27 Ekim 2023
Tek tümör antijenini hedefleyen kimerik antijen reseptörü (CAR) eksprese eden Jurkat hücreleri tarafından kantitatif tümör hücresi öldürmesini değerlendirmek için bir protokol. Bu protokol, periferik kandan türetilen T hücrelerinde onaylanmadan önce CAR menteşe yapılarının hızlı optimizasyonu için bir tarama platformu olarak kullanılabilir.
CAR T hücreleri, insan klinik deneylerinde daha iyi yanıtlar elde etmek için sürekli olarak geliştirilmektedir. Bunu, en iyi sonucu veren kombinasyonları taramak için floresan görüntüleme kullanmak gibi tarafsız bir yüksek verimli yöntem kullanarak laboratuvarımızda değerlendirmenin yollarını belirliyoruz. Hücre dışı ve menteşe alanlarının geometrisini değiştirerek herhangi bir tek zincirli değişken parça için tasarlanabilen çeşitli yapı kombinasyonları vardır.
Bu protokolü, Jurkat hücrelerini kullanarak hedef hücreleri ortadan kaldırmada en iyi etkinliğe sahip kombinasyonları belirlemek için tasarladık. Bu, daha sonra geleneksel T hücreleri ile doğrulanan Jurkat hücrelerini kullanarak hedef hücre sitotoksisitesine dayalı olarak CAR yapılarını taramak için hızlı, yüksek verimli bir protokoldür. Bu teknik kullanılarak bir düzine farklı CAR yapısı aynı anda 96 oyuklu bir plakada test edilebilir.
Burada Akhavan Laboratuvarı'nda, birden fazla CAR yapısını taramak için yüksek verimli bir şekilde Jurkat hücrelerini eksprese eden CAR tarafından hedef hücrelerin doğrudan siklozunu mutlak sayılarla ölçüyoruz. Laboratuvarımızın birincil amacı, yüksek dereceli beyin tümörlerine karşı CAR T-hücre tedavisinin klinik çevirisini iyileştirmektir. CAR T hücresi sitotoksisitesini iyileştirmenin yanı sıra tümör mikro çevresini hedeflemek için bir yöntem olarak yüksek verimli ilaç ekranlarından yararlanıyoruz.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu protokol, CAR eksprese eden Jurkat hücrelerinin tümör hücrelerine karşı sitotoksisitesini değerlendirmek için yüksek verimli bir yöntemi özetlemektedir. Çeşitli CAR konstrüktlarının hızlı bir şekilde taranmasına olanak tanır ve spesifik tümör antijenlerini hedeflemek için en etkili kombinasyonları belirlemek mümkündür.
Rapid, high-throughput cytotoxicity evaluation of CAR constructs in Jurkat cells enables early-stage de-risking and prioritization of CAR designs before resource-intensive primary T cell validation. This platform accelerates the identification of hinge-optimized CARs with superior target cell killing, supporting efficient portfolio triage in oncology cell therapy pipelines. By quantifying cytotoxicity across multiple constructs simultaneously, teams can make data-driven decisions at critical discovery inflection points.
This high-throughput cytotoxicity platform fits at the interface of early discovery and lead identification, bridging construct design with preclinical validation. It enables rapid hypothesis testing and construct triage before advancing to resource-intensive primary T cell or in vivo studies.