Name: Fare Oosit Çekirdeğinin Hücre İskeleti Tabanlı Ajitasyonunun Uzamsal Ölçeklerde Yakalanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-12T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: Keşfedin fare oositlerinde hücre iskeleti kuvvetlerinin çekirdek şekli ve RNA dinamikleri üzerindeki etkisini. Gelişmiş görüntüleme teknikleri ile çok ölçekli kuvvet iletimini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

A.A.J. ve M.A. makaleyi birlikte yazdılar ve tüm ortak yazarlar el yazması hakkında yorum yaptılar. M. A.A., CNRS ve "Projet Fondation ARC" (PJA2022070005322) tarafından desteklenmektedir.A.A.J., Fondation des Treilles, Fonds Saint-Michel ve Fondation du Collège de France tarafından desteklenmektedir.

Fare Oositlerinde Hücre İskeletinin Nükleer Şekil ve Kondensat Dinamiği Üzerine Etkisi

<ol><li>Quinlan, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+Streaming+in+the+Drosophila+Oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev+Cell+Developl+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic Streaming in the Drosophila Oocyte.</a> Annual Rev Cell Developl Biol. 32, 173-195 (2016).</li>
<li>Goldstein, R. E., van de Meent, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+perspective+on+cytoplasmic+streaming%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">A physical perspective on cytoplasmic streaming.</a> Interface Focus. 5 (4), 20150030(2015).</li>
<li>Gundersen, G. G., Worman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+positioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Nuclear positioning.</a> Cell. 152 (6), 1376-1389 (2013).</li>
<li>Metzger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP+and+kinesin-dependent+nuclear+positioning+is+required+for+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAP and kinesin-dependent nuclear positioning is required for skeletal muscle function.</a> Nature. 484 (7392), 120-124 (2012).</li>
<li>Roman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+repair+after+physiological+damage+relies+on+nuclear+migration+for+cellular+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Muscle repair after physiological damage relies on nuclear migration for cellular reconstruction.</a> Science. 374 (6565), 355-359 (2021).</li>
<li>Almonacid, M., Terret, M. E., Verlhac, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+nucleus+positioning+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Develop+Biol%22%5BJournal%5D)">Control of nucleus positioning in mouse oocytes.</a> Semin Cell Develop Biol. 82, 34-40 (2018).</li>
<li>Brunet, S., Maro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germinal+vesicle+position+and+meiotic+maturation+in+mouse+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Germinal vesicle position and meiotic maturation in mouse oocyte.</a> Reproduction. 133 (6), 1069-1072 (2007).</li>
<li>Levi, M., Ghetler, Y., Shulman, A., Shalgi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+molecular+markers+are+correlated+with+maturation-competence+of+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Morphological and molecular markers are correlated with maturation-competence of human oocytes.</a> Hum Reprod. 28 (9), 2482-2489 (2013).</li>
<li>Almonacid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+diffusion+positions+the+nucleus+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Active diffusion positions the nucleus in mouse oocytes.</a> Nat Cell Biol. 17 (4), 470-479 (2015).</li>
<li>Almonacid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+fluctuations+of+the+nuclear+envelope+shape+the+transcriptional+dynamics+in+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Active fluctuations of the nuclear envelope shape the transcriptional dynamics in oocytes.</a> Dev Cell. 51 (2), 145-157 (2019).</li>
<li>Al Jord, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+forces+functionally+reorganize+nuclear+condensates+in+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic forces functionally reorganize nuclear condensates in oocytes.</a> Nat Commun. 13 (1), 5070(2022).</li>
<li>Shin, Y., Brangwynne, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+phase+condensation+in+cell+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Liquid phase condensation in cell physiology and disease.</a> Science. 357 (6357), eaaf4382(2017).</li>
<li>Banani, S. F., Lee, H. O., Hyman, A. A., Rosen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomolecular+condensates%3A+organizers+of+cellular+biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev.+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Biomolecular condensates: organizers of cellular biochemistry.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 18 (5), 285-298 (2017).</li>
<li>Lyon, A. S., Peeples, W. B., Rosen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+understanding+the+functions+of+biomolecular+condensates+across+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev.+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for understanding the functions of biomolecular condensates across scales.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 22 (3), 215-235 (2021).</li>
<li>Gordon, J. M., Phizicky, D. V., Neugebauer, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+mechanisms+of+gene+expression+control%3A+pre-mRNA+splicing+as+a+life+or+death+decision%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Nuclear mechanisms of gene expression control: pre-mRNA splicing as a life or death decision.</a> Curr Opin Genet Dev. 67, 67-76 (2021).</li>
<li>Barutcu, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+mapping+of+nuclear+domain-associated+transcripts+reveals+speckles+and+lamina+as+hubs+of+functionally+distinct+retained+introns%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Systematic mapping of nuclear domain-associated transcripts reveals speckles and lamina as hubs of functionally distinct retained introns.</a> Mol Cell. 82 (5), 1035-1052.e9 (2022).</li>
<li>Guo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+stochastic%2C+motor-driven+properties+of+the+cytoplasm+using+force+spectrum+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Probing the stochastic, motor-driven properties of the cytoplasm using force spectrum microscopy.</a> Cell. 158 (4), 822-832 (2014).</li>
<li>Verlhac, M. H., Kubiak, J. Z., Clarke, H. J., Maro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+and+chromatin+behavior+follow+MAP+kinase+activity+but+not+MPF+activity+during+meiosis+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Microtubule and chromatin behavior follow MAP kinase activity but not MPF activity during meiosis in mouse oocytes.</a> Development. 120 (4), 1017-1025 (1994).</li>
<li>Reis, A., Chang, H. Y., Levasseur, M., Jones, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APCcdh1+activity+in+mouse+oocytes+prevents+entry+into+the+first+meiotic+division%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">APCcdh1 activity in mouse oocytes prevents entry into the first meiotic division.</a> Nat Cell Biol. 8 (5), 539-540 (2006).</li>
<li>El-Hayek, S., Clarke, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+oocyte+growth+and+development+by+intercellular+communication+within+the+follicular+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl+Cell+Differ%22%5BJournal%5D)">Control of oocyte growth and development by intercellular communication within the follicular niche.</a> Results Probl Cell Differ. 58, 191-224 (2016).</li>
<li>Dumont, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+centriole-+and+RanGTP-independent+spindle+assembly+pathway+in+meiosis+I+of+vertebrate+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A centriole- and RanGTP-independent spindle assembly pathway in meiosis I of vertebrate oocytes.</a> J Cell Biol. 176 (3), 295-305 (2007).</li>
<li>Kaláb, P., Pralle, A., Isacoff, E. Y., Heald, R., Weis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+a+RanGTP-regulated+gradient+in+mitotic+somatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Analysis of a RanGTP-regulated gradient in mitotic somatic cells.</a> Nature. 440 (7084), 697-701 (2006).</li>
<li>Lafontaine, D. L. J., Riback, J. A., Bascetin, R., Brangwynne, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nucleolus+as+a+multiphase+liquid+condensate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev.+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The nucleolus as a multiphase liquid condensate.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 22 (3), 165-182 (2021).</li>
<li>Terret, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DOC1R%3A+a+MAP+kinase+substrate+that+control+microtubule+organization+of+metaphase+II+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">DOC1R: a MAP kinase substrate that control microtubule organization of metaphase II mouse oocytes.</a> Development. 130 (21), 5169-5177 (2003).</li>
<li>Dumont, J., Verlhac, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+FRET+to+study+RanGTP+gradients+in+live+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Using FRET to study RanGTP gradients in live mouse oocytes.</a> Methods Mol Biol. 957, 107-120 (2013).</li>
<li>McSwiggen, D. T., Mir, M., Darzacq, X., Tjian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+phase+separation+in+live+cells%3A+diagnosis%2C+caveats%2C+and+functional+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Develop%22%5BJournal%5D)">Evaluating phase separation in live cells: diagnosis, caveats, and functional consequences.</a> Gene Develop. 33 (23-24), 1619-1634 (2019).</li>
<li>OOCytes. , https://github.com/Carreau/OOCytes (2014).</li>
<li>Thévenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+transactions+on+image+processing%22%5BJournal%5D)">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE transactions on image processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li>
<li>ImageJ. , https://imagej.github.io/update-sites/big-epfl (2023).</li>
<li>Hebert, B., Costantino, S., Wiseman, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+image+correlation+spectroscopy+%28STICS%29+theory%2C+verification%2C+and+application+to+protein+velocity+mapping+in+living+CHO+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal image correlation spectroscopy (STICS) theory, verification, and application to protein velocity mapping in living CHO cells.</a> Biophys J. 88 (5), 3601-3614 (2005).</li>
<li>Yi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+maintenance+of+asymmetric+meiotic+spindle+position+through+Arp2%2F3-complex-driven+cytoplasmic+streaming+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamic maintenance of asymmetric meiotic spindle position through Arp2/3-complex-driven cytoplasmic streaming in mouse oocytes.</a> Nat Cell Biol. 13 (10), 1252-1258 (2011).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Stowers ImageJ Plugins. , https://research.stowers.org/imagejplugins/ (2023).</li>
<li>Luisier, F., Vonesch, C., Blu, T., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+interscale+wavelet+denoising+of+Poisson-corrupted+images%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Process%22%5BJournal%5D)">Fast interscale wavelet denoising of Poisson-corrupted images.</a> Signal Process. 90 (2), 415-427 (2010).</li>
<li>Ovocyte_Nucleus. , https://github.com/orion-cirb/Ovocyte_Nucleus (2023).</li>
<li>Letort, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLetort%2C+G+%22gletort%2FImageJFiles%3A+GLijplugs_v0.2.0%22">gletort/ImageJFiles: GLijplugs_v0.2.0</a>. , doi: 10.5281/zenodo.6854802 (2022).</li>
<li>ImageJFiles. , https://github.com/gletort/ImageJFiles/tree/master/radioak (2023).</li>
<li>Chu, F. Y., Haley, S. C., Zidovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+shape+fluctuations+of+the+cell+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">On the origin of shape fluctuations of the cell nucleus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (39), 10338-10343 (2017).</li>
<li>Caragine, C. M., Haley, S. C., Zidovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+fluctuations+and+coalescence+of+nucleolar+droplets+in+the+human+cell+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Surface fluctuations and coalescence of nucleolar droplets in the human cell nucleus.</a> Phys Rev Lett. 121 (14), 148101(2018).</li>
<li>Introini, V., Kidiyoor, G. R., Porcella, G., Cicuta, P., Cosentino Lagomarsino, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Centripetal+nuclear+shape+fluctuations+associate+with+chromatin+condensation+in+early+prophase%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Centripetal nuclear shape fluctuations associate with chromatin condensation in early prophase.</a> Commun Biol. 6 (1), 1-11 (2023).</li>
<li>Boija, A., Klein, I. A., Young, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomolecular+condensates+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Biomolecular condensates and cancer.</a> Cancer Cell. 39 (2), 174-192 (2021).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışması beyan etmezler.

Bu protokoldeki temel adımlar, oositlerin hayatta kalmalarını veya normal işlevlerinietkilemeden uygun mikroenjeksiyonunu içerir 9,10,11 ve ayrıca nükleer benekler gibi ilgili yapıların doğru görselleştirilmesine izin verecek önceden tanımlanmış miktarlarda cRNA'nın mikroenjekte edilmesini içerir.
Sitoplazmik ve (intra)-nükleer dinamikler arasındaki bağlantıyı kurmak, hücre iskeletinin çekirdeği veya içini nasıl çalkaladığını incelerken çok önemlidir. Bu protokol, küçük değişikliklerle, sitoplazmik karıştırma yoğunluklarını nükleer YFP-Rango veya SRSF2-GFP damlacık dinamikleri (11'de olduğu gibi) ile ilişkilendirerek buna izin verir. Devam etmek için, oositler, nükleer anahat veya damlacık dinamiklerini yakalamak için 491 nm'lik bir lazerle hemen 120 saniye filme alınmadan önce, sitoplazmik karıştırmayı yakalamak için parlak alan modunda 120 saniye boyunca filme alınmalıdır. Nükleer SRSF2-GFP damlacıkları durumunda, korelasyon, etkili difüzyon katsayılarını (bu protokoldeki 7. adıma bakın) görüntü korelasyon analizleri kullanılarak elde edilen sitoplazmik karıştırmanın ters çevrilmiş maksimum yoğunluk değerleriyle karşılaştırarak basitçe değerlendirilebilir (bu protokoldeki 4. adıma bakın). Bir diğer önemli nokta, damlacık yüzey dalgalanmalarının analizi için seçilen kondensatların boyutudur. Boyut yüzey dalgalanmalarının yoğunluğunu modüle ettiğinden, yanlılığı önlemek için karşılaştırmalı analizler için benzer çaptaki damlacıklar seçilmelidir.
