Name: Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-02T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: Keşfedin ekstrakraniyal elektrot yerleştirme ve serebral kan akımı ölçümü yöntemini anestezili farelerde Alzheimer hastalığı modellerinde kullanarak. Bu protokol nörovasküler yanıtları değerlendirmek için gelişmiş görüntüleme teknikleri sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir (D.A.T.'ye): NIA RO1 AG074999, NIA R21AG051103, VA I21RX002223 ve VA I21 BX003023.

Tüm hayvan prosedürleri, Duke Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi veya hayvanları içeren araştırmaları düzenleyen eşdeğer yerel otorite tarafından onaylandı. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, aletler ve ekipmanlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Enstrüman hazırlığı
<ol><li>Gerekli tüm öğelerin ve cerrahi aletlerin yerinde olduğundan emin olun (Şekil 2): kafa derisi temizleme solüsyonu (alkollü pedler), bant, forseps, makas ve küçük (0,5 mm) çapak deliklerini yerleştirmek için bir matkap.</li>
	<li>Kafatası uygulaması için ekstrakraniyal yüzey elektrotlarını hazırlayın ve daha önce kullanılmışlarsa herhangi bir cerrahi yapıştırıcının temizlendiğinden emin olun.</li>
	<li>Bu tACS elektrotlarının empedansını kafatasına uygulamadan önce doğrudan doğrulayın. Bunun için, her iki elektrot da tuzlu su banyosuna yerleştirilmiş olarak tACS stimülatörünün yerleşik ölçüm fonksiyonunu kullanın. NOT: Kafatasından yeterli akımın geçmesine izin vermek için tercih edilen empedans, elektrot çifti başına &lt;5 KΩ'dur. Stimülatör cihazı, sabit akım darbeleri vermeden önce empedansı kontrol eder ve değeri doğrudan verir.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65195/65195fig02.jpg"> Şekil 2: Ekstrakraniyal stimülasyonu hazırlamak için diseksiyon aletleri ve makas dahil olmak üzere gerekli enstrümantasyonun bir fotoğrafı. 1. Mikro diseksiyon makası, 11,5 cm; 2. Forseps, 11,5 cm, hafif eğri, tırtıklı; 3. Dumont #7 forseps, kavisli; 4. Dumont #5 forseps; 5. Mikro küret, 13 cm; 6. Q-ipuçları; 7. Cerrahi bant; 8. Alkol pedleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65195/65195fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. Hayvanın ameliyat için hazırlanması
NOT: Bu deneyler için, beşi erkek ve dokuzu dişi olmak üzere 12 hafta ile 33 hafta arasında 14 C57BL / 6 kontrol faresi kullandık.
<ol><li>Hayvanı% 30O2'de izofluran içeren bir indüksiyon odasında ~ 1.5 L / dk'da, başlangıçta ~% 4 indüklemek ve ~% 1.25 -% 1.5 spontan solunum ile anestezi seviyesinde tutmak için anestezi ve kuyruk sıkışması tepkisini ortadan kaldırmak için yeterli.</li>
	<li>İndüksiyondan sonra hayvanı stereotaksik çerçeveye aktarın ve ardından sonraki elektrot uygulaması ve çapak deliği prosedürü için kafayı burun konisine ve kulak çubuklarına sabitleyin (Şekil 1 ve Şekil 3).</li>
	<li>Stereotaksik çerçevenin burun konisini bir giriş aracılığıyla buharlaştırıcıya ve bir süpürücü sisteminden (örn. odun kömürü veya vakum) herhangi bir izofluran kalıntısını çıkarmak için bir çıkışa bağlayın. Hem izofloran ile anestezi seviyesini korumak hem de oda havasına kazara sızmayı önlemek için burun konisinden hava sızıntısı olmadığından emin olun (Şekil 3).</li>
	<li>Entübasyon olmadan spontan solunuma izin vermek için burun konisinin konumu da dahil olmak üzere farenin stereotaksik çerçevedeki konumunu ve ayrıca araştırma personelini korumak için uygun anestezi iyileşmesini ve süpürmeyi kontrol edin (Şekil 3).</li>
	<li></li><li><li><li></ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65195/65195fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65195/65195fig03large.jpg" target="_blank"></a><ol><li></li><li><li> </li><li><li><li></li><li><li> </li><li></ol><ol><li><li><ol><li></li><li></li></ol></li></ol><ol><li></li><li> </li><li></ol><ol><li> </li><li></li><li><li><li></li><li></ol><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65195/65195fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65195/65195fig04large.jpg" target="_blank"></a><ol><li></li></ol>

Serebral Kan Akışının ve Elektrik Alanlarının Haritalanması: Farelerde Elektrot Yerleştirme

<ol><li>Bestmann, S., Walsh, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Transcranial electrical stimulation.</a> Current Biology. 27 (23), R1258-R1262 (2017).</li>
<li>Bikson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigor+and+reproducibility+in+research+with+transcranial+electrical+stimulation%3A+An+NIMH-sponsored+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Stimulation%22%5BJournal%5D)">Rigor and reproducibility in research with transcranial electrical stimulation: An NIMH-sponsored workshop.</a> Brain Stimulation. 11 (3), 465-480 (2018).</li>
<li>Turner, D. A., Degan, S., Galeffi, F., Schmidt, S., Peterchev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+dose-dependent+enhancement+of+cerebral+blood+flow+by+transcranial+AC+stimulation+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Stimulation%22%5BJournal%5D)">Rapid, dose-dependent enhancement of cerebral blood flow by transcranial AC stimulation in mouse.</a> Brain Stimulation. 14 (1), 80-87 (2020).</li>
<li>Shah, S., Chhatbar, P. Y., Feld, J. A., Feng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+tDCS+into+routine+inpatient+rehabilitation+practice+to+boost+post-stroke+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Stimulation%22%5BJournal%5D)">Integrating tDCS into routine inpatient rehabilitation practice to boost post-stroke recovery.</a> Brain Stimulation. 13 (4), 953-954 (2020).</li>
<li>Voroslakos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+effects+of+transcranial+electric+stimulation+on+brain+circuits+in+rats+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Direct effects of transcranial electric stimulation on brain circuits in rats and humans.</a> Nature Communications. 9 (1), 483(2018).</li>
<li>Alekseichuk, I., Mantell, K., Shirinpour, S., Opitz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+modeling+of+transcranial+magnetic+and+electric+stimulation+in+mouse%2C+monkey%2C+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Comparative modeling of transcranial magnetic and electric stimulation in mouse, monkey, and human.</a> Neuroimage. 194, 136-148 (2019).</li>
<li>Tavakoli, A. V., Yun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+alternating+current+stimulation+%28tACS%29+mechanisms+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Transcranial alternating current stimulation (tACS) mechanisms and protocols.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 214(2017).</li>
<li>Yavari, F., Jamil, A., Mosayebi Samani, M., Vidor, L. P., Nitsche, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+and+functional+effects+of+transcranial+electrical+stimulation+%28tES%29-An+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Basic and functional effects of transcranial electrical stimulation (tES)-An introduction.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 85, 81-92 (2018).</li>
<li>Wachter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+direct+current+stimulation+induces+polarity-specific+changes+of+cortical+blood+perfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Transcranial direct current stimulation induces polarity-specific changes of cortical blood perfusion in the rat.</a> Experimental Neurology. 227 (2), 322-327 (2011).</li>
<li>Han, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+responses+in+rat+brain+during+transcranial+direct+current+stimulation%3A+A+functional+near-infrared+spectroscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic responses in rat brain during transcranial direct current stimulation: A functional near-infrared spectroscopy study.</a> Biomedical Optics Express. 5 (6), 1812-1821 (2014).</li>
<li>Ayata, C., Lauritzen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spreading+depression%2C+spreading+depolarizations%2C+and+the+cerebral+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Spreading depression, spreading depolarizations, and the cerebral vasculature.</a> Physiological Reviews. 95 (3), 953-993 (2015).</li>
<li>Berenyi, A., Belluscio, M., Mao, D., Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-loop+control+of+epilepsy+by+transcranial+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Closed-loop control of epilepsy by transcranial electrical stimulation.</a> Science. 337 (6095), 735-737 (2012).</li>
<li>Hoang, K. B., Cassar, I. R., Grill, W. M., Turner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+and+stimulation+algorithms+for+adaptive+brain+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Biomarkers and stimulation algorithms for adaptive brain stimulation.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, 564(2017).</li>
<li>Turner, D., A, D. S., Hoffmann, U., Galleffi, F., Colton, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CVN-AD+Alzheimer%27s+mice+show+premature+reduction+in+neurovascular+coupling+in+response+to+spreading+depression+and+anoxia+compared+to+aged+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%27s+and+Dementia%22%5BJournal%5D)">CVN-AD Alzheimer's mice show premature reduction in neurovascular coupling in response to spreading depression and anoxia compared to aged controls.</a> Alzheimer's and Dementia. 17 (7), 1109-1120 (2021).</li>
<li>Colton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mNos2+deletion+and+human+NOS2+replacement+in+Alzheimer+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuropathology+and+Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">mNos2 deletion and human NOS2 replacement in Alzheimer disease models.</a> Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 73 (8), 752-769 (2014).</li>
<li>Castano-Prat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+slow+%28%3C1+Hz%29+and+fast+%28beta+and+gamma%29+neocortical+oscillations+in+the+3xTg-AD+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease+under+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Altered slow (<1 Hz) and fast (beta and gamma) neocortical oscillations in the 3xTg-AD mouse model of Alzheimer's disease under anesthesia.</a> Neurobiology of Aging. 79, 142-151 (2019).</li>
<li>Etter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+gamma+stimulation+rescues+memory+impairments+in+an+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Optogenetic gamma stimulation rescues memory impairments in an Alzheimer's disease mouse model.</a> Nature Communications. 10 (1), 5322(2019).</li>
<li>Iaccarino, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamma+frequency+entrainment+attenuates+amyloid+load+and+modifies+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Gamma frequency entrainment attenuates amyloid load and modifies microglia.</a> Nature. 540 (7632), 230-235 (2016).</li>
<li>Martorell, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-sensory+gamma+stimulation+ameliorates+Alzheimer%27s-associated+pathology+and+improves+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multi-sensory gamma stimulation ameliorates Alzheimer's-associated pathology and improves cognition.</a> Cell. 177 (2), 256-271 (2019).</li>
<li>Dawson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+stimulation+paired+with+rehabilitation+for+upper+limb+motor+function+after+ischaemic+stroke+%28VNS-REHAB%29%3A+A+randomised%2C+blinded%2C+pivotal%2C+device+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve stimulation paired with rehabilitation for upper limb motor function after ischaemic stroke (VNS-REHAB): A randomised, blinded, pivotal, device trial.</a> Lancet. 397 (10284), 1545-1553 (2021).</li>
<li>Hacker, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+brain+stimulation+in+early-stage+Parkinson+disease%3A+Five-year+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Deep brain stimulation in early-stage Parkinson disease: Five-year outcomes.</a> Neurology. 95 (4), e393-e401 (2020).</li>
<li>Duun-Henriksen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+era+in+electroencephalographic+monitoring%3F+Subscalp+devices+for+ultra-long-term+recordings%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">A new era in electroencephalographic monitoring? Subscalp devices for ultra-long-term recordings.</a> Epilepsia. 61 (9), 1805-1817 (2020).</li>
<li>Haneef, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sub-scalp+electroencephalography%3A+A+next-generation+technique+to+study+human+neurophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Sub-scalp electroencephalography: A next-generation technique to study human neurophysiology.</a> Clinical Neurophysiology. 141, 77-87 (2022).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu protokol, tES14'e beyin yanıtını tahmin etmek için bir biyobelirteç olarak CBF yanıtının in vivo, anestezi altında ölçümüne odaklanır. tES yanıtının uzun vadeli biyobelirteçleri, amiloid plak oluşumunun önlenmesi veya değişmesi gibi histolojik tedavi etkilerini içerir (yani, birkaç AD modelinde 40 Hz'de gama stimülasyonu ile)16,17,18,19, ancak kısa süreli biyobelirteçle...

Transkraniyal elektriksel stimülasyon (tES; sinüs dalgası stimülasyonu ile, tACS) beyin nöromodülasyonunayaygın, dışsal, invaziv olmayan bir yaklaşımdır 1,2. Daha önce, belirli dozlarda tES'nin (ve özellikle tACS'nin) altta yatan beyin bölgelerindeki serebral kan akışını (CBF) artırabileceğini varsaymıştık3. Ayrıca, uygulanan harici akım veya intrakraniyal elektrik alanı ile ortaya çıkan CBF yanıtları arasında bir doz-yanıt ilişkisi olabilir. Bununla birlikte, çoğu klinik stimülasyon protokolü, bir tedavi protokolü olarak planlanan süreler boyunca (yani 30-45 dakika) maksimum rahat cilt stimülasyon seviyesine (yani ~ 2 mA) odaklanmıştır 4,5. Kemirgenlerde, tES6'nın neden olduğu beyindeki elektrik alanlarını araştırmak için doğrudan kafatasına uygulanan invaziv, ekstrakraniyal beyin elektrotlarını kullanmak mümkündür. Bu nedenle, bu yaklaşımın amacı, ilgili frekanslarda tACS yoğunluğunun doz-yanıt ilişkisi açısından CBF değişiklikleri üzerindeki etkilerini belirlemektir. Bu doz-yanıt eğrisi, beyne uygulanan elektrik alanıyla ilgili olarak CBF'nin kısa süreli fizyolojik biyobelirteç doğrudan ölçümlerine dayanmaktadır3. Daha önce, daha büyük genliklerde, tipik olarak klinik olarak tACS tarafından indüklenen beyindeki elektriksel alanların aralığının ötesinde, indüklenen elektrik alanı ile korteks3'teki CBF arasında neredeyse doğrusal bir korelasyon olduğunu göstermiştik. Bununla birlikte, daha küçük alan stimülasyonu (yani, 1-5 mV / mm yoğunluğu) insanlarda kullanım için daha uygun ve uygulanabilir olabilir; bu nedenle, daha küçük CBF değişikliklerini tespit etmek için tekniklerimizi değiştirdik.
Bu makale, uyanık kemirgenler tarafından tolere edilebilen düşük alan kuvvetli tES alternatif sinüs akımlarının (tACS) CBF (yani 0.5-2.0 mA akım, 1-5 mV/mm elektrik alanı) üzerindeki etkilerini analiz etmek için bir protokolü açıklamaktadır5. Bu protokol, hem aktif tACS'nin beyin içindeki yayılımını (CBF tarafından izlendiği gibi) hem de hem diyagram hem de gerçek bir deneysel fotoğraf olarak gösterilen intrakraniyal elektriksel alan yoğunluğunu belirlemek için tACS sırasında yeni lazer benek görüntülemenin yanı sıra çift intrakraniyal cam elektrotların kullanılmasını içerir (Şekil 1). Doğrudan nöronal modülasyon, nöral plastisite ve astrosit aktivasyonu dahil olmak üzere beyinde tES'nin birçok olası fizyolojik etkisi vardır 7,8. CBF, tDCS 9,10 ile ölçülmüş olmasına rağmen, bu ölçümler yavaş, dolaylı ve beyindeki doz-yanıt fonksiyonunu değerlendirmek için yetersizdi. Bu nedenle, uygun kısa süreli biyobelirteçleri (yani, CBF, elektrik alanları) ve tACS'nin hızlı açma / kapama dizilerini kullanarak, artık doz-yanıt fonksiyonunu daha doğru bir şekilde tahmin edebiliriz. Ayrıca, CBF'yi ölçmek için hem fokal lazer Doppler probları (LD) hem de tanımlanmış ilgi alanlarına sahip lazer benek görüntüleme (LSI) dahil olmak üzere farklı teknikler uygulayabiliriz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65195/65195fig01.jpg"> Şekil 1: Transkraniyal stimülasyon diyagramı ve fotoğraf örneği. (A) Transkraniyal stimülasyon düzeneğinin şeması. Diyagram, koronal ve sagital sütürlere sahip bir fare kafatasını göstermektedir. Transkraniyal elektrotlar kafatasına lateral ve simetrik olarak yerleştirilir ve elektrotlar ile kafatası arasına cerrahi yapıştırıcı ve iletken macun ile monte edilir. Bu elektrotlar, stimülasyonun frekansını, genliğini ve süresini belirleyebilen, insan uyumlu, sabit akımlı bir stimülasyon cihazına bağlanır. İntrakraniyal elektriksel alanların değerlendirilmesi için, bilateral cam elektrotlar (~ 2 MΩ) serebral kortekse yerleştirilir (yani, küçük çapak deliklerinden kafatasının iç yönünün 1 mm yakınına) ve bunlar mineral yağ ile kapatılır ve boyun kasında AgCl toprakları bulunur (merkezde deri altı boyun dokusuna gömülü daha büyük teller olarak gösterilir). Bu cam elektrotlar bir DC amplifikatöre bağlanır ve çıkışları en az dört kanallı bir sayısallaştırıcı aracılığıyla kaydedilir. Bilateral lazer Doppler probları da kayıt için kafatasına yerleştirilir. Kafatasının tamamı ayrıca bir lazer benek görüntüleme cihazı veya içsel optik sinyal tespiti için yüksek çözünürlüklü (en az 1.024 x 1.024 piksel, 12-14 bit piksel derinliği) soğutmalı bir kamera ile görüntülenir. Hemoglobin izosbestik frekansı tipik olarak seçilir (yani, 562 nm) kan akışı görüntüleme için aydınlatma için. (B) Bilateral lazer Doppler problarını (solda), çapak deliklerinden yerleştirilen (iki taraflı) intrakraniyal cam kayıt mikroelektrotlarını ve tACS uyarıcı elektrotları lateral olarak gösteren gerçek bir deneyin yakın çekim görüntüsü. Kısaltma: tACS = transkraniyal alternatif akım stimülasyonu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65195/65195fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Mekanizmaları değerlendirmenin bir yolu olarak, K+ kaynaklı yayılma depolarizasyonu gibi CBF'yi de değiştiren diğer fizyolojik süreçlerle etkileşimleri de sorgulayabiliriz11. Ayrıca, düzenli zamanlarda planlanmış seanslar yerine, epilepsi tedavisi12 (yani klinik Neuropace cihazları) için önerildiği gibi, çeşitli hastalıklar için ek biyobelirteçlere dayalı kapalı döngü bir sistem geliştirmek de mümkündür. Örneğin, Parkinson hastalığı için kapalı döngü beyin stimülasyonu, genellikle yeterli dopamin (tipik olarak β bandı LFP'ler) yokluğunda bu hastalığa özgü içsel, anormal yerel alan potansiyellerine (LFP'ler) dayanır13.

<table><tbody><tr><td>Alkol pedleri</td><td>HenryShein</td><td>112-6131</td><td></td></tr><tr><td>Bebek mineral yağı</td><td>Johnson & Johnson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD 1 mL şırınga</td><td>Becton Dikinson</td><td>REF 305699</td><td></td></tr><tr><td>C3 Düz Yüzey Elektrotları</td><td>Neuronexus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BI NIH</td> kolonilerinden fareler<td></td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Bakır kafatası elektrotları</td><td>Ev hazırlığında</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digidata 1440, Clampex</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>FST</td><td>#5</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 forseps kavisli</td><td>Dumont</td><td>RS-5047</td><td></td></tr><tr><td>Göz merhemi</td><td>Major</td><td>LubiFresh P.M. NDC-0904-6488-38</td><td></td></tr><tr><td>Alevli/Kahverengi mikropipet çektirme</td><td>Sutter enstrüman A.Ş.</td><td>Model P-87</td><td></td></tr><tr><td>Forseps 11,5 cm hafif kavis&nbsp; tırtıklı</td><td>Roboz</td><td>RS-8254</td><td></td></tr><tr><td>İntramedik iğne 23 G</td><td>Becton Dikinson</td><td>REF 427565</td><td></td></tr><tr><td>KCl 1 M</td><td>Ev içi hazırlık</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler Probları</td><td>Moor Instruments</td><td>0.46 mm lazer doppler probları</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Benek Görüntüleme Cihazı</td><td>RWD</td><td>RFLSI-ZW</td><td></td></tr><tr><td>Mikro küret 13 cm</td><td>FST</td><td>10080-05</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası, 11,5 cm</td><td>Roboz</td><td>RS-5914</td><td></td></tr><tr><td>Fare anestezi fiksasyonu</td><td>Stoelting</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroconn-DS</td><td>Neurocare</td><td>DC-Stimulator Plus</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite Monitoring</td><td>Kent Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Q-ipuçları</td><td>Fisherbrand</td><td>22363167</td><td></td></tr><tr><td>Tuzlu %0,9 NaCl çözeltisi</td><td>Baxter</td><td>281322</td><td></td></tr><tr><td>Sensicam QE</td><td>PCO Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yazılımı</td><td>Axon Instruments Clampex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi yapıştırıcı</td><td>Covetrus</td><td>31477</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bant</td><td>3M Transpore</td><td>T9784</td><td></td></tr></tbody></table>

anestezi uygulanmış farelerde ekstrakraniyal uyarıcı elektrotların yerleştirilmesi ve serebral kan akımı ve İntrakraniyal elektrik alanlarının Ölçülmesi

Placement of Extracranial Stimulating Electrodes and Measurement of Cerebral Blood Flow and Intracranial Electrical Fields in Anesthetized Mice

Çeşitli nöronal aktivasyon formlarına serebral kan akışı (CBF) yanıtlarının saptanması, dinamik beyin fonksiyonunu ve beyne substrat beslemesindeki varyasyonları anlamak için kritik öneme sahiptir. Bu makale, transkraniyal alternatif akım stimülasyonuna (tACS) CBF yanıtlarını ölçmek için bir protokolü açıklamaktadır. Doz-yanıt eğrileri hem tACS (mA) ile meydana gelen CBF değişikliğinden hem de intrakraniyal elektrik alandan (mV / mm) tahmin edilir. İntrakraniyal elektrik alanını, beynin her iki tarafındaki cam mikroelektrotlarla ölçülen farklı genliklere dayanarak tahmin ediyoruz. Bu yazıda, CBF'yi ölçmek için bilateral lazer Doppler (LD) probları veya lazer benek görüntüleme (LSI) kullanmayı içeren deney düzeneğini açıklıyoruz; Sonuç olarak, bu kurulum elektrot yerleşimi ve stabilitesi için anestezi gerektirir. Genç kontrol hayvanlarında (12-14 hafta) yaşlı hayvanlara (28-32 hafta) kıyasla daha yüksek akımlarda (1.5 mA ve 2.0 mA) önemli ölçüde daha büyük bir yanıt göstererek, yaşın bir fonksiyonu olarak CBF yanıtı ile akım arasında bir korelasyon sunuyoruz (p < 0.005 fark). Ayrıca, nihai insan çalışmaları için önemli bir husus olan <5 mV / mm'lik elektrik alan kuvvetlerinde önemli bir CBF yanıtı gösteriyoruz. Bu CBF yanıtları ayrıca uyanık hayvanlara kıyasla anestezi kullanımından, solunum kontrolünden (yani entübe ve spontan solunum), sistemik faktörlerden (yani CO2) ve perisitler ve endotel hücrelerinin aracılık ettiği kan damarları içindeki lokal iletimden de güçlü bir şekilde etkilenir. Benzer şekilde, daha ayrıntılı görüntüleme/kayıt teknikleri, alan boyutunu tüm beyinden sadece küçük bir bölgeyle sınırlayabilir. Kemirgenler için hem ev yapımı hem de ticari elektrot tasarımları, bilateral cam DC kayıt elektrotları kullanılarak CBF ve intrakraniyal elektrik alanının eşzamanlı ölçümü ve görüntüleme yaklaşımları dahil olmak üzere tACS stimülasyonunu uygulamak için ekstrakraniyal elektrotların kullanımını açıklıyoruz. Şu anda bu teknikleri, Alzheimer hastalığı ve inme hayvan modellerinde CBF'yi artırmak için kapalı döngü bir format uygulamak için uyguluyoruz.

Temsili sonuçlar Şekil 4, Şekil 5 ve Şekil 6'da gösterilmektedir. Şekil 4, üst kanallarda iki intrakraniyal kayıt elektrotu ve alt kanallarda CBF yanıtları ile dört kanalın bir örneğini göstermektedir. tACS kafatası boyunca simetriktir, ancak genel olarak, intrakraniyal alan yanıtı, uygulanan AC akımları için hafif asimetriktir ve bir taraf diğerinden daha büyük bir yanıt gösterir (...

Beyin elektriksel alan ölçümleri ve ilgili bir biyobelirteç-serebral kan akışı açısından ekstrakraniyal stimülasyon için doz-yanıt eğrilerini değerlendirmek için bir protokol tanımladık. Bu protokol beyne invaziv elektrot yerleştirilmesini içerdiğinden, kontrollü solunum yerine spontan solunum tercih edilerek genel anestezi gerekir.

Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi

The detection of cerebral blood flow (CBF) responses to various forms of neuronal activation is critical for understanding dynamic brain function and ...

Serebral kan akışı, oksi deoksi hemoglobinin doygunluk derecesi ile ölçülebilir. Doygunluktaki bu artış yaşlanma ile ve Alzheimer modelinde azalır. Hem uygulanan akımları hem de intrakraniyal elektriksel alan yoğunluğunu kullanarak elektriksel stimülasyonun gücünü tahmin ediyoruz.En son gelişmeler, Alzheimer hastalığının hayvan modellerine uygulama için ekstrakraniyal stimülasyonun iyileştirilmesini içerir. Şu anda, hayvan modellerinde lazer spektral görüntüleme, çift fotomikroskopi ve fizyolojik kayıt dahil olmak üzere çoklu görüntüleme teknolojileri kullanılmaktadır. Buradaki zorluk, Alzheimer hastalığı modellerinde dinamik serebral kan akışı tepkilerindeki değişikliklerin mekanik temelini anlamaktır.Alzheimer model farelerinde metabolik zorluklara verilen yanıtlardaki eksiklikleri bulduk ve ekstra kraniyal stimülasyon uygulamak bu eksiklikleri iyileştiriyor. Protokolümüzün avantajı, stimülasyona dayalı bir yaklaşımın serebral kan akışını iyileştirmesidir.

placement-extracranial-stimulating-electrodes-measurement-cerebral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare beyninin iki taraflı M2 alanlarından yerel alan potansiyelinin (LFP) in vivo kaydını göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir fare sabitlenir ve prosedür için hazırlanır. LFP'leri kaydetmek için, karmaşık motor hareketlerinden sorumlu olan ikili M2 alanlarının hedef koordinatlarına mikroelektrotlar yerleştirin.

Fare Beyninin Her İki Yarımküresinden Yerel Alan Potansiyelinin Kaydedilmesi

Sigara kısıtlayıcı EEG radiotelemetry serbestçe hareket kemirgenler, in vivo uzun vadeli elektroenzefalografıye kaydetmek için değerli bir metodolojik bir yaklaşımdır. Bu ayrıntılı bir protokol MSS ritmi ve MSS ile ilgili davranışsal aşamalarında güvenilir kayıtları elde etmek için, beynin farklı bölgelerinde stereotaksik epidural ve derin intraserebral elektrot yerleştirme anlatılmaktadır.

Sigara frenleyici EEG Radiotelemetry: Epidural ve Derin İntraserebral Stereotaksik EEG Elektrot Yerleştirme

Bu çalışmada, üretan anestezi altında hiperdirect yolaktan çoklu saha in vivo elektrofizyolojik kayıtların nasıl gerçekleştirileceği üzerine metodoloji sunulmuştur.

Akut<emIn vivo</em&gt; Anestezi Uygulanan Sıçanlarda Hiperdirect Pathway&#39;den Lokal Alan Potansiyellerinin Elektrofizyolojik Kayıtları ve Çoklu Ünite Aktivitesi

Bu iletişim kuralı, farelerde güvenilir bir HFS yöntemi ayarlamak gösterilmiştir. Hipokampal dentat gyrus boyunca nöronların elektriksel olarak HFS doğrudan ve dolaylı olarak içinde vivotarafından uyarılır. Nöronal aktivite ve moleküler sinyal c-fos ve Notch1 immünfloresan boyama, sırasıyla incelenir; neurogenesis tarafından bromodeoxyuridine tahlil etiketleme sayılabilir.

Yüksek frekanslı stimülasyon tarafından fare dentat Gyrus aktivasyonu için invaziv bir yöntem

Biz iki taraflı ikincil motor korteks (m2) fareler, Yarımküre lateralizasyonu değerlendirmek için uygulanabilir yerel alan potansiyeli (LFP) içinde vivo elektrofizyolojik kayıt sunuyoruz. Çalışmada WT kontrolleri ile karşılaştırıldığında APP/PS1 fareler sol ve sağ m2 arasında senkronizasyon değişen seviyeleri ortaya çıktı.

Fareler Ikincil motor korteks bilateral lokal saha potansiyel kayıt ile Yarımküre lateralizasyon değerlendirilmesi

Bu protokol, fonksiyonel ultrason (fUS) kullanarak fare beynindeki hacimsel serebral hemodinamik varyasyonların nicelliğini açıklar. Duyusal stimülasyonun yanı sıra dinlenme durumu fonksiyonel bağlantısını takip eden 3D fonksiyonel aktivasyon haritası prosedürleri, uyuşturulmış ve uyanık farelerde açıklayıcı örnekler olarak sağlanır.

Transkraniyal Fonksiyonel Ultrason Görüntüleme Kullanan Farelerde Tüm Beyin 3D Aktivasyon ve Fonksiyonel Bağlantı Haritalaması

Protokol, serbestçe hareket eden bilinçli farelerde hücre dışı elektrofizyolojik özellikleri ortaya çıkarmak için motor kortekste (MC) hücre dışı kayıt metodolojisini ve ayrıca yerel alan potansiyellerinin (LFP'ler) ve sivri uçların veri analizini açıklar.

Serbestçe hareket eden farelerde çok kanallı hücre dışı kayıt

Fare beyninin in vivo transkraniyal manyetik uyarımını sağlamak için milimetre büyüklüğünde bir bobin ile birleştirilmiş düşük maliyetli bir elektroensefalografik kayıt sistemi önerilmektedir. Özel yapım, esnek, çoklu elektrot dizisi substratına sahip geleneksel vidalı elektrotlar kullanılarak, transkraniyal manyetik stimülasyona yanıt olarak fare beyninden çok bölgeli kayıt gerçekleştirilebilir.

Fare Beynini In Vivo'da Transkraniyal Olarak Uyarmak için Milimetre Boyutlu Bir Bobin ile Birleştirilmiş Düşük Maliyetli Elektroensefalografik Kayıt Sistemi

Bu protokol, kafasına sabitlenmiş farelerin beyin sapından in vivo, yüksek yoğunluklu tek nöron kayıtları elde etmek için bir yöntemi açıklar. Bu yaklaşım, genel anestezi öncesinde ve sırasında Hızlı Göz Hareketi (REM) uykusu sırasında aktif olmayan bir beyin sapı bölgesi olan ventrolateral periakuaduktal grideki nöronların aksiyon potansiyel ateşlemesini ölçmek için kullanılır.

Kafası Sabit Farelerin Beyin Sapından Akut Tek Üniteli Çoklu Elektrot Kayıtları

Bu protokol, serbestçe hareket eden kemirgen EEG'sini kaydetmek için güvenilir ve kolay erişilebilir bir sistem oluşturmak için geliştirilmiştir.

Serbestçe Hareket Eden Farelerde Kronik Çok Bölgeli Elektroensefalografi Kaydı için Uygun Maliyetli ve Minimal İnvaziv Bir Protokol

Keşfedin ekstrakraniyal elektrot yerleştirme ve serebral kan akımı ölçümü yöntemini anestezili farelerde Alzheimer hastalığı modellerinde kullanarak. Bu protokol nörovasküler yanıtları değerlendirmek için gelişmiş görüntüleme teknikleri sunar.

Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal

Anestezi Uygulanmış Farelerde Ekstrakraniyal Uyarıcı Elektrotların Yerleştirilmesi ve Serebral Kan Akımı ve İntrakraniyal Elektrik Alanlarının Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet