Name: Otomatik Hücre İşlemcisinde Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-18T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Öğrenin, otomatik hücre işlemcisi kullanarak kimerik antijen reseptörü T hücresi üretimini. Bu yarı otomatik yöntem, klinik düzeyde CAR T-hücreleri üretmek için esnek ve maliyet etkin bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, çeşitli kişi ve kuruluşların bu çalışmaya katkılarını kabul eder. Hücre ve Gen Terapisi Laboratuvarı ve Penn Translasyonel ve İlişkili Çalışmalar Laboratuvarı, süreç geliştirme ve IND sunumlarına hazırlık konusunda değerli yardımlar sağladı. Melissa Varghese ve Amanda DiNofia, bu makalenin temelini oluşturan IND sunumları için süreç geliştirme ve hazırlığa katkıda bulundular. Bu çalışma, Philadelphia Çocuk Hastanesi Hücre ve Gen Terapisi İşbirliği'nin Hızlandırma Hibesi ile desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca teknik ve araştırma destekleri için Miltenyi Biotec'e teşekkür eder. Şekil 1 , telif hakkı © 2023 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG kapsamındadır; Tüm hakları saklıdır.

Klinik Ölçekli CAR-T Hücre Üretimi için Otomatik İşlemci

<ol><li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tisagenlecleucel+in+children+and+young+adults+with+B-cell+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tisagenlecleucel in children and young adults with B-cell lymphoblastic leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 378 (5), 439-448 (2018).</li>
<li>Shah, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+anti-CD20%2C+anti-CD19+CAR+T+cells+for+relapsed+B+cell+malignancies%3A+A+phase+1+dose+escalation+and+expansion+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bispecific anti-CD20, anti-CD19 CAR T cells for relapsed B cell malignancies: A phase 1 dose escalation and expansion trial.</a> Nature Medicine. 26 (10), 1569-1575 (2020).</li>
<li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor+T+cells+for+sustained+remissions+in+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371 (16), 1507-1517 (2014).</li>
<li>Grupp, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor-modified+T+cells+for+acute+lymphoid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor-modified T cells for acute lymphoid leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 368 (16), 1509-1518 (2013).</li>
<li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+humanized+CD19-targeted+chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29-modified+T+cells+in+children+and+young+adults+with+relapsed%2Frefractory+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficacy of humanized CD19-targeted chimeric antigen receptor (CAR)-modified T cells in children and young adults with relapsed/refractory acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 128 (22), 217(2016).</li>
<li>Mock, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+manufacturing+of+CAR-T+cells+for+adoptive+immunotherapy+using+CliniMACS+Prodigy%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Automated manufacturing of CAR-T cells for adoptive immunotherapy using CliniMACS Prodigy.</a> Cytotherapy. 18 (8), 1002-1011 (2016).</li>
<li>Fernández, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GMP-compliant+manufacturing+of+NKG2D+CAR+memory+T+cells+using+CliniMACS+Prodigy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">GMP-compliant manufacturing of NKG2D CAR memory T cells using CliniMACS Prodigy.</a> Frontiers in Immunology. 10 (10), 2361(2019).</li>
<li>Zhu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-system+manufacturing+of+CD19+and+dual-targeted+CD20%2F19+chimeric+antigen+receptor+T+Cells+using+CliniMACS+Prodigy+device+at+an+academic+medical+center%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Closed-system manufacturing of CD19 and dual-targeted CD20/19 chimeric antigen receptor T Cells using CliniMACS Prodigy device at an academic medical center.</a> Cytotherapy. 20 (3), 394-406 (2018).</li>
<li>Zhang, W., Jordan, K. R., Schulte, B., Purev, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+clinical+grade+CD19+chimeric+antigen+receptor+T+cells+produced+using+automated+CliniMACS+prodigy+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Characterization of clinical grade CD19 chimeric antigen receptor T cells produced using automated CliniMACS prodigy system.</a> Drug Design, Development and Therapy. 12 (12), 3343-3356 (2018).</li>
<li>Abou-El-Enein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scalable+manufacturing+of+CAR+T+cells+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Scalable manufacturing of CAR T cells for cancer immunotherapy.</a> Blood Cancer Discovery. 2 (5), 408-422 (2021).</li>
<li>Miltenyi Biotec. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CliniMACS+Prodigy+User+Manual%22">CliniMACS Prodigy User Manual</a>. , https://static.miltenyibiotec.com/asset/150655405641/document_h0fd9i4al17q32uhfuf4h7lu25?content-disposition=inline (2021).</li>
<li>Ghassemi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+manufacturing+of+non-activated+potent+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Rapid manufacturing of non-activated potent CAR T cells.</a> Nature Biomedical Engineering. 6 (2), 118-128 (2022).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chemistry%2C+manufacturing%2C+and+control+%28CMC%29+information+for+human+gene+therapy+investigational+new+drug+applications+%28INDs%29+guidance+for+industry%22">Chemistry, manufacturing, and control (CMC) information for human gene therapy investigational new drug applications (INDs) guidance for industry</a>. , https://www.fda.gov/media/113760/download (2020).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Considerations+for+the+development+of+chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29+T+cell+products+draft+guidance+for+industry%22">Considerations for the development of chimeric antigen receptor (CAR) T cell products draft guidance for industry</a>. , https://www.fda.gov/media/156896/download (2022).</li>
</ol>

S.K., S.G. ve Y.W., Miltenyi Biotec'ten araştırma desteği aldı.

CAR-T hücre tedavisi, B hücresi ve diğer maligniteler için umut verici bir tedavi yaklaşımı olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, geleneksel CAR-T hücre üretim yöntemlerinin, yüksek maliyet, emek yoğun üretim ve kontaminasyon riskini artıran açık adımlar gibi çeşitli sınırlamaları vardır. Son zamanlarda, bu sınırlamaları ele almak için Miltenyi CliniMACS Prodigy ("işlemci") dahil olmak üzere birkaç yarı otomatik platform ortaya çıktı. Bu yazıda açıklanan işlemciye entegre edilen T hücresi transdüksiyonu (TCT) işlemi...

Bir kimerik antijen reseptörünü (CAR) eksprese etmek üzere tasarlanmış T hücrelerinin evlat edinme transferi, refrakter B hücreli maligniteleriolan hastaların tedavisinde dikkate değer bir etkinlik göstermiştir 1,2,3,4,5. Bununla birlikte, CAR-T hücreleri için geleneksel üretim yöntemleri emek yoğundur, zaman alıcıdır ve son derece uzmanlaşmış adımları gerçekleştirmek için yüksek eğitimli teknisyenler gerektirir. Örneğin, otolog bir CAR-T hücre ürününün geleneksel üretim süreci, T hücrelerini zenginleştirmek için yoğunluk gradyanlı santrifüjleme, elütriasyon veya manyetik ayırma, steril bir şişede viral bir vektör ile aktivasyon ve transdüksiyon ve hasat ve formülasyondan önce bir biyoreaktörde genişlemeyi içerir. Son zamanlarda bu süreci kısmen otomatikleştirmeyi amaçlayan çeşitli sistemler ortaya çıkmıştır. Örneğin, Miltenyi CliniMACS Prodigy (bundan böyle "işlemci" olarak anılacaktır), bu adımların çoğunu otomatik bir şekildegerçekleştirebilen otomatik bir hücre işleme cihazıdır 6,7,8,9. Geleneksel ve otomatik CAR-T üretim yöntemlerinin derinlemesine bir tartışması, yakın tarihli bir inceleme makalesindesunulmuştur 10.
İşlemci, hematopoietik progenitör hücrelerin işlenmesi için ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) onaylı bir tıbbi cihaz olan CliniMACS Plus'ın işlevselliği üzerine kuruludur. İşlemci, hücrelerin otomatik olarak yıkanmasına, fraksiyonlanmasına ve yetiştirilmesine izin veren bir hücre yetiştirme ünitesi içerir (Şekil 1). T hücresi transdüksiyonu (TCT) işlemi, manuel CAR-T hücresi üretimini büyük ölçüde kopyalayan işlemci cihazı içinde önceden ayarlanmış bir programdır. TCT, grafiksel bir kullanıcı arayüzü ("Etkinlik Matrisi", Şekil 2) kullanarak özelleştirilebilir hücre işlemeye izin verir. İşlemci birçok adımı otomatikleştirdiğinden ve birden fazla cihazın işlevselliğini tek bir makinede birleştirdiğinden, teknoloji uzmanlarından daha az eğitim ve özel sorun giderme becerileri gerektirir. Tüm adımlar kapalı, tek kullanımlık bir boru seti içinde gerçekleştirildiğinden, işlemci, açık bir üretim süreci için kabul edilebilir olarak kabul edilenden daha az sıkı hava işleme altyapısına sahip tesislerde çalıştırılabilir. Örneğin, işlemciyi ISO sınıf 8 (AB sınıfı C ile karşılaştırılabilir) sertifikalı bir tesiste çalıştırıyoruz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65488/65488fig01.jpg"> Şekil 1: T hücresi transdüksiyon sistemini kullanarak CAR-T hücresi üretimi. Gösterilen, boru setinin takılı olduğu işlemcidir. Boru seti, işleme tamponu, kültür ortamı ve lentiviral vektör içeren torbalar gibi diğer bileşenlerin steril kaynak yoluyla bağlanmasına izin verir. Lökoferez ürünü Uygulama torbasına eklendikten sonra, T Hücre Seçim Boncukları ile etiketlenebilir, Ayırma sütunundan geçirilebilir ve daha sonra Yeniden Uygulama torbasına aktarılabilir. Seçilen hücreler daha sonra kültür için aletin Yetiştirme ünitesine yönlendirilir ve Aktivasyon reaktifi ile aktive edilir (bkz. Nihai ürün, Hedef hücre torbasında toplanır. Proses boyunca, kalite kontrol için numuneleri aseptik olarak çıkarmak mümkündür. Dairelerin içindeki gri sayılar, sıvı yolunu boru setinden geçiren işlemci üzerindeki numaralı valfleri temsil eder. 11'in izniyle çoğaltılmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65488/65488fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65488/65488fig02.jpg"> Şekil 2: Etkinlik Matrisi. T hücresi seçimi ve aktivasyonundan sonra, CAR-T hücresi üretim sürecinin geri kalanı tamamen özelleştirilebilir. Aktiviteler eklenebilir veya silinebilir ve uygun gün ve saat için planlanabilir ve aktivite sonrası kültür hacmi belirtilebilir (Hacim). Örneğin, Transdüksiyon aktivitesi 1. Gün saat 10:00'da başlayacak şekilde yapılandırıldı ve aktivitenin sonundaki kültür hacmi 100 mL olarak ayarlandı. Aktivite Matrisi, yetiştirme dönemi boyunca düzenlenebilir. İşlemin durumu, işleme cihazının entegre ekranından izlenebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65488/65488fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Bu makalenin amacı, işlemciyi kullanarak CAR-T hücrelerinin üretiminin ayrıntılı bir incelemesini sağlamak ve ayrıca düzenleyiciler tarafından bir araştırma amaçlı yeni ilaç (IND) başvurusunu onaylamak için muhtemelen gerekli olacak süreç içi ve ürün salım testleri hakkında rehberlik sağlamaktır. Sunulan protokol, satıcının önerdiği yaklaşıma yakın kalır ve şu anda tek merkezli bir araştırmacı tarafından başlatılan faz I/II klinik araştırmasında değerlendirilmekte olan IND 28617'nin altında yatan protokoldür. Bu çalışma, B hücreli akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) veya B-soy lenfoblastik lenfoma (B-Lly) hastaları için insanlaştırılmış CD19'a yönelik otolog CAR-T hücreleri üretmek için bu işlemciyi kullanmanın güvenliğini ve etkinliğini belirlemeyi amaçlamaktadır [NCT05480449]. Deneme Eylül 2022'de başladı ve B-ALL veya B-Lly ile 0-29 yaş arası 89 hastaya kadar kaydedilmesi planlanıyor. Denemeden elde edilen bazı üretim sonuçlarını makalede bildiriyoruz.
Makale, izlenecek adımları içeren bir protokol olarak sunulsa da, başkalarının kendi CAR-T hücre üretim süreçlerini optimize etmeye başlaması için bir başlangıç noktası olarak düşünülmesi gerektiğini belirtmek isteriz. Sunulan protokoldeki olası varyasyonların kapsamlı olmayan bir listesi şunları içerir: başlangıç materyali olarak dondurularak saklanmış T hücreleri yerine taze kullanılması; farklı bir T hücresi zenginleştirme yöntemi kullanmak veya tamamen atlamak; IL2 yerine IL7/IL15 gibi farklı besiyerleri ve sitokin kokteylleri kullanarak; insan AB serumunun konsantrasyonunu değiştirmek veya tamamen atlamak; transdüksiyon zamanlaması; "çok isabetli" transdüksiyonların kullanılması; değişen ajitasyon, kültür hacimleri ve beslenme programı; nükleik asitlerin veya lentiviral olmayan vektörlerin elektroporasyonu dahil olmak üzere farklı genetik transfer yöntemlerinin kullanılması; farklı bir nihai formülasyon tamponu ve/veya kriyoprotektan kullanarak; ve daha sonra infüzyon için kriyoprezervasyon yerine CAR-T hücrelerini taze olarak infüze etmek. Bu varyasyonlar, terapötik ürünün hücresel bileşimi ve gücü üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Genel Süreç Adımı</td>
			<td>İşlem Günü</td>
			<td colspan="4">Teknik Detaylar</td>
		</tr><tr><td>Hücre Zenginleştirme</td>
			<td rowspan="2">Gün 0</td>
			<td colspan="4">CD4+/CD8+ T hücrelerinin seçimi</td>
		</tr><tr><td>Hücre Aktivasyonu</td>
			<td colspan="4">T hücre kültürü tohumlama ve aktivasyonu</td>
		</tr><tr><td>Hücre İletimi</td>
			<td>1. Gün</td>
			<td colspan="4">Lentiviral transdüksiyon (100 mL kültür hacmi)</td>
		</tr><tr><td rowspan="12">Hücre Genişlemesi (ardından hücre formülasyonu)</td>
			<td>2. Gün</td>
			<td colspan="4">--</td>
		</tr><tr><td>3. Gün</td>
			<td colspan="4">Kültür Yıkama (1 döngü); Çalkalayıcı etkinleştirildi; Kültür hacmi 200 mL'ye yükselir</td>
		</tr><tr><td>4. Gün</td>
			<td colspan="4">--</td>
		</tr><tr><td>5. Gün</td>
			<td colspan="4">Besleme (50 mL); Kültür hacmi 250 mL'lik son hacme ulaşır</td>
		</tr><tr><td>6. Gün</td>
			<td colspan="4">Proses içi numune; Medya değişimi (-125 mL / +125 mL)</td>
		</tr><tr><td>7. Gün</td>
			<td colspan="4">Medya değişimi (-150 mL / +150 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>8. Gün</td>
			<td colspan="4">Proses içi numune; Medya değişimi (-150 mL / +150 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>9. Gün</td>
			<td colspan="4">Medya değişimi (-180 mL / +180 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>10. Gün</td>
			<td colspan="4">Proses içi numune; Medya değişimi (-180 mL / +180 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>11. Gün</td>
			<td colspan="4">Medya değişimi (-180 mL / +180 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>12. Gün</td>
			<td colspan="4">Medya değişimi (-180 mL / +180 mL) veya Hasat</td>
		</tr><tr><td>13. Gün</td>
			<td colspan="4">Hasat</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: İşlem zaman çizelgesi ve genel bakış. Bu tablo, mevcut bir klinik araştırmada kullanılan TCT süreç adımlarını özetlemektedir [NCT05480449]. İşlem, 0. günde CD4+/CD8+ seçimi, kültür tohumlaması ve aktivasyonu ile T hücresi zenginleştirmesi ile başlar, ardından 1. günde transdüksiyon ile devam eder. Hücreler 48 saat dinlenir, ardından bir kültür yıkaması, kültür hacminin 200 mL'ye çıkarılması ve bir çalkalama mekanizması kullanılarak çalkalanması gelir. 6. Günde, ilk proses içi numune alınır. Hücreler, en az üç tam doz CAR-T hücresi (hasta &lt;50 ×kg, aksi takdirde 2,5 × 10 8 CAR-T hücresi) ve kalite kontrol testi (~2 × 106 CAR-T hücresi) için yeterli hücre mevcut olduğunda toplanır; veya kültür toplam 4-5 x 109 hücreye ulaştığında. Kısaltmalar: TCT = T hücre transdüksiyonu; CAR-T = kimerik antijen reseptörü T hücreleri; MACS = manyetik olarak etkinleştirilen hücre sıralaması.

<table><tbody><tr><td>12 x 75 borosilikat tüp</td><td>Charles Nehri</td><td>TL1000</td><td></td></tr><tr><td>20 mL Reaktif Torbası</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-631</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konik Tüp</td><td>Fisher</td><td>05-539-10</td><td></td></tr><tr><td>150 mL Transfer Seti</td><td>Fenwal</td><td>4R2001</td><td></td></tr><tr><td>2.000 mL Transfer</td><td>Seti Fenwal</td><td>4R2041</td><td></td></tr><tr><td>7AAD</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>BDB559925</tr><tr><td>Alkol Hazırlama</td><td>Tyco / Sağlık Çantası</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Erişim</td><td>Medline</td><td>2300E-0500</td><td></td></tr><tr><td>CD19 APC-Vio770 REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-643</td><td></td></tr><tr><td>CD19 CAR Algılama Reaktifi Biotin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-129-550</td><td></td></tr><tr><td>CD19 PE</td><td>BD</td><td>555413</td><td></td></tr><tr><td>CD3 APC</td><td>BD</td><td>340440</td><td></td></tr><tr><td>CD4 VioBright FITC REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-229</td><td></td></tr><tr><td>CD45 VioBlue REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-637</td><td></td></tr><tr><td>CD8 APC-Vio770 REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-681</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Referans Boncukları 10um</td><td>Nexcelom</td><td>B10-02-020</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Referans Boncukları 15um</td><td>Nexcelom</td><td>B15-02-010</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Referans Boncukları 5um</td><td>Nexcelom</td><td>B05-02-050</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Slaytları</td><td>Nexcelom</td><td>CHT4-SD100-002</td><td></td></tr><tr><td>CliniMACS CD4 GMP Mikro Boncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>276-01</td><td>CD4 reaktifi</td></tr><tr><td>CliniMACS CD8 GMP MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>275-01</td><td>CD8 reaktifi</td></tr><tr><td>CliniMACS PBS/EDTA Tampon</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-021-201</td><td>Tampon</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Origen</td><td>CP-10</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma Torbası 50 mL</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-074-400</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma Şişesi, 1.8 mL</td><td>Nunc</td><td>12565171N</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma Şişesi, 4.5 mL</td><td>Nunc</td><td>12565161N</td><td></td></tr><tr><td>İnsan AB serumu</td><td>Valley Biyomedikal</td><td></td><td>Steril filtrelenmiş, ısıyla inaktive edilmiş</td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini% 25</td> <td>Grifols</td><td>68516-5216-1</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini% 5</td> <td>Grifols</td><td>68516-5214-1</td><td></td></tr><tr><td>MACS GMP Rekombinant İnsan IL-2</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-148</td><td>Sitokinler</td></tr><tr><td>MACS GMP T Hücre TransAct</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-076-202</td><td>Aktivasyon reaktifi</td></tr><tr><td>MycoSeq Mycoplasma Tespit Kiti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>4460623</td><td></td></tr><tr><td>İğneler, Hipodermik 14G</td><td>Medline</td><td>SWD200573</td><td></td></tr><tr><td>İğneleri, SlideSafe 18G</td><td>BD</td><td>B-D305918</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları, 2-200 &mu; L, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Eppendorf</td><td>022492209</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları, 50-1000 &mu; L, ayrı ayrı sarılmış</td><td>Eppendorf</td><td>022492225</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler 10 mL</td><td>Fisher</td><td>13-678-27F</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler 25 mL</td><td>Fisher</td><td>13-675-30</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler 5 mL</td><td>Fisher</td><td>13-678-27E</td><td></td></tr><tr><td>Plazmalit-A</td><td>Baxter</td><td>2B2544X</td><td>Elektrolit çözeltisi</td></tr><tr><td>Prodigy TS520 Boru Seti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076- 600</td><td>Boru seti</td></tr><tr><td>Steril Alan</td><td>Medline</td><td>NON21001</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin PE-Vio770</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-793</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 1 mL</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 10 mL</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 3 mL</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 30 mL</td><td>BD</td><td>302832</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 50 mL</td><td>BD</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>TexMACS GMP Orta</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-306</td><td>Orta</td></tr><tr><td>Üçlü Örnekleme Adaptörü</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-609</td><td></td></tr><tr><td>Viral Vektör</td><td>CHOP Klinik Vektör Çekirdeği</td><td></td><td>huCART19</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biological Safety Kabine</td><td>Baker Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Auto 2000</td><td>Nexcelom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CliniMACS Prodigy</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-075-301</td><td>İşlemci</td></tr><tr><td>Kontrollü Hız Dondurucu</td><td>Planya / Kryosave</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Endosafe nexgen-PTS150K</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mettler Denge</td><td>Mettler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğutmalı Santrifüj</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğutmalı Santrifüj</td><td>Fisher Sci</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SCD Steril Boru Kaynakçı</td><td>Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sebra Tüp Mühürleyen</td><td>Sebra</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Varitherm</td><td>Barkey</td><td></td><td>Kuru çözülme cihazı</td></tr><tr><td>XN-330 Hematoloji Analiz Cihazı</td><td>Sysmex</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

otomatik hücre İşlemcisinde kimerik antijen reseptörü t hücresi Üretimi

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

Kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücreleri, çeşitli malign ve malign olmayan hastalıkların tedavisi için umut verici bir immünoterapötik yaklaşımı temsil eder. CAR-T hücreleri, bir hücre yüzeyi hedefini tanıyan ve ona bağlanan ve hedef hücrenin öldürülmesiyle sonuçlanan kimerik bir proteini eksprese eden genetiği değiştirilmiş T hücreleridir. Geleneksel CAR-T hücre üretim yöntemleri emek yoğundur, pahalıdır ve kontaminasyon riski taşıyabilir. Otomatik bir hücre işlemcisi olan CliniMACS Prodigy, hücre tedavisi ürünlerinin kapalı bir sistemde klinik ölçekte üretilmesine olanak tanıyarak kontaminasyon riskini en aza indirir. İşleme, bir bilgisayarın kontrolü altında yarı otomatik olarak gerçekleşir ve böylece sürece insan katılımını en aza indirir, bu da zamandan tasarruf sağlar ve değişkenliği ve hataları azaltır.
Bu el yazması ve video, bu işlemciyi kullanarak CAR-T hücreleri üretmek için T hücresi transdüksiyon (TCT) sürecini açıklamaktadır. TCT işlemi, CD4 + / CD8 + T hücresi zenginleşmesini, aktivasyonunu, viral bir vektör ile transdüksiyonunu, genişlemesini ve hasadı içerir. Bu adımların sıralanmasına ve zamanlamasına izin veren bir işlevsellik olan Etkinlik Matrisi kullanılarak, TCT süreci kapsamlı bir şekilde özelleştirilebilir. Mevcut İyi Üretim Uygulamalarına (cGMP) uygun olarak CAR-T hücre üretiminin bir incelemesini sağlıyoruz ve bir Araştırma Amaçlı Yeni İlaç (IND) uygulamasını destekleyecek gerekli salım testlerini ve klinik öncesi deneyleri tartışıyoruz. Klinik CAR-T hücre üretimi için yarı otomatik bir süreç kullanmanın fizibilitesini gösteriyor ve avantaj ve dezavantajlarını tartışıyoruz. Son olarak, bu üretim sürecinin klinik bir ortamda nasıl uygulanabileceğinin bir örneği olarak pediatrik B hücreli maligniteleri [NCT05480449] hedefleyen, araştırmacı tarafından başlatılan devam eden bir klinik çalışmayı açıklıyoruz.

NCT05480449 denemesinin ilk üç CAR-T üretim çalışmasından elde edilen sonuçlar aşağıda Tablo 3'te sunulmuştur. Başlangıç materyali, vektör, kültür sitokinleri ve AB serum konsantrasyonları her çalışma için tutarlı tutuldu. Ürünler 7. veya 8. günde hasat edildi. Ortalama günlük hücre büyümesi F idi (toplam hücre sayısındaki artış), TCT işleminin hücre genişlemesini teşvik etmede etkili olduğunu gösteriyordu. Bu sonuçlar, işlemcinin tutarlı ve tekrarlanabilir CAR-T hücre ürünleri üretebileceğini göstermekt...

Bu makale, klinik kullanım için kimerik antijen reseptörü T hücreleri için, özellikle viral transdüksiyon ve T hücrelerinin kültivasyonunu gerçekleştirebilen otomatik bir hücre işlemcisi kullanarak üretim sürecini detaylandırmaktadır. Erken aşama bir klinik araştırmanın süreç geliştirme ve uygulaması sırasında göz önünde bulundurulması gereken önerilerde bulunuyor ve tuzakları açıklıyoruz.

Otomatik Hücre İşlemcisinde Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi Üretimi

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant ...

Protokolümüzün avantajı, hala esneklik sunan yarı otomatik, kapalı bir sistem olmasıdır. Emek yoğun adımların yerini bir bilgisayar tarafından çalıştırılan otomasyon alır ve bir bilgisayar tarafından çalıştırıldığı için kullanıcı protokolünü özelleştirebilir. Bunların hepsi de kapalı bir sistemde yapılır.Hastanelerde yaygın olarak bulunan kök hücre laboratuvarlarının, ticari alternatiflerden önemli ölçüde daha düşük maliyetle klinik sınıf CAR-T hücreleri üretme kabiliyetine sahip olduğunu bulduk. Sürecimizin, CAR-T hücresini diğer hedeflere özgü hale getirmek ve ayrıca diğer hücre ve gen terapilerini üretmek için kolayca uyarlanabileceğini düşünüyoruz. Ekibimiz diğer CAR-T hücre hedeflerini ve yeni gen terapilerini keşfetmeye hazır.Daha geniş bir ölçekte, hücre ve gen tedavileri hızla genişliyor ve bu heyecan verici alanda desteklemeye ve yenilik yapmaya devam etmekten heyecan duyuyoruz.

chimeric-antigen-receptor-t-cell-manufacturing-on-an-automated-cell

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretilmesi için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. İnsan T hücreleri, anti-CD3 ve anti-CD28 antikorları ile kaplanmış manyetik boncuklar ve interlökin-2 (IL-2) ile takviye edilmiş bir ortam ile inkübe edilir ve bu da T hücresi aktivasyonuna ve çoğalmasına yol açar. Transgenik RNA'nın konakçı genomuna entegre olmasına ve transgeni eksprese etmesine izin veren transgenik lentiviral vektörler tanıtılır. Bu, transdüksiyona...

Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Üretmek için Ex Vivo Bir Teknik

Bu protokolün amacı, kapalı bir sitokin yakalama sistemi içeren ve özel personel veya bir GMP tesisinin kullanılmasını gerektirmeyen tezgah üstü, otomatik, ikinci nesil hücre zenginleştirme cihazı kullanarak patojene özgü klinik dereceli T hücreleri üretmektir. Üretilen sitomegalovirüs pp65'e özgü T hücreleri doğrudan hastalara uygulanabilir.

Sitokin yakalama Sistemi kullanılarak Klinik Uygulamalar için Sitomegalovirüs özgü otomatik Hücre Zenginleştirme T hücreleri

Sıvı ve katı tümör hücrelerini hedefleyen kimerik antijen reseptör T hücrelerinin gücünü değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı in vitro sitoz ispat sistemini tanımlıyoruz. Bu protokol diğer bağışıklık etki hücreleri değerlendirmek için uzatılabilir, yanı sıra kombinasyon tedavileri.

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Biz güvenilir şemerik antijen reseptörü oluşturmak için bir yaklaşım tarif (CAR) T hücreleri ve in vitro ve in vivo onların farklılaşma ve fonksiyon test.

İmal İmmünoterapi için İmkanerik Antijen Reseptör (CAR) T Hücreleri

Bu protokol, İyi Üretim Uygulamaları (GMP) standartlarıyla uyumluluğu sağlayarak, ilgilenilen bir gen ile birincil insan T hücrelerinin dönüştürülmesi sürecini ana hatlarıyla belirtir.

Geni Değiştirilmiş T hücrelerinin Üretimi için GMP Uyumlu Bir Prosedür

Bu protokol, retroviral vektör üretimini ve murin T hücresi transdüksiyonunu kolaylaştırarak fare CAR-T hücrelerinin verimli bir şekilde üretilmesini kolaylaştırır.

Murin kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücrelerinin verimli üretimi

Bu protokol, insan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücreleri (CAR Treg'ler) oluşturmak ve test etmek için kolaylaştırılmış bir iş akışı sağlar.

İnsan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücrelerinin üretimi

Bu protokol, birincil T hücrelerinin yetiştirilmesi için temel adımları tanımlar; bunların izolasyonu, aktivasyonu, genişlemesi ve mRNA elektroporasyonu ile geçici transfeksiyonu dahildir. Ayrıca, fenotip, aktivasyon belirteçleri, canlılık ve kimerik antijen reseptörü (CAR) ekspresyonunun akış sitometrik analizi için bir iş akışı ve antikor paneli önerilmektedir.

Birincil insan T hücrelerinin izolasyonu, yetiştirilmesi ve geçici transfeksiyonu için kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri üretmek

Protein terapötikler üretmek için hücre hattı geliştirme, üretim, yüksek verimlilik, otomatik bir platform açıklanmıştır. Uygulama, BD FACS Aria Hücre Sıralayıcısı CloneSelect Imager ve Tecan Özgürlük EVO sıvı taşıma sistemi, gelişmiş hücre hattı kalite ve yüksek tekrarlanabilirlik hücre hattı geliştirme işleme kapasitesi önemli ölçüde artış göstermiştir.

Protein Therapeutics İmalat Hücre Hatları Kalkınma Yüksek throughput Otomatik Platformu

Bu protokol bir diyabet tedavisi için terapötik hedefleri bulmak için işlevsel beta hücre kitlesi modüle faktörleri belirlemek sağlar. Protokolü adenovirüsler ile gen ekspresyon manipülasyonu takiben izole sıçan adacıklarında adacık çoğaltma ve beta hücre fonksiyonu değerlendirmek için modern bir yöntem oluşur.

Çoğaltma ve Beta Hücre Fonksiyonu değerlendirilmesi Adenovirally-transdük İzole Kemirgen Islets

Öğrenin, otomatik hücre işlemcisi kullanarak kimerik antijen reseptörü T hücresi üretimini. Bu yarı otomatik yöntem, klinik düzeyde CAR T-hücreleri üretmek için esnek ve maliyet etkin bir alternatif sunar.

Otomatik Hücre İşlemcisinde Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi Üretimi

Daha fazla video keşfet