Name: Genetiği Değiştirilmiş Fare Modellerinde Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörlerinin Tanımlanması, Teşhis Edilmesi ve Derecelendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Keşfedin, P0-GGF-beta-3 fare modelinde malign periferik sinir kılıfı tümörlerinin histolojik analiz ve derecelendirme yöntemlerini. Bu protokol, insan tümörleriyle benzerlikleri doğrulayarak nörofibromatozis tip bir araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Hastalıklar ve İnme Enstitüsü'nden (R01 NS048353 ve R01 NS109655 SLC'ye hibelerle desteklenmiştir; R01 NS109655-03S1'den D.P.J.'ye), Ulusal Kanser Enstitüsü (R01 CA122804'den SLC'ye) ve Savunma Bakanlığı (X81XWH-09-1-0086 ve W81XWH-12-1-0164'ten SLC'ye).

P 0-GGFβ3 Fare Modelinde PN-MPNST Progresyonunun Patolojik Değerlendirmesi

<ol><li>Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+promoting+the+pathogenesis+of+Schwann+cell+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms promoting the pathogenesis of Schwann cell neoplasms.</a> Acta Neuropathologica. 123 (3), 321-348 (2012).</li>
<li>Longo, J. F., Weber, S. M., Turner-Ivey, B. P., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+diagnosis+and+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+1+%28NF1%29-associated+peripheral+nervous+system+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Anatomic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the diagnosis and pathogenesis of neurofibromatosis type 1 (NF1)-associated peripheral nervous system neoplasms.</a> Advances in Anatomic Pathology. 25 (5), 353-368 (2018).</li>
<li>Longo, J. F., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RASopathies%3A+Biology%2C+genetics+and+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The RASopathies: Biology, genetics and therapeutic options.</a> Advances in Cancer Research. 153, 305-341 (2022).</li>
<li>Boyd, K. P., Korf, B. R., Theos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 61 (1), 1-16 (2009).</li>
<li>Rad, E., Tee, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%3A+Fundamental+insights+into+cell+signalling+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1: Fundamental insights into cell signalling and cancer.</a> Seminars in Cell and Developmental Biology. 52, 39-46 (2016).</li>
<li>Brannan, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+the+neurofibromatosis+type-1+gene+leads+to+developmental+abnormalities+in+heart+and+various+neural+crest-derived+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of the neurofibromatosis type-1 gene leads to developmental abnormalities in heart and various neural crest-derived tissues.</a> Genes and Development. 8 (9), 1019-1029 (1994).</li>
<li>Jacks, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+predisposition+in+mice+heterozygous+for+a+targeted+mutation+in+Nf1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tumour predisposition in mice heterozygous for a targeted mutation in Nf1.</a> Nature Genetics. 7 (3), 353-361 (1994).</li>
<li>Zhu, Y., Ghosh, P., Charnay, P., Burns, D. K., Parada, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromas+in+NF1%3A+Schwann+cell+origin+and+role+of+tumor+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neurofibromas in NF1: Schwann cell origin and role of tumor environment.</a> Science. 296 (5569), 920-922 (2002).</li>
<li>Cichowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+tumor+development+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse models of tumor development in neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2172-2176 (1999).</li>
<li>Joseph, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+loss+of+Nf1+transiently+promotes+self-renewal+but+not+tumorigenesis+by+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The loss of Nf1 transiently promotes self-renewal but not tumorigenesis by neural crest stem cells.</a> Cancer Cell. 13 (2), 129-140 (2008).</li>
<li>Rhodes, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+%28Arf%29+loss+drives+NF1-associated+atypical+neurofibroma+and+malignant+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a (Arf) loss drives NF1-associated atypical neurofibroma and malignant transformation.</a> Human Molecular Genetics. 28 (16), 2752-2762 (2019).</li>
<li>Chaney, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cdkn2a+loss+in+a+model+of+neurofibroma+demonstrates+stepwise+tumor+progression+to+atypical+neurofibroma+and+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cdkn2a loss in a model of neurofibroma demonstrates stepwise tumor progression to atypical neurofibroma and MPNST.</a> Cancer Research. 80 (21), 4720-4730 (2020).</li>
<li>Mohamad, T., Plante, C., Brosseau, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+understanding+the+mechanisms+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Toward understanding the mechanisms of malignant peripheral nerve sheath tumor development.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8620(2021).</li>
<li>Somatilaka, B. N., Sadek, A., McKay, R. M., Le, L. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor%3A+models%2C+biology%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumor: models, biology, and translation.</a> Oncogene. 41 (17), 2405-2421 (2022).</li>
<li>Keng, V. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+inactivation+of+Pten+with+EGFR+overexpression+in+Schwann+cells+models+sporadic+MPNST%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">Conditional inactivation of Pten with EGFR overexpression in Schwann cells models sporadic MPNST.</a> Sarcoma. 2012, 620834(2012).</li>
<li>Miettinen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathologic+evaluation+of+atypical+neurofibromatous+tumors+and+their+transformation+into+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+in+patients+with+neurofibromatosis+1-a+consensus+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histopathologic evaluation of atypical neurofibromatous tumors and their transformation into malignant peripheral nerve sheath tumor in patients with neurofibromatosis 1-a consensus overview.</a> Human Pathology. 67, 1-10 (2017).</li>
<li>Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRC2+is+recurrently+inactivated+through+EED+or+SUZ12+loss+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">PRC2 is recurrently inactivated through EED or SUZ12 loss in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1227-1232 (2014).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+mutations+of+SUZ12+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Somatic mutations of SUZ12 in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Nature Genetics. 46 (11), 1170-1172 (2014).</li>
<li>Magallon-Lorenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+genomic+analysis+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+lines+challenges+current+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Deep genomic analysis of malignant peripheral nerve sheath tumor cell lines challenges current malignant peripheral nerve sheath tumor diagnosis.</a> iScience. 26 (2), 106096(2023).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+a+sporadic+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line.</a> Scientific Reports. 11 (1), 5690(2021).</li>
<li>Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+neuropathies+and+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+in+transgenic+mice+overexpressing+glial+growth+factor+beta3+in+myelinating+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells.</a> Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).</li>
<li>Stonecypher, M. S., Byer, S. J., Grizzle, W. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+neuregulin-1%2FErbB+signaling+pathway+promotes+the+proliferation+of+neoplastic+Schwann+cells+in+human+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Activation of the neuregulin-1/ErbB signaling pathway promotes the proliferation of neoplastic Schwann cells in human malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Oncogene. 24 (36), 5589-5605 (2005).</li>
<li>Kohli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pan+erbB+inhibitor+PD168393+enhances+lysosomal+dysfunction-induced+apoptotic+death+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">The pan erbB inhibitor PD168393 enhances lysosomal dysfunction-induced apoptotic death in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Neuro-Oncology. 14 (3), 266-277 (2012).</li>
<li>Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+beta+and+neuregulin-1+alpha+differentially+affect+the+migration+and+invasion+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).</li>
<li>Kazmi, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+neuregulin-1+model+neurofibroma-malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+progression+and+implicate+specific+chromosomal+copy+number+variations+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis.</a> American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).</li>
<li>Brosius, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+overexpression+and+Trp53+haploinsufficiency+cooperatively+promote+de+novo+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis.</a> Acta Neuropathologica. 127 (4), 573-591 (2014).</li>
<li>Vogel, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+tumor+model+for+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mouse tumor model for neurofibromatosis type 1.</a> Science. 286 (5447), 2176-2179 (1999).</li>
<li>Reuss, D. E., et al. Malignant peripheral nerve sheath tumour (MPNST). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReuss%2C+DE+%22WHO+Classification+of+Tumours+of+the+Central+Nervous+System%2C+Revised+4th+Edition%22">WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System, Revised 4th Edition</a>. Louis, D. N., et al. , International Agency for Research on Cancer (IARC), Lyon, France. 226-229 (2016).</li>
<li>Landuzzi, L., Ruzzi, F., Lollini, P. L., Scotlandi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synovial+sarcoma+preclinical+modeling%3A+integrating+transgenic+mouse+models+and+patient-derived+models+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Synovial sarcoma preclinical modeling: integrating transgenic mouse models and patient-derived models for translational research.</a> Cancers. 15 (3), 588(2023).</li>
<li>Cohen, P. R., Rapini, R. P., Farhood, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+human+hematopoietic+progenitor+cell+antigen+CD34+in+vascular+and+spindle+cell+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cutaneous+Pathology%22%5BJournal%5D)">Expression of the human hematopoietic progenitor cell antigen CD34 in vascular and spindle cell tumors.</a> Journal of Cutaneous Pathology. 20 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Weiss, S. W., Nickoloff, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD-34+is+expressed+by+a+distinctive+cell+population+in+peripheral+nerve%2C+nerve+sheath+tumors%2C+and+related+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">CD-34 is expressed by a distinctive cell population in peripheral nerve, nerve sheath tumors, and related lesions.</a> American Journal of Surgical Pathology. 17 (10), 1039-1045 (1993).</li>
<li>Longo, J. F., Brosius, S. N., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+gene+functions+in+tumorigenesis+by+ex+vivo+ablation+of+floxed+alleles+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Defining gene functions in tumorigenesis by ex vivo ablation of floxed alleles in malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (174), (2021).</li>
<li>Hoffman, G. E., Murphy, K. J., Sita, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+titrating+antibodies+for+immunocytochemical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The importance of titrating antibodies for immunocytochemical methods.</a> Current Protocols in Neuroscience. 76, 2.12.1-2.12.37 (2016).</li>
<li>Brossier, N. M., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+shed+new+light+on+the+pathogenesis+of+neurofibromatosis+type+I-related+neoplasms+of+the+peripheral+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models shed new light on the pathogenesis of neurofibromatosis type I-related neoplasms of the peripheral nervous system.</a> Brain Research Bulletin. 88 (1), 58-71 (2012).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Burada sunulan histolojik ve biyokimyasal yöntemler, nörofibrom ve MPNST patogenezinin GEM modellerini teşhis etmek ve karakterize etmek için bir çerçeve sağlar. Yıllar geçtikçe, bu metodolojilerin GEM modellerinde ortaya çıkan periferik sinir kılıfı tümörlerinin patolojisini değerlendirmek için oldukça yararlı olduğunu gördük 21,25,26. Bununla birlikte, burada özetlenen protokoller, GEM modellerindeki tümörlerin insan meslektaşlarının patolojisini ne kadar doğru bir şekilde özetlediğini belirlemek için yararlı olsa da, bu stratejilerde takdir edilmesi gereken bazı sınırlamalar vardır. Başlangıç olarak, P 0-GGFβ3 fareleri, tümör fenotiplerinin neredeyse tamamen nüfuz ettiğini gösterir, bu da genomik çalışmalar ve genom ölçekli shRNA taramaları için kullanılabilen nörofibromlar ve MPNST'ler 21,25,26 olan çok sayıda fare elde etmeyi nispeten kolaylaştırır. Bu modeldeki fenotipin yüksek penetransı, P 0-GGFβ3 farelerini klinik öncesi deneyler için oldukça yararlı kılmaktadır. Bununla birlikte, bunun tüm GEM kanser modelleri için geçerli olmayacağı kabul edilmelidir. Bu nedenle, tümör geliştireceği tahmin edilebilecek hayvanların oranını belirlemenin önemini vurguladık. Daha az sıklıkla tümör geliştiren bir hayvan modeliyle çalışırken, klinik öncesi çalışmalara veya diğer çalışmalara girilebilecek tümör taşıyan hayvanları kesin olarak tanımlamak için manyetik rezonans görüntüleme veya pozitron emisyon tomografisi gibi görüntüleme yöntemlerini kullanmanın avantajlı olduğunu gördük. Ancak bu yaklaşım, tekrarlanan taramalar gerekiyorsa maliyet engelleyici olabilir. Bu nedenle, ilgilenilen GEM modelinin ortalama hayatta kalma süresini belirlemenin önemini de vurguladık26-Bir hayvanın ne zaman bir tümör geliştirmesinin beklenebileceğini anlamak, istenen fenotipe ve ilgili maliyetlere sahip hayvanları tanımlamak için gereken tarama sayısını azaltır.
Bir faredeki büyük bir tümörün aslında oldukça az miktarda doku olduğunu kabul etmek de önemlidir. Bu protokolde, tümör dokusunun üçe bölündüğü, histoloji/immünohistokimyaya ayrılan bölümler, erken geçiş hücre kültürlerinin oluşturulması ve ilgilenilen biyomoleküllerin (proteinler, RNA, DNA) izolasyonu ile bir süreç öneriyoruz. Bununla birlikte, tümör boyutu değişecektir ve tümör oldukça küçükse, bu şekilde bölünmek için yeterli dokuya sahip olmayı engelleyebilir. Bu durumda, araştırmacı tümör teşhisine veya tümör dokusunun başka bir kullanımına öncelik verilip verilmediğini belirlemelidir32. Bu koşullar altında, önyargımız, diğer deneylere başlamadan önce neyle çalıştığımızı anlamak için doğru bir teşhise sahip olmamız gerektiğidir. Tümör tanılarının genellikle neoplazmın üçte birinden daha azını kullanarak kolayca kurulabileceğini bulduk. Küçük tümörlerle uğraşırken, bunun yerine tipik olarak küçük bir tümör dokusu parçasını çıkaracağız, histoloji dokusuna saracağız ve işlem sırasında dokunun kaybolmamasını sağlamak için bir doku kasetine yerleştireceğiz. Bu yaklaşımın dezavantajı, DSÖ derecelendirmesi isteniyorsa araştırmacının neoplazmı düşük derecelendirmesine neden olabilmesidir; Bunun nedeni, kanserlerde genellikle daha düşük ve daha yüksek dereceli bölgelerin bir arada bulunmasıdır ve çok küçük bir örnek alınırsa, elde edilen derece, tümör örneğinin nereden alındığına bağlı olacaktır.
Periferik sinir kılıfı tümör kimliğini belirlemek için tanımladığımız protokoller büyük ölçüde immünohistokimyaya dayanmaktadır. Bazı hücre tipleri için kullanılabilecek alternatif yaklaşımlar olsa da (örneğin, mast hücrelerini tanımlamak için Unna boyamaları yapmak), bu nörofibromlarda ve MPNST'lerde bulunan hücre tiplerinin çoğu için aynı şekilde doğru değildir. Sonuç olarak, kullanılacak immünohistokimyasal prosedürlerin uygun şekilde optimize edildiğini belirlemek için büyük özen gösterilmelidir. Deneyimlerimize göre, çeşitli sorunlar tanısal immünohistokimyayı tehlikeye atabilir. Araştırmacının daha önce kullanmadığı bir primer antikorla seyreltme serisi gerçekleştirmesi kritik derecede önemlidir; Ek olarak, daha önce optimize edilmiş yeni bir antikor partisi kullanılırken bir seyreltme serisi gerçekleştirilmelidir33. Taze reaktif partilerinin elinizin altında olduğundan emin olmak için de özen gösterilmelidir. Deneyimlerimize göre, yaşlandıklarında, hidrojen peroksit ve DAB özellikle düzgün performans göstermemeye eğilimlidir, bu da araştırmacının lekelerinin negatif olduğuna uygunsuz bir şekilde karar vermesine neden olabilir.
Pleksiform nörofibromlar, MPNST'ler ve MPNST'lerin ayırıcı tanısında göz önünde bulundurulan çeşitli neoplazm tipleri için tanımladığımız immünohistokimyasal profiller en sık karşılaştığımızprofillerdir 21,25,26,34. Bununla birlikte, MPNST'lerde ve bu diğer malignitelerde farklı farklılaşma nadir olmadığından, araştırmacı burada tanımladığımızdan biraz farklı boyama profilleriyle karşılaşabilir. Bu nüanslar, yeni bir GEM tümör oluşumu modelini karakterize eden ekibin deneyimli bir insan veya veteriner patolog içermesini şiddetle tavsiye etmemizin nedenidir. Bu protokolde, GEM ve insan MPNST'lerine DSÖ derecelendirmesi uyguladık. Bu derecelendirme sistemini tercih ediyoruz çünkü derecelendirme kriterleri nispeten iyi tanımlanmıştır ve insan ve fare MPNST'leri arasında karşılaştırılması kolaydır 2,28. Bununla birlikte, DSÖ derecelendirme kriterlerinin patologlar tarafından aynı şekilde kabul edilmediğini belirtmek isteriz. Bunun nedeni, MPNST'lere uygulanan üç DSÖ derecesinin hastalarda klinik sonuçları öngördüğünün açık olmamasıdır. Bu nedenle, birçok patolog MPNST'leri basitçe düşük dereceli veya yüksek dereceli maligniteler olarak sınıflandırmayı tercih eder. Bu yaklaşımı kullanarak, MPNST'lerin yaklaşık% 85'i, tümör nekrozunun eşlik edebileceği hızlı mitotik aktivite, belirgin hücresel atipi ve hiperkromazi ile karakterize yüksek dereceli maligniteler olarak kabul edilir. Düşük dereceli MPNST'ler daha az hücresellik, hiperkromazi ve mitotik aktivite gösterir.
Erken geçiş MPNST hücrelerinin allogreftlenmesinin, bu kültürlerin tümörjenitesini doğrulamanın basit bir yolu olduğunu bulduk. Bununla birlikte, hücreler bir allogreft oluşturmadığında bazı hususlara dikkat edilmelidir32. Deneyimlerimize göre, erken pasajlı MPNST hücrelerinin ezici çoğunluğu bir allogreft oluşturacak olsa da, zaman zaman bunu yapmayan erken pasaj kültürleriyle karşılaştık. Bu başarısızlığa rağmen, dizi karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (aCGH) ve tüm ekzom dizilemesi, bu erken geçiş kültürlerinin tümör hücreleri olmalarıyla tutarlı çoklu genomik anormalliklere sahip olduğunu göstermiştir 25,26. Ayrıca, genellikle kültürlerin aşılama için hasat edilmeden önce birleşmesine izin verildiği için sağlıklı olmayan erken geçiş kültürleri de bulduk. Kaba kullanım nedeniyle hasar gören hücreler (örneğin, aşırı sayıda yukarı ve aşağı pipetlenmiş enzimatik olmayan hücre ayrışma çözeltisi ile aşırı uzun süre inkübe edilmiş) aşılandığında da kötü performans gösterir. Greft oluşumu için belirttiğimiz sürelerin deneyimlerimize dayanan bir tahmin olduğunu da belirtmek isteriz. Bazen, allogreftleri başarılı bir şekilde oluşturacak ancak bunu yapmak daha uzun zaman alacak erken geçiş kültürleriyle karşılaştık.
Yukarıda özetlenen yaklaşımlar, periferik sinir sistemi neoplazisinin yeni geliştirilmiş bir GEM modelinin temel yönlerini karakterize etmek ve bu hayvanlarda gelişen nörofibromları ve MPNST'leri doğru bir şekilde teşhis etmek için kapsamlı bir araç sağlar. Erken geçiş MPNST kültürlerinin oluşturulması ve bu kültürlerin allogreftleme için kullanılması için ana hatlarıyla belirttiğimiz yöntemler, GEM modellerinde tanımlanan neoplazmların tümörjenitesi için de net kanıtlar sağlar. Erken geçiş kültürleri oluştururken bireysel klonların seçimini yapmadığımızı vurgulamak isteriz. Tümör hücrelerini kültürlere yerleştirirken bazı seçilimlerin kaçınılmaz olduğunu kabul etmemize rağmen, bu ilk bulgular erken geçiş GEM MPNST kültürlerinde tanımlanan mutasyonların ana tümörde bulunanlara oldukça benzer kaldığını göstermektedir. Bununla birlikte, aCGH'yi kullanarak, bu erken geçiş kültürlerini daha uzun geçişler için taşımaya devam etmenin, bu tümör hücrelerinin önceki geçişlerinde görülenlerden ayrılmaya başlayan genomik değişikliklerle sonuçlandığını da bulduk.

Son otuz yılda, çok sayıda laboratuvar, insan kanseriyle ilişkili mutasyonları fare genomuna sokarak veya insan kanserlerinde aşırı eksprese edilen bir gen ürününü aşırı eksprese ederek insan kanserlerinin fare modellerini oluşturmaya çalışmıştır. Ortaya çıkan genetiği değiştirilmiş fare (GEM) modelleri, yeni tanıtılan genomik modifikasyonun tümör oluşumunu başlattığını belirlemek, tümör ilerlemesine katkıda bulunan daha sonra meydana gelen diğer genetik veya epigenetik değişiklikleri tanımlamak ve tümörün başlamasını ve ilerlemesini sağlayan anahtar sinyal yollarını tanımlamak gibi çeşitli amaçlar için kullanılabilir. İmmün yetmezliği olan farelerin kullanımına dayanan ortotopik ksenogreft modellerinin aksine, GEM kanser modelleri tamamen işlevsel bir bağışıklık sistemine sahiptir ve bu nedenle aday terapötik ajanlara verilen yanıtları daha doğru bir şekilde modellemektedir. Bununla birlikte, GEM kanser modellerini bu gibi amaçlar için kullanırken, araştırmacıların GEM neoplazmları ile yapılan gözlemlerin insan meslektaşlarıyla ilgili olduğunu doğrulamaları önemlidir. Bu doğrulama, GEM neoplazmlarının patolojisinin kapsamlı bir değerlendirmesini ve GEM neoplazmlarının patolojik özelliklerinin karşılık gelen insan tümör tipinin patolojisini özetleyip özetlemediğinin belirlenmesini içermelidir.
Tümör yatkınlık sendromu nörofibromatozis tip 1 (NF1), insan sinir sistemini etkileyen en yaygın genetik hastalıktır ve her 3.000-3.500 canlı doğumda yaklaşık 1'inde görülür 1,2,3. NF1'den etkilenen bireyler, derilerinde (dermal nörofibromlar) ve büyük sinirlerde ve sinir pleksuslarında (pleksiform nörofibromlar) nörofibromlar olarak bilinen çok sayıda iyi huylu periferik sinir kılıfı tümörü geliştirir. Hem dermal hem de pleksiform nörofibromlar fiziksel, davranışsal ve/veya sosyal bozukluk üreterek hastanın yaşam kalitesini kötüleştirirken, pleksiform nörofibromlar (PN'ler) özellikle tehlikelidir 4,5. Bunun nedeni, PN'lerin sıklıkla son derece düşük sağkalım oranınasahip agresif iğsi hücreli neoplazmlar olan malign periferik sinir kılıfı tümörlerine (MPNST'ler) dönüşmesidir 1,2. Büyük ölçüde, bu düşük sağkalım oranı, şu anda MPNST'leri tedavi etmek için kullanılan radyo ve kemoterapötik rejimlerin etkisiz olmasından kaynaklanmaktadır. Bununla birlikte, yeni, daha etkili tedaviler geliştirmek zor olmuştur. Bunun nedeni, MPNST'lerin NF1 hastalarında ne kadar sık ortaya çıktığına rağmen, hala nadir görülen neoplazmlar olmalarıdır. Sonuç olarak, çalışma için çok sayıda insan tümörü elde etmek çok zordur; Klinik araştırmalar için MPNST'li yeterli sayıda hastayı işe almak da zordur. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, nörofibroma patogenezini ve PN-MPNST ilerlemesini yönlendiren anormallikler hakkında daha fazla bilgi edinmek ve aday terapötik ajanlarla klinik öncesi çalışmaları kolaylaştırmak amacıyla çeşitli GEM modelleri oluşturulmuştur.
NF1 hastaları, NF1 geninin bir kopyasında inaktive edici mutasyonlara sahiptir. Nörofibroma patogenezi Schwann hücre soyundan bir hücrede kalan fonksiyonel NF1 geninde inaktive edici bir mutasyon meydana geldiğinde tetiklenir. Bununla birlikte, şaşırtıcı bir şekilde, fareler germ hattını inaktive eden Nf1 mutasyonları ile üretildiğinde, nörofibromlargeliştirmediler 6,7. Nf1-null Schwann hücrelerine sahip farelerin ve diğer tüm hücre tiplerinde Nf1 haplo yetmezliğinin (Krox20-Cre;Nf1flox/- fareler) geliştirilen pleksiform nörofibromlar, nörofibrom patogenezi için ek hücre tiplerinde azaltılmış Nf1 gen dozajının gerekli olduğunu öne sürdü8. O zaman bile, Krox20-Cre'deki pleksiform nörofibromlar; Nf1flox/- fareler MPNST olmak için ilerlemediler ve bu nedenle insan meslektaşlarının biyolojisini sadece kısmen taklit ettiler. MPNST patogenezi Nf1 mutasyonları, Trp539 veya Cdkn2a10 gibi ek tümör baskılayıcı genlerdeki mutasyonlarla ortaklaştığında ortaya çıkmıştır, ancak bu GEM modellerindeki MPNST'ler, önceden var olan iyi huylu pleksiform nörofibromlardan ziyade de novo veya belirsiz biyolojik potansiyele sahip atipik nörofibromatöz neoplazmlardan (ANNUBP'ler)11,12 gelişmiştir (bkz.13,14 bu modellerin yanı sıra Suz12 ve Pten15 gibi genlerde MPNST ile ilişkili ek fonksiyon kaybı mutasyonlarını tanıtan diğer modellerin mükemmel incelemeleri için).
Bu fare modelleri, NF1, TP53 ve CDKN2A gibi genlerin NF1 ile ilişkili periferik sinir sistemi neoplazmlarının patogenezinde oynadığı rolü belirlemek ve aday terapötik ajanları test eden klinik öncesi çalışmalar için paha biçilmez olmuştur. Bununla birlikte, pleksiform nörofibromların belirsiz biyolojik potansiyele sahip atipik nörofibromatöz neoplazmlar (ANNUBPs16) ve daha sonra MPNST'ler haline gelme süreci hakkında hala eksik bir anlayışa sahibiz. Nf1 ve Arf'de delesyonları olan farelerin MPNST'ler11 olma yolunda ilerleyen ANNUBP'ler geliştirdiğine dair son raporla bu süreci anlamada son zamanlarda bazı ilerlemeler kaydedilmiştir. Bununla birlikte, insanlarda görülen pleksiform nörofibrom-MPNST ilerlemesi sürecini tam olarak özetleyen Nf1 mutasyonuna dayalı fare modelleri henüz mevcut değildir. Ek olarak, MPNST'lerin geliştirilmesine yol açan birden fazla farklı yol olup olmadığı açık değildir. Bu göz önüne alındığında, yukarıda tarif edilen GEM'lerin sadece nörofibrom-MPNST ilerlemesine ve MPNST patogenezine yol açan birkaç farklı yolun bir alt kümesini modellemesi mümkündür. Bu nokta, MPNST'lerin sporadik olarak da ortaya çıkması ve bazı sporadik MPNST'lerin görünüşte NF1 mutasyonlarına sahip olmamasıgerçeğiyle vurgulanmaktadır 17,18.
Bu son nokta, Magollon-Lorenz ve arkadaşlarının NF1 mutasyonlarından yoksun en azından bazı sporadik MPNST'lerin melanom veya farklı bir sarkomtipi 19 olduğu yönündeki son önerisiyle sorgulanmış olsa da, yakın zamanda sporadik bir MPNST ve bu tümörden türetilen bir hücre hattı (2XSB hücreleri) NF1 vahşi tip20. Ana tümörün ve 2XSB hücre hattının karakterizasyonu sırasında, sporadik malign periferik sinir kılıfı tümörünün ayırıcı tanısında rutin olarak düşünülen melanom ve diğer birçok sarkom tipi dahil olmak üzere alternatif tanı olasılıklarını sistematik olarak dışladık20. Ek olarak, Magollon-Lorenz ve ark. çalıştıkları üç sporadik MPNST hücre hattındaki bulgularının, sporadik MPNST'ler olarak tanımlanan tüm tümörlerin MPNST olmadığını gösterecek şekilde genelleştirilemeyeceğini kabul ettiler.
Nörofibrom ve MPNST patogenezinin mutlaka spesifik tümör baskılayıcı gen mutasyonlarına bağlı olmadığı bir GEM modeli oluşturmak için, güçlü Schwann hücresi mitojen nöregulin-1'in (NRG1) aşırı ekspresyonunun Schwann hücresine özgü miyelin proteini sıfır (P0) promotörü (P 0-GGFβ3 fareleri) tarafından yönlendirildiği transgenik fareler ürettik21. İnsan nörofibromlarının, MPNST'lerin ve MPNST hücre hatlarının, NRG1 sinyaline aracılık eden erbB reseptörü tirozin kinazlar (erbB2, erbB3 ve erbB4) ile birlikte birkaç NRG1 izoformunu eksprese ettiğini ve bu erbB reseptörlerinin yapısal olarak aktive olduğunu daha önce göstermiştik22. Ayrıca erbB kinazların farmakolojik inhibitörlerinin MPNST proliferasyonunu22, sağkalım23 ve migrasyon24'ü güçlü bir şekilde inhibe ettiğini gösterdik. İnsanlardaki gözlemlerimize uygun olarak, P 0-GGFβ3 fareleri, yüksek frekansta MPNST'ler haline gelen pleksiform nörofibromlar 25 geliştirir 21,25. P 0-GGFβ3 MPNST'lerin, insan meslektaşları gibi, yaygın olarak Trp53 ve Cdkn2a mutasyonlarının yanı sıra tümör oluşumuna potansiyel olarak katkıda bulunan çok sayıda başka genomik anormallik geliştirdiğini gösterdik25. P 0-GGFβ3 farelerinde ortaya çıkan MPNST'lerde inaktive edici Nf1 mutasyonları yoktur. Bununla birlikte, genetik tamamlamayı kullanarak, NRG1'in P 0-GGFβ3 farelerinde tümörijenezi desteklediğini gösterdik, ağırlıklı olarak Nf1 kaybı26 ile değiştirilen aynı sinyal kaskadları yoluyla; bu sonuç, Trp53 haploinyofisi varlığında Nf1 kaybı için NRG1 aşırı ekspresyonunun ikame edilmesinin (P 0-GGFβ3;Trp53+/- fareler), cis-Nf1+/-'de görüldüğü gibi, MPNST'lerin de novo geliştirdiği hayvanlar üretir; Trp53+/- fareler27.
P 0-GGFβ3 farelerinin, NF1'li insanlarda görülen nörofibroma patogenezi ve nörofibrom-MPNST ilerlemesi süreçlerini doğru bir şekilde modellediğini gösteren bu ve diğer bilgileri elde etmek için, bu hayvanlardan alınan dokuları işlemek, tümörlerini doğru bir şekilde teşhis etmek, bu farelerde ortaya çıkan MPNST'leri derecelendirmek, erken geçiş P0-GGFβ3 ve P0-GGFβ3'ü oluşturmak ve karakterize etmek için özel metodolojiler geliştirdik; Trp53+/- MPNST kültürleri ve P 0-GGFβ3 PN'leri ve MPNST'ler ile P0-GGFβ3'ün patolojisinin eleştirel olarak karşılaştırılması; Trp53+/- MPNST'ler insan meslektaşlarınınkine. Bu metodolojilerin çoğu, sinir sistemi neoplazisinin diğer GEM modellerine genellenebilir. Ek olarak, bu metodolojilerin birçoğu, neoplazmların diğer organ bölgelerinde ortaya çıktığı GEM modellerine daha geniş bir şekilde uygulanabilir. Sonuç olarak, burada bu metodolojilerin ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>100 mm Doku Kültürü Plakaları</td><td>Corning Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>3, 3'- Diaminobensidin (DAB)</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>SK-400</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu plakalar</td><td>Corning Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Asetik Asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 İkincil (Keçi Anti-Fare)</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 İkincil (Keçi Anti-Fare)</td><td>Invitrogen</td><td>A21043 veya A11004</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 İkincil (Keçi Anti-Tavşan)</td><td>Invitrogen</td><td>A11036</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum Klorür (NH4Cl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>BCA Protein Test Kiti</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Caldesmon</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>E89, ab32330</td><td></td></tr><tr><td>CD117</td><td>Hücre Marque</td><td>117R-18-ASR</td><td></td></tr><tr><td>CD163</td><td>Leica</td><td>NCL-L-CD163</td><td></td></tr><tr><td>CD31</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab29364</td><td></td></tr><tr><td>CD34</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab81289</td><td></td></tr><tr><td>CD86</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab53004</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sıyırıcı</td><td>Sarstedt</td><td>83.183</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sıyırıcı</td><td>Corning</td><td>25-056-CI</td><td></td></tr><tr><td>Daire Lamel</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-100</td><td></td></tr><tr><td>Citrisolve Hibrit (d-limonen bazlı çözücü)</td><td>Decon Laboratories</td><td>5989-27-5</td><td></td></tr><tr><td>Eleştirmen Asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A104-500</td><td></td></tr><tr><td>Sitokeratin</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>C-11, ab7753</td><td></td></tr><tr><td>Desmin</td><td>Agilent Dako&nbsp;</td><td>klon D33 (M0760)</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobensizdin (DAB) Çözelti</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>15-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (200 Kanıt)</td><td>Decon Laboratories</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Buzağı Serumu</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-01</td><td></td></tr><tr><td>Forksolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6279</td><td></td></tr><tr><td>Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)</td><td>Corning</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoksilen</td><td>Fisherbrand</td><td>245-677</td><td></td></tr><tr><td>Hemasitometre</td><td>Brightline-Hauser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>A144-212</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>327-500</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Wako Kimyasalları</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP (Peroksidaz) Polimer Kiti, Fare Üzerinde Fare</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>MP-2400</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP (Peroksidaz) Polimer Kiti, At Anti-Tavşan</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>MP-7401</td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka</td><td>makinesi Thermo Scientific</td><td>Heracell 240i CO2 inkübatörü</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A415</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67</td><td>Hücre Sinyalizasyonu ve nbsp;</td><td>12202</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı Azot</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MART1</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>M2-9E3, ab187369</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nestin</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>İnsan: MAD5236 (10C2), İnsan: MAB353 (Rat-401)</td><td></td></tr> <tr><td>Neuregulin 1 beta</td><td>Evde</td><td>SLC tarafından yapılmıştır (ayrıca R& D Sistemleri)</td><td></td></tr><tr><td>Nörofibromin</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji&nbsp;</td><td>SC-67</td><td></td></tr><tr><td>BAŞINI SALLADI. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Yağsız Kuru Süt</td><td>Walmart</td><td>Büyük Değer Markası</td><td></td></tr><tr><td>P0-GGF&beta; 3 fare</td><td>Evde</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafin Balmumu</td><td>Leica</td><td>Paraplast 39601006</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PM-999</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (%4)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J19943-K2</td><td></td></tr><tr><td>Permount (Ksilen Montaj Ortamı)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>pH Metre</td><td>Mettler Toldedo</td><td>Seven Excellence, 8603</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (Dulbecco's)</td> <td>Corning</td><td>20-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>PMEL</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>EP4863(2), ab137078</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin Hidrobromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5899-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir İzoflurance Makinesi</td><td>VetEquip İnhalasyon Anestezi Sistemleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PVA-DABCO (Sulu Montaj Ortamı)</td><td>Millipore Sigma</td><td>10981100ML</td><td></td></tr><tr><td>Pirinç Pişirici</td><td>Kayın Hamilton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S100B</td><td>Agilent Dako&nbsp;</td><td>Z0311&nbsp; (şimdi GA504)</td><td></td></tr><tr><td>SMA</td><td>Ventana Medikal Sistemler&nbsp;</td><td>klon 1A4</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Sitrat (Dihidrat)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP327-1</td><td></td></tr><tr><td>Sox10</td><td>ABCAM&nbsp;</td><td>ab212843</td><td></td></tr><tr><td>Çelik histoloji kalıbı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>TCF4 / TCFL2 & nbsp;</td><td>Hücre Sinyalizasyonu&nbsp;</td><td>(CH48H11) # 2569</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kaseti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Toluidin Mavi</td><td>ACROS Organikler</td><td>348600050</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Corning</td><td>25-051-31</td><td></td></tr></tbody></table>

genetiği değiştirilmiş fare modellerinde malign periferik sinir kılıfı tümörlerinin tanımlanması, teşhis edilmesi ve derecelendirilmesi

Identifying, Diagnosing, and Grading Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumors in Genetically Engineered Mouse Models

Otozomal dominant tümör yatkınlık sendromu nörofibromatozis tip 1 (NF1) olan hastalar genellikle daha sonra oldukça agresif malign periferik sinir kılıfı tümörlerine (MPNST'ler) dönüşen pleksiform nörofibromlar (PN'ler) geliştirir. Bir PN'nin bir MPNST'ye dönüştüğü süreci anlamak, NF1'li insanlarda görülen PN-MPNST ilerlemesini doğru bir şekilde kopyalayan genetik olarak tasarlanmış fare (GEM) modellerinin mevcudiyeti ile kolaylaştırılacaktır. Ne yazık ki, Nf1 ablasyonlu GEM modelleri bu süreci tam olarak özetlememektedir. Bu, Schwann hücrelerinde Schwann hücresi mitojen nöregulin-1'in (NRG1) aşırı ekspresyonunun yüksek frekanslı MPNST'ler haline gelen PN'lerin gelişmesiyle sonuçlandığı bir GEM modeli olan P 0-GGFβ3 farelerini geliştirmemize yol açtı. Bununla birlikte, P 0-GGFβ3 farelerinde tümör oluşumu ve neoplastik ilerlemenin NF1 hastalarında görülen süreçleri doğru bir şekilde modelleyip modellemediğini belirlemek için, önce P0-GGFβ3 periferik sinir kılıfı tümörlerinin patolojisinin insan meslektaşlarının patolojisini özetlediğini kanıtlamamız gerekiyordu.
Burada, P 0-GGFβ3 ve P0-GGFβ3 kullanarak GEM modellerinde periferik sinir sistemi neoplazmlarını doğru bir şekilde teşhis etmek ve derecelendirmek için kullanılan özel metodolojileri açıklıyoruz; Örnek olarak Trp53+/- fareler. PN ve MPNST'leri teşhis etmek için kullanılan histolojik, immünohistokimyasal ve histokimyasal yöntemleri, bu neoplazmların patolojilerini taklit eden diğer tümör tiplerinden nasıl ayırt edileceğini ve bu neoplazmların nasıl derecelendirileceğini açıklıyoruz. GEM MPNST'lerden erken geçiş kültürlerinin oluşturulmasını, bu kültürlerin immünositokimya kullanılarak nasıl karakterize edileceğini ve allogreftler oluşturularak tümörjenitelerinin nasıl doğrulanacağını tartışıyoruz. Toplu olarak, bu teknikler GEM modellerinde ortaya çıkan PN'lerin ve MPNST'lerin patolojisini karakterize eder ve bu murin tümörlerinin patolojisini insan meslektaşlarıyla eleştirel olarak karşılaştırır.

Genetiği değiştirilmiş farelerdeki sinir sistemi neoplazmlarının insan meslektaşlarının patolojisini doğru bir şekilde özetleyip özetlemediğini değerlendirmek için bir metodoloji geliştirdik. Burada, bu histolojik teknikleri, tanımlanmış patolojik kriterleri ve kültür metodolojilerini P 0-GGFβ3 fare modelinde ortaya çıkan nörofibromlara ve malign periferik sinir kılıfı tümörlerine uyguluyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Fare Modellerinde Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörlerinin Tanımlanması, Teşhis Edilmesi ve Derecelendirilmesi

Patients with the autosomal dominant tumor susceptibility syndrome neurofibromatosis type 1 (NF1) commonly develop plexiform neurofibromas (PNs) that ...

Grubumuz nörofibromatozis tip 1 ve hastalıkla ilişkili kanserlerin patolojisi, pleksiform nörofibromlar ve malign periferik sinir kılıfı tümörleri üzerine odaklanmıştır. Bunu yapmak için, genetiği değiştirilmiş bir fare modeli, P0GGF beta üç, Laboratuvarımız ve pleksiform nörofibromlar ve malign periferik sinir kılıfı tümörleri üzerinde çalışan diğerleri de dahil olmak üzere çeşitli teknikler kullanıyoruz. Hasta kaynaklı tümör örneklerine sınırlı erişim çalışmalarımızı engellemektedir.Sonuç olarak, genetiği değiştirilmiş fare modellerinin oluşturulması ve karakterize edilmesi, hastalık mekanizmaları ve tedavilerin potansiyel gelişimi üzerine devam eden araştırmalar için çok önemlidir. Periferik sinir tümörlerini tanımlamak zor olabilir ve genellikle diğer kanserler gibi yanlış teşhis edilir. Bunu önlemek için, bu tümörleri doğru bir şekilde tanımlamak ve derecelendirmek için histoloji, immünohistokimya ve derecelendirme kullanarak ayrıntılı bir protokol geliştirdik.Bu, gelecekteki araştırma çalışmalarının güvenilirliğini artırır. Çalışmamız, insan hastalığını uygun şekilde taklit etmelerini sağlamak için genetiği değiştirilmiş fare modelinden türetilmiş tümörleri araştırmak ve doğrulamak için bir çerçeve sağlar. Tümör mikroçevresini ve tümör dönüşümü için gerekli faktörleri anlamak için mevcut genetiği değiştirilmiş fare modellerini kullanacağız.Pleksiform nörofibromların malign periferik tümörlere ilerlemesine neden olan nedir?

identifying-diagnosing-grading-malignant-peripheral-nerve-sheath

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Genetiği değiştirilmiş fare modellerinde ortaya çıkan tümörlerde terapötik hedefleri ve karşılık gelen insan tümör tipini belirlemek ve karşılaştırmak için genomik analizler ve fonksiyonel genomik ekranlar kullanan türler arası karşılaştırmalı bir onkogenomik yaklaşım geliştirdik.

Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörünün Fare Modellerinde Terapötik Hedefleri Belirlemek için Genetik Profilleme ve Genom Ölçeğinde Bırakma Taraması

Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Bu iletişim kuralı bir vitro insan preklinik modeli osteoclastogenesis kanser hücre-Osteoklast etkileşimi taklit etmek için meme kanseri hücre hatları ile kültürlü periferik kan monosit üzerinden gelişimi anlatılmaktadır. Model kemik metastaz oluşumunu anlayışımız daha fazla ve tedavi olanakları geliştirmek için kullanılabilir.

Osteoclastogenesis periferik kan monosit kültürlü meme kanseri hücre hatları ile birlikte gelen bir insan preklinik modelinin geliştirilmesi

Bu makalede genetiği pankreas kanseri farelerde yüksek çözünürlüklü ultrason kullanımı. Birincil amaç algılama ve endojen pankreas tümörleri değerlendirilmesi için ayrıntılı bir talimat sağlamaktır.

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

Burada ayırmak ve kurulan subkutan tümörler tümör bağışıklık ve non-immün microenvironment bileşenlerinin zenginleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik tümör bağışıklık sızmak ve tümör bağışıklık microenvironment kapsamlı karakterizasyonu izin verebilir non-immün tümör kesirler ayrı analiz için sağlar.

Zenginleştirme ve kurulan subkutan fare tümör tümör bağışıklık ve Non-immün Microenvironments karakterizasyonu

Neoplazi anlayışı için baş ve boyun kanseri hastalarında mutasyona uğramış spesifik genler ile murine modellerinin geliştirilmesi gereklidir. Burada, belirli genomik değişikliklerile murine HNC hücre hatları oluşturmak için adeno-ilişkili bir virüs-Cas9 sistemi kullanarak primer minür dil hücrelerinin in vitro dönüşümü için bir protokol salıyoruz.

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun Kanseri Hücre Hattı In Vitro Kurulması

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Melanom, hızla diğer organlara yayılan çok agresif bir hastalıktır. Bu protokol, metastatik melanomun Braf / Pten fare modelindeki inguinal lenf düğümlerinin hacmini izlemek için 3D render ile birlikte ultra yüksek frekanslı ultrason görüntülemenin uygulanmasını açıklamaktadır.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Burada, genetiği değiştirilmiş fare modeli kaynaklı tümörlerde in vivo embriyonik öldürücü olan gen nakavtlarını gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz ve daha sonra nakavtın tümör büyümesi, proliferasyon, sağkalım, göç, invazyon ve transkriptom in vitro ve in vivo üzerindeki etkisini değerlendiriyoruz.

Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümör Hücrelerinde Floks Alellerinin Ex vivo Ablasyonu ile Tümörigenezde Gen Fonksiyonlarının Tanımlanması

Bu yöntem makalesinin amacı, cerrahi olarak rezeke edilmiş plevral mezotelyomadan primer tümör hücre hatlarının zenginleştirilmesi, üretilmesi ve genişletilmesi için sağlam ve tekrarlanabilir bir metodoloji göstermektir.

Primer, Malign Plevral Mezotelyoma Tümör Hatlarının Oluşumu ve Genleşmesi

Keşfedin, P0-GGF-beta-3 fare modelinde malign periferik sinir kılıfı tümörlerinin histolojik analiz ve derecelendirme yöntemlerini. Bu protokol, insan tümörleriyle benzerlikleri doğrulayarak nörofibromatozis tip bir araştırmalarına katkı sağlar.

Genetiği Değiştirilmiş Fare Modellerinde Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörlerinin Tanımlanması, Teşhis Edilmesi ve Derecelendirilmesi (Video) | JoVE Journal

Genetiği Değiştirilmiş Fare Modellerinde Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörlerinin Tanımlanması, Teşhis Edilmesi ve Derecelendirilmesi

Daha fazla video keşfet