kullanılan işlemi göstermektedir. Optik diskin merkezinden dairesel, saat yönünde piksellerin yoğunluğunu ölçmek için optik diskin iki katı büyüklüğünde bir yarıçap kullanılır. Sırasıyla kullanıcı tarafından belirlenen bir eşiğin üstünde ve altında noktalarla karşılaştığında pikselleri bir başlangıç veya bitiş noktasıyla işaretler. Bu, her seferinde optik diskin merkezinden bi...

Fare retinal damar sistemi, vasküler patern oluşumunun mekanizmalarını anlamada özellikle ilgi çekicidir. Bu protokol, optik diskten sabit bir mesafede floresan anjiyografi fundus görüntülerinden fare retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçer.

Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

Bu protokol, gen mutasyonları veya retina hastalığı nedeniyle anestezi uygulanmış farelerde retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçmek için kolay ve güvenilir bir yöntem sağlar. Bu tekniğin temel avantajı, burada özel olarak yazılmış MATLAB programının pratik, kullanımı kolay, kullanışlı ve güvenilir olmasıdır. Retina damar çapı değişiklikleri genellikle RP ve diğer retinal vasküler durumlar gibi dejeneratif hastalıklarda ortaya çıkar.Fare modelleri, tedavinin etkinliği ve retina damarları üzerindeki etkileri hakkında bilgi verir. Yöntem, gözdeki vasküler bozuklukların ilerlemesini takiben ölçülebilir klinik belirteçler olarak ve potansiyel tedavilerin izlenmesi için potansiyel olarak yararlı olabilir. Başlamak için, floresein çalışma solüsyonu içeren bir şırınga hazırlayın ve anestezi uygulanmış hayvana intra-peritoneal olarak uygulayın ve kornea yüzeyine bir damla% 2 metil selüloz jel uygulayın.Ardından hayvanı görüntüleme sisteminin konumlandırma aşamasına yerleştirin. Retina görüntüleme fundus kamera merceğini, farenin korneasına doğrudan ve nazikçe dokunacak şekilde konumlandırın ve optik sinir başını görme alanının ortasına yerleştirmek için hizalamayı hafifçe ayarlayın. Ardından fundus kamerasındaki yeşil floresan kanalına geçin ve görüntüleri çekmek için retina damarlarına odaklanın.İdeal zaman noktasını belirlemek ve floresein fundus görüntüsünü görselleştirmek için floresein enjeksiyonunu takiben istenen zaman noktalarında görüntüler yakalayın. İlk olarak, MATLAB programını açın. Ardından fundus çapını indirin ve kaydedin.m kodu. Ardından, fundus görüntü analizi klasörünü açın ve fundus çapını sürükleyip bırakın. m kodunu analiz klasörüne ekleyin.Bir FFA görüntüsünü görüntü analizi klasörüne sürükleyip bırakın. MATLAB programında, etkinleştirmek için kod dosyasına iki kez tıklayın. Çalıştır seçeneğini seçin.Görüntüyü seçmek için bir açılır menü görünecektir. Görüntüyü seçin ve ekranda analiz parametreleri için bir açılır menü belirecektir. Açılır menüde analiz parametrelerini ayarlayın ve Tamam'a basın. Optik diskin merkezini seçin ve ardından optik diskin kenarını seçin.Analiz arka planda gerçekleştirilecek ve analiz sonuçları ekranda görünecektir. Tablo, her gemi için ortalama, standart sapma ve standart hata değerlerini içerir. Tabloyu kaydedin.Ve sonra şekli ortalama kalınlık seti ile kaydedin. Kaydedilen dosyaların bulunduğu analiz klasörünü açın ve ardından kaydedilen şekli açın. Kaydedilen tabloyu açın, değerleri kopyalayın ve bir Excel dosyasına yapıştırın.Floresein enjeksiyonundan sonra, bir kontrol faresi ve bir MITFMI-VGA9 / mutant fareden görüntüler elde edildi, bunun için optik disk merkezinden damarlar üzerindeki uç noktalara kadar en kısa mesafe saat yönünde ölçüldü. Ortalama damar çapı, vahşi tip ve mutant fareler için damar sayısının bir fonksiyonu olarak elde edildi. Hatırlanması gereken en önemli şeyler, fundus kamerasının konumlandırılması ve optik diskin fundus görüntüsünde merkezlenmesidir.Bu tekniğe ek olarak, yeni ilaçların araştırılması, gözdeki farklı damar durumlarının teşhis edilmesi ve retina damar sisteminin işleyişinin daha iyi anlaşılması için moleküler teknikler de uygulanabilir.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İntravital mikroskopi, hayvanlarda retina vasküler çaplarını, kan dolaşım hızlarını ve toplam retinal kan akışını görselleştirmek ve ölçmek için kullanılabilir.

Farelerde Retinal Kan Akışının İntravital Video Mikroskobu Ölçümleri

Protokol farelerde geliştirilen komea mikro-tahlili tarif eder.

Kornea mikrocep Testi: Fare Eye Angiogenezis Bir Model

Retina hastalığının hayvan modellerinde kan-retina bariyeri geçirgenliğini ve iç sınırlayıcı membran bütünlüğünü araştırmak için, retinal nöronları ve gliaları etiketlemek için araç olarak birkaç adeno-ilişkili virüs (AAV) varyantı kullandık. Virüs aracılı raportör gen ekspresyonu daha sonra retinal bariyer geçirgenliğinin bir göstergesi olarak kullanılır.

Aracı Olarak Adeno-ilişkili virüs kullanarak Hastalığında Retina Engelleri Eğitim için

Retina önemli benzerlikler beyinle paylaşır ve böylece damarlara ve beyinde nöronal yapısında olmayan invaziv çalışmaya benzersiz bir pencereyi temsil eder. Bu iletişim kuralı demans retina görüntüleme teknikleri kullanarak çalışma yöntemi açıklanır. Bu yöntem potansiyel olarak demans tanı ve risk değerlendirmesine yardımcı olabilir.

Demans çalışması için retina Imaging'i kullanma

Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.

Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları

Burada, Yetişkin tg(fli:EGFP) Zebra balığı retina damarlara kolay bir analizini neoangiogenesis ve yapısal değişiklikler bağlantılı uzun vadeli vasküler patolojiler ayarlarında bir hızlı okuma olarak sağlayacak bir yöntem protokol tartışmak.

Diyabet ile gözleri bir balık eğitim: mikrodiseksiyon, görselleştirme ve yetişkin tg(fli:EGFP) Zebra balığı retina damarlara analizi

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Bu protokol, farelerin retinal düz montajlarının hazırlanması ve immünofloresan boyanması ve analizi için ayrıntılı bir yöntemi açıklamaktadır. Floresein fundus anjiyografinin (FFA) fare yavruları ve görüntü işleme için kullanımı da ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Oksijene Bağlı Retinopati Fare Modelinde Retina Damarlarının Dinamik Büyümesinin İzlenmesi

Bu makalede, tüm mount retinal preparatları için iyi kurulmuş ve tekrarlanabilir bir lektin lekesi testi ve proliferatif ve proliferatif olmayan retinopatilerde sıklıkla değiştirilen vasküler parametrelerin nicel ölçümü için gerekli protokoller açıklanmaktadır.

Proliferatif Olmayan ve Proliferatif Retinopatilerle Farelerin Tüm Mount Retinalarında Vasküler Parametrelerin Nicelemesi

Burada, Retinal Ven Tıkanıklığı (RVO) çalışmasında floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografi (OCT) görüntüleri için üç veri analizi protokolü sunulmuştur.

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Retinal vasküler sistemdeki perisitler, retroorbital floresan domates lektin enjeksiyonu sonrası trombosit kaynaklı büyüme faktörü reseptörü β ile immünofloresan boyama ile incelendi. Etiketli retina, doku temizleme yöntemi ile daha fazla tedavi edildi ve retina vaskülatürünü çevreleyen perisitlerin üç boyutlu görünümlerini konfokal mikroskop altında görselleştirmek için tamamen monte edildi.

Farelerde Retinal Vasküler Perisitlerin İmmün Boyama ile 3D Görüntülenmesi 

Öğrenin, farelerde floresan anjiyografi görüntüleri kullanarak retina damar çapını otomatik ölçme yöntemini. MATLAB tabanlı bu teknik, retinal hastalıkların ilerlemesini izlemek ve tedavi etkinliğini değerlendirmek için güvenilir bir araç sunar.

Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet