Name: Fare Yuvarlak Spermatid Enjeksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Öğrenin fare yuvarlak spermatid enjeksiyonu tekniğini embriyonik gelişim verimliliğini artırmak için. Bu yöntem, non-obstrüktif azospermi hastalarında üreme sorunlarını çözmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Embriyonik Gelişimi İncelemek için Murin Round Spermatid Enjeksiyon Prosedürü

<ol><li>Redgrove, K. A., McLaughlin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+immune+response+in+Chlamydia+trachomatis+infection+of+the+male+genital+tract%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the immune response in Chlamydia trachomatis infection of the male genital tract: A double-edged sword.</a> Front Immunol. 5, 534(2014).</li>
<li>Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+injection+of+spermatozoa+and+spermatogenic+cells%3A+Its+biology+and+applications+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic injection of spermatozoa and spermatogenic cells: Its biology and applications in humans and animals.</a> Reprod Biomed Online. 10 (2), 247-288 (2005).</li>
<li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+injected+with+testicular+spermatozoa+or+round+spermatids+can+develop+into+normal+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes injected with testicular spermatozoa or round spermatids can develop into normal offspring.</a> Development. 121 (8), 2397-2405 (1995).</li>
<li>Tesarik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+II.+Clinical+application+in+the+treatment+of+infertility+due+to+non-obstructive+azoospermia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. II. Clinical application in the treatment of infertility due to non-obstructive azoospermia.</a> Human Reprod. 11 (4), 780-783 (1996).</li>
<li>Tesarik, J., Mendoza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+I.+Laboratory+techniques+and+special+features+of+zygote+development%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. I. Laboratory techniques and special features of zygote development.</a> Human Reprod. 11 (4), 772-779 (1996).</li>
<li>Hirabayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+regimens+for+full-term+development+of+rabbit+oocytes+injected+with+round+spermatids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Activation regimens for full-term development of rabbit oocytes injected with round spermatids.</a> Mol Reprod Dev. 76 (6), 573-579 (2009).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+a+marmoset+following+injection+of+elongated+spermatid+from+a+prepubertal+male%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Birth of a marmoset following injection of elongated spermatid from a prepubertal male.</a> Mol Reprod Dev. 86 (8), 928-930 (2019).</li>
<li>Niederberger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forty+years+of+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Forty years of IVF.</a> Fertil Steril. 110 (2), 185(2018).</li>
<li>Gross, K. X., Hanson, B. M., Hotaling, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection.</a> Urol Clin North Am. 47 (2), 175-183 (2020).</li>
<li>Hanson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+into+human+oocytes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection into human oocytes: a systematic review and meta-analysis.</a> Asian J Androl. 23 (4), 363-369 (2021).</li>
<li>Tekayev, M., Vuruskan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+values+and+advances+in+round+spermatid+injection+%28ROSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical values and advances in round spermatid injection (ROSI).</a> Reprod Biol. 21 (3), 100530(2021).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fourteen+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fourteen babies born after round spermatid injection into human oocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (47), 14629-14634 (2015).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ninety+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+oocytes%3A+survey+of+their+development+from+fertilization+to+2+years+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ninety babies born after round spermatid injection into oocytes: survey of their development from fertilization to 2 years of age.</a> Fertil Steril. 110 (3), 443-451 (2018).</li>
<li>Yang, H., Shi, L., Chen, C. D., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+generated+after+round+spermatid+injection+into+haploid+two-cell+blastomeres%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mice generated after round spermatid injection into haploid two-cell blastomeres.</a> Cell Res. 21 (5), 854-858 (2011).</li>
<li>Moreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+offspring+generated+by+ROSI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse offspring generated by ROSI.</a> J Reprod Dev. 62 (1), 37-42 (2016).</li>
<li>Federici, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+rescues+female+lethality+of+a+paternally+inherited+Xist+deletion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection rescues female lethality of a paternally inherited Xist deletion in mouse.</a> PLoS Genet. 12 (10), e1006358(2016).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternally+inherited+H3K27me3+affects+chromatin+accessibility+in+mouse+embryos+produced+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Paternally inherited H3K27me3 affects chromatin accessibility in mouse embryos produced by round spermatid injection.</a> Development. 149 (18), 200696(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+multiomics+sequencing+reveals+the+reprogramming+defects+in+embryos+generated+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell multiomics sequencing reveals the reprogramming defects in embryos generated by round spermatid injection.</a> Sci Adv. 8, (2022).</li>
<li>Ward, M. A., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in mice.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2018 (1), (2018).</li>
<li>Yoshida, N., Perry, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-actuated+mouse+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Piezo-actuated mouse intracytoplasmic sperm injection (ICSI).</a> Nat Protoc. 2 (2), 296-304 (2007).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+selection+of+valuable+mutant+mouse+round+spermatids+and+strain+rescue+via+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">FACS selection of valuable mutant mouse round spermatids and strain rescue via round spermatid injection.</a> Zygote. 23 (3), 336-341 (2013).</li>
<li>Kong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+%27Scriptaid%27+on+the+developmental+competence+of+mouse+embryos+generated+through+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of the histone deacetylase inhibitor 'Scriptaid' on the developmental competence of mouse embryos generated through round spermatid injection.</a> Hum Reprod. 32 (1), 76-87 (2017).</li>
<li>Hosseini, S., Salehi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricostatin+A-treated+round+spermatid+enhances+preimplantation+embryo+developmental+competency+following+round+spermatid+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Tricostatin A-treated round spermatid enhances preimplantation embryo developmental competency following round spermatid injection in mice.</a> Zygote. 30 (3), 373-379 (2022).</li>
<li>Kishigami, S., Wakayama, S., Nguyen, V. T., Wakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+time+restriction+for+intracytoplasmic+sperm+injection+and+round+spermatid+injection+into+activated+oocytes+for+efficient+offspring+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Similar time restriction for intracytoplasmic sperm injection and round spermatid injection into activated oocytes for efficient offspring production.</a> Biol Reprod. 70 (6), 1863-1869 (2004).</li>
<li>Tao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+activation+during+round+spermatid+injection%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Oocyte activation during round spermatid injection: state of the art.</a> Reprod Biomed Online. 45 (2), 211-218 (2022).</li>
<li>Ogura, A., Ogonuki, N., Miki, H., Inoue, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinsemination+and+nuclear+transfer+using+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Microinsemination and nuclear transfer using male germ cells.</a> Int Rev Cytol. 246, 189-229 (2005).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in the mouse.</a> Biol Reprod. 52 (4), 709-720 (1995).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-speed+congenic+strategy+using+first-wave+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A high-speed congenic strategy using first-wave male germ cells.</a> PLoS One. 4 (3), e4943(2009).</li>
<li>Abdelaal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+for+pediatric+male+cancer+patients%3A+illustrating+contemporary+and+future+options%3B+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Androl+Urol%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation for pediatric male cancer patients: illustrating contemporary and future options; a case report.</a> Transl Androl Urol. 10 (1), 520-526 (2021).</li>
<li>Eyni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+bioengineering+of+male+germ+stem+cells+to+preserve+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Advanced bioengineering of male germ stem cells to preserve fertility.</a> J Tissue Eng. 12, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CaCl22H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>C7902&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Glikoz&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G6152&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>HEPES-Na (temel)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H3784&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Beyotime&nbsp;</td><td>C1025</td><td>FACS</td></tr><tr><td>insan koryonik gonadotropin (HCG)</td> <td>Ningbo İkinci Hormon Şirketi</td><td>HCG</td><td>Yumurtlamayı teşvik eden ilaçlar</td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td>Oosit etrafındaki granüloza hücrelerinin çıkarılması</td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>CZB</td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5655&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>KSOMaa</td><td>Caisson Labs</td><td>IVL04-100ML</td> L-glutamin <td>amino asitleri ile desteklenmiş potasyum simpleks optimize edilmiş ortam</td></tr><tr><td>;</td><td>Sigma</td><td>G8540 ve nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>M2</td><td>Sigma</td><td>M7167-50ML</td><td>Çalışma sıvısı</td></tr><tr><td>MgSO47H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M1880&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Na2-EDTA2H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>E5134&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>CZB</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Na-laktat% 60 şurup d = 1.32 g / L</td><td>Sigma</td><td>L7900&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Na-piruvat&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4562&nbsp;</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr><tr><td>Piezo matkap uçları (ICSI)&nbsp;</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>piezoXpert</td><td>Piezoelektrik membran yırtılması</td></tr><tr><td>hamile kısrak serumu gonadotropin (PMSG)</td> <td>Ningbo İkinci Hormon Şirketi</td><td>PMSG</td><td>Yumurtlama teşvik edici ilaçlar</td></tr><tr><td>PVA ve nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P8136</td><td>CZB'nin Hazırlanması</td></tr></tbody></table>

fare yuvarlak spermatid enjeksiyonu

Mouse Round Spermatid Injection

Araştırmamıza, AOA'nın embriyoların gelişim yetenekleri üzerindeki etkisini inceleyerek başladık. Deney tasarımının şematik bir gösterimi Şekil 1A'da gösterilmiştir. Spermatozoon enjeksiyonundan önce, oositlere AOA (A-ICSI) uygulandı veya tedavi edilmedi (ICSI) kaldı. Embriyonik gelişim ile ilgili detaylı veriler Tablo 1'de sunulmuştur. Sonuçlar, A-ICSI ve ICSI grupları arasında bölünme, blastosist veya doğum oranlarında anlamlı bir fark olmadığını gösterdi (P &gt; 0.05; Şekil 1B). Bu bulgular, AOA'nın 20 dakika boyunca 10 mM SrCl2 kullanılmasının embriyoların gelişim potansiyelini etkilemediğini göstermektedir.
Daha önce, FACS veya mikroskop altında doğrudan görsel inceleme ile seçilen ROSI embriyolarının gelişimsel etkinliğinde belirgin bir fark olmadığı bildirilmişti22. Deneylerimizde RS'yi tanımlamak için FACS teknolojisi kullanılmıştır (Şekil 2A,B). Mikroskop altında, fare yuvarlak spermatidleri yaklaşık 10 μm çapındaydı ve ortada çıkıntı benzeri bir nükleolus yapısı sergiliyordu (Şekil 2C). FACS yoluyla seçimin, mikroskop altında doğrudan görsel incelemeden daha doğru olduğunu varsayıyoruz. Ek olarak, literatür RS'nin morfolojik farklılıklar yoluyla doğrudan araştırılmasını desteklemektedir. ROSI embriyoları iki farklı yöntem kullanılarak üretildi: Yuvarlak spermatid enjeksiyonundan önce oositlerin AOA'ya tabi tutulduğu A-ROSI grubu ve yuvarlak spermatid enjeksiyonundan sonra oositlerin AOA'ya tabi tutulduğu ROSI-A grubu. Deney tasarımının şematik diyagramı Şekil 1C'de gösterilmiştir. Özellikle, A-ROSI, ROSI-A ve ICSI grupları arasında bölünme ve blastosist oranlarında anlamlı bir fark bulunmadı (P &gt; 0.05; Şekil 1D). A-ROSI, ROSI-A ve ICSI gruplarının blastosist oranları aktivasyon grubundan anlamlı olarak yüksekti (P &lt; 0.05; Şekil 1D). Bununla birlikte, ROSI grubunun doğum oranı, oositlerin enjeksiyondan önce veya sonra aktive edilip edilmediğine bakılmaksızın ICSI grubundan daha düşüktü (P &lt; 0.05; Şekil 1D). Daha da önemlisi, A-ROSI grubunun doğum oranı ROSI-A grubununkinden biraz daha yüksekti (Şekil 1D). Embriyo gelişim verileri ile ilgili daha fazla ayrıntı Tablo 1'de sunulmaktadır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig01.jpg"> 
Şekil 1: ROSI embriyoları, ICSI embriyolarına kıyasla düşük gelişimsel verimlilik göstermiştir. (A) Aktivasyonun ICSI embriyonik gelişimi üzerindeki etkisini değerlendiren deneysel protokolün şematik gösterimi. Mavi = Oositler aktive edilmedi; Sarı = Oositler aktive edildi. (B) A-ICSI ve ICSI'den türetilen embriyoların gelişimsel etkinliği. (C) Farklı tipte embriyolar oluşturmak için deney protokolünün şematik gösterimi. (D) A-ROSI, ROSI-A, A ve ICSI'den türetilen embriyoların gelişimsel etkinliği. **, P &lt; 0.01. Kısaltmalar: A= Aktivasyon E= Embriyonik gün; ROSI= Yuvarlak spermatid enjeksiyonu; ICSI= İntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu. Hata çubukları standart sapmayı gösterir. Oranların karşılaştırılması ki-kare testi kullanılarak yapılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig02.jpg"> 
Şekil 2: Yuvarlak spermatidler akım sitometrik sıralama ile seçildi. (A) Yuvarlak spermatidlerin seçimi için bir akış sitometrik sıralama diyagramı kullanıldı. (B) Yuvarlak spermatidlerin seçimini gösteren temsili resimler. Ölçek çubuğu: 10 μm. Kısaltmalar: FSC = İleri dağılım; SSC = yan saçılma; 355 uyarma dalga boyudur; 460/50 ve 670/30, 355 dalga boylu lazer altında iki algılama kanalıdır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Grup</td>
			<td colspan="3">İmplantasyon öncesi geliştirme</td>
			<td colspan="2">İmplantasyon sonrası gelişim</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Çoğaltır</td>
			<td>Bölünme oranı (%)</td>
			<td>Blastokist oranı (%)</td>
			<td>2 hücreli embriyo transfer edildi / Hayır. Alıcıların sayısı</td>
			<td>Doğum oranı (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>75.17 (112/149)</td>
			<td>49/5</td>
			<td>48.98 (24/49)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ROSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>73.83 (110/149)</td>
			<td>44/5</td>
			<td>18.18 (8/44) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSI-A</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>64.63 (95/147)</td>
			<td>45/5</td>
			<td>13.33 (6/45) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etkinleştirme</td>
			<td>5</td>
			<td>100.00 (150/150)</td>
			<td>12.00 (18/150) **</td>
			<td>51/5</td>
			<td>0.00 (0/51) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI (Uluslararası Bilişim T</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>73.47 (108/147)</td>
			<td>46/5</td>
			<td>52.17 (24/46)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1. Farklı gruplardan elde edilen embriyoların gelişimsel etkinliği.
Ek Tablo 1. Akış sitometrisine göre sıralanan farklı hücre popülasyonlarının oranı. P3 kısmı yuvarlak spermatidlerdir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/Supplementary%20Table%201_RE.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Fare Yuvarlak Spermatid Enjeksiyonu

Round spermatids, characterized by their haploid genetic content, represent the precursor cells to mature spermatozoa. Through the innovative technique of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.

Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Erkek germ hattındaki de novo mutasyonlar, sonraki nesillerde olumsuz sağlık sonuçlarına katkıda bulunabilir. Burada, çevresel ajanlar tarafından indüklenen erkek germ hücrelerindeki mutasyonları ölçmek için bir transgenik kemirgen modelinin kullanımı için bir protokol açıklıyoruz.

Transgenik Kemirgen Deneyi sayısallaştırabilmek Erkek Germ Hücre Mutant Frekans

Testis fare hücreleri için bir transfeksiyon tekniği Spermatogenezisin benzersiz süreçleri incelemek için bu makalede, in vivo mikroenjeksiyon ve fare testis Elektroporasvon açıklar. Sunulan protokol, elektroporasyon ile cam kılcal hazırlanması götürücü kanalı yoluyla mikro-enjeksiyon, ve transfeksiyon adımlar içerir.

Fare Testis İn Vivo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon

Mayoz hangi gamet DNA ikileşmesi bir turu ve kromozom ayrışma birbirini izleyen iki tur üzerinden kurulan gelişimsel işlemidir. Memeli mayoz segregasyonun kromozom yayılır hazırlamak için bir teknik kullanarak incelenebilir. Burada, yüzey-yayılım çekirdeği fare spermatocytes üzerinden hazırlama yöntemi göstermektedir.

Fare Spermatocytes segregasyonun kromozom hazırlanması yayılır

Bu tübül squash teknik hızla hücresel bütünlüğünü koruyarak fare spermatocytes geliştirme saytolojik özellikleri değerlendirmek için hedeftir. Bu yöntem tüm aşamalarında spermatogenez çalışma için izin verir ve diğer biyokimyasal ve moleküler biyolojik yaklaşımlar için fare mayoz çalışmanın yanında kolayca uygulanabilir.

Seminifer tübül Squash tekniği fare modeli kullanarak sperma saytolojik analizi için

Bu protokol, seminifer epitel döngüsünün belirli aşamalarını temsil eden yetişkin fare seminifer tübüllerinin segmentlerinin transilluminasyon destekli mikroseksiyonunu ve buradaki hücre tiplerini ve daha sonra kabak preparatlarının ve bozulmamış tübül segmentlerinin immünostainasyonunu açıklar.

Aşağı Akış İmmünasyon Analizleri için Fare Seminifer Epitel Döngüsünün Belirli Aşamalarının Transilluminasyon Destekli Diseksiyonu

Bu makale, yarı klonlanmış embriyoların yapımında sperm yerine partenogenetik haploid embriyonik kök hücrelerin kullanımını göstermeyi amaçlamaktadır.

Sperm Yerine Fare Partenogenetik Haploid Embriyonik Kök Hücrelerin Uygulanması

Bu makalede, erkek mayotik bölünmesi için değerli bir model olan abdominal cerrahi ve testiküler GSK923295 enjeksiyonu yoluyla CENP-E'nin in vivo inhibisyonu bildirilmiştir. İmmünofloresan, akım sitometrisi ve transmisyon elektron mikroskobu tahlillerini kullanarak, CENP-E inhibisyonunun fare spermatositlerinde kromozom yanlış hizalaması ve genom instabilitesi ile sonuçlandığını gösterdik.

Kinesin-7 CENP-E'nin In Vivo İnhibisyon, İmmünofloresan ve Akım Sitometrisi Kullanılarak Spermatositlerde Fonksiyonel Değerlendirilmesi

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Burada açıklanan AcroSensE fare modeli ve canlı hücre görüntüleme yöntemleri, sperm akrozomunun hücre altı bölmesindeki kalsiyum dinamiklerini ve bunların membran füzyonu ve akrozom ekzositozuna yol açan ara adımları nasıl düzenlediğini incelemek için yeni bir yaklaşım sağlar.

Canlı fare sperminde akrozomal kalsiyum dinamiği ve ekzositozun gerçek zamanlı görüntülenmesi

Burada, intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI)-embriyo transferi (ET) fare modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz, bu da ICSI'ye atfedilebilecek glikoz metabolizmasındaki yaşa bağlı değişiklikleri gözlemlememize olanak tanıyarak insan gelişimi üzerindeki potansiyel uzun vadeli etkileri hakkında bilgi veriyor.

İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu Sonrası Fare Yavrularında Kan Şekerinin İzlenmesi

Öğrenin fare yuvarlak spermatid enjeksiyonu tekniğini embriyonik gelişim verimliliğini artırmak için. Bu yöntem, non-obstrüktif azospermi hastalarında üreme sorunlarını çözmeye yardımcı olur.

Fare Yuvarlak Spermatid Enjeksiyonu

Daha fazla video keşfet