Name: Neovasküler Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Vasküler Morfolojisinin İndosiyanin Yeşili Anjiyografi ile Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Öğrenin, indosiyanin yeşili anjiyografi ile yaşlı ve genç farelerde koroidal neovaskülarizasyonun vasküler morfolojisini karakterize edin. Bu yöntem, anti-VEGF direncini aşmak için yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, BrightFocus Vakfı, Retina Araştırma Vakfı, Mullen Vakfı ve YF'ye Oftalmolojide Sarah Campbell Blaffer Vakfı, Baylor Tıp Fakültesi'ne NIH çekirdek hibesi 2P30EY002520 ve Baylor Tıp Fakültesi Oftalmoloji Bölümü'ne Körlüğü Önleme Araştırmaları'ndan sınırsız hibe ile desteklenmiştir.

Bu çalışmada yapılan hayvan deneyleri, Baylor Tıp Fakültesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri'nden (IACUC) onay almıştır. Tüm prosedürler, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı Bildirisi'nde belirtilen yönergelere uygun olarak gerçekleştirildi. Bu çalışma için genç (7-9 hafta) ve yaşlı (12-16 ay) C57BL / 6J erkek ve dişi fareler kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.
1. Görüntüleme sisteminin hazırlanması
<ol><li>Görüntüleme sırasında farenin vücut sıcaklığının korunmasını sağlamak için görüntüleme platformuna bir ısıtma yastığı yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakın). Isıtma yastığını etkinleştirin ve sıcaklığı 35 °C'ye ayarlayın.</li>
	<li>Toz kapağını çıkarın ve lazer taramalı oftalmoskopu açın. Makineye 55°'lik bir lens yerleştirin.</li>
	<li>Görüntüleme yazılımını kurun (Malzeme Tablosuna bakın) ve genotip, cinsiyet, yaş vb. dahil olmak üzere temel bilgileri girin. Görüntüleme oturumu başladığında, ICGA görüntülerini yakalamak için IR'yi (Kızılötesi kanal) seçin.</li>
</ol>2. ICGA ve FA öncesi hayvan hazırlığı
<ol><li>Gerekli anestezi miktarını (Ketamin / Ksilazin 70-100 / 2.5-10 mg / kg, Malzeme Tablosuna bakınız) belirlemek için fareyi tartın. NOT: Metabolik profil farklı fare suşları arasında değiştiğinden dozajı optimize etmek çok önemlidir. Görüntülemeyi tamamlamadan önce farenin uyanmasını veya aşırı doz ve potansiyel hayvan ölümü riskini önlemek için uygun dozu belirlemek önemlidir.</li>
	<li>İntraperitoneal enjeksiyon ile anestezi vermek için 30-32 G iğneli 1 mL steril şırınga kullanın. Farenin yeterince uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol etmek için farenin pençelerinden birini hafifçe sıkıştırın. Hayvan herhangi bir tepki veya hareket gösterirse, bir sonraki adıma geçmeden önce ek süre beklemeniz önerilir. Bu, hayvanın yerleşmesine izin verir ve sonraki prosedürler için en uygun koşulları sağlar.</li>
	<li>Farenin her iki gözünü genişletmek için% 1 tropikamid oftalmik solüsyon damlası uygulayın. Göz hareketini ve göz kırpmayı azaltmak için her iki gözde% 0.5 proparakain hidroklorür damlaları ( Malzeme Tablosuna bakınız) kullanmadan önce en az 30 saniye bekleyin. Bunu kayganlaştırıcı göz jeli damlaları ile takip edin. NOT: Tüm anestezi süresi boyunca, farenin gözlerinde kornea opaklığına yol açabilecek aşırı kuruluk sorununu ele almak önemlidir. Bu opaklık, engellenen görüş nedeniyle sonraki görüntülemeyi zorlaştırır. Bunu önlemek için, farenin gözlerini nemli tutmak için sürekli olarak kayganlaştırıcı göz jeli damlaları uygulamak çok önemlidir.</li>
