Name: Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Öğrenin transgenik Aedes aegypti sivrisineklerinde kondisyon maliyetlerini ölçme yöntemlerini. Bu protokol üreme başarısı, kanat boyutu ve yaşam süresi gibi parametreleri değerlendirerek genetik kontrol stratejilerinin ekolojik etkisini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, bu protokole verdikleri destek için Missouri Üniversitesi'nden Dr. Bill Reid ve Alexander Franz'a teşekkür eder. Yazarlar ayrıca NIH / NIAID'den Dr. Benjamin Krajacich'e R analizine verdiği destek için teşekkür eder. Bu çalışma NIH, hibe numarası R01 AI130085 (KEO) ve NIH/NIAID Intramural Araştırma Programı Bölümü AI001246 (EC) tarafından finanse edilmiştir.

<ol><li>Dawkins, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDawkins%2C+R+%22The+Selfish+Gene.+New+edition%22">The Selfish Gene. New edition</a>. , University Press. Oxford, New York. Oxford. (1989).</li>
<li>Crow, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unmasking+a+Cheating+Gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Unmasking a Cheating Gene.</a> Science. 283 (5408), 1651-1652 (1999).</li>
<li>Gould, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broadening+the+application+of+evolutionarily+based+genetic+pest+management%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Broadening the application of evolutionarily based genetic pest management.</a> Evolution. 62 (2), 500-510 (2008).</li>
<li>Williams, A. E., Franz, A. W. E., Reid, W. R., Olson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+effectors+and+gene+drive+strategies+for+mosquito+population+suppression+or+replacement+to+mitigate+arbovirus+transmission+by+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Antiviral effectors and gene drive strategies for mosquito population suppression or replacement to mitigate arbovirus transmission by Aedes aegypti.</a> Insects. 11 (1), (2020).</li>
<li>Irvin, N., Hoddle, M. S., O'Brochta, D. A., Carey, B., Atkinson, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+fitness+costs+for+transgenic+Aedes+aegypti+expressing+the+GFP+marker+and+transposase+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Assessing fitness costs for transgenic Aedes aegypti expressing the GFP marker and transposase genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 101 (3), 891-896 (2004).</li>
<li>Moreira, L. A., Wang, J., Collins, F. H., Jacobs-Lorena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fitness+of+anopheline+mosquitoes+expressing+transgenes+that+inhibit+Plasmodium+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fitness of anopheline mosquitoes expressing transgenes that inhibit Plasmodium development.</a> Genetics. 166 (3), 1337-1341 (2004).</li>
<li>Dilani, P. V. D., Dassanayake, R. S., Tyagi, B. K., Silva Gunawardene,, N, Y. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+transgenesis+on+mosquito+fitness%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Insect+Science%22%5BJournal%5D)">The impact of transgenesis on mosquito fitness: A review.</a> Frontiers in Insect Science. 38, (2022).</li>
<li>Hammond, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+creation+and+selection+of+mutations+resistant+to+a+gene+drive+over+multiple+generations+in+the+malaria+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Genetics%22%5BJournal%5D)">The creation and selection of mutations resistant to a gene drive over multiple generations in the malaria mosquito.</a> PLOS Genetics. 13 (10), (2017).</li>
<li>Reid, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+single-locus+CRISPR%2FCas9-based+gene+drive+variants+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+via+single-generation+crosses+and+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Assessing single-locus CRISPR/Cas9-based gene drive variants in the mosquito Aedes aegypti via single-generation crosses and modeling.</a> 3 (12), (2022).</li>
<li>Wu, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MGDrivE+2%3A+A+simulation+framework+for+gene+drive+systems+incorporating+seasonality+and+epidemiological+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">MGDrivE 2: A simulation framework for gene drive systems incorporating seasonality and epidemiological dynamics.</a> PLOS Computational Biology. 17 (5), (2021).</li>
<li>Oberhofer, G., Ivy, T., Hay, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+drive+and+resilience+through+renewal+with+next+generation+Cleave+and+Rescue+selfish+genetic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Gene drive and resilience through renewal with next generation Cleave and Rescue selfish genetic elements.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (16), 9013-9021 (2020).</li>
<li>Adolfi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+population+modification+gene-drive+rescue+system+in+the+malaria+mosquito+Anopheles+stephensi%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Efficient population modification gene-drive rescue system in the malaria mosquito Anopheles stephensi.</a> Nature Communications. 11 (1), 5553(2020).</li>
<li>Carballar-Lejarazu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+gene+drive+for+population+modification+of+the+malaria+vector+mosquito%2C+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Next-generation gene drive for population modification of the malaria vector mosquito, Anopheles gambiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (37), 22805-22814 (2020).</li>
<li>Champer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CRISPR+homing+gene+drive+targeting+a+haplolethal+gene+removes+resistance+alleles+and+successfully+spreads+through+a+cage+population%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">A CRISPR homing gene drive targeting a haplolethal gene removes resistance alleles and successfully spreads through a cage population.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (39), 24377-24383 (2020).</li>
<li>Champer, S. E. 15, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+and+experimental+performance+of+CRISPR+homing+gene+drive+strategies+with+multiplexed+gRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Computational and experimental performance of CRISPR homing gene drive strategies with multiplexed gRNAs.</a> Science Advances. 6 (10), (2020).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+confinable+gene+drive+system+in+the+human+disease+vector+Aedes+aegypti.+eLife%5BTitle%5D)+AND+%229%22%5BJournal%5D)">Development of a confinable gene drive system in the human disease vector Aedes aegypti. eLife.</a> 9. 51701, (2020).</li>
<li>Champer, S. E., Kim, I. K., Clark, A. G., Messer, P. W., Champer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anopheles+homing+suppression+drive+candidates+exhibit+unexpected+performance+differences+in+simulations+with+spatial+structure%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Anopheles homing suppression drive candidates exhibit unexpected performance differences in simulations with spatial structure.</a> eLife. 11, 79121(2022).</li>
<li>Petersen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+correlation+between+wing+size+and+body+weight+in+captive+Culex+quinquefasciatus%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+da+Sociedade+Brasileira+de+Medicina+Tropical%22%5BJournal%5D)">Assessment of the correlation between wing size and body weight in captive Culex quinquefasciatus.</a> Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical. 49 (4), 508-511 (2016).</li>
<li>Yeap, H. L., Hoffmann, A. A., Endersby, N. M., Ritchie, S. A., Johnson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+size+and+wing+shape+measurements+as+quality+indicators+of+Aedes+aegypti+mosquitoes+destined+for+field+release%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Body size and wing shape measurements as quality indicators of Aedes aegypti mosquitoes destined for field release.</a> The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 89 (1), 78-92 (2013).</li>
<li>Fecundity Briegel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((metabolism%2C+and+body+size+in+Anopheles+%28Diptera%3A+Culicidae%29%2C+vectors+of+malaria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">metabolism, and body size in Anopheles (Diptera: Culicidae), vectors of malaria.</a> Journal of Medical Entomology. 27 (5), 839-850 (1990).</li>
<li>Hurd, H., Hogg, J. C., Renshaw, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+bloodfeeding%2C+fecundity+and+infection+in+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology+Today%22%5BJournal%5D)">Interactions between bloodfeeding, fecundity and infection in mosquitoes.</a> Parasitology Today. 11 (11), 411-416 (1995).</li>
<li>Kistler, K. E., Vosshall, L. B., Matthews, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+with+CRISPR-Cas9+in+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Genome engineering with CRISPR-Cas9 in the mosquito Aedes aegypti.</a> Cell Reports. 11 (1), 51-60 (2015).</li>
<li>Coates, C. J., Jasinskiene, N., Miyashiro, L., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mariner+transposition+and+transformation+of+the+yellow+fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mariner transposition and transformation of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (7), 3748-3751 (1998).</li>
<li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+production+of+genetically+modified+Aedes+aegypti+for+field+releases+in+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil.</a> Journal of Visualized Experiments. 83 (83), (2014).</li>
<li>Clemons, A., Mori, A., Haugen, M., Severson, D. W., Duman-Scheel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+egg+collection+of+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Culturing and egg collection of Aedes aegypti.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (10), (2010).</li>
<li>Rohlf, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TpsDig+%282.32%29+%5BComputer+software%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">TpsDig (2.32) [Computer software.</a> , (2018).</li>
<li>Rohlf, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TpsUtil+%281.79%29+%5BComputer+software%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">TpsUtil (1.79) [Computer software.</a> , (2018).</li>
<li>Zelditch, M. L., Swiderski, D. L., Sheets, H. D., Fink, W. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZelditch%2C+ML+%22Geometric+Morphometrics+for+Biologists%22">Geometric Morphometrics for Biologists</a>. , Elsevier Academic Press. New York, NY. (2017).</li>
<li>Size Klingenberg, C. P., shape, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((and+form%3A+concepts+of+allometry+in+geometric+morphometrics%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">and form: concepts of allometry in geometric morphometrics.</a> Development Genes and Evolution. 226 (3), 113-137 (2016).</li>
<li>Axford, J. K., Ross, P. A., Yeap, H. L., Callahan, A. G., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fitness+of+wAlbB+Wolbachia+infection+in+Aedes+aegypti%3A+Parameter+estimates+in+an+outcrossed+background+and+potential+for+population+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Fitness of wAlbB Wolbachia infection in Aedes aegypti: Parameter estimates in an outcrossed background and potential for population invasion.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 94 (3), 507-516 (2016).</li>
<li>Ross, P. A., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fitness+costs+of+Wolbachia+shift+in+locally-adapted+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Fitness costs of Wolbachia shift in locally-adapted Aedes aegypti mosquitoes.</a> Environmental Microbiology. 24 (12), 5749-5759 (2022).</li>
<li>Rigby, L. M., Johnson, B. J., Peatey, C. L., Beebe, N. W., Devine, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+sublethal+permethrin+exposure+on+susceptible+and+resistant+genotypes+of+the+urban+disease+vector+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">The impact of sublethal permethrin exposure on susceptible and resistant genotypes of the urban disease vector Aedes aegypti.</a> Pest Management Science. 77 (7), 3450-3457 (2021).</li>
<li>Smith, L. B., Silva, J. J., Chen, C., Harrington, L. C., Scott, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fitness+costs+of+individual+and+combined+pyrethroid+resistance+mechanisms%2C+kdr+and+CYP-mediated+detoxification%2C+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">Fitness costs of individual and combined pyrethroid resistance mechanisms, kdr and CYP-mediated detoxification, in Aedes aegypti.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 15 (3), 0009271(2021).</li>
<li>Chaves, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertical+transmission+of+Zika+virus+%28Flaviviridae%2C+Flavivirus%29+in+Amazonian+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29+delays+egg+hatching+and+larval+development+of+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Vertical transmission of Zika virus (Flaviviridae, Flavivirus) in Amazonian Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) delays egg hatching and larval development of progeny.</a> Journal of Medical Entomology. 56 (6), 1739-1744 (2019).</li>
<li>Kuno, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+history+of+laboratory+breeding+of+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29+focusing+on+the+origins+and+use+of+selected+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Early history of laboratory breeding of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) focusing on the origins and use of selected strains.</a> Journal of Medical Entomology. 47 (6), 957-971 (2010).</li>
<li>David, M., Garcia, G., Valle, D., Maciel-de-Freitas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticide+resistance+and+fitness%3A+the+case+of+four+Aedes+aegypti+populations+from+different+Brazilian+regions%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Insecticide resistance and fitness: the case of four Aedes aegypti populations from different Brazilian regions.</a> BioMed Research International. , (2018).</li>
<li>Wendell, M. D., Wilson, T. G., Higgs, S., Black, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+gamma-ray+mutagenesis+of+the+white+gene+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Chemical and gamma-ray mutagenesis of the white gene in Aedes aegypti.</a> Insect Molecular Biology. 9 (2), 119-125 (2000).</li>
<li>Koenraadt, C. J., Kormaksson, M., Harrington, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inbreeding+and+genetic+modification+on+Aedes+aegypti+larval+competition+and+adult+energy+reserves%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+and+Vectors%22%5BJournal%5D)">Effects of inbreeding and genetic modification on Aedes aegypti larval competition and adult energy reserves.</a> Parasites and Vectors. 3, (2010).</li>
<li>Rezende, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+desiccation+resistance+in+Aedes+aegypti%3A+presumptive+role+of+the+chitinized+serosal+cuticle%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryonic desiccation resistance in Aedes aegypti: presumptive role of the chitinized serosal cuticle.</a> BMC Developmental Biology. 8, (2008).</li>
<li>Farnesi, L. C., Vargas, H. C. M., Valle, D., Rezende, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Darker+eggs+of+mosquitoes+resist+more+to+dry+conditions%3A+Melanin+enhances+serosal+cuticle+contribution+in+egg+resistance+to+desiccation+in+Aedes%2C+Anopheles+and+Culex+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">Darker eggs of mosquitoes resist more to dry conditions: Melanin enhances serosal cuticle contribution in egg resistance to desiccation in Aedes, Anopheles and Culex vectors.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11 (10), (2017).</li>
<li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+pornoscopy%3A+Observation+and+interruption+of+Aedes+aegypti+copulation+to+determine+female+polyandric+event+and+mixed+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mosquito pornoscopy: Observation and interruption of Aedes aegypti copulation to determine female polyandric event and mixed progeny.</a> PLoS ONE. 13 (3), (2018).</li>
<li>Helinski, M. E., Harrington, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mating+history+and+body+size+influence+female+fecundity+and+longevity+of+the+dengue+vector+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Male mating history and body size influence female fecundity and longevity of the dengue vector Aedes aegypti.</a> Journal of Medical Entomology. 48 (2), 202-211 (2011).</li>
<li>Felipe Ramarez-Sanchez,, Camargo, L., Avila, C., W, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+sexual+history+influences+female+fertility+and+re-mating+incidence+in+the+mosquito+vector+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Male sexual history influences female fertility and re-mating incidence in the mosquito vector Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Insect Physiology. 121, 104019(2020).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Ae. aegypti uygunluk çalışmaları, bu yazıda tartışıldığı gibi, transgenik kargo (örneğin, gen sürücü elemanları) veya gen nakavtları ile ilişkili uygunluk maliyetlerini değerlendirmek için genellikle laboratuvarda gerçekleştirilir; bununla birlikte, bu çalışmalar çeşitli amaçlar için yapılabilir - Wolbachia ile enfekte30,31, böcek ilacına dirençli32,33 veya arbovirüs ile enfekte...

En uygun olanın hayatta kalması, çevrelerine en iyi şekilde adapte olmuş genleri barındıran bireylerin bu genleri sonraki nesillere aktaracağına dair Darwinci fikirdir1. Bu, genlerinin hayatta kalıp kalmayacağını belirleyenin zindelik olduğu anlamına gelir. 150 yıldan daha eski olan bu kavram, transgenik sivrisineklerde başarılı bir gen sürücüsü mühendisliğinin belki de en önemli belirleyicisidir. Gen sürücüleri veya bencil bir genetik elementin popülasyonlarayayılmasına izin veren süper Mendel kalıtım modeli 2, genetik haşere yönetimi3 için araştırılmaktadır. Vektör kontrolü bağlamında, bu strateji ya vahşi tip (WT) eklembacaklıları patojenlere dirençli olanlarla değiştirmeyi (popülasyon modifikasyonu) ya da hepsini birlikte ortadan kaldırmayı (popülasyon baskılama)4. Bununla birlikte, transgenik sivrisinekler, WT muadillerine kıyasla genellikle fitness maliyetleri (genetik yük olarak da adlandırılır) sergiler, bu da transgenin onları geride bırakabilecek popülasyonlarda kaybolacağı anlamına gelir. Bu nedenle, transgenlerin bir gen tahrik sistemi ile birleştirilmesi, herhangi bir uygunluk maliyetini dengelemek ve transgeni tipik Mendel kalıtımından beklenenden daha yüksek seviyelerde popülasyon boyunca itmek için gereklidir4.
Sivrisinek vektör türleri üzerinde yapılan laboratuvar çalışmaları, transgenlerin genellikle 5,6,7 fitness maliyeti gösterdiğini göstermiştir. Örneğin, Irvin ve ark. Drosophila aktin 5C veya sentetik 3XP3 promotörleri altında gelişmiş yeşil floresan protein (eGFP) veya transpozaz genlerini eksprese etmek için tasarlanmış Aedes (Ae.) aegypti'de çeşitli yaşam parametrelerini ölçtü ve bunları vahşi tip Orlando suşu (türetildikleri aynı genetik arka plan) ile karşılaştırdı5. En önemlisi, tüm transgenik suşların üreme uygunluğunu önemli ölçüde azalttığını buldular5. Transgene bağlı olarak, Plasmodium parazit gelişimini inhibe eden transgenleri eksprese eden bazı Anopheles (An.) sivrisinekleri de fitness maliyetleri sergiledi6. Spesifik olarak, An. stephensi, yapısal veya kan unu ile indüklenebilir promotörler altında bir arı zehiri fosfolipazı (PLA2) eksprese ederek, kontrollere kıyasla önemli ölçüde daha az yumurta bıraktı6. Bu yazarlar ayrıca, farklı bir transgeni ifade eden transgenik Anofellerin, bir SM1 dodekapeptid tetramerinin uygunluk maliyetleri göstermediğini bulmuşlardır, bu da onları, transgen tarafından verilen uygunluk maliyetlerinin, en azından kısmen, üretilen transgenik proteinin etkisine bağlı olduğu sonucuna varmalarına yol açmıştır6. Gerçekten de, uygunluk maliyetleri, laboratuvarda yetiştirilen suşlarda transgen ürünlere, konumsal etkilere, hedef dışı etkilere, yerleştirme mutajenezine veya akrabalı yetiştirme etkilerine bağlanabilir7. Bu nedenle, gen sürücüleri, bu transgen kaynaklı uygunluk maliyetlerini dengeleyecek kadar sağlam olmalı ve aynı zamanda sürücünün kendisini bloke eden ekleme ve silmelerin (indels) geliştirilmesinden kaçınmalıdır.
Gelişimsel veya üreme uygunluğu maliyetleri, laboratuvar veya kafes çalışmalarında7 ölçülebilir, ancak alandaki bilinmeyen faktörlerin de bir etkisi olabileceği konusunda bir uyarı vardır. Bununla birlikte, kontrollü uygunluk çalışmaları, transgenik hattın sonraki nesiller boyunca devam edip etmeyeceğini belirlemek için bir gen sürücü programı gibi genetik olarak değiştirilmiş sivrisinek salınımlarını planlarken veya değerlendirirken önemli bir ilk adımdır. Örneğin, Hammond ve ark. Kadın doğurganlığı için gerekli genleri bozmayı amaçlayan bir gambiae CRISPR/Cas9 tabanlı gen sürücülerideğerlendirildi 8. Yazarlar, en az 25 nesil boyunca sürdürülen kafes çalışmaları sayesinde, sivrisineklerin CRISPR hedefli bölünmeyi bloke eden ve kadın doğurganlığını geri kazandıran gen güdümlü dirençli alellere maruz kaldığını buldular8. Modelleme çabaları, gen sürücüsü için heterozigot olan dişilerde doğurganlığın, simüle edilmiş koşullarda gen sürücü fiksasyonu üzerinde en dramatik etkilere sahip olduğunu göstermiştir8. Aynı doğrultuda, farklı promotörler altında veya farklı intergenik lokuslarda otonom gen sürücü kasetlerini eksprese etmek için tasarlanan Ae. aegypti (Higgs'in Beyaz Göz suşu, HWE), simüle edilmiş popülasyonlarda farklı gen sürücü fiksasyonu oranları sergiledi9. Yazarlar, MGDrivE modelleme10'u, ölçülen indel oluşum oranları, maternal etkiler ve laboratuvarda toplanan yaşam parametresi verileriyle birlikte kullanarak, sivrisinek uygunluğunun simüle edilmiş koşullarda gen sürücüsünün kalıcılığını en güçlü şekilde etkilediğinibuldular 9. Gen sürücü verimliliğini bozma olasılığı en yüksek olan uygunluk maliyetleri, içsel sürücünün kendisinden ziyade, somatik Cas9 (aşırı) ekspresyonuna veya özellikle heterozigotlarda hedeflenen genden kaynaklanabilir 11,12,13,14,15,16,17.
Önemi göz önüne alındığında, uygunluk, bir transgenik hattın sonraki nesiller boyunca devam etme yeteneği için önemli bir faktördür ve bir transgen ile ilişkili herhangi bir fizyolojik etki için bir gösterge olarak kullanılabilir. Örneğin, hedef dışı etkiler fitness maliyetleriyle ilişkilendirilebilir. Bu durumda, birkaç nesil boyunca transgenik bir çizginin geri çaprazlanması önerilir. Ayrıca, transgenik popülasyonun gerçek dünyada ne kadar iyi rekabet edebileceğini araştırmak için transgenik çizgiyi bir alan popülasyonunu yansıtan bir çizgiyle geçmek de gerekli olabilir. Uygunluk maliyetlerini karşılaştırılabilir olacak şekilde ölçmek için, bu el yazması, Ae. aegypti sivrisinekleri, transgenlerle ilişkili fitness maliyetlerine özel bir vurgu yaparak, bu tür çalışmaların daha kolay çoğaltılabilmesi için ortak yaşam öyküsü özelliklerini ölçmek için basit protokoller sağlar. Protokoller doğurganlık, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrünü içerir. Kanat uzunluğu ve alanının ölçülmesi de toraks uzunluğu18,19 ve kan unu boyutu, doğurganlık ve bağışıklık20,21 ile doğrudan bağlantılı olan vücut büyüklüğü ölçümleri ile ilişkili olduğu için bir kondisyon ölçümü olarak seçilmiştir. Uygunluğu değerlendirmenin birçok yolu olmasına rağmen, bu parametreler üreme başarısını yansıttıkları, ölçülmesi kolay oldukları ve literatürde yaygın olarak bildirildikleri için seçilmiştir.

<table><tbody><tr><td>1 oz. yarı saydam plastik sufle kapları</td><td>WebstaurantStore</td><td>301100PC</td><td></td></tr><tr><td>2 oz. yarı saydam polistiren sufle kapları</td><td>WebstaurantStore</td><td>760P200N</td><td></td></tr><tr><td>3 mL plastik pipetleyiciler&nbsp;</td><td>Kornin</td><td>357524</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik tüpler</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>64 oz. beyaz çift poli kaplamalı kağıt gıda bardağı</td><td>WebstaurantStore</td><td>999SOUP64WB</td><td>sivrisinek muhafazası için</td></tr><tr><td>65 mm lens&nbsp;</td><td>Canon</td><td>MP-E 65mm f/2.8 1-5x makro fotoğraf</td><td>Canon makro fotoğraf MP-E 65mm, 7D-65mm-1X; zoom = 1, 200, 6.3, ISO = 100; kanatları veya yumurta kağıtlarını fotoğraflamak için, diğer kameralar muhtemelen yeterli olsa da</td></tr><tr><td>Aedes aegypti&nbsp; sivrisineklerde</td><td></td><td>BEI yumurta olarak çoklu suşlar mevcuttur</td><td></td></tr><tr><td>Yapay membran besleyiciler</td><td>https://lillieglassblowers.com/</td> <td>Meduim membran besleyici, Özel yapım, 33mm</td><td>Chemglass da sunuyor, ancak boyutlar bizim için yanlış. Bizimki yaklaşık 3 cm?</td></tr><tr><td>ATP</td><td>MP Biyomedikal</td><td>ICN15026605</td><td>Herhangi bir kaliteli ATP, 10mM filtre steril alikotları -20'de</td></tr><tr><td>Kuluçka için suyu sterilize etmek için</td><td>otoklav</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Canon EOS 7D fotoğraf makinesi&nbsp;</td><td>Canon</td><td>3814B004</td><td>kanatları veya yumurta kağıtlarını fotoğraflamak için, ancak diğer kameralar muhtemelen</td></tr><tr><td>defibrine koyun kanı için yeterlidir&nbsp;</td><td>Colorado Serum A.Ş.</td><td>60 ml, her 2 haftada bir</td><td>https://colorado-serum-com.3dcartstores.com/sheep-defibrinated</td></tr><tr><td>Çift Deveboynu Mikroskop Aydınlatıcı</td><td>Dolan Jenner Fiber-Lite 180</td><td>181-1 Sistem</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Dumont</td><td>5SF</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı Bez</td><td></td><td>omnisorb ii</td><td>4 "dokunmamış süngerler</td></tr><tr><td>cam mikroskop slayt</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>Cam Petri kapları, 100 > 15 mm</td><td>VWR</td><td>75845-546</td><td>sivrisinekleri buz üzerinde uyuşturmak/manipüle etmek için</td></tr><tr><td>Domuzların bağırsağı</td> Toplu olarak satın aldığımız <td>herhangi bir Şarküteri</td><td></td><td>, 50 ml konik Buz</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>kovası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe'de -20'de ~ 4X12 "'lik küçük alikotlarda saklar, böler, yıkar ve saklarız</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td></td></tr><tr>Leica GZ4 <td>Transgenik sivrisinekleri taramak için</td> <td>StereoZoom mikroskobu</td><td></td><td></td> (varsa)</tr> <tr><td>Boya fırçası</td><td>AIT sentetik fırça&nbsp;</td><td>larvaları/pupaları manipüle etmek için</td> <td>10-0 numara</td> (Amazon)</tr><tr><td>Külotlu hortum</td><td>Walmart</td><td>L'eggs Her gün</td><td>&nbsp; Kadın Naylon <güçlü>Artı < / güçlü>Diz Yüksekleri Dik Parmak, 16 çift (artı kartona uyar)</td></tr><tr><td>Kalemler</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kartonların 2 derece depolanması için plastik kaplar</td><td>Walmart</td><td></td><td>Sterilite 58 Qt Saklama Kutusu Şeffaf Taban Beyaz Kapak 8'li Set</td></tr><tr><td>Larva yetiştirmek için plastik kaplar</td><td>Walmart</td><td></td><td>Sterilite 28 Qt. Saklama Kutusu Plastik, Beyaz,</td></tr><tr><td>Larvaların kuluçkalanması için 10 Plastik kap</td> seti <td>Walmart</td><td></td><td>Sterilite 6 Qt. Saklama Kutusu Plastik, Beyaz</td></tr><tr><td>polipropilen şeffaf şarküteri kapları&nbsp;</td><td>WebstaurantMağazası</td><td>&nbsp; 127DM12BULK</td><td>12 oz veya gerekirse daha büyük (127RD16BULK) için 16 oz</td></tr> <tr><td>Lastik bantlar</td><td>Office Max</td><td>&nbsp;#100736/#909606 /#3777415</td><td>12", #64 ve #10</td></tr><tr><td>Sivrisinek muhafazası için</td><td>kauçuk tıpa</td><td>VWR</td><td>217-0515</td></tr><tr><td>Küp şeker veya kuru</td><td></td><td></td><td></td>üzüm gibi şeker kaynağı</tr><tr><td>Tetramin pul yem</td><td>Tetramin</td><td>16106</td><td></td></tr><tr><td>tpsDig</td><td>Stony Brook Morphometrics</td><td></td><td>Çevrimiçi olarak dağıtılan ücretsiz bir morfometrik görüntü işleme yazılımı https://www.sbmorphometrics.org/</td></tr> <tr><td>tpsUtil</td> adresinde mevcuttur <td>Stony Brook Morphometrics</td><td></td><td>Çevrimiçi olarak dağıtılan ücretsiz bir morfometrik görüntü işleme yazılımı şu adreste mevcuttur: https://www.sbmorphometrics.org/</td></tr> <tr><td>Beyaz organze kumaş 8" & times; 8"</td><td>FabricWholesale.com&nbsp;</td><td>4491676</td><td>Joann Casa Collection Organze Kumaş by Casa Collection&nbsp;</td></tr><tr><td>Whitman Grade 1 Kalitatif Filtre kağıdı&nbsp;</td>Yumurta kağıtları için <td>Whitman</td><td>1001-824</td><td>. Beyaz renk, siyah yumurtaları görmeyi kolaylaştırır.</td></tr></tbody></table>

transgenik aedes aegypti sivrisineklerinde kondisyon maliyetlerinin Ölçülmesi

Quantifying Fitness Costs in Transgenic Aedes aegypti Mosquitoes

Transgenik sivrisinekler genellikle vahşi tip muadillerine kıyasla fitness maliyetleri gösterir. Bu bağlamda, fitness maliyeti çalışmaları, genetik olarak değiştirilmiş sivrisineklerden yaşam parametresi verilerinin toplanmasını ve bunların aynı genetik geçmişe sahip transgenlerden yoksun sivrisineklerle karşılaştırılmasını içerir. Bu el yazması, sivrisinek Aedes aegypti'deki doğurganlık, kanat boyutu ve şekli, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrü dahil olmak üzere ortak yaşam öyküsü özelliklerinin nasıl ölçüleceğini göstermektedir. Bu parametreler üreme başarısını yansıttıkları, ölçülmeleri kolay oldukları ve literatürde yaygın olarak bildirildikleri için seçilmiştir. Temsili sonuçlar, bir gen nakavt edilmesi veya bir gen sürücü elemanının tek bir eklenmesi ile ilişkili uygunluk maliyetlerini ölçer. Yaşam parametresi verilerinin nasıl toplandığını standartlaştırmak önemlidir, çünkü bu tür veriler, çalışmalarda üretilen transgenik sivrisineklerin sağlığını karşılaştırmak veya simüle edilmiş bir vahşi tip sivrisinek popülasyonunda transgen fiksasyon oranını modellemek için kullanılabilir. Bu protokol transgenik Aedes aegypti için spesifik olsa da, protokol diğer sivrisinek türleri veya diğer deneysel tedavi koşulları için de kullanılabilir, ancak belirli biyolojik bağlamların özel adaptasyonlar gerektirebileceği uyarısı vardır.

Yukarıdaki protokolü takiben, iki sivrisinek hattının uygunluğu değerlendirildi: (1) Ae. aegypti D7L1 (AAEL006424) tükürük proteininden CRISPR / Cas9 aracılı nakavt ve (2) Ae. otonom CRISPR / Cas9 aracılı gen sürücülerini ifade eden aegypti hatları9. İlki durumunda, D7L1 genine özgü sgRNA'larla embriyoların mikroenjekte edilmesinden sonra bozulmayı oluşturmak için homolog olmayan uç birleştirme yolundan (NHEJ) yararlanılarak homozigot bir D7L1 nakavt hattı oluşturulmuştu...

Mevcut protokol, Aedes aegypti sivrisineklerinde doğurganlık, kanat boyutu, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrü dahil olmak üzere ortak yaşam parametresi verilerinin nasıl ölçüleceğini açıklamaktadır. Bu ölçümler, transgenik sivrisineklerin uygunluğunu değerlendirmek için kullanılabilir.

Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi

Transgenic mosquitoes often display fitness costs compared to their wild-type counterparts. In this regard, fitness cost studies involve collecting life ...

Bu protokol, aedes aegypti sivrisineklerinde uygunluğu yansıtan standart ölçümleri gösterir, bu uygunluk parametreleri üreme başarısını yansıttıkları, ölçülmesi basit oldukları ve literatürde yaygın olarak bildirildikleri için seçilmiştir. Başlamak için, transgenik ve vahşi tip sivrisinekleri yumurtadan çıkarmak için yumurta kağıtlarını gece boyunca steril suya koyun. Birkaç damla öğütülmüş balık yemi bulamacı sağlayarak larvaların ad libitum beslenmesine izin verin.Yetişkinlerin bakire olduğundan emin olmak için, pupaları ortaya çıktıklarında cinsiyetlerine göre ayırın, pupaları bir cam mikroskop lamına taşıyın ve pupayı hareketsiz hale getirmek için fazla suyu doku ile birlikte alın. İki kat ila dört kat büyütmeli bir stereoskop altında, ince uçlu bir boya fırçası kullanarak, pupayı yüzü yukarı bakacak şekilde konumlandırın. Daha sonra genital lob şeklindeki farklılıklar için kuyruğu görsel olarak analiz edin.Erkek ve dişi pupaları uygun muhafazada ayrı su kaplarına koyun. Yabani tip veya transgenik gen sürüşü bir veya gen sürüşü iki erkeği bakire vahşi tip dişilerle kütle üzerinde çaprazlamak için, yaklaşık 150 sivrisinek içeren sivrisinek kartonlarına beş erkeğe bir dişi oranla

quantifying-fitness-costs-in-transgenic-aedes-aegypti-mosquitoes

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokolü biz bir ile RNAi-aracılı gen susturulması...

RNAi-aracılı Gene Nakavt ve<em&gt; In Vivo</emYetişkin Kadınlar&gt; diürez Testi<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Sivrisinekler

RIDL® (Baskın Ölümcül Taşıyan Böceklerin Salınımı) sistemini kullanarak Aedes aegypti'nin popülasyon baskısını elde etmek için çok sayıda erkek sivrisinek salınmalıdır. Bu, maksimum sayıda yüksek kaliteli erkek sivrisinek elde etmek için güvenilir sistemler sağlamak için kitlesel yetiştirme tekniklerinin ve teknolojisinin kullanılmasını gerektirir.

Brezilya'da Saha Sürümleri için Genetiği Değiştirilmiş Aedes aegypti'nin Seri Üretimi

Yağ vücut böceklerde Merkezi metabolik organdır. Biz izole yağ vücut dokusu yanıt çeşitli uyaranlara karşı eğitim kullanıcı sağlayan bir canlı organ kültür sistemi mevcut.

Yağ vücut Organ kültür sistemi içinde Aedes Aegypti, bir vektör Zika virüs

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Açıklanan, yumurtaları saymak ve 24 kuyu doku kültürü plakası kullanarak bireysel sivrisineklerin kuluçka oranlarını belirlemek için zaman ve yerden tasarruf sağlayan bir yöntemdir, bu da doğurganlık ve doğurganlık testlerinin ölçeğini ve hızını önemli ölçüde artırabilir.

24 Kuyu Doku Kültürü Plakası (EAgaL Plakaları) kullanılarak Aedes aegypti için Geliştirilmiş Doğurganlık ve Doğurganlık Tahlilleri

Bu protokolün amacı, yapay bir membran besleyici aracılığıyla Aedes aegypti sivrisineklerine hayvansal türevli ve yapay kan yemekleri sunmak ve yutturılan yemek hacmini tam olarak ölçmektir.

Aedes aegypti Sivrisineklerinde Hayvansal Türevli Kan ve Yapay Yemeklerin Beslenmesi ve Ölçülmesi

Steril böcek tekniği (SIT), kimyasal kontrollere dirençli olabilecek spesifik, tıbbi açıdan önemli sivrisinek popülasyonlarını kontrol etmek için kullanılır. Burada, Aedes aegypti sivrisineğini hedef alan operasyonel bir SIT programında salınmak üzere steril erkek sivrisineklerin kitlesel olarak yetiştirilmesi ve hazırlanması yöntemini açıklıyoruz.

Işınlanmış ve İşaretlenmiş Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinin Operasyonel Steril Böcek Tekniği Programında Salınıma Hazırlanması

Burada, erkek Aedes aegypti'nin çiftleşme rekabet gücünün bir işaretleyici olarak floresan boyası kullanılarak incelenmesi için bir protokol sunuyoruz. Dişi sivrisinekler çiftleşme için hem işaretli hem de işaretlenmemiş erkeklere maruz kalır. Çiftleşme sonrası spermathecae'leri çiftleşme partnerlerini belirlemek için floresan mikroskop altında incelenir.

Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinde Çiftleşme Rekabet Gücünü Incelemek için Floresan Boyası Rhodamine B'yi Kullanmak

Burada bildirilen protokoller, laboratuvar içeren küçük kafes denemelerinde vektör kontrolüne yönelik genetik olarak tasarlanmış sivrisineklerin performansını değerlendirmenin üç alternatif yolunu göstermektedir. Her protokol, sivrisinek suşunun taşıdığı (gen tahriki veya gen dışı tahrik) ve ölçülen parametre türlerine özel modifikasyona göre uyarlanmıştır.

Genetik Olarak Tasarlanmış Anopheline Sivrisineklerinin Küçük Kafes Laboratuvar Denemeleri

Burada, CRISPR-Cas9 teknolojisini kullanarak sivrisinek A. aegypti'de embriyonik mikroenjeksiyon yoluyla genom düzenleme için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz.

Sarı Humma Sivrisineği Aedes aegypti'de CRISPR-Cas9 Kullanılarak Genom Düzenleme

Öğrenin transgenik Aedes aegypti sivrisineklerinde kondisyon maliyetlerini ölçme yöntemlerini. Bu protokol üreme başarısı, kanat boyutu ve yaşam süresi gibi parametreleri değerlendirerek genetik kontrol stratejilerinin ekolojik etkisini anlamaya yardımcı olur.

Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet