PD-1/PD-L1 Etkileşiminin PDL1-Vaxx Peptit Aşısı ile İndüklenen Antikor Blokajının Manyetik Floresan Boncuk Tabanlı Çift Raportörlü Akış Analizi
7 Temmuz 2023
Kontrol noktası inhibitörleri, kansere karşı savaşa yönelik tedavilerin geliştirilmesinde önemli hedeflerdir. Bu rapor, PD-1/PDL1 kompleks oluşumunu bloke eden nötralize edici poliklonal antikor üretimini indükleyen yeni bir PDL1 peptit bazlı kanser aşısı olan PDL1-Vaxx'ı tanıtmaktadır. Bu çalışma aynı zamanda bu aktiviteyi analiz etmek için floresan boncuk bazlı bir tahlilin geliştirilmesini ve test edilmesini de detaylandırmaktadır.
Profesör Pravin Kaumaya liderliğindeki projemiz, kansere karşı daha iyi savaşmak için bağışıklık sistemini güçlendirmek için kullanılabilecek B hücreli epitop peptit aşıları geliştirmeye odaklanmıştır. Bağışıklık kontrol noktası hedeflerini hedefleyen peptit aşılarının, hasta sonuçlarını iyileştirmek için diğer tedavilerle bile birleştirilebileceğine inanıyoruz. Anti PD-L1 antikorlarımızın bloke etme yeteneğini, insan rekombinant PD-L1 proteininin MagPlex boncuklarına bağlandığı geleneksel bir mikroboncuk testinde test etmek istedik.
PD-L1 boncuklara bağlandıktan sonra, PD-1 ligandı için düşük bir bağlanma kapasitesine sahip olduklarını bulduk. Bu, bu test engelleme yolunu kullanmamızı engelledi. Proteinin boncuklara bağlanması ligand veya antikorlara bağlanmayı inhibe ettiğinde, çözelti içindeki test antikorları ile ön işlem bir seçenektir, daha sonra hedef bloker karışımına ligand kaplı boncuklar eklenir.
Etkileşimleri incelenebilir. Bu, aynı hedef-ligand-bağlanma etkileşimini incelemek için farklı bir yol olabilir B-Vaxx, PD1-Vaxx, PDL1-Vaxx ve CTLA4-Vaxx kanser aşılarını geliştirdik. Bu aşılar HER2'yi hedef alır ve çeşitli bağışıklık kontrol noktası belirteçleri çeşitli kanser türlerinde rol oynar.
B-Vaxx ve PD1-Vaxx, Avustralya ve ABD'de devam eden klinik çalışmalardadır. Bağışıklık kontrol noktası aşılarımızın daha fazla hastaya fayda sağlayacağını umuyoruz. Önceki mikroküre deneylerinde, PD-1'in ligandı PD-L1 ile iyi etkileşime girdiğini bulduk. Bu nedenle, PD-1 etiketli MagPlex boncuklarını eklemeden önce anti-PD-L1 peptit antikorlarını biyotinile PD-L1 proteinine önceden bağlayarak protokolü yeniden tasarladık.
Bu, antikorlarımızı PD-1 / PD-L1 etkileşimini bloke etme yetenekleri açısından test etmemizi sağladı. Tedavi direncinin üstesinden gelen kombinasyon immünoterapilerine odaklanmaya devam edeceğiz. Ayrıca tümör büyümesini daha iyi inhibe eden, metastazı önleyen ve hasta sağkalım oranlarını uzatan daha etkili kombinasyon tedavilerini keşfetmek istiyoruz.
Genel Bakış
Bu çalışma, nötralize edici antikorlar indükleyerek kansere karşı bağışıklık yanıtını artırmak için tasarlanmış, PDL1 peptit tabanlı yeni bir kanser aşısı olan PDL1-Vaxx'ı sunmaktadır. Araştırma ayrıca, bu antikorların PD-1/PD-L1 etkileşimlerine karşı bloklama aktivitesini analiz etmek için geliştirilen floresan boncuk tabanlı bir testi detaylandırmaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- İmmünoloji
- Kanser tedavisi
- Aşı geliştirme
Arka Plan
- Kontrol noktası inhibitörleri kanser tedavisinde kritik öneme sahiptir.
- PD-L1, immün kontrol noktası blokajı için önemli bir hedeftir.
- Peptit aşılar potansiyel olarak immün yanıtları artırabilir.
- Terapilerin kombine edilmesi hasta sonuçlarını iyileştirebilir.
Çalışmanın Amacı
- PD-L1'i hedefleyen peptit tabanlı bir aşı geliştirmek.
- aşının antikor üretimini tetiklemedeki etkinliğini değerlendirmek.
- antikor blokaj aktivitesini ölçmek için güvenilir bir analiz yöntemi oluşturmak.
Kullanılan Yöntemler
- PDL1-Vaxx peptid aşısının geliştirilmesi.
- Mikroboncuk deneyi kullanılarak anti-PD-L1 antikorlarının test edilmesi.
- Antikor testi için yeniden mühendislik protokolleri.
- Floresan yoğunluğunu ölçmek için akış sitometrisi.
Temel Sonuçlar
- PDL1-Vaxx, nötralize edici antikorları başarıyla indüklemiştir.
- Mikrobonsuk deneyi, antikorların bloklama kapasitesini ortaya koymuştur.
- Yeniden yapılandırılan protokoller test doğruluğunu artırmıştır.
- Artırılmış etkinlik için kombinasyon tedavileri araştırılmaktadır.
Sonuçlar
- PDL1-Vaxx, bir kanser aşısı olarak gelecek vaat etmektedir.
- Floresan boncuk assayleri, antikor etkileşimlerini analiz etmek için etkilidir.
- Kombinasyon tedavilerini optimize etmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önem
Kontrol noktası blokajı, immüno-onkolojinin temel taşlarından biri olmaya devam etmektedir; ancak hastaların değişken yanıtları, mekanistik olarak doğrulanmış yeni terapötiklere olan ihtiyacı artırmaktadır. PDL1-Vaxx ile indüklenen antikor blokajına yönelik çift raporlu manyetik boncuk deneyi, keşif ve preklinik aşama arayüzünde immün kontrol noktası inhibisyonunu değerlendirmek için kantitatif ve tekrarlanabilir bir platform sunar. Bu iş akışı, antikor fonksiyonuna ilişkin öngörücü güveni destekler ve yeni nesil immünoterapiler için portföy seçimi sürecine bilgi sağlar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Antikor aracılı PD-1/PD-L1 yolak blokajının doğrudan sorgulanmasını sağlar.
- Fonksiyonel antikor inhibisyonunu nicelendirerek mekanistik risk azaltma sürecini destekler.
- İmmün kontrol noktası aşı adayları için hedef validasyonunu kolaylaştırır.
- İleri geliştirme için öncü antikorların önceliklendirilmesine yönelik veri sağlar.
Tarama ve Assay Geliştirme
- PD-L1'e karşı antikor taraması için standartlaştırılmış, kantitatif bir analiz sunar.
- Antikor adayları arasında blokaj etkinliğinin tekrarlanabilir ölçümünü sağlar.
- İmmün kontrol noktası inhibitörlerinin yüksek kapasiteli taraması için ölçeklenebilirliği destekler.
- Aday antikorların ve kontrollerin çapraz karşılaştırması için güvenilir veriler üretir.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel süreklilik için in vitro blokaj verilerini preklinik etkinlik modelleriyle uyumlu hale getirir.
- Aşı kaynaklı antikorların hayvan çalışmalarına risk ayarlı şekilde aktarılmasını destekler.
- Kombinasyon immünoterapi stratejilerini bilgilendirmek için mekanistik kanıtlar sağlar.
- Hastalık modelleriyle ilgili antikor fonksiyonlarının kantitatif değerlendirmesine olanak tanır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu çift raporlu boncuk testi, immün kontrol noktası aşı programları için erken keşif, öncü bileşik belirleme ve preklinik doğrulama aşదaları arasında köprü kurar.
- Keşif Biyolojisi: Hipotez odaklı hedef doğrulamayı destekleyerek PD-1/PD-L1 antikor blokajını nicelleştirir.
- Tarama: Antikor etkinliğinin değerlendirilmesi için tekrarlanabilir, kantitatif okumalar sağlar.
- Analitik: Adaylar arasında inhibisyon yüzdelerinin ve bağlanma sinyallerinin doğrudan karşılaştırılmasına olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: In vitro blokajı, preklinik modellerdeki in vivo etkinlikle ilişkilendirir.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Diğer kontrol noktası hedeflerine ve antikor modalitelerine uyarlanabilir bir platform analizi oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Antikor fonksiyonu ve hedef etkileşimi konusundaki öngörü güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Tekrarlanabilirlik ve ölçeklenebilirlik için blokaj değerlendirmesini standardize eder.
- Stratejik Değer: Kontrol noktası aşı adayları ve kombinasyonları için devam/dur kararlarına temel oluşturur.
- Portföy Etkisi: İlerletilecek antikor adaylarının risk ayarlı önceliklendirilmesini sağlar.
Uygulama Hususları
- İmmünolojik analiz geliştirme ve akış sitometrisi analizi konusunda uzmanlık gerektirir.
- Çift raporlayıcı akış analiz enstrümantasyonuna ve manyetik boncuk platformlarına erişim gereklidir.
- Analiz tekrarlanabilirliği için ekipler arası sıkı bir standardizasyon gerektirir.
- Protokol optimizasyonu ile çeşitli antikor kaynaklarına ve kontrol noktası hedeflerine uyarlanabilir.
- Güvenilir yorumlama için valide edilmiş reaktiflere ve kantitatif kontrollere bağımlıdır.