Bu protokol için bazı sınırlamalar vardır. Nükleer anahat dalgalanmalarının analizleri, YFP-Rango veya NLS-GFP gibi tam nükleer içi boyamaya dayanır. Nükleer benekler üzerindeki analizler için, aşırı miktarda SRSF2-GFP cRNA'nın mikroenjeksiyonu, daha önce başkaları tarafından gözden geçirildiği gibi, bu kondens belirtecinin faz ayırma özelliklerinde belirgin değişikliklere yol açabilir (Şekil 3C)26. Bu nedenle, eksojen protein ekspresyon profillerinin endojen olanlarla karşılaştırılabilir olduğunu doğrulamak çok önemlidir. Ayrıca, nispeten küçük damlacıklar (<2 μm yarıçap), burada tanımlanan araçlarla uzamsal çözünürlüğün sınırlamaları nedeniyle yüzey dalgalanma analizi boru hatlarından hariç tutulmalıdır. Bu çözünürlük sorunu genellikle, örneğin oosit çekirdeğindeki veya somatik hücrelerin önemli ölçüde daha küçük çekirdeğindeki daha küçük kondensatların yüzey dalgalanmalarını araştırmak için gerekli olabilecek daha kararlı mikroskopların kullanılmasıyla çözülebilir.
Genel olarak, bu protokol, fare oosit çekirdeğinin ölçekler boyunca aktin ve mikrotübül hücre iskeleti bazlı ajitasyonunun yakalanmasına izin verir. Spesifik olarak, sitoplazmanın hücre iskeleti tabanlı mobilizasyonunun, nükleer anahat dalgalanmalarının, sıvı benzeri nükleer benek yer değiştirmeleri ve yüzey dalgalanmalarının belgelenmesine izin verir. Diğer hücre tiplerinde yapılan bazı çalışmalar, bu konularınbazılarını 38,39,40 bireysel uzamsal ölçeklerde değişen karmaşıklıktaki farklı protokoller aracılığıyla ele alsa da, bu basit protokol, söz konusu hücresel dinamikleri ilk kez tek bir iş hattında birden fazla ölçekte ele almak için gerekli araçları sağlar. Ayrıca, bu yaklaşımdan elde edilen veriler,10,11'de olduğu gibi biyofiziksel modelleme ile tamamlandığında, aşağıdakilerin minimal invaziv bir değerlendirmesini mümkün kılar: i) nükleer mekanikteki değişiklikler10; ii) sitoplazmadaki hücre iskeleti bazlı aktif kuvvetlerin çekirdek11'deki kondensatlara iletilmesi; ve iii) bu aktif enerjinin farklı hücresel bölmelere yayılması10,11. Daha da önemlisi, bu protokol çok yönlüdür, çünkü yalnızca nükleolus23 gibi diğer nükleer kondensatlara değil, aynı zamanda hem hücre iskeleti hem de nükleer kondensat davranışlarındaki değişikliklerin belgelendiği kanser hücreleri gibi diğer hücre tiplerine de uyarlanabilir17,41.

Nükleer konumlandırma, çoklu hücresel ve gelişimsel işlevler için gereklidir 1,2,3,4,5. Oosit adı verilen memeli dişi germ hücreleri, boyut olarak asimetrik bir bölünmeye uğramasına rağmen, çekirdeği hücre merkezinde konumlandırmak için sitoplazmalarını yeniden şekillendirir, bu da sonraki kromozomun merkezden uzaklaşmasınadayanır 6 (Şekil 1). Çekirdeğin bu merkezlenmesi, farelerde ve insanlarda başarılı oosit gelişimini 7,8 ve dolayısıyla embriyojenik potansiyellerini öngörür (Şekil 1).
Fare oositlerinde sitoplazmik yeniden şekillenme, esas olarak aktomiyosin hücre iskeleti9 tarafından yönlendirilir (Şekil 2). Aktivitesi, çekirdeği10 çalkalayan, yeniden konumlandıran ve nüfuz eden mekanik kuvvetler üretir (Şekil 2). Sonuç olarak, bu sitoplazmik-nükleoplazmik kuvvet iletimi, çekirdekte biyomoleküler kondensatlar 12,13,14,15,16 olarak bilinen birkaç zarsız organelden biri olan nükleer benekler11 olarak adlandırılan nükleer haberci RNA işleme organellerinin dinamiklerini ayarlar (Şekil 2).
Canlı görüntüleme, nükleer ajitasyonun işlevsel etkilerini deşifre etmede belirleyici olmuştur. Saatler boyunca nükleer göç filmlerinin yanı sıra aktin ağının ve toplu sitoplazmanın yüksek zamansal çözünürlüklü filmleri, farklı zaman ölçeklerini birbirine bağlayan nükleer konumlandırma için teorik bir modelin detaylandırılmasına büyük ölçüde katkıda bulundu9. Ayrıca, sitoplazmanın, nükleer anahatların ve kromatin ve nükleer kondensatlar gibi nükleer bileşenlerin yüksek zamansal çözünürlüklü filmleri, hücre içindeki farklı uzay-zamansal ölçekler arasında köprü kurarak, fare oositlerinde çekirdeğin hücre iskeleti tabanlı ajitasyonunun RNA işleme ve gen ekspresyonu üzerindeki rolünü vurguladı10,11. Toplamda, canlı görüntülemeye dayanan böyle bir ölçek geçiş yaklaşımı, çekirdeğin hücre iskeleti ajitasyonunu oositlerin gelişimsel başarısına bağlayan ilk mantığı sağladı.
Protokol, sitoplazmik kuvvetlerin (esas olarak F-aktin ve kısmen mikrotübüller tarafından üretilen) çekirdeğe ve fare oositlerindeki iç bileşenlerine iletimini incelemek için kullanılan görüntüleme ve görüntü analizi boru hattını sağlar. Bu deneylerin sonucu, sitoplazmik aktif hareketler, nükleer anahattın dalgalanmaları ve tek bir nükleer biyomoleküler kondensatların hareketi ve yüzey dalgalanmaları arasındaki bağlantıyı kuran iki yeni çalışmada10,11 gösterildiği gibi, sitoplazmadaki hücre iskeletinden nükleer iç kısma kadar uzamsal ölçeklerdeki kuvvetlerin sürekliliğini yakalamaktır: nükleer benekler. Aynı yaklaşım, sitoplazmik kuvvetlerin değişmesi beklenen diğer model sistemlere de uygulanabilir, örneğin malign kanser hücreleribağlamında 17.

<table><tbody><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA)</td> <td>Sigma&nbsp;</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>CSU-X1-M1 eğirme diski</td><td>Yokogawa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMI6000B mikroskobu&nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Femtojet mikroenjektör</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiji</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtre tekerleği</td><td>Sutter Instruments Roper Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorodish</td><td>World Hassas Aletler</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>Metamorph yazılımı&nbsp;</td><td>Evrensel Görüntüleme,&nbsp;</td><td></td><td>versiyon 7.7.9.0</td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8410-1L</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OF1 ve C57BL/6 fareler&nbsp;</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poli(A) Atık kiti&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM1350</td><td></td></tr><tr><td>Retiga 3 CCD kamera&nbsp;</td><td>QImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNAeasy kiti&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>SC35 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab11826</td><td>Nükleer benek antikoru; fare IgG1 anti-SRSF2 / SC35 (1:400)</td></tr> <tr><td>SRSF2-GFP plazmid ve nbsp;</td><td>&nbsp; OriGene Technologies</td><td>MG202528</td><td>NM_011358</td></tr><tr><td>Stripper Mikropipeti</td><td>&nbsp; </td><td>Oosit toplama için uzmanlaşmış</td>XLAB Çözümleri <td></td></tr><tr><td>T3 mMessage mMachine</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM1384&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>T7 mMessage mMachine&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM13344</td><td></td></tr><tr><td>Termostatik oda</td><td>Ömrü Görüntüleme Hizmeti</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Windows Excel</td><td>Windows</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare oosit Çekirdeğinin hücre İskeleti tabanlı ajitasyonunun uzamsal Ölçeklerde yakalanması

Capturing Cytoskeleton-Based Agitation of the Mouse Oocyte Nucleus Across Spatial Scales

Kadın infertilitesinin nedenlerini anlamada en büyük zorluk, oosit adı verilen dişi germ hücrelerinin gelişimini yöneten mekanizmaları aydınlatmaktır. Gelişimleri, embriyogenezi başlatmak için oositi sperm ile füzyona hazırlayan iki kritik aşama olan hücre büyümesi ve müteakip bölünmeler ile işaretlenir. Büyüme sırasında, oositler sitoplazmalarını çekirdeği hücre merkezinde konumlandırmak için yeniden düzenlerler, bu da farelerde ve insanlarda başarılı oosit gelişimini ve dolayısıyla embriyojenik potansiyellerini öngören bir olaydır. Fare oositlerinde, bu sitoplazmik yeniden düzenlemenin, aktivitesi çekirdeğe giren, yeniden konumlandıran ve nüfuz eden mekanik kuvvetler üreten hücre iskeleti tarafından yönlendirildiği gösterilmiştir. Sonuç olarak, bu sitoplazmik-nükleoplazmik kuvvet iletimi, biyomoleküler kondensatlar olarak bilinen nükleer RNA işleme organellerinin dinamiklerini ayarlar. Bu protokol, fare oositlerinde uzamsal ölçekler boyunca hücre iskeletinin çekirdek üzerindeki etkisini yüksek zamansal çözünürlükle belgelemek için deneysel bir çerçeve sağlar. i) oosit sitoplazmasındaki hücre iskeleti aktivitesini, ii) oosit çekirdeğinin hücre iskeleti bazlı ajitasyonunu ve iii) oosit nükleoplazmasındaki biyomoleküler kondensat dinamikleri üzerindeki etkilerini değerlendirmek için gerekli görüntüleme ve görüntü analizi adımlarını ve araçlarını detaylandırır. Oosit biyolojisinin ötesinde, burada detaylandırılan yöntemler, ölçekler arasında nükleer dinamiklerin hücre iskeletine dayalı ayarını benzer şekilde ele almak için somatik hücrelerde kullanılmak üzere uyarlanabilir.

Şekil 3'teki görüntü panelleri, tipik bir tam büyümüş oosit örneklerini göstermektedir (Şekil 3A), tamamen büyümüş bir oositteki nükleoplazma YFP-Rango'yu ifade eder (Şekil 3B), tam büyümüş bir oositteki nükleoplazma doğru (sol panel; Şekil 3C) veya aşırı (sağ panel; Şekil 3C) SRSF2-GFP cRNA dozu ve SC35 antikoru kullanılarak tamamen büyümüş bir oositte nükleer beneklerin immün boyanması (Şekil 3D). SRSF2-GFP cRNA'nın mikroenjekte edilecek doğru dozu, SRSF2-GFP'nin ekspresyon profilleri ile nükleer beneklerin endojen profilleri arasındaki görsel karşılaştırmalara dayalı olarak tanımlandı.
Oositlerdeki sitoplazmik karıştırma kuvvetleri, STICS vektör haritaları ve görüntü korelasyon analizi (bkz.9 ve11) kullanılarak laboratuvardan yapılan önceki çalışmalarda gösterildiği gibi, hem genetik (örneğin, FMN2-mutant fare) hem de kimyasal (örneğin, Cytochalasin D) hücre iskeleti bozulmaları ile azaltılabilir. