Name: Orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında donma yaralanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: Keşfedin, fare masseter kasında donma yaralanması protokolü kullanarak orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmayı. Bu yöntem, ekstremite kaslarına kıyasla farklı rejenerasyon mekanizmalarını incelemek için güçlü bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Sichuan İl Sağlık ve Zindelik Komitesi (Hibe Numarası: 21PJ063) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (Hibe Numarası: 82001031) alınan hibelerle desteklenmiştir.

Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Sichuan Üniversitesi Batı Çin Stomatoloji Okulu Etik Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı (WCHSIRB-D-2020-114). Erkek C57BL / 6 fareleri (5 haftalık) nem kontrollü (% 53 ± 2) ve sıcaklık kontrollü (23 ± 2 ° C) bir tesiste büyütüldü ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsündeydi. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, reaktifler ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Donma yaralanması
<ol><li>Anestezi: Fareleri izofluranla ıslatılmış pamuk topları ile sakinleştirin ve 50 mg / kg'lık bir dozda intraperitoneal olarak tiletamin-zolazepam enjekte edin. Ameliyat öncesi ve sonrası analjezi, 1 mg/kg dozunda intraperitoneal meloksikam enjeksiyonu ile sağlandı. Gözlerini veteriner merhemi ile koruyun. 38 ° C'de tutulan bir ısıtma yastığı, hayvana termal destek sağlamak için tüm prosedür boyunca cerrahi örtünün altına yerleştirildi. Fareleri ameliyat masasına yan yatırdıktan sonra yapışkan bantla sabitleyin (Şekil 1). Göz kapağı refleksi, düzeltme refleksi ve pedal çekme refleksi kaybı ile anestezinin yeterliliğini değerlendirin. NOT: İzofloran anestezisi uygularken, fareyi bir elinizle ve izofloranla ıslatılmış pamuk topunu diğer elinizle tutun. Rahatsızlık ve cilt tahrişini önlemek için pamuğu hayvandan uzak tuttuğunuzdan emin olun.</li>
	<li>Ameliyat öncesi epilasyon: Farenin baldırındaki ve yüzündeki tüyleri tıraş etmek için elektrikli bir tıraş bıçağı kullanın ve tüy dökücü macunu pamuklu çubukla cilde uygulayın, masseter kasını ve tibialis ön kasını kaplayın. 1-2 dakika sonra macunu etanol bazlı cerrahi mendil ile yıkayın (Şekil 2A ve Şekil 2G). Cerrahi bölgeler üç tur iyot bazlı ovma ve% 75 etanol ile dezenfekte edildi. NOT: Elektrikli tıraş makinesi tek başına özellikle masseter bölgesinde epilasyon için yeterli değildi. Tüy dökücü macunu uygularken aşırı macun kullanmamak önemlidir. Cilt yanıklarını önlemek için macunu yıkarken cildi nazikçe silin.</li>
	<li>Cerrahi alan maruziyeti: Cerrahi işlemden önce cerrahi örtülerle örtün. MAS kası için, önce mandibulanın alt kenarı boyunca palpe edin. Kenardan 5 mm uzakta, oral komissürü tragusa bağlayan çizgi boyunca 7 mm'lik bir kesi yapın (kesikli çizgi, Şekil 2B'deki kesiğin yerini gösterir).</li>
	<li>TA kası için, tibia kemiğinin ön kenarını bulmak için önce baldır boyunca palpe edin. Dizden başlayıp ayak bileğinde bitecek şekilde bistüri ile derinin içinden kenara doğru 2 mm arkaya doğru kesin (kesikli çizgi Şekil 2H'deki kesi yerini gösterir). Her fare için, sol taraftaki MAS ve TA kası yaralanırsa, karşı taraftaki diğer kası kontrol olarak kullanın. NOT: Bu kesi, kesi sırasında kasların zarar görmemesini sağlamak için çok yüzeyseldir. Yüzdeki kesi tragusa çok yakın olmamalıdır. Aksi takdirde, parotis bezi açığa çıkacak ve sonraki dondurma işlemi sırasında aşırı kanamaya yol açacaktır.</li>
	<li>Kuru buz dondurma: MAS ve TA kaslarının uzun eksenleri boyunca önceden soğutulmuş forseps ile bir parça kuru buz tutun (sırasıyla Şekil 2C ve Şekil 2I). Kuru buzu 5 saniye boyunca doğrudan kasın yüzeyine yerleştirin. Kuru buzu çıkardıktan hemen sonra kasın sert ve soluk beyaz göründüğünü onaylayın (Şekil 2D ve Şekil 2J), ancak bitişik yaralanmamış kasa benzer şekilde 22-25 saniye içinde normal rengine ve dokusuna döndüğünü onaylayın (Şekil 2E ve Şekil 2K). NOT: Kuru buzu tutan forsepsler, kuru buzun hızlı süblimleşmesini önlemek için önceden soğutulmalıdır. 5 sn donma yaralanmasının gerçekleştirilmesinde ve kasın 22-25 sn iyileşme süresinin sayılmasında bir zamanlayıcı zorunludur. İyileşme süresi 22 saniyeden kısa veya 25 saniyeden uzun olan herhangi bir kas terk edilmelidir. Bu adım pratik gerektirir.</li>
	<li>Yara kapatma: Kasın tamamen iyileşmesinden sonra, cilt yarasını en az üç 7-0 dikişle kapatın (Şekil 2F ve Şekil 2L).</li>
	<li>Resüsitasyon: Sütür tamamlandığında, fareleri termal destekle kafese yerleştirin ve tüm doğrultma refleksleri yeniden kazanılana kadar sürekli olarak izleyin.</li>
</ol>2. Kas toplama
<ol><li>Fareleri aşırı dozda izofluran ile ötenazi yapın, ardından servikal çıkık yapın. Histolojik analiz için her iki taraftaki MAS ve TA kaslarını hasat edin.</li>
	<li>MAS kas diseksiyonu: Farenin yüzündeki cildi kesin ve MAS kasının arka kısmını ortaya çıkarmak için parotis bezini çıkarın. MAS'ı anterior ekinden mandibula üzerindeki posterior ekine kadar diseksiyon yapın. Beyaz noktalı alan, MAS'ın açıkta kalan kısmını gösterir (Şekil 3A). NOT: MAS kası, her ikisi de mandibula yüzeyine yakından bağlı derin ve yüzeysel bölmelerden oluşur. MAS'ın tam izolasyonunu sağlamak için diseksiyon sırasında makası mandibulaya bastırdığınızdan emin olun. Elmacık kemiğini MAS'tan elmacık kemiği ile mandibula arasındaki sınırlarla ayırt etmeye dikkat edin.</li>
	<li>TA kas diseksiyonu: Ayak bileğinden dizine kadar cildi kesin ve TA kasını ortaya çıkarmak için fasyayı çıkarın. TA'nın tendonunu izole etmek için mikro diseksiyon forsepslerinin ucunu kullanın ve tibiaya yapışan lifleri koparmak için dize kadar kaydırın. Daha sonra ayak bileğindeki tendonu kesin (Şekil 3B). NOT: TA kası için, fare bileğinin etrafında birkaç kas tendonu vardır; Tibiaya en büyük ve en yakın olan TA'nın tendonunu ayırt etmek pratik gerektirecektir.</li>
	<li>Ön soğutma izopentan: İki yalıtım varili hazırlayın; Küçük namluyu izopentan ve büyük namluyu sıvı nitrojen ile doldurun. Kas diseksiyonundan 10 dakika önce küçük namluyu büyük namlunun içine yerleştirin (Şekil 3D).</li>
	<li>Gömme kalıp hazırlığı: Her numune için silindirik bir kalay folyo kalıbı yapın ve bunları optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiği ile doldurun.</li>
	<li>Taze dondurulmuş: Kası, OCT bileşiğine dik tutarak OCT'ye batırın (Şekil 3C). Kalıbı önceden soğutulmuş izopentanın içine aktarmak için bir iğne tutucu kullanın. OCT'nin beyaz ve katı hale gelmesi için 40 saniye bekleyin (Şekil 3D). NOT: Kalıbın konumunun çok düşük olmadığından emin olun. Aksi takdirde, izopentan OCT ile karışacak ve kas dondurma sürecini bozacaktır. Kalıptaki OCT seviyesi, kas örneğinin yüksekliği ile karşılaştırılabilir olmalıdır. Hızlı ve verimli dondurma sağlamak için aşırı miktarda OCT'den kaçının.</li>
	<li>Numune saklama: Taze donmuş kas numunelerini açıkça etiketlenmiş 24 oyuklu plakalarda saklayın. Numuneleri hemen bölümlere ayırın veya uzun süreli kullanım için -80 °C'de saklayın.</li>
</ol>3. Histolojik analiz
<ol><li>Kas örneğinden 10 μm kalınlığındaki bölümleri yüzey işlem görmüş slaytlara kesmek için bir kriyostat kullanın.</li>
	<li>Slaytları 20 dakika buz gibi asetona koyun ve çeker ocakta 20 dakika havayla kurutun.</li>
	<li>Slaytları fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile 3 x 5 dakika yıkayın. NOT: Bu adımdan itibaren, kurumayı önlemek için slaytlar bir nem odasında tutulmuştur.</li>
	<li>Sirius Kırmızısı boyama<ol><li>0.5 g Sirius Red tozunu 500 mL doymuş pikrik asit içinde çözerek Sirius Red çalışma solüsyonunu hazırlayın.</li>
		<li>Slaytları oda sıcaklığında 1 saat boyunca Sirius Red çalışma solüsyonu ile boyayın.</li>
		<li>Slaytları 2 x 5 dakika boyunca% 0,5 asetik asit ile yıkayın.</li>
		<li>Boyama işleminden sonra, numuneler önce 15 saniye boyunca% 95 etanol içinde kurutulmalı, ardından 1 dakika boyunca susuz etanol içinde dehidrasyon yapılmalıdır. Son adım, sürgünün nötr balsam ile monte edilmesini içerir.</li>
	</ol></li>
	<li>İmmünohistolojik boyama<ol><li>Bölümleri PBS'de% 0.3 Triton ile oda sıcaklığında 20 dakika boyunca geçirgen hale getirin, ardından bir PBS yıkaması yapın.</li>
		<li>Pax7 boyama için, referans verilen kit ile birlikte verilen reaktifle bölümleri bloke edin; laminin ve Pdgfrα boyama için, oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS'de% 5 sığır serum albümini (BSA) ve% 5 eşek serumu ile bloklayın.</li>
		<li>Bölümleri Pax7, laminin ve Pdgfrα'ya karşı birincil antikorlarla gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin, ardından 3 x 5 dakika boyunca PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Bölümleri floresan boya konjuge ikincil antikorlarla oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin, ardından 3 x 5 dakika PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) ile 3 dakika inkübe edin, ardından 3 x 5 dakika PBS ile yıkayın.</li>
		<li>Montaj ortamını bölüme yerleştirin, lamel üstüne yerleştirin ve lamel kapatmak için oje kullanın.</li>
	</ol></li>
</ol>

Farelerde Dondurucu Yaralanma Yoluyla Orofasiyal Kas Fibroz Modelinin Oluşturulması

<ol><li>Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+body+region+specificity+in+murine+models+of+muscle+regeneration+and+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy.</a> Acta Physiologica. 231 (1), e13553(2021).</li>
<li>Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Clinics in Perinatology. 45 (4), 661-678 (2018).</li>
<li>Pai, B. C. J., Hung, Y. -T., Wang, R. S. H., Lo, L. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+patients+with+complete+unilateral+cleft+lip+and+palate%3A+20-year+follow-up+of+a+treatment+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Outcome of patients with complete unilateral cleft lip and palate: 20-year follow-up of a treatment protocol.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 359e-367e (2019).</li>
<li>Parsaei, Y., Chandler, L., Smetona, J. T., Lopez, J., Steinbacher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aesthetic+repair+of+unilateral+cleft+lip+using+the+modified+inferior+triangle+and+adjunctive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Aesthetic repair of unilateral cleft lip using the modified inferior triangle and adjunctive techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 149 (1), 70e-73e (2022).</li>
<li>Schubert, F. R., Singh, A. J., Afoyalan, O., Kioussi, C., Dietrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+roll+the+eyes+and+snap+a+bite+-+function%2C+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+In+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">To roll the eyes and snap a bite - function, development and evolution of craniofacial muscles.</a> Seminars In Cell & Developmental Biology. 91, 31-44 (2019).</li>
<li>Vyas, B., Nandkishore, N., Sambasivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+cranial+mesoderm%3A+developmental+trajectory+and+evolutionary+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Vertebrate cranial mesoderm: developmental trajectory and evolutionary origin.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 77 (10), 1933-1945 (2020).</li>
<li>Sambasivan, R., Kuratani, S., Tajbakhsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+eye+on+the+head%3A+the+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An eye on the head: the development and evolution of craniofacial muscles.</a> Development. 138 (12), 2401-2415 (2011).</li>
<li>Cheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head+muscle+fibro-adipogenic+progenitors+account+for+the+tilted+regeneration+towards+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Head muscle fibro-adipogenic progenitors account for the tilted regeneration towards fibrosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 589, 131-138 (2022).</li>
<li>Pavlath, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+among+muscle+precursor+cells+in+adult+skeletal+muscles+with+differing+regenerative+capacities%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity among muscle precursor cells in adult skeletal muscles with differing regenerative capacities.</a> Developmental Dynamics. 212 (4), 495-508 (1998).</li>
<li>Camacho-Alonso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+lingual+musculature+in+rats+using+myoblasts+over+porcine+bladder+acellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Regeneration of lingual musculature in rats using myoblasts over porcine bladder acellular matrix.</a> Oral Diseases. 27 (6), 1580-1589 (2021).</li>
<li>LeBoff, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinician%27s+guide+to+prevention+and+treatment+of+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">The clinician's guide to prevention and treatment of osteoporosis.</a> Osteoporosis International. 33 (10), 2049-2102 (2022).</li>
<li>Julien, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+contribution+of+skeletal+muscle+mesenchymal+progenitors+to+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair.</a> Nature Communications. 12 (1), 2860(2021).</li>
<li>Mahdy, M. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol-induced+injury+as+a+new+model+of+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Glycerol-induced injury as a new model of muscle regeneration.</a> Cell and Tissue Research. 374 (2), 233-241 (2018).</li>
<li>Guardiola, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+acute+skeletal+muscle+regeneration+by+cardiotoxin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Induction of acute skeletal muscle regeneration by cardiotoxin injection.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (119), 54515(2017).</li>
<li>Larouche, J. A., Wallace, E. C., Spence, B. D., Buras, E., Aguilar, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+mapping+of+immune+and+stem+cell+dysregulation+after+volumetric+muscle+loss%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal mapping of immune and stem cell dysregulation after volumetric muscle loss.</a> JCI Insight. 8 (7), e162835(2023).</li>
<li>Anderson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+a+critical+size+threshold+for+volumetric+muscle+loss+in+the+mouse+quadriceps%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of a critical size threshold for volumetric muscle loss in the mouse quadriceps.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 25 (2), 59-70 (2019).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446.e7 (2019).</li>
<li>Dong, J., Dong, Y., Chen, Z., Mitch, W. E., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathway+to+muscle+fibrosis+depends+on+myostatin+stimulating+the+differentiation+of+fibro%2Fadipogenic+progenitor+cells+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The pathway to muscle fibrosis depends on myostatin stimulating the differentiation of fibro/adipogenic progenitor cells in chronic kidney disease.</a> Kidney International. 91 (1), 119-128 (2017).</li>
<li>Lemos, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nilotinib+reduces+muscle+fibrosis+in+chronic+muscle+injury+by+promoting+TNF-mediated+apoptosis+of+fibro%2Fadipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nilotinib reduces muscle fibrosis in chronic muscle injury by promoting TNF-mediated apoptosis of fibro/adipogenic progenitors.</a> Nature Medicine. 21 (7), 786-794 (2015).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Biferali, B., Proietti, D., Mozzetta, C., Madaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+cross-talk+in+skeletal+muscle%3A+the+social+network%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+In+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors cross-talk in skeletal muscle: the social network.</a> Frontiers In Physiology. 10, 1074(2019).</li>
</ol>

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

İskelet kası rejenerasyonunu incelemek için fiziksel, kimyasal ve cerrahi uyaranların kullanımı dahil olmak üzere çeşitli yaralanma modelleri vardır 10,11,12,13,14,15,16. Kardiyotoksin ve baryum klorür, kas rejenerasyonunu başlatmak için en yaygın kullanılan iki kimyasaldır...

Orofasiyal kaslar, çiğneme, konuşma, solunum ve yüz ifadesi gibi günlük fizyolojik aktivitelerde kritik öneme sahiptir1. Konjenital orofasiyal deformitelerde ise bu kaslar atrofik ve fibrotik değişiklikler göstererek vücut sağlığının ve sosyal bilişin bozulmasına yol açar2. Yüz rekonstrüktif cerrahisi ilk basamak tedavi olmaya devam etmektedir, ancak postoperatif hastaların %30-70 kadarı hala kas kaybı ve kas disfonksiyonundan muzdariptir 3,4 Orofasiyal kas rejenerasyonunun başarısızlığı, tek başına ameliyatla düzeltilemeyen içsel faktörlere bağlanmıştır.
Orofasiyal kasların ortaya çıkışı, karmaşık omurgalı kafasına ve odacıklı kalbeeşlik eden evrimsel bir yeniliktir 5,6. Somitten türetilmiş uzuv muadillerinden farklı olarak, orofasiyal kaslar branş kemerindenkaynaklanır 7. Bu filogenetik ve ontogenetik karakterler onları farklı rejeneratif davranışlara yatkın hale getirebilir8. Masseter (MAS) kasının, tibialis anterior (TA) kasının aynı derecede yaralanmaya maruz kaldıktan sonra tamamen yenilendiği sırada ciddi fibroz geliştirdiği bildirilmiştir 1,9. Bununla birlikte, rejenerasyonun altında yatan mekanizma tam olarak anlaşılamamıştır.
Bu çalışmada, orofasiyal kas rejenerasyonunun araştırılmasını kolaylaştırmak için farelerin masseter kasının donma yaralanması modeli oluşturulmuştur. Fibroz fenotipini değerlendirmek için zaman noktası olarak yaralanmadan 14 gün sonrasını seçtik, çünkü iki kas arasında fark edilebilir ayrışmanın tespit edilebildiği en erken zaman noktasıydı. Yaralanmadan sonra MAS'ın tamamen yenilenmesi en az 40 hafta gerektirir1. Tutarlı bir şekilde, bu çalışma, yaralanmadan 14 gün sonra TA'nın düzenli rejenerasyonuna kıyasla, MAS'ın donma yaralanmasını takiben kayda değer bir kollajen birikimi ortaya koymuştur. Bu modelin yardımıyla, kas atrofisi ve fibroz ile ilgili daha ileri mekanik çalışmalar yapılabilir ve bu da ameliyat sonrası orofasiyal kas rejenerasyonunu teşvik etmek için potansiyel terapötik yolların geliştirilmesine yardımcı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>1 mL şırınga</td><td>Shifeng Tıbbi Cihaz ve Alet (Chengdu, Sichuan, Çin)</td> <td>1 ml şırınga</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Aseton</td><td>Chron Kimyasalları</td><td>Aseton</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Yapışma mikroskobu slaytları</td><td>Citotest Scientific</td><td>188105</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Hayvan tüy dökücü</td><td>Phygene Scientific</td><td>PH1877</td> <td>/</td></tr> <tr><td>BSA (sığır serum albümini)</td> <td>Solarbio Life Sciences</td><td>A8010</td><td>/</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio Yaşam Bilimleri</td><td>C0065</td><td>/</td></tr><tr><td>Eşek anti-keçi Alexa Fluor 488</td><td>Abcam</td><td>ab150129</td><td>1:200</td></tr><tr><td>eşek serumu</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>SL050</td><td>/</td></tr><tr><td>Kuru Buz</td><td>Sinrro Teknolojisi (Chengdu, Sichuan, Çin)</td><td>pirinç şeklinde kuru buz</td><td>/</td></tr><tr><td>IFKine Kırmızı Eşek tavşan karşıtı</td><td>Abbkine Scientific Company</td><td>A24421</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Yalıtım varilleri (büyük)</td><td>Termos</td><td>D600</td><td>/</td></tr><tr><td>Yalıtım varilleri (küçük)</td><td>Polar Ware</td><td>250B</td><td>/</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, Çin)</td><td>R510-22/</td><td></td></tr><tr><td>Isopentane</td><td>MACKLIN</td><td>M813375</td><td>/</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9393</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Sıvı nitrojen</td><td>Sinrro Teknolojisi (Chengdu, Sichuan, Çin)</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>MOM kiti</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>Fareler&nbsp;</td><td>&nbsp; Dashuo Biyolojik Teknoloji Şirketi (Chengdu, Sichuan, Çin)</td> <td>5 haftalık</td> <td>/</td></tr> <tr><td>montaj ortamı</td><td>Solarbio Yaşam Bilimleri</td><td>S2100</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Nertral balsam</td><td>Solarbio Yaşam Bilimleri</td><td>G8590</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Pax7</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası&nbsp;</td><td>Pax7</td><td>1:5</td></tr><tr><td>Pdgfra</td><td>R& D sistemleri</td><td>AF1062</td><td>1:40</td></tr><tr><td>Sirus Kırmızı Boyama Kiti</td><td>Solarbio Yaşam Bilimleri</td><td>G1472</td><td>/</td></tr><tr><td>Cerrahi aletler (forseps, makas, iğne tutucu, neşter ve dikiş)</td><td>Zhuoyue Tıbbi Alet (Suqian, Jiangsu, Çin)</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>Tissue-tek OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>/</td></tr><tr><td>Triton</td><td>Shanghai Scigrace Biotech</td><td>ABIO-Biofroxx-0006A</td><td>/ </td></tr><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac</td><td>Zoletil 50</td><td>/</td></tr></tbody></table>

orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında donma yaralanması

Freezing Injury in Mouse Masseter Muscle to Establish an Orofacial Muscle Fibrosis Model

Orofasiyal kas, farklı bir evrimsel yörünge ve gelişim kökeni olan iskelet kası dokusunun bir alt kümesini oluşturur. Somitten türetilmiş uzuv kaslarının aksine, orofasiyal kaslar, kraniyal nöral krestin özel katkılarıyla brankial kemerlerden kaynaklanır. Yakın zamanda yapılan bir çalışma, rejenerasyonun orofasiyal kas grubunda da farklı olduğunu ortaya koymuştur. Bununla birlikte, altta yatan düzenleyici mekanizma ortaya çıkarılmayı beklemektedir. Mevcut iskelet kası rejenerasyon modelleri esas olarak uzuv ve gövde kasına odaklanmaktadır. Bu protokolde, orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında ve tibialis anterior kasında donma hasarını indüklemek için kuru buz kullanıldı. Kas uydu hücrelerinin ve fibro-adipojenik progenitörlerin zamansal dinamikleri iki kas arasında farklıydı, bu da bozulmuş miyofiber rejenerasyonuna ve aşırı hücre dışı matris birikimine yol açtı. Bu modelin yardımıyla, orofasiyal hastalıkları olan hastalar için terapötik yaklaşımlar geliştirmek için orofasiyal bölgedeki kas rejenerasyonu hakkında daha derin bir araştırma yapılabilir.

HE ve Sirius Kırmızı boyaması (Şekil 4 ve Ek Şekil S1), bu donma-yaralanma modelinde TA'nın tam kas rejenerasyonunu ortaya çıkardı. Buna karşılık, MAS bozulmuş miyofiber rejenerasyonu ve aşırı ekstraselüler matriks birikimi sergiledi. İntakt MAS ve TA kasının histolojisi, miyoliflerin hizalandığı ve fibrotik alanın sadece interstisyel boşlukta ve farklı demetler arasında ortaya çıktığı Şekil 4A,B'de gösterilmişt...

Bu protokolün amacı orofasiyal kas fibrozis modeli oluşturmaktır. Dondurma yaralanması sonrası fareler masseter ve tibialis anterior kası arasındaki histolojinin karşılaştırılması masseter kas fibrozisini doğruladı. Bu model, orofasiyal kas fibrozisinin altında yatan mekanizmanın daha fazla araştırılmasını kolaylaştıracaktır.

Orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında donma yaralanması

Orofacial muscle constitutes a subset of skeletal muscle tissue, with a distinct evolutionary trajectory and development origin. Unlike the somite-derived ...

Mevcut iskelet kası rejenerasyon çalışmaları sadece uzuv ve gövde kasına odaklanmakta ve orofasiyal kas rejenerasyonunun özelliklerini ve mekanizmasını büyük ölçüde keşfedilmemiş bırakmaktadır. Bu araştırmanın kapsamı, orofasiyal bölgedeki kas rejenerasyonunun daha fazla araştırılmasını kolaylaştırmak için daha kolay ve güvenilir bir fare modeli oluşturmaktır. Son gelişmeler, orofasiyal kasların, farklı bir evrimsel yörüngeye ve gelişimsel kökene sahip benzersiz bir iskelet kası alt kümesi oluşturduğunu gözden geçirmektedir.Ayrıca uzuv muadillerine kıyasla farklı rejenerasyon performansları sergilerler. Bu belirgin farklılıkların altında yatan mekanizmayı anlamak için orofasiyal kas rejenerasyonu hakkında daha derin bir araştırma yapılması gerekmektedir. Çalışma, orofasiyal kas rejenerasyonunu incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem sunmaktadır.Yarı dondurma yaralanma işlemi 20 dakika sürdü ve hasat işlemi her fare için sadece 10 dakika sürdü ve fareler, herhangi bir hareket bozukluğu olmadan yaralanmayı iyi tolere edebilir. Modelimiz, fibrotik masseter kası ile tamamen rejenere tibialis anterior kası arasında morfoloji, histoloji ve moleküler regülasyon açısından daha sonra karşılaştırmaya izin verdiğinden, altta yatan mekanizmayı daha derinlemesine araştırmamız için bize iki kişilik bir güç sunar. Gelecekteki araştırmamız, yerleşik kas kök hücrelerinin ve çoklu niş hücrelerin değişiklikleri arasındaki nedensel etkilere odaklanacak ve buna bağlı olarak orofasiyal kas fibrozu sürecine yönelik müdahaleler geliştirecektir.

freezing-injury-mouse-masseter-muscle-to-establish-an-orofacial

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Farede fasiyal sinir üzerinde bir kesi veya ezme aksotomisinin nasıl yapılacağını detaylandıran bir cerrahi protokol sunuyoruz. Fasiyal sinir aksotomisi, sinir yaralanmasına fizyolojik yanıtı incelemek ve terapötik teknikleri test etmek için kullanılabilir.

Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

Bu protokol, faredeki mandibular ilk azı dişinin nasıl çıkarılacağına dair adım adım ayrıntıları gösterir. Çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunar.

Murin Mandibuler Molar Ekstraksiyon Soket İyileştirme Modelinin Kurulması

Burada, sıçan masseterinde hacimsel kas kaybı (VML) yaralanmasının cerrahi olarak oluşturulması için bir protokol açıklıyoruz ve kraniyofasiyal kas yaralanmalarının incelenmesi ve bunların yeni hidrojel gibi biyomateryaller kullanılarak tedavisi için tekrarlanabilir ve erişilebilir bir model sağlıyoruz.

Biyomühendislik Materyallerini İncelemek İçin Masseter Hacimsel Kas Kaybının Kemirgen Modeli

Burada, kraniyal levator auris longus (LAL) kasının in vivo elektroporasyonu ve denervasyonunu birleştiren bir protokol sunuyoruz. Bu prosedür, kas kaynaklı proteinlerin nöromüsküler sinapsın rejenerasyonundaki potansiyel rolünün incelenmesini sağlar.

Kranial Levator Auris Longus İskelet Kasının Kombine İn Vivo Elektroporasyonu ve Kısa Süreli Reinnervasyonu

Bu protokol, mandibular kemik onarımını analiz etmek için kapsamlı ve etkili bir yöntem sunar. Bir fare modelinde stabilize olmayan mandibular kırık için tekrarlanabilir bir teknik tanımladık ve minimum doku hasarı ve kemik kaybı ile endokondral kemik onarımı sürecinin analizine izin verdik.

Fare Modellerinde Stabilize Olmayan Mandibular Kırık için Daha Az İnvaziv Teknik

Hacimsel kas kaybı (VML) yaralanmaları endojen rejeneratif yeteneği aşarak kalıcı fonksiyonel eksikliklere neden olur. Mevcut VML araştırması öncelikle uzuv ve gövde kaslarına odaklanmaktadır. VML'nin mekanik çalışmalarını kraniyofasiyal kaslara genişletmek için, bu makale, VML hasarı öncesi ve sonrası masseter kas fonksiyonunun uzunlamasına değerlendirilmesi için in vivo bir yöntemi açıklamaktadır.

Hacimsel Kas Kaybı (VML) Yaralanmasının Cerrahi Olarak Oluşturulmasını Takiben Sıçan Masseter Kasının İn vivo Fonksiyonel Değerlendirmesi

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Canlı hücreler Mağaza çalışan Kalsiyum Giriş Floresans tabanlı Ölçümü: Kültür Kanseri Hücre gelen İskelet Kası Fiber

Biz doğrudan kas kuvveti, kas gücü, kasılma kinetiği ve izole iskelet kaslarında yorulma ölçmek için bir yöntem...

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

Keşfedin, fare masseter kasında donma yaralanması protokolü kullanarak orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmayı. Bu yöntem, ekstremite kaslarına kıyasla farklı rejenerasyon mekanizmalarını incelemek için güçlü bir araç sunar.

Orofasiyal kas fibroz modeli oluşturmak için fare masseter kasında donma yaralanması

Daha fazla video keşfet