	<li>Fareyi bir ısıtma suyu yastığına yerleştirin. NOT: Fareler, yüksek bir yüzey alanı/hacim oranına sahiptir ve bu da çevreye ısı kaybının artmasına neden olur. Anestezinin neden olduğu sıcaklık düşüşü ile birleştiğinde, bu fare için önemli bir risk oluşturabilir ve potansiyel olarak hipotermi nedeniyle ölüme yol açabilir. İşlem sırasında hipotermiyi önlemek ve farenin sağlığını sağlamak için gerekli önlemleri almak çok önemlidir.</li>
	<li>2 mg/mL ICG ve 20 mg/mL Floresein boyadan oluşan 1:1 hacimlik bir karışım hazırlayın (bkz. 1 mL'lik bir şırınga ve 32 G'lik bir iğne kullanarak intraperitoneal enjeksiyon yoluyla karışımın 250 μL'sini uygulayın.<ol><li>Herhangi bir organın delinmesini önlemek için iğneyi farenin karnının sol alt çeyreğine, arka bacakların yakınında, farenin derisine paralel bir açıyla sokun.</li>
		<li>Pistonu dikkatlice geri çekin ve şırınga kapağına kan girmediğini doğrulayın. Tutarlı bir tempoyu koruyarak boyayı yavaş ve istikrarlı bir şekilde enjekte etmeye devam edin. NOT: ICG boyası kullanımdan önce 0.22 μm şırınga filtresi ile filtrelenmelidir.</li>
	</ol></li>
</ol>3. ICGA ve FA
<ol><li>Görüntülemeye başlamak için fareyi görüntüleme platformunun ısıtma yastığına yerleştirin.</li>
	<li>Farenin gövdesini kameraya 45 derecelik bir açıyla konumlandırın ve başını hafifçe aşağı doğru döndürün. Bu, optik sinirin kameranın odağının merkezinde olmasını sağlar.</li>
	<li>Bir pamuklu çubuk kullanarak, ilk önce görüntülenen göz üzerindeki kayganlaştırıcı göz damlası veya jel tabakasını çıkarmak için gözü nazikçe silin. Görüntüleme prosedürünü tamamladıktan hemen sonra kayganlaştırıcı jel damlalarını uyguladığınızdan emin olun. NOT: Anestezi altındayken gözün 1 dakikadan fazla yağlanmadan bırakılması önerilmez.</li>
	<li>Kamerayı farenin gözüne doğru hareket ettirin. Alım modülünden FA kanalını seçin. FA kanalından yayılan lüminesans, daha hızlı yerleştirme için fare korneasının ortasına konumlandırmak için kullanılabilir.</li>
	<li>Farenin kafasını, optik sinir ekranda ortalanacak şekilde konumlandırın ve lazer tarama oftalmoskopunu belirli bir açıyla eğme ihtiyacını ortadan kaldırın. İstenen hizalamayı elde etmek için farenin kafa konumunda küçük ayarlamalar yapın.</li>
	<li>Alım modülünde ICGA kanalını seçin. Lazer yoğunluğunun %100 olarak ayarlandığından emin olun ve uygun lensle eşleşmesi için 55° seçeneğini seçin. Bu, lazer taramalı oftalmoskop için en uygun ayarları sağlar. NOT: Aşırı doygunluğu önlemek için, erken evreyi görüntülerken tipik olarak %25-50 civarında daha düşük bir lazer yoğunluğu kullanmak gerekebilir. Lazer yoğunluğunun bu aralıkta ayarlanması, aşırı doygunluğa neden olmadan net ve doğru görüntüler yakalamaya yardımcı olabilir.</li>
	<li>Göz, görüntüleme yazılımında tüm ekranı kapladığında, CNV membranının en net görüntüsünü elde etmek için hassasiyet ve odak ayarlarında ayarlamalar yapın.<ol><li>Görüntünün hassasiyetini ayarlamak için çekim modülündeki yuvarlak siyah düğmeyi döndürün.</li>
