Name: Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: Keşfedin murin intrapulmoner trakeal transplantasyon modelini, akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığını incelemek için. Bu yöntem, allogrefler ve izogrefler arasındaki yanıtları karşılaştırarak fibroz mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu makaleyi düzenlediği için Jerome Valero'ya teşekkür eder. Şekil 1 ve Şekil 3I,J,L BioRender.com ile oluşturulmuştur.

Tüm hayvanlar, Kanada Hayvan Bakımı Konseyi tarafından Deney Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda belirtilen yönergelere uygun olarak tedavi edildi. Deney protokolü, Toronto Genel Hastanesi Araştırma Enstitüsü, Üniversite Sağlık Ağı Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı.
1. Donör ameliyatı
NOT: BALB/c fareleri, deney için donör örneği olarak kullanılmıştır. Tüm prosedürler steril bir teknik kullanılarak yapılmalıdır.
<ol><li>İşlemden önce, her farenin ağırlığını kaydedin.</li>
	<li>Bir CO2 odası kullanarak fareyi ötenazi yapın.</li>
	<li>Ölüm onaylandıktan sonra, fareyi sırtüstü pozisyonda konumlandırın ve uzuvları bantla sabitleyin.</li>
	<li>Ameliyat bölgesini %70 izopropil alkol ile sterilize ederek hazırlayın. NOT: Gerekirse ve yerel hayvan etik komitesi tarafından önerildiği gibi, kürkü kesi bölgesinden kırpın.</li>
	<li>Ciltte orta karın bölgesinden başlayıp ön servikal bölgeye kadar uzanan orta hat kesisi yapın.</li>
	<li>Yağ yastıkçıklarını dikkatlice geri çekerek, kayış kaslarını yanal olarak hareket ettirerek ve trakeayı çevreleyen bağ dokusundan ayırarak trakeaya erişin. Trakea ve yemek borusu arasında boşluk oluşturmak için forseps kullanın.</li>
	<li>Ksifoidi kaldırın ve diyaframı kesin.</li>
	<li>Sternumu kaldırın, bir hemostat yerleştirerek sternumdan boyun bölgesine açık bir yol sağlayın. Göğüs kafesini her iki taraftan sıkıştırın ve boyun kaslarından yukarı doğru uzanarak sternumdan kesin.</li>
	<li>Trakeal çatallanmayı ortaya çıkarmak için timusu ve trakeayı tıkayan herhangi bir yağ veya kası çıkarın.</li>
	<li>Hem ana bronşları kesin hem de hava yolunu yemek borusundan dikkatlice ayırın.</li>
	<li>Gırtlağı kesin ve çıkarın.</li>
	<li>Diseke edilen trakeaya steril salin solüsyonu veya steril salin veya koruma solüsyonuna batırılmış steril gazlı bez ile koruma solüsyonu püskürtün ve canlılığını korumak için buzun üzerine yerleştirin.</li>
</ol>2. Alıcı cerrahisi
NOT: C57BL/6 fareler, deney için alıcılara örnek olarak kullanılmıştır.
<ol><li>Ameliyat gününün sabahı sürekli salimli buprenorfini deri altına 1 mg/kg'lık bir dozda uygulayın.</li>
	<li>% 5 izofluran kullanarak bir indüksiyon odasında anesteziyi indükleyin.</li>
	<li>Fare hafifçe uyuşturulduktan sonra, intraperitoneal olarak (0.1 mg / g) ksilazin ve (0.01 mg / g) ketaminden oluşan bir kokteyl enjekte edin.</li>
	<li>Fareyi% 2-3 izofluran ile indüksiyon odasına geri koyun.</li>
	<li>Ameliyat bölgesinde kürkü tıraş edin. Ayrıca, bupivakaini planlanan insicisyon bölgesi boyunca deri altından 7 mg / kg'lık bir dozda bir çizgi bloğu olarak uygulayın.</li>
	<li>Orotrakeal entübasyondan önce ayak parmağı tutamına refleks yanıtının olmadığını doğrulayın. 20 G intravenöz kateter kullanarak fareyi orotrakeal olarak entübe edin ve 500 μL tidal hacmi, 120 bpm solunum hızı, %100 oksijen ve %2 izofluran olan bir ventilatöre bağlayın. Bu prosedürü kolaylaştırmak için, hayvanı boynu uzatılmış olarak dikey konumda tutan, dile kelepçe uygulanmış bir stand kullanın.</li>
	<li>Bir ısıtma yastığını etkinleştirin ve fareyi, başı cerrahtan uzakta ve kuyruğu cerraha bakacak şekilde pedin üzerinde sağ yanal konuma getirin (Şekil 2). Uzuvları bantla sabitleyin. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere veteriner merhemi sürün.</li>
	<li>Ameliyat bölgesini %7,5 povidon iyot ile ovalayın, %70 izopropil alkol ile sterilize edin ve %10 povidon iyot ile yeniden fırçalayın. Ameliyat bölgesini kaplamak için steril cerrahi örtüler uygulayın.</li>
	<li>Bu süre zarfında donör trakeasını 16 G'lik bir intravenöz katetere yükleyin (Şekil 3C,D).</li>
	<li>Alıcının cildinde bir kesi yapmak için neşter kullanın ve kas ve bağ dokusunu dağlayın.</li>
	<li>Beşinci veya altıncı interkostal boşluğu açın ve iki ekartör kullanarak göğüs kafesini açık tutun.</li>
	<li>Pamuklu çubuklar ve makas kullanarak inferior pulmoner ligamenti inceleyin.</li>
	<li>Donör trakea için yolun oluşturulmasını simüle edin (Şekil 3G, H).</li>
	<li>Sol akciğerin şişirilmesini kolaylaştırmak için ventilatör çıkış tüpünü üç bir vana ile kısmen kapatarak sabitleyin.</li>
	<li>Sol akciğeri 20 G iğne ile delerek bir yol oluşturun. Delinme derinliğinin kabaca trakeal allogreftin uzunluğuna eşit olmasını sağlamak. Akciğerin kenarındaki delinme bölgesini seçin ( Şekil 3I'de gösterildiği gibi), yolun masa üstüne paralel uzandığından emin olun ( Şekil 3J'de mavi bir daire ile işaretlendiği gibi). NOT: Yukarı doğru bir yerleştirme açısı plevral tabakanın penetrasyonuna neden olurken, daha derin bir açı büyük damarlardan kanamaya neden olabilir ( Şekil 3J'de kırmızı çarpı ile işaretlendiği gibi).</li>
	<li>16 G intravenöz kateteri sol akciğere yerleştirin ve donör trakeayı sol akciğere ekstrüde edin. Trakeal allogreftin yerleştirilmesinden sonra, çıkış borusundan engelsiz ekspiratuar akışa izin vermek için üç vanayı serbest bırakın.</li>
	<li>Plevral enjeksiyon bölgesini bir klipsle kapatın (Şekil 3K,L). Klipsi, kenarı akciğer kenarının konturuna uyacak şekilde hizalanacak şekilde (Şekil 3L'de mavi daire ile gösterilmiştir) tam olarak delinme bölgesine yerleştirin. NOT: Kırpma bölgesi için yanlış bir konum, etkisiz sızdırmazlığa ve hava sızıntısına neden olabilirken, yetersiz klips derinliği, ameliyat sonrası klipsin ayrılmasına neden olabilir ( Şekil 3L'deki kırmızı çarpı işaretleriyle gösterildiği gibi).</li>
	<li>Göğüs boşluğunu salin solüsyonu ile doldurun ve salini bir gazlı bezle emdirin.</li>
	<li>Sol akciğeri yeniden şişirin ve çalışan bir dikiş tekniği kullanarak kaburgaları kapatın.</li>
	<li>Kesintili dikişlerle kas ve cildi kapatın.</li>
	<li>Ameliyat sonunda 5 mg/kg'lık bir dozda deri altına meloksikam analjezik uygulayın.</li>
	<li>Alıcı fareyi uyanık olana kadar gözlemleyin. Ardından, trakeal tüpü çıkarın ve alıcı fareyi bir kafese koyun. NOT: Alıcı fareler ayrı ayrı yerleştirilmelidir.</li>
	<li>Ameliyattan 24 saat sonra başlayarak ve ameliyat sonrası 3 gün boyunca devam ederek deri altı enjeksiyon yoluyla günde bir kez meloksikam (5 mg / kg) uygulayın.</li>
</ol>3. Alıcı farelerden örneklerin toplanması
<ol><li>% 5 izofluran kullanarak bir indüksiyon odasında anesteziyi indükleyin.</li>
	<li>Orotrakeal entübasyondan önce ayak parmağı tutamına refleks yanıtının olmadığını doğrulayın. Entübasyon yöntemi ve solunum cihazı ayarı, alıcı cerrahisindekiyle aynıdır.</li>
	<li>Fareyi sırtüstü pozisyonda konumlandırın ve uzuvları sabitleyin.</li>
	<li>Ameliyat bölgesini %70 izopropil alkol ile sterilize ederek hazırlayın.</li>
	<li>Ciltte orta karın bölgesinden başlayıp ön servikal bölgeye kadar uzanan orta hat kesisi yapın.</li>
	<li>25 G'lik bir iğneye bağlı 1 ml'lik bir şırınga kullanarak fareyi inferior vena kava yoluyla kansızlaştırın ve ötenazi ile sonuçlanın.</li>
	<li>Göğsü açın ve trakeaya donör fare ile aynı şekilde erişin. Trakeayı entübasyon tüpünün etrafına 7-0 ipekle bağlayın.</li>
	<li>Kalbi ortaya çıkarmak için timüs, yağ ve kasları çıkarın.</li>
	<li>Sol atriyumu, sağ atriyumu ve inferior vena kavayı kesin. Akciğerleri sağ ventrikül yoluyla 3 mL steril salin ile perfüze edin.</li>
	<li>Histolojik analiz için, akciğerleri bir entübasyon tüpü aracılığıyla% 10 formalin ile şişirin.</li>
	<li>Ventilasyon tüpünü ekstübe edin ve trakeayı 7-0 ipekle bağlayın.</li>
	<li>Gırtlak ve yemek borusunu bölün. Onları daha düşük bir yöne çekin ve ardından kalp ve akciğer bloğunu çıkarın,% 10 formalin içine yerleştirin.</li>
</ol>

Akciğer Nakillerinde Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılması

<ol><li>Chambers, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Thoracic+Organ+Transplant+Registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+Thirty-fifth+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report-2018%3B+Focus+theme%3A+Multiorgan+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The International Thoracic Organ Transplant Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: Thirty-fifth adult lung and heart-lung transplant report-2018; Focus theme: Multiorgan Transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 37 (10), 1169-1183 (2018).</li>
<li>Hertz, M. I., Jessurun, J., King, M. B., Savik, S. K., Murray, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American J Pathol. 142 (6), 1945-1951 (1993).</li>
<li>Ikonen, T. S., Brazelton, T. R., Berry, G. J., Shorthouse, R. S., Morris, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+re-growth+is+associated+with+inhibition+of+obliterative+airway+disease+in+orthotopic+tracheal+allografts+in+non-immunosuppressed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Epithelial re-growth is associated with inhibition of obliterative airway disease in orthotopic tracheal allografts in non-immunosuppressed rats.</a> Transplantation. 70 (6), 857(2000).</li>
<li>Dutly, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+for+post-transplant+obliterative+airway+disease+reveals+angiogenesis+from+the+pulmonary+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A novel model for post-transplant obliterative airway disease reveals angiogenesis from the pulmonary circulation.</a> Am J Transplant. 5 (2), 248-254 (2005).</li>
<li>Wagnetz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rejection+of+tracheal+allograft+by+intrapulmonary+lymphoid+neogenesis+in+the+absence+of+secondary+lymphoid+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rejection of tracheal allograft by intrapulmonary lymphoid neogenesis in the absence of secondary lymphoid organs.</a> Transplantation. 93 (12), 1212-1220 (2012).</li>
<li>Hirayama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+long-term+expression+of+lentivirally+delivered+IL-10+in+the+lung+attenuates+obliteration+of+intrapulmonary+allograft+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Local long-term expression of lentivirally delivered IL-10 in the lung attenuates obliteration of intrapulmonary allograft airways.</a> Hum Gene Ther. 22 (11), 1453-1460 (2011).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+bone+marrow-derived+IL-17+receptor+A-positive+cells+drive+allograft+fibrosis+in+a+mouse+intrapulmonary+tracheal+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Immunol%22%5BJournal%5D)">Recipient bone marrow-derived IL-17 receptor A-positive cells drive allograft fibrosis in a mouse intrapulmonary tracheal transplantation model.</a> Transpl Immunol. 69, 101467(2021).</li>
<li>Matsuda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen+tyrosine+kinase+modulates+fibrous+airway+obliteration+and+associated+lymphoid+neogenesis+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Spleen tyrosine kinase modulates fibrous airway obliteration and associated lymphoid neogenesis after transplantation.</a> Am J Transplant. 16 (1), 342-352 (2016).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+CTLA4-Ig+on+Obliterative+bronchiolitis+in+a+mouse+intrapulmonary+tracheal+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Effect of CTLA4-Ig on Obliterative bronchiolitis in a mouse intrapulmonary tracheal transplantation model.</a> Ann Thorac Cardiovasc Surg. 27 (6), 355-365 (2021).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+potent+anti-angiogenic+factor%2C+vasohibin-1%2C+ameliorates+experimental+bronchiolitis+obliterans%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">A potent anti-angiogenic factor, vasohibin-1, ameliorates experimental bronchiolitis obliterans.</a> Transplant Proc. 44 (4), 1155-1157 (2012).</li>
<li>Aloisi, F., Pujol-Borrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphoid+neogenesis+in+chronic+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases.</a> Nat Rev Immunol. 6 (3), 205-217 (2006).</li>
<li>Cupedo, T., Jansen, W., Kraal, G., Mebius, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+secondary+and+tertiary+lymphoid+structures+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Induction of secondary and tertiary lymphoid structures in the skin.</a> Immunity. 21 (5), 655-667 (2004).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+intrapulmonary+de+novo+lymphoid+tissue+in+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of intrapulmonary de novo lymphoid tissue in obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> J Immunol. 182 (11), 7307-7316 (2009).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+airway+epithelium+in+acutely+rejection+orthotopic+vascularized+mouse+lung+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22A+J+Resp+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Maintenance of airway epithelium in acutely rejection orthotopic vascularized mouse lung transplants.</a> A J Resp Cell Mol Biol. 37 (6), 625-630 (2007).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+airway+fibrosis+in+orthotopic+mouse+lung+transplantation+models-an+experimental+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-an experimental reappraisal.</a> Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+B+cell-dependent+pathway+drives+chronic+lung+allograft+rejection+after+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A B cell-dependent pathway drives chronic lung allograft rejection after ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Am J Transplant. 19 (12), 3377-3389 (2019).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vendor-specific+microbiome+controls+both+acute+and+chronic+murine+lung+allograft+rejection+by+altering+CD4%2BFoxp3%2B+regulatory+T+cell+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vendor-specific microbiome controls both acute and chronic murine lung allograft rejection by altering CD4+Foxp3+ regulatory T cell levels.</a> Am J Transplant. 19 (10), 2705-2718 (2019).</li>
</ol>

Bu makalenin yazarlarının ifşa edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Murin IPTT prosedürü kritik adımları içerir. Anestezi ile ilgili olarak, ilk önemli adım endotrakeal entübasyondur. Ses tellerini görselleştirmek ve anında entübasyonu kolaylaştırmak için fareyi bacakları masanın üzerinde olacak şekilde uygun bir yükseklikte tutmak önemlidir. Ek olarak, dikkatli solunum hacmi ve pozitif ekspirasyon sonu basıncı (PEEP) ayarlaması gereklidir. Tipik olarak, 25-30 g ağırlığındaki fareler için 500 μL'lik birsolunum hacmi ve 2 cmH2O'luk bir PEEP yeterlidir. Bununla birlikte, daha bü...

Akciğer nakli, son dönem solunum yolu hastalıkları olan hastalar için etkili bir tedavi olarak kurulmuştur. Bununla birlikte, insan akciğer nakli alıcıları için medyan sağkalım oranı sadece yaklaşık 6 yıldır ve bir tür obstrüktif hava yolu hastalığı (OAD) olan obliteratif bronşiyolit (OB) gelişimi, transplantasyondan sonraki ilk yıldan sonra önemli bir ölüm nedenidir1.
OAD'nin altında yatan mekanizmayı araştırmak için çeşitli hayvan modelleri kullanılmıştır. Böyle bir model, heterotopik trakeal transplantasyon (HTT) model2'dir. Bu modelde, trakeal greftler alıcının deri altı dokusuna veya omentumuna implante edilir. İskemiye bağlı trakeal greft epitel hücrelerinin kaybı meydana gelir, bunu alloreaktif lenfosit infiltrasyonu ve donör epitel hücrelerinin apoptozu izler. Fibroblastlar ve miyofibroblastlar trakea etrafında göç ederek hücre dışı bir matris oluşturur. Son olarak, hava yolu lümeninin tamamen fibröz obliterasyonu meydana gelir. HTT modeli teknik olarak basittir, in vivo bir ortam sağlar ve yüksek tekrarlanabilirlik sunar.
OAD'yi incelemek için başka bir model, fizyolojik ventilasyonu sürdürmek için trakeal greftlerin alıcının trakeasına yerleştirildiği sıçan ortotopik trakeal transplantasyon (OTT) modelidir3. Bu modelde, donör epitel hücrelerinin iskemiye bağlı tükenmesi, bunların trakea içindeki alıcı epitel hücreleri ile yer değiştirmesine neden olur ve orta derecede fibrozun eşlik ettiği tıkanmamış bir hava yolu oluşturur. Bu modeller akciğer transplantasyonu sonrası hava yolu obliterasyonunun anlaşılmasına katkıda bulunmuş olsa da, akciğer parankimal mikroçevresinin rekapitülasyonu açısından sınırlılıkları vardır.
Araştırma grubumuz, trakeal greftlerin alıcı akciğereimplante edildiği sıçan intrapulmoner trakeal transplantasyon (IPTT) modelini tanıttı 4 (Şekil 1). IPTT modeli, akciğer mikroçevresinde meydana gelen hava yolu lümeninin fibröz obliterasyonunu sergiler. Ayrıca, sıçan IPTT 5,6,7,8,9,10'dan teknik olarak daha zorlu olan farelere başarıyla uygulanmıştır. Murin IPTT modelinin bu adaptasyonu, transgenik fareler kullanılarak akciğer nakli sonrası OAD'nin akciğer immünolojik ortamının karmaşık ayrıntılarını daha derinlemesine incelememizi sağladı.
IPTT modeli bazı benzersiz özelliklere sahiptir. Bunlardan biri, pulmoner dolaşım ile kolaylaştırılan ve hava yolu obliterasyonunda çok önemli bir rol oynayan neoanjiyogenezdir 4,10. Ek olarak, IPTT modeli, bazıları periferik düğüm adresini eksprese eden yüksek endotelyal venüllere sahip olan lenfoid agregatlar sergiler ve bunların üçüncül lenfoid organlar (TLO'lar) olduğunu gösterir7,8. TLO'lar lenf nodlarına benzer ve T hücreleri, B hücreleri ve sıklıkla foliküler dendritik hücrelerin eşlik ettiği bir germinal merkezden oluşur 11,12. Hava yolu obliterasyonu da dahil olmak üzere çeşitli kronik inflamatuar hastalıklarda TLO'lar bildirilmiştir, bu da IPTT modelini TLO'ların hava yolu obliterasyonundaki rolünü araştırmak için uygun hale getirir 7,8,11,12,13. Bu makale, araştırmacıları bu modele alıştırmak ve akciğer transplantasyonunu takiben hava yolu obliterasyonu ile ilgili daha fazla araştırmayı kolaylaştırmak amacıyla murin IPTT modelinin metodolojisini sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>BALB/cJ</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>8-10 hafta 25-30 g</td><td>Erkek, Donör</td></tr><tr><td>BD 1 mL Şırınga</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide İğne Aiguile BD PrecisionGlide</td><td>Becton Dickinson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>Bovie Change-A-Tip Deluxe Yüksek Sıcaklık</td><td>Bovie</td><td>DEL1</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>8-10 hafta 25-30 g</td><td>Erkek, Alıcı</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Forseps</td><td>F & middot; S&middot; T</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon Ligaclip Çoklu Klips Aplikatörleri-Ethicon</td><td></td> <td>LX107</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Graefe Forseps</td><td>F & Middot; S&middot; T</td><td>11150-10</td><td></td></tr><tr><td>Glover Bulldog Kelepçesi</td><td>Integra</td><td>320-127</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Sivrisinek Kanama Durdurucular</td><td>F & Middot; S&middot; T</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Horizon Titanyum Bağlama Klipsleri</td><td>Teleflex</td><td>001201</td><td></td></tr><tr><td>Leica M651 Mikrocerrahi prosedürler için manuel cerrahi mikroskop</td><td>Yaylı kilitli Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Magnetix Fiksatör</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-001</td><td></td></tr><tr><td>Mikrocerrahi Makas</td><td>Jarit</td><td>277-051</td><td></td></tr><tr><td>Fare ve Perinatal Sıçan Ventilatörü Model 687</td><td>Harvard</td><td>55-0001</td><td></td></tr><tr><td>Perfadex Plus</td><td>XVIVO</td><td>19850</td><td></td></tr><tr><td>Ekartör Ucu Kör - 2,5 mm</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-011</td><td></td></tr><tr><td>küçük hayvan masası</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-003</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro Mavi 24" CV-1 Konik, Çift Kollu</td><td>Covidien</td><td>VP702X</td><td></td></tr><tr><td>Siktan merhem</td><td>Alconn</td><td>1444062</td><td></td></tr><tr><td>Sistem Elastomeri</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-007</td><td></td></tr><tr><td>Terumo Surflo IV Kateter, Terumo Medical Corporation'da 20 G x 1</td><td></td><td>SR-OX2025CA</td><td></td></tr><tr><td>VMT masa üstü</td><td>benson</td><td>91803300</td><td></td></tr></tbody></table>

murin İntrapulmoner trakeal transplantasyon: akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığının araştırılmasında bir model

Murine Intrapulmonary Tracheal Transplantation: A Model for Investigating Obliterative Airway Disease After Lung Transplantation

Murin intrapulmoner trakeal transplantasyon (IPTT), akciğer transplantasyonunu takiben obliteratif hava yolu hastalığının (OAD) bir modeli olarak kullanılmaktadır. İlk olarak ekibimiz tarafından bildirilen bu model, yüksek teknik tekrarlanabilirliği ve immünolojik davranışların ve terapötik müdahalelerin araştırılmasına uygunluğu nedeniyle OAD çalışmasında kullanım kazanmıştır.
IPTT modelinde, bir kemirgen trakeal grefti, plevra yoluyla doğrudan alıcının akciğerine yerleştirilir. Bu model, greftlerin deri altı veya omental bölgelere nakledildiği heterotopik trakeal transplantasyon (HTT) modelinden ve donör trakeanın alıcının trakeasının yerini aldığı ortotopik trakeal transplantasyon (OTT) modelinden farklıdır. 
IPTT modelinin başarılı bir şekilde uygulanması, ileri anestezi ve cerrahi beceriler gerektirir. Anestezik beceriler, alıcının endotrakeal entübasyonunu, uygun ventilasyon parametrelerinin ayarlanmasını ve anesteziden sonra uygun zamanlanmış ekstübasyonu içerir. Cerrahi beceriler, akciğere hassas greft yerleştirilmesi ve hava sızıntısı ve kanamayı önlemek için viseral plevranın etkili bir şekilde kapatılmasını sağlamak için gereklidir. Genel olarak öğrenme süreci yaklaşık 2 ay sürmektedir.
HTT ve OTT modellerinden farklı olarak, IPTT modelinde, allogreft hava yolu, ilgili akciğer mikroçevresinde hava yolu obliterasyonu geliştirir. Bu, araştırmacıların akciğer transplantasyonundan sonra hava yolu obliterasyonunda rol oynayan akciğere özgü immünolojik ve anjiyojenik süreçleri incelemelerine olanak tanır. Ayrıca, bu model, insan akciğer allogreftlerinde de görülen üçüncül lenfoid organları (TLO'lar) sergilemesi bakımından da benzersizdir. TLO'lar, T ve B hücre popülasyonlarından oluşur ve immün hücre alımını yönlendiren yüksek endotelyal venüllerin varlığı ile karakterize edilir; Bu nedenle, greft kabulü ve reddinde çok önemli bir rol oynamaları muhtemeldir. IPTT modelinin, akciğer nakli allogreftinde hava yolu obliterasyonunun gelişiminde rol oynayan intrapulmoner immün ve profibrotik yolakları incelemek için yararlı bir araç olduğu sonucuna vardık.

Deneyimlerimize dayanarak, bu modeldeki yeterlilik tipik olarak yaklaşık 2 aylık bir eğitim gerektirir. Yeterlilik sağlandıktan sonra, donör prosedürleri tipik olarak 15 dakika gerektirirken, alıcı prosedürleri yaklaşık 30 dakika gerektirir. Eğitimli bir operatör için beklenen ölüm oranı %0'dır.
Şekil 4A'da bir trakeal allogreft fibroblastik doku ile tam obstrüksiyon gösterir ve epitel hücreleri gözle görülür şekilde tahrip edilir. Tersine, Şe...

Murin intrapulmoner trakeal transplantasyon (IPTT) modeli, akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığını (OAD) incelemek için değerlidir. Allotransplantasyon sonrası hava yolu obliterasyonunda akciğere özgü immünolojik ve anjiyojenik davranış hakkında yüksek tekrarlanabilirlik ile bilgi sunar. Burada, IPTT prosedürünü ve beklenen sonuçlarını açıklıyoruz.

Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model

Murine intrapulmonary tracheal transplantation (IPTT) is used as a model of obliterative airway disease (OAD) following lung transplantation. Initially ...

Araştırmamız akciğer nakli sonrası kronik akciğer allogreft disfonksiyonunu inceliyor. Bir akciğeri naklettiğinizde, hastaların yarısından fazlasında fibröz obliterasyon veya hava yolu anormallikleri gelişecektir. Bunu anlamak, akciğer nakli sonrası uzun süreli sağkalımı anlamanın anahtarıdır.Bu intrapulmoner trakeal nakil modelinin önemi, nakledilen trakeanın akciğerin çevresine yerleştirilmesidir ve bu nedenle, nakilden sonraki tepkisi açısından bir allogrefte karşı bir İzogrefte bakabilirsiniz. En büyüleyici olanı, bir İzogreftin, aynı iskemiye ve aynı yaralanmaya sahip olmasına rağmen, tamamen iyileşmesi ve normal anatomiye sahip olması, ancak bir allogreftin fibröz obliterasyon geliştirmesi ve bunun bir allogreftte neden olduğunu anlamak, akciğer transplantasyonunda fibrozun altında yatan mekanizmaları anlamanın anahtarıdır.

murine-intrapulmonary-tracheal-transplantation-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video gösterileri ve farelerde obliteratif hava yolu hastalığı (OAD) geliştirilmesi, heterotopik ve ortotopik trakeal nakli modeli incelemek için iki deneysel modeller karşılaştırır.

Obliteratif Havayolu Hastalığı Geliştirme Eğitim Modeli olarak kullanılan Farelerde Heterotopik ve Ortotopik Trakeal Nakli

Obliteratif bronşiolit akciğer transplantasyonu uzun süreli yaşam için anahtar engel ve sağlam bir preklinik model eksikliği obliteratif bronşiolit immünopatogenezi inceleyerek engellemektedir. Diğer solid organ nakli aksine, vaskülarize fare akciğer transplantasyonu vardır ancak son zamanlarda geliştirilmiştir. Burada fare ortotopik tek-akciğer transplantasyonu sonrası bağımsız geliştirilen obliteratif bronşiolit modeli gösterilmektedir.

Ortotopik Akciğer Transplantasyonu bir Mürin Modelinde Obliteratif Bronşiolit Gelişimi

Insanlarda akciğer hastalıklarının durumunu taklit eden bir modelinin kullanılması, belirli bir hastalığın patofizyolojisi ve / veya etyolojisinin araştırılması için ve terapötik müdahale geliştirmek için çok önemlidir. Burada doğrudan fare akciğerlere eksojen malzemeleri teslim noninvazif bir entübasyon yöntemi sunulmuştur.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Greft stenoz mühendislik doku hava yolu değiştirme kritik bir engel teşkil etmektedir. Stenoz temel hücresel mekanizmaları araştırmak için bir fare modeli doku Mühendisliği trakeal değiştirme numaralı seribaşı kemik iliği mononükleer hücreler (BM-MNC) kullanmaktadır. Burada, iskele imalatı, BM-MNC yalıtım, greft tohum ve implantasyon dahil olmak üzere bizim Protokolü ayrıntılı.

Tohum ve bir biyosentetik doku Mühendisliği trakeal greft bir fare modeli implantasyonu

Konjenital diyafram fıtığı ve fetal trakeal tıkanıklık gibi çeşitli hayvan modelleri etik konular, maliyet, cerrahi zorluk, boyut, sağkalım oranları ve genetik araçların mevcudiyeti ile ilgili avantaj ve dezavantajlar sürmektedir. Bu model, hem trakeal tıkanıklık hem de artan ışık basıncının akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir araç sağlar.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Bu makalenin amacı, farelerde heterotopik laringeal transplantasyon gerçekleştirmek için gereken mikrocerrahi adımları tanımlamaktır. Bu fare modelinin laringeal transplantasyonun diğer hayvan modellerine kıyasla avantajları, maliyet etkinliği ve immünolojik tahlillerin ve verilerin mevcudiyetidir.

Laringeal Transplantasyonu İncelemek için Heterotopik Bir Fare Modeli

Ventilasyonu korurken ve hipoksiden kaçınırken sol akciğer iskemisi reperfüzyonu (IR) hasarı oluşturmak için bir fare cerrahi modeli.

Orotrakeal Entübasyon ve Ventilasyonlu Akciğer İskemisi Reperfüzyon Cerrahisinin Bir Fare Modeli

Izole adacık transplantasyonu tip 1 şeker hastalığı için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Burada, fare pancreata adacıkları izole, ve böbrek subkapsüler alan nakli için bir yöntem açıklanmaktadır.

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Sıçangil modeli servikal kalp nakli immünolojik hem de iskemi reperfüzyon yaralanması çalışmasından için uygundur. Biz olmayan bir dikiş manşet tekniği kullanılarak prosedür değiştirilmiş ve bu yaklaşım ile 1.000 'den fazla başarılı nakli gerçekleştirildi.  Burada, videoyu tamamlamak için bu tekniğin ek ayrıntıları.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Keşfedin murin intrapulmoner trakeal transplantasyon modelini, akciğer transplantasyonu sonrası obliteratif hava yolu hastalığını incelemek için. Bu yöntem, allogrefler ve izogrefler arasındaki yanıtları karşılaştırarak fibroz mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model (Video) | JoVE Journal

Murin İntrapulmoner Trakeal Transplantasyon: Akciğer Transplantasyonu Sonrası Obliteratif Hava Yolu Hastalığının Araştırılmasında Bir Model

Daha fazla video keşfet