Name: Canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Öğrenin, farelerde intrafemoral enjeksiyon tekniğiyle hematopoietik kök hücre nakli ve seri kemik iliği analizi yapmayı. Bu yöntem, değerli hasta örneklerinin güvenli greftlenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Canlı farelerde kemik iliği çalışması için intrafemoral enjeksiyon

<ol><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li>
<li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo. Nature reviews.</a> Genetics. 132, 1-14 (2020).</li>
<li>Pinho, S., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+activity+and+interactions+with+the+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell activity and interactions with the niche.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (5), 303-320 (2019).</li>
<li>Méndez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+niches+in+haematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Bone marrow niches in haematological malignancies.</a> Nature Reviews. Cancer. 20 (5), 285-298 (2020).</li>
<li>Frassoni, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intrabone+transplant+of+unrelated+cord-blood+cells+in+acute+leukaemia%3A+a+phase+I%2FII+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/II study.</a> The Lancet. Oncology. 9 (9), 831-839 (2008).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature Medicine. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Scientific Reports. 6 (1), 23886(2016).</li>
<li>Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+bone+marrow+aspiration+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral bone marrow aspiration in live mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), e51660(2014).</li>
<li>Iwano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+bioluminescence+imaging+of+deep+tissue+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals.</a> Science. 359 (6378), 935-939 (2018).</li>
<li>Sundberg, R. D., Hodgson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspiration+of+bone+marrow+in+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Aspiration of bone marrow in laboratory animals.</a> Blood. 4 (5), 557-561 (1949).</li>
<li>Schmitz, M., Bourquin, J. -P., Bornhauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+technique+for+intrafemoral+injection+and+bone+marrow+sampling+in+mouse+transplant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%26+lymphoma%22%5BJournal%5D)">Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models.</a> Leukemia & lymphoma. 52 (9), 1806-1808 (2011).</li>
<li>Nakauchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+type-specific+5hmC+landscape+and+dynamics+of+healthy+human+hematopoiesis+and+TET2-mutant+preleukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cell type-specific 5hmC landscape and dynamics of healthy human hematopoiesis and TET2-mutant preleukemia.</a> Blood Cancer Discovery. 3 (4), 346-367 (2022).</li>
<li>Chan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isocitrate+dehydrogenase+1+and+2+mutations+induce+BCL-2+dependence+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations induce BCL-2 dependence in acute myeloid leukemia.</a> Nature Medicine. 21 (2), 178-184 (2015).</li>
<li>Zhang, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+blockade+reverses+bone+marrow+failure+induced+by+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-6 blockade reverses bone marrow failure induced by human acute myeloid leukemia.</a> Science Translational Medicine. 12 (538), (2020).</li>
<li>Bak, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+genetic+engineering+of+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+using+CRISPR%2FCas9+and+AAV6%5BTitle%5D)+AND+%22eLIFE%22%5BJournal%5D)">Multiplexed genetic engineering of human hematopoietic stem and progenitor cells using CRISPR/Cas9 and AAV6.</a> eLIFE. 6, 27873(2017).</li>
<li>Nishimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sufficiency+for+inducible+Caspase-9+safety+switch+in+human+pluripotent+stem+cells+and+disease+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sufficiency for inducible Caspase-9 safety switch in human pluripotent stem cells and disease cells.</a> Gene Therapy. 27 (10-11), 525-534 (2019).</li>
<li>Chao, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+AML-iPSCs+reacquire+leukemic+properties+after+differentiation+and+model+clonal+variation+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human AML-iPSCs reacquire leukemic properties after differentiation and model clonal variation of disease.</a> Cell Stem Cell. 20 (3), 329-344 (2017).</li>
<li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+multicenter+phase+II+study+of+intrabone+marrow+transplantation+of+unwashed+cord+blood+using+reduced-intensity+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">A prospective multicenter phase II study of intrabone marrow transplantation of unwashed cord blood using reduced-intensity conditioning.</a> European Journal of Haematology. 100 (4), 335-343 (2018).</li>
<li>Fink, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+the+medullary+cavity+of+tibia+and+femur+for+intra-bone+marrow+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Capacity of the medullary cavity of tibia and femur for intra-bone marrow transplantation in mice.</a> PloS One. 14 (11), 0224576(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1/2 mL Şırınga, 27 G</td><td>BD</td><td>305620</td><td>https://www.bd.com/en-ca/offerings/capabilities/bd-luer-lok-syringe-with-attached-needle/305620</td></tr><tr><td>ACK Parçalama Tamponu</td><td>Qualoty Biyolojik</td><td>118-156-101CS</td><td>https://www.qualitybiological.com/product/ack-lysing-buffer/</td></tr> <tr><td>Biyolojik Işınlayıcı</td><td>Kimtron</td><td>IC-250</td><td>https://www.kimtron.com/ic-250</td></tr><tr><td>Klorheksidin</td><td>Nolvasan</td><td>NDC 54771-8701-1</td><td>https://www.zoetisus.com/products/petcare/nolvasan-skin-and-wound-cleanser</td></tr><tr><td>Etil alkol, kanıt 190</td><td>Altın Kalkan</td><td></td><td>https://goldsd.com/line-card/</td></tr> <tr><td>FACSCanto II&nbsp;</td><td>(Becton Dickinson and Company (BD), Franklin Lakes, NJ, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-01</td><td></td></tr> <tr><td>https://www.omegascientific.com/product/fetal-bovine-serum-usda-certified/ Akış sitometresi, AriaII</td><td>Beckton Dickinson (BD)</td><td></td><td>hücre sıralama</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053 https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12440053</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran, USP</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-094-25</td><td>https://www.dechra-us.com/our-products/us/companion-animal/dog/prescription/isoflurane-usp-inhalation-anesthetic</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareleri&nbsp;</td><td>Jackson Laboratuvarı, Bar Harbor, ME, ABD</td><td> Tür #:005557</td><td>Altı ila on haftalık erkek veya kadın&nbsp;</td></tr><tr><td>Oftalmik merhem, USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-780-55</td><td>https://www.bausch.com/contentassets/2914df881e4344a 7a202cc5a0673c977/</td></tr><tr><td>neomycin-and-polymyxin-b-sulfates-gramicidin-ophthalmic-solution.pdf OstiFen Enjeksiyonu (Caprofen)</td><td>VetOne</td><td>NDC 13985-748-20</td><td>http://vetone.net/Default/CatHeaderPage?id=9534ccca-eac5-4d68-8ad8-46436067587b</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15140122</td></tr><tr><td>Povidon-iyot</td><td>Betadine</td><td>NDC 67618-155-16</td><td>https://www.betadine.com/veterinary-surgical-scrub-and-solution/</td></tr> <tr><td>TokeOni (ABD'de)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>808350-5MG</td><td>AkaLumine-HCl/Akaluc; https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/808350</td></tr><tr><td>UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15575020</td></tr><tr><td><güçlü>Engraftment antikor paneli (in vivo, fare kemik iliği)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Antijen</güçlü></td><td></td><td></td><td><güçlü > Seyreltme< / güçlü</td></tr> <tr><td>> < güçlü > Antijen< / güçlü >: Anti-insan CD45 <güçlü > Florofor< / güçlü >: V450 <güçlü > Klon< / güçlü >: HI30</td><td>BD Biosciences</td><td>560367</td><td>1:25</td></tr> <tr><td>< güçlü > Antijen< / güçlü >: Anti-fare CD45.1 <güçlü > Florofor< / güçlü >: PE-Cy7 <güçlü>klon</güçlü>: A20</td><td>eBioscience</td><td>25-0453-81</td><td>1:50</td></tr><tr><td><güçlü>Antijen</güçlü>:Anti-fare TER-119 <güçlü>Florofor</güçlü>: PE-Cy5 <güçlü>Klon</güçlü>: TER-119</td><td>eBiyobilim</td><td>15-5921-83</td><td>1:100</td></tr><tr><td><güçlü > Antijen< / güçlü >: Anti-insan CD3 <güçlü > Florofor< / güçlü >: APC-Cy7 <güçlü > klon< / güçlü >: SK7</td><td>BD Biosciences</td><td>341090</td><td>1: 12.5</td></tr> <tr><td>< güçlü > Antijen< / güçlü >: Anti-insan CD19 <güçlü > Florofor< / güçlü >: APC <güçlü > Klon< / güçlü >: HIB19</td><td>BD Biosciences</td><td>555415</td><td>1:25</td></tr><tr><td><güçlü>Antijen</güçlü>:Anti-insan CD33 <güçlü>Florofor</güçlü>: PE <güçlü>Klon</güçlü>: WM53</td><td>BD Biosciences</td><td>555450</td><td>1:25</td></tr><tr><td><güçlü>Canlı/Ölü boyama</güçlü></td><td></td><td></td><td><güçlü>Conc.</güçlü></td></tr><tr><td>PI</td><td>Canlandırıcı</td><td></td><td>1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td><güçlü>Kompanzasyon boncukları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Negatif kontrol</td><td>BD Biosciences: Ayrıntılar için talimatlara</td><td></td><td>bakın</td></tr>, <tr><td>Anti-fare Ig, &kappa;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Ayrıntılar için talimatlara bakın</td></tr></tbody></table>

canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir

Simplified Intrafemoral Injections Using Live Mice Allow for Continuous Bone Marrow Analysis

Bu protokoller 1,14,15,16,17,18,19,20 takiben her bir örnek nakledildi ve ksenogreft fare modeli kuruldu. Buradaki deneylerin amacı, canlı farelerde çeşitli insan hücresi türleri ile IF enjeksiyonunu ve ardından kemik iliği aspirasyonunu/analizini göstermek...

Canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir

Despite the complexity of hematopoietic cell transplantation in humans, researchers commonly perform intravenous or intrafemoral (IF) injections in mice. ...

simplified-intrafemoral-injections-using-live-mice-allow-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kemik iliği nakli Kemik iliği kaynaklı hücrelerin genotipi değiştirmek için bir yol sağlar. Ilgilenilen genin kemik iliğinden elde edilen hücreler ve olmayan kemik iliğinden elde edilen hücreler, hem de ifade etmek gerekirse, kemik iliği transplantasyonu olmayan kemik iliği kaynaklı hücre genotip değiştirmeden, farklı bir genotip için kemik iliği kaynaklı hücre değiştirebilir.

Kemik İliği Transplantasyonu tarafından Fare Kolit immün ve non-immün Hücreler Gen Ekspresyonu İşlevsel Rolleri Farklılaşan

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

Bu protokol, farelerin kurban edilmesini gerektirmeden femur kemik iliğinin (BM) seri örneklemesi için bir prosedürü tanımlar. Bu prosedür, farelerin BM bileşiminin zaman içinde uzunlamasına çalışmalarını kolaylaştırır ve ex vivo ve transplantasyon çalışmaları için BM içindeki hücrelere seri erişim sağlar.

Canlı Farelerde Femoral Kemik İliği Aspirasyon

Hematopoietik kök ve projenitör hücreler (HSPCs) ve kemik iliği niş arasındaki etkileşimin doğası tam olarak anlaşılamamıştır. Özel donanım modifikasyonları ve çok adımlı bir satın alma protokolü ex vivo görüntünün kemik iliği alanları içinde bağlantılı etiketli HSPCs, izleme etkileşimleri ve hareket için iki-foton ve konfokal mikroskopi kullanımına izin verir.

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Burada, laboratuvar faresinden arka bacak uzun kemiklerinin (femurlar ve tibialar) diseksiyonu için bir protokol sunuyoruz. Ayrıca, kemik iliğinin kemik iliği boşluğundan çıkarılması için santrifüjlemeyi kullanan, bu kemiklerden kemik iliği izolasyonu için hızlı bir teknik tarif ediyoruz.

Murin Hind Ekstremite Uzun Kemik Diseksiyon ve Kemik İliği İzolasyonu

Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Protokol, femoral kemik iliğindeki hücrelerin hareketini in vivo olarak izlemek için kullanılabilecek yeni bir murin femur pencere odası modelini tanımlar. İntravital multifoton floresan mikroskobu, zaman içinde femur kemik iliğinin üç bileşenini (vaskülatür, kollajen matrisi ve nötrofiller) görüntülemek için kullanılır.

için Femur Pencere Odası Modeli<em&gt; İn Vivo</emFare Kemik İliği içinde&gt; Hücre Takibi

İntravital Floresans mikroskobu (IVFM) hasta, posta ve kemik iliği (BM) niş içine hematopoetik hücrelerin engraftment çalışmaya genetik hayvan modelleri ile birlikte uygulanır.

Intravital floresan mikroskobu (IVFM) kemik iliği nişler hematopoetik hücrelerin Engraftment Dynamics çalışmaya genetik modelleri ile birleştirerek

İntrafemoral enjeksiyonlar, hücreleri doğrudan kemik iliği boşluğuna yerleştirerek az sayıda hematopoietik kök ve progenitör hücrenin (HSPC'ler) aşılanmasına izin verir. Burada, insan HSPC'lerinin immün yetmezliği olan farelere intrafemoral enjeksiyonunun deneysel bir protokolünü açıklıyoruz.

İnsan Hematopoietik Kök ve Progenitör Hücrelerinin İmmün Kuvvetlenmiş Farelere İntrafemoral Enjeksiyonu 

Burada, farelere ksenogreftlenmiş ve kemik iliği aspiratlarından elde edilen akut insan miyeloid lösemi hücrelerinde mTORC1, JAK/STAT5 ve MAPK yollarının aşağı akışındaki sinyalleri analiz etmek için fosfoflow sitometri tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 ve p-ERK1/2 seviyeleri, yüksek duyarlılığa sahip yeni nesil spektral akış sitometresi kullanılarak eş zamanlı olarak ölçülür.

Akut Miyeloid Lösemi Hasta Kaynaklı Ksenotransplantların Hücre İçi Fosfoflow Sitometrisi

Öğrenin, farelerde intrafemoral enjeksiyon tekniğiyle hematopoietik kök hücre nakli ve seri kemik iliği analizi yapmayı. Bu yöntem, değerli hasta örneklerinin güvenli greftlenmesini sağlar.

Canlı fareler kullanılarak yapılan basitleştirilmiş intrafemoral enjeksiyonlar, sürekli kemik iliği analizine izin verir

Daha fazla video keşfet