		<li>Odağı ayarlamak için oftalmoskop üzerindeki düğmeyi çevirin. FA kullanarak retina damar sistemini görselleştirmek için en uygun odak tipik olarak 35-45 D (diyoptri) aralığındadır. Öte yandan, ICGA kullanarak koroidi görselleştirmek için ideal odak genellikle 10-15 D arasındadır. NOT: CNV membranının farklı boyutları nedeniyle, vasküler morfolojinin optimal görüntülenmesini sağlamak için odağı 10-30 D'de ayarlamak gerekebilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Odak ve hassasiyet mümkün olan en iyi görüntüyü elde etmek için ayarlandıktan sonra, görüntüyü normalleştirmek için çekim modülündeki yuvarlak siyah düğmeye basın. Normalleştirme tamamlandığında (tüm kareler yakalandığında), görüntüyü kaydetmek için dokunmatik ekran panelindeki edin düğmesine tıklayın. CNV'yi farklı açılardan görüntülemek için kamerayı hareket ettirmek gerekebilir. Fare, CNV lezyonunun en iyi görüntüsünü sağlamak için farklı pozisyonlarda da yönlendirilebilir. NOT: Optik sinirden daha uzaktaki damar sistemini görüntülerken lazer taramalı oftalmoskopun odağını veya konumunu yeniden ayarlamak gerekebilir.</li>
	<li>Toplama modülünü kullanarak FA kanalına geri dönün. CNV lezyonunun sızıntısını yakalamak için her görüntünün hassasiyetini ve odağını ayarlamak için 3.6-3.7 adımlarında listelenen adımları tamamlayın. NOT: CNV sızıntısının aşırı doygunluğunu önlemek ve sızıntı alanını yapay olarak artırmak için doğru hassasiyetin seçildiğinden emin olun.</li>
	<li>Enjeksiyondan 3-4 dakika sonra ICGA ve FA'nın "erken fazını" görüntüleyin. NOT: "Erken evre", koroid damar sisteminin açık ve belirgin bir şekilde görülebildiği zamandır. Tipik olarak 4-8 dakika arasında meydana gelen orta fazda, retina ve koroid damarları çok daha soluk ve dağınıktır. Geç faz (>8-10 dakika) başladığında, hem koroid hem de retina damarları ayırt edilemez hale gelir. Bununla birlikte, hiperfloresan KNV lezyonları, azalmış arka plana karşı maksimum kontrast sergiler. Bahsedilen bu zamanlamalar değişkendir ve enjekte edilen ICG boyasının konsantrasyonuna ve miktarına bağlıdır. Daha fazla miktarda ICG boyası, her fazın zaman çizelgesini artırma ve daha belirgin damarlar sağlama eğilimindedir. Bir aşama, mutlak bir zamandan ziyade yukarıda listelenen temel özelliklere göre tanımlanmalıdır.</li>
	<li>Tüm görüntüler elde edildikten sonra, farenin gözüne bir jel yağlayıcı veya merhem sürün ve kurtarma için fareyi ısıtma yastığı üzerinde dikkatlice izleyin. Farenin tamamen iyileşmesi genellikle 1,5 saat sürer.</li>
	<li>Fareleri, anesteziden tamamen kurtulduktan ve uyandıktan sonra kafeslerine ve belirlenen tutma alanına geri yerleştirin.</li>
	<li>Görüntüleme sistemini ve lazeri kapatmadan önce, sonraki analizler için görüntüleri TIFF veya JPEG dosyaları olarak dışa aktarın.</li>
</ol>4. RPE / koroid düz montaj ve boyama
<ol><li>Gözleri gece boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin. Gözleri PBS ile üç kez yıkayın. Lensi ve korneayı çıkarın.</li>
	<li>Gözleri oda sıcaklığında 1 saat bloke edici solüsyonda (% 10 sığır serum albümini,% 0.6 Triton X-100 PBS'de) inkübe edin. PBS yıkamasını üç kez tekrarlayın.</li>
	<li>Gözleri izolektin GS-IB4 Alexa-un 568 konjugatı ve anti-α-düz kas aktin antikoru (bkz. Malzeme Tablosu) ile gece boyunca bloke edici solüsyonda inkübe edin.</li>
	<li>PBS ile üç kez yıkayın. Numuneleri bir Alexa Fluor 488 keçi anti-tavşan ikincil antikoru ile inkübe edin (Malzeme Tablosuna bakınız) oda sıcaklığında 2 saat.</li>
	<li>Kenardan ekvatora 4 radyal kesim yapın. Retinayıdikkatlice çıkarın 17. NOT: Neovasküler membranın kazara ayrılmamasına dikkat edilmelidir.</li>
	<li>Düz monte edilmiş koroidi bir cam kızak üzerine monte edin. Konfokal mikroskopi kullanarak CNV'yi görselleştirin.</li>
</ol>

Farede Lazer ile İndüklenen CNV'nin Farklı Lezyon Tiplerinin Karakterizasyonu

<ol><li>Fleckenstein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).</li>
<li>Wong, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+age-related+macular+degeneration+and+disease+burden+projection+for+2020+and+2040%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of age-related macular degeneration and disease burden projection for 2020 and 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Global Health. 2 (2), e106-e116 (2014).</li>
<li>Maguire, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five-Year+outcomes+with+anti-vascular+endothelial+growth+factor+treatment+of+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+the+comparison+of+age-related+macular+degeneration+treatments+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Five-Year outcomes with anti-vascular endothelial growth factor treatment of neovascular age-related macular degeneration: the comparison of age-related macular degeneration treatments trials.</a> Ophthalmology. 123 (8), 1751-1761 (2016).</li>
<li>Yang, S., Zhao, J., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+anti-VEGF+therapy+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Resistance to anti-VEGF therapy in neovascular age-related macular degeneration: a comprehensive review.</a> Drug Design, Development and Therapy. 10, 1857-1867 (2016).</li>
<li>Ehlken, C., Jungmann, S., Böhringer, D., Agostini, H. T., Junker, B., Pielen, A. Switch of anti-VEGF agents is an option for nonresponders in the treatment of AMD. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEhlken%2C+C+%22Eye%22">Eye</a>. 28 (5), London, England. 538-545 (2014).</li>
<li>Heier, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+aflibercept+%28VEGF+trap-eye%29+in+wet+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Intravitreal aflibercept (VEGF trap-eye) in wet age-related macular degeneration.</a> Ophthalmology. 119 (12), 2537-2548 (2012).</li>
<li>Rofagha, S., Bhisitkul, R. B., Boyer, D. S., Sadda, S. R., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SEVEN-UP+Study+Group+Seven-year+outcomes+in+ranibizumab-treated+patients+in+ANCHOR%2C+MARINA%2C+and+HORIZON%3A+a+multicenter+cohort+study+%28SEVEN-UP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">SEVEN-UP Study Group Seven-year outcomes in ranibizumab-treated patients in ANCHOR, MARINA, and HORIZON: a multicenter cohort study (SEVEN-UP).</a> Ophthalmology. 120 (11), 2292-2299 (2013).</li>
<li>Krebs, I., Glittenberg, C., Ansari-Shahrezaei, S., Hagen, S., Steiner, I., Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-responders+to+treatment+with+antagonists+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Non-responders to treatment with antagonists of vascular endothelial growth factor in age-related macular degeneration.</a> British Journal of Ophthalmology. 97 (11), 1443-1446 (2013).</li>
<li>Mettu, P. S., Allingham, M. J., Cousins, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+response+to+Anti-VEGF+therapy+in+neovascular+AMD%3A+Exploring+disease+mechanisms+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Incomplete response to Anti-VEGF therapy in neovascular AMD: Exploring disease mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 82, 100906(2021).</li>
<li>Otsuji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+non-responders+to+ranibizumab+in+the+treatment+of+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z%29%22%5BJournal%5D)">Initial non-responders to ranibizumab in the treatment of age-related macular degeneration (AMD).</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z). 7, 1487-1490 (2013).</li>
<li>Cobos, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+CFH%2C+CFB%2C+ARMS2%2C+SERPINF1%2C+VEGFR1+and+VEGF+polymorphisms+and+anatomical+and+functional+response+to+ranibizumab+treatment+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Association between CFH, CFB, ARMS2, SERPINF1, VEGFR1 and VEGF polymorphisms and anatomical and functional response to ranibizumab treatment in neovascular age-related macular degeneration.</a> Acta Ophthalmologica. 96 (2), e201-e212 (2018).</li>
<li>Kitchens, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacogenetics+study+to+predict+outcome+in+patients+receiving+anti-VEGF+therapy+in+age+related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z.%29%22%5BJournal%5D)">A pharmacogenetics study to predict outcome in patients receiving anti-VEGF therapy in age related macular degeneration.</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z.). 7, 1987-1993 (2013).</li>
<li>Rosenfeld, P. J., Shapiro, H., Tuomi, L., Webster, M., Elledge, J., Blodi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+losing+vision+after+2+Years+of+monthly+dosing+in+the+phase+III+Ranibizumab+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients losing vision after 2 Years of monthly dosing in the phase III Ranibizumab clinical trials.</a> Ophthalmology. 118 (3), 523-530 (2011).</li>
<li>Spaide, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+signs+of+vascular+abnormalization+with+antiangiogenic+therapy+for+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography signs of vascular abnormalization with antiangiogenic therapy for choroidal neovascularization.</a> American Journal of Ophthalmology. 160 (1), 6-16 (2015).</li>
<li>Lumbroso, B., Rispoli, M., Savastano, M. C., Jia, Y., Tan, O., Huang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+study+of+choroidal+neovascularization+early+response+after+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography study of choroidal neovascularization early response after treatment.</a> Developments in Ophthalmology. 56, 77-85 (2016).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+apolipoprotein-A-I%2Fapolipoprotein-A-I+binding+protein+and+anti-VEGF+treatment+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+choroidal+neovascularization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Combination of apolipoprotein-A-I/apolipoprotein-A-I binding protein and anti-VEGF treatment overcomes anti-VEGF resistance in choroidal neovascularization in mice.</a> Communications Biology. 3 (1), 386(2020).</li>
<li>Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+AIBP%2C+apoA-I%2C+and+Aflibercept+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+neovascular+AMD+by+inhibiting+arteriolar+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Combination of AIBP, apoA-I, and Aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2(2022).</li>
<li>Koehn, D., Meyer, K. J., Syed, N. A., Anderson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%2FXylazine-induced+corneal+damage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Ketamine/Xylazine-induced corneal damage in mice.</a> PloS One. 10 (7), e0132804(2015).</li>
<li>Li, X. -T., Qin, Y., Zhao, J. -Y., Zhang, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lens+opacity+induced+by+different+kinds+of+anesthetic+drugs+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Acute lens opacity induced by different kinds of anesthetic drugs in mice.</a> International Journal of Ophthalmology. 12 (6), 904-908 (2019).</li>
<li>Zhou, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+corneal+calcification+associated+with+xylazine+for+longitudinal+optical+coherence+tomography+in+young+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Preventing corneal calcification associated with xylazine for longitudinal optical coherence tomography in young rodents.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 461-469 (2017).</li>
<li>Ikeda, W., Nakatani, T., Uemura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataract-preventing+contact+lens+for+in+vivo+imaging+of+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Cataract-preventing contact lens for in vivo imaging of mouse retina.</a> BioTechniques. 65 (2), 101-104 (2018).</li>
<li>Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+abnormalities+in+choroidal+vasculature+in+a+mouse+model+of+age-related+macular+degeneration+by+time-course+indocyanine+green+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography.</a> Journal of Visualized Experiments. 84, e51061(2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Bu çalışma, lazer kaynaklı CNV'li fare modellerinde arteriolar ve kapiller koroidal neovaskülarizasyonun (CNV) vasküler morfolojisini tanımlamak için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını göstermiştir. İndosiyanin yeşili (ICG) boyanın hemoglobine bağlı ve kızılötesi ışık özellikleri, araştırma topluluğu tarafından kullanılan mevcut yöntem olan floresein anjiyografi (FA) kullanılarak elde edilmesi zor olan CNV morfolojisinin saptanmasını sağlamıştır.
Protokoldeki ilk kritik adım,...

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), yaşlı bireylerde ciddi görme kaybına yol açan yaygın bir durumdur1. Yalnızca Amerika Birleşik Devletleri'nde, AMD hastalarının sayısının iki katına çıkacağı ve mevcut 11 milyona kıyasla 2050 yılına kadar yaklaşık 22 milyona ulaşacağı tahmin ediliyor. Küresel olarak, tahmini AMD vaka sayısının 2040 yılına kadar şaşırtıcı bir şekilde 288 milyona ulaşması bekleniyor2.
"Islak" veya neovasküler AMD olarak da bilinen koroidal neovaskülarizasyon (CNV), merkezi retinanın altında anormal kan damarlarının oluşumu nedeniyle görme üzerinde yıkıcı etkilere sahip olabilir. Bu, kanamaya, retina eksüdasyonuna ve önemli görme kaybına yol açar. Hücre dışı VEGF'yi hedef alan anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) tedavilerinin kullanıma girmesi KNV tedavisinde devrim yaratmıştır. Bununla birlikte, bu gelişmelere rağmen, hastaların% 50'ye kadarı, sıvı birikimi ve çözülmemiş veya yeni kanamalar gibi devam eden hastalık aktivitesi ile bu tedavilere yetersiz yanıtlar sergilemektedir 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14.
Klinik çalışmalar, CNV hastalarında anti-VEGF direncinin sıklıkla büyük kalibreli dallanan arteriyoller, vasküler döngüler ve anastomoz bağlantıları ile karakterize arteriolar CNV'nin varlığına karşılık geldiğini göstermiştir9. Tekrarlanan anti-VEGF tedavisi, damar anormalizasyonuna, arteriolar KNV gelişimine ve nihayetinde anti-VEGF tedavilerine dirence katkıda bulunabilir14,15. Arteriolar KNV vakalarında, özellikle yüksek kan akımı koşulları altında, arteriyovenöz anastomoz döngülerinde yetersiz oluşturulmuş sıkı bağlantıların neden olduğu yüksek eksüdasyona bağlı kalıcı sıvı sızıntısı muhtemeldir9. Tersine, anti-VEGF tedavisine iyi yanıt veren bireyler kılcal CNV sergileme eğilimindedir.
Hayvan modellerini kullanarak yaptığımız çalışmalarda, yaşlı farelerde lazerle indüklenen CNV'nin arteriyolar CNV geliştirdiğini ve anti-VEGF tedavisine direnç gösterdiğini gösterdik16,17. Tersine, genç farelerde lazere bağlı CNV, kılcal CNV gelişimine ve anti-VEGF tedavisine yüksek yanıt verilmesine yol açar. Bu nedenle, hem mekanik hem de terapötik araştırmalar için CNV vasküler tipleri arasında ayrım yapmak çok önemlidir.
Klinik ortamlarda, CNV genellikle floresein anjiyografi (FA) sızıntı modellerine (örneğin, Tip 1, Tip 2) göre sınıflandırılır, eksüdasyonu izlemek ve patolojik sızıntı alanlarını belirlemek için floresein boyası kullanır. AMD araştırmalarında, CNV ağırlıklı olarak hayvan modellerinde FA kullanılarak incelenmiştir. Bununla birlikte, FA, CNV'nin vasküler morfolojisini ortaya koyamamaktadır. Ayrıca, FA sadece görünür ışık spektrumundaki görüntüleri yakalar ve retina pigment epitelinin (RPE) altındaki koroidal vaskülatürü görselleştiremez. Buna karşılık, plazma proteinleri için güçlü afinite sergileyen indosiyanin yeşili (ICG), baskın intravasküler retansiyonu kolaylaştırır ve vasküler yapının ve kan akışının görselleştirilmesini sağlar9. ICG'nin yakın kızılötesi floresan özelliğinden yararlanarak, ICG anjiyografi (ICGA) kullanılarak retina ve koroid pigmentinin görüntülenmesi mümkün hale gelir. Bu bağlamda, kapiller ve arteriolar KNV'nin gözlendiği genç ve yaşlı farelerde lazerle indüklenen koroidal neovaskülarizasyonun (KNV) sızıntısını ve vasküler morfolojisini araştırmak için FA ve ICGA'yı birleştiren bir protokol sunulmuştur.

<table><tbody><tr><td>32-G İnsülin Şırınga</td><td>MHC Tıbbi Ürünler</td><td>NDC 08496-3015-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 keçi anti-tavşan ikincil antikoru</td><td>Invitroten</td> <td>ve nbsp; A11008</td><td></td></tr><tr><td>Anti-&alfa; düz kas Aktin antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab5694</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji, Inc.</td><td>SC-2323&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J fareler (7-9 hafta)</td> <td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Suşu #: 000664</td><td></td></tr><tr><td>Floresein Sodyum Tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MFCD00167039</td><td></td></tr><tr><td>Gaymar T Pompası Isı Terapi Sistemi</td><td>Gaymar</td><td>TP-500</td><td>Görüntülemeden sonra fare kurtarma için su sirkülasyonlu ısı pompası</td></tr><tr><td>GenTeal Jel</td><td>Genteal</td><td>NDC 58768-791-15</td><td>Şeffaf kayganlaştırıcı göz jeli</td></tr><tr><td>GS-IB4 Alexa-Flour 568 konjuge</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; I21412</td><td></td></tr><tr><td>Heidelberg Göz Kaşifi</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>HEYEX2</td><td></td></tr><tr><td>İndosiyanin Yeşil</td><td>Pfaultz & Bauer</td><td>I01250</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Vedco Inc.</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Acros Organik&nbsp;</td><td></td><td></td>416785000</tr><tr><td>Proparakain Hidroklorür Oftalmik Çözelti (% 0.5)</td><td>Sandoz</td><td>NDC 61314-016-01</td><td></td></tr><tr><td>Spectralis Çoklu Modalite Görüntüleme Sistemi</td><td>Heidelberg Mühendislik, Almanya</td><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamid oftalmik solüsyon (%1)</td><td>Bausch & Lomb</td><td>NDC 24208-585-64</td><td>Öğrencilerin genişlemesi için</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun vasküler morfolojisinin İndosiyanin yeşili anjiyografi ile karakterizasyonu

Characterization of Vascular Morphology of Neovascular Age-Related Macular Degeneration by Indocyanine Green Angiography

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), yaşlı bireyler arasında körlüğün önde gelen nedenlerinden biridir ve yaşlanan nüfusa bağlı olarak prevalansı hızla artmaktadır. Tüm AMD vakalarının %10-20'sini oluşturan koroidal neovaskülarizasyon (KNV) veya ıslak AMD, AMD'ye bağlı körlüğün endişe verici bir şekilde %80-90'ından sorumludur. Mevcut anti-VEGF tedavileri hastaların yaklaşık %50'sinde suboptimal yanıtlar göstermektedir. KNV hastalarında anti-VEGF tedavisine direnç genellikle arteriolar KNV ile ilişkilidir, yanıt verenler ise kapiller KNV'ye sahip olma eğilimindedir. Floresein anjiyografi (FA), ıslak YBMD hastalarında ve hayvan modellerinde sızıntı paternlerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılırken, CNV vasküler morfolojisi (arteriolar KNV ve kapiller KNV) hakkında bilgi sağlamaz. Bu protokol, lazer kaynaklı CNV fare modellerinde lezyon tiplerini karakterize etmek için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını tanıtır. Bu yöntem, yaş YBMD'de anti-VEGF direncinin mekanizmalarını ve tedavi stratejilerini araştırmak için çok önemlidir. Mekanik ve terapötik çalışmalarda KNV'nin hem sızıntı hem de vasküler özelliklerinin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesi için FA ile birlikte ICGA'nın dahil edilmesi önerilmektedir.

Protokolü takiben, genç (7-9 hafta) ve yaşlı (12-16 ay) C57BL / 6J farelerde lazerle indüklenen CNV'ye ICGA ve FA uygulandı. FA, KNV lezyonlarının yeri ve sızıntısı hakkında bilgi verirken (Şekil 1, sol paneller), ICGA KNV lezyonlarının vasküler morfolojisini ortaya koyar (Şekil 1, sağ paneller). Genç farelerde, kılcal CNV, CNV lezyonlarına hakimdir. Buna karşılık, yaşlı fareler, büyük kalibreli damarlar, vasküler döngüler ve anastomoz bağlantıları ile karakteri...

Şu anda, floresein anjiyografi (FA), koroidal neovaskülarizasyonun (KNV) hayvan modellerinde sızıntı paternlerini tanımlamak için tercih edilen yöntemdir. Bununla birlikte, FA vasküler morfoloji hakkında bilgi sağlamaz. Bu protokol, fare modellerinde lazerle indüklenen CNV'nin farklı lezyon tiplerini karakterize etmek için indosiyanin yeşili anjiyografinin (ICGA) kullanımını özetlemektedir.

Neovasküler Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Vasküler Morfolojisinin İndosiyanin Yeşili Anjiyografi ile Karakterizasyonu

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of blindness among older individuals, and its prevalence is rapidly increasing due to the aging ...

Yaşlı bireylerde ciddi görme kaybına neden olan yaygın bir durum olan yaşa bağlı makula dejenerasyonunun mekanizması ve tedavi stratejileri üzerinde çalışıyoruz. Özellikle, YBMD'nin yaş tipi olan kornea neovaskülarizasyonunun mevcut tedavisine karşı ilaç direnci sorununu çözmek için yeni tedaviler geliştiriyoruz. Laboratuvarımız yakın zamanda CNV'de anti-VEGF direncini iyileştirmek için yeni bir tedavi geliştirdi.Bu, fare CNV modeli kullanılarak elde edilir. Araştırmamız, lazer kaynaklı CNV'li yaşlı farelerin anti-VEGF tedavisine dirençli arteriolar CNV geliştirdiğini göstermiştir. Buna karşılık, kılcal CNV'li genç fareler tedaviye yanıt verir.AMD araştırmalarında, CNV, hayvan modellerinde sızıntı modellerini ortaya çıkarmak için neredeyse sadece floresein anjiyografi ile incelenmiştir. Bununla birlikte, FA CNV vasküler morfolojisi göstermez ve bu nedenle YBMD'de anti-VEGF direncinin araştırılması uygun değildir. KNV görüntüleme için kullanılan mevcut FA yöntemi, kapiller veya arteriolar KNV gibi CNV lezyonlarının vasküler morfolojisi ile ilgili hayati bilgilerden yoksundur.Bununla birlikte, ICGA ve FA'yı birleştirerek, bu protokol hem KNV sızıntısını hem de vasküler morfolojiyi değerlendirebilir. Hem sızıntı hem de KNV lezyon morfolojisini değerlendirerek, arteriolar KNV ile ilgili altta yatan molekül mekanizmasını incelemek mümkündür ve bu nedenle YBMD hastaları için anti-VEGF direncini tedavi etmek için yeni hedefler bulma fırsatları sağlar.

characterization-vascular-morphology-neovascular-age-related-macular

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kuyruk ven enjeksiyon yoluyla gerçekleştirilebilir Indocyanine Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) fare koroidinde anormallikleri karakterize kaliteli ISYA zaman ders görüntüler sağlar.

Zaman kurs Indocyanine Yeşil Anjiyografi ile Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Fare Modeli Koroid vaskülatürüne anormallikleri tespit

Retina önemli benzerlikler beyinle paylaşır ve böylece damarlara ve beyinde nöronal yapısında olmayan invaziv çalışmaya benzersiz bir pencereyi temsil eder. Bu iletişim kuralı demans retina görüntüleme teknikleri kullanarak çalışma yöntemi açıklanır. Bu yöntem potansiyel olarak demans tanı ve risk değerlendirmesine yardımcı olabilir.

Demans çalışması için retina Imaging'i kullanma

Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.

Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Foscein bazlı floresan video anjiyografi (FVA) kullanılarak, sıçan ve tavşanlarda yan duvar anevrizmasının anevrizma perfüzyon ve damar patinliğini verimli bir şekilde değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz. % 92,6 pozitif tahmini değeri ile, özel bir ekipman gerektirmez basit ama çok etkili ve ekonomik bir yöntemdir.

Rat ve Rabbit anevrizma modellerinde anevrizma perfüzyon ve ebeveyn arter patensinin değerlendirilmesi için floresan anjiyografi

Parafoveal yüzeyel kılcal pleksusun damar ve perfüzyon yoğunluğu arasındaki belirleme katsayısının değerlendirilmesini, kılcal damarlardan daha büyük damarların perfüzyon yoğunluğuna katkısını tanımlamak için tanımladık.

Optik Koherens Tomografi Anjiyografi ile Ölçülen Maküler Perfüzyon Yoğunluğuna Kılcal ve Diğer Damar Katkılarının Değerlendirilmesi

Bu makalede, tüm mount retinal preparatları için iyi kurulmuş ve tekrarlanabilir bir lektin lekesi testi ve proliferatif ve proliferatif olmayan retinopatilerde sıklıkla değiştirilen vasküler parametrelerin nicel ölçümü için gerekli protokoller açıklanmaktadır.

Proliferatif Olmayan ve Proliferatif Retinopatilerle Farelerin Tüm Mount Retinalarında Vasküler Parametrelerin Nicelemesi

Laboratuvar tahlilleri, yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) uzunlamasına optik koherens tomografi (OCT) tabanlı multimodal görüntülemesinden prognostik değerden yararlanabilir. AMD'li ve AMD'siz insan donör gözleri, doku kesitlemeden önce OCT, renk, yakın kızılötesi yansıma taramalı lazer oftalmoskopi ve otofloresan kullanılarak iki uyarma dalga boyunda görüntülenir.

Ex Vivo Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Araştırmaları için İnsan Donör Gözlerinin OCT Tabanlı Multimodal Görüntülemesi

Bu makale, aterosklerozun farklı aşamalarını değerlendirmek için tıbbi araştırmalarda yaygın olarak kullanılan vasküler fonksiyon ve morfolojinin çeşitli invaziv olmayan değerlendirmeleri için metodolojik hususları açıklamaktadır.

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Bu çalışmada yağ kaynaklı kök stromal vasküler kesir bulunan hücreleri ve trombosit açısından zengin plazma Limoli retina restorasyon tekniği ile elde edilen trombosit suprachoroidal greft görme keskinliği artırabilirsiniz olup olmadığını değerlendirmek için hedeftir ve Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu tarafından etkilenen gözde retina hassasiyeti yanıt.

Rejeneratif tedavisi ile Suprachoroidal hücre otogrefti içinde Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu: ön Vivo içinde rapor

Öğrenin, indosiyanin yeşili anjiyografi ile yaşlı ve genç farelerde koroidal neovaskülarizasyonun vasküler morfolojisini karakterize edin. Bu yöntem, anti-VEGF direncini aşmak için yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

Neovasküler Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Vasküler Morfolojisinin İndosiyanin Yeşili Anjiyografi ile Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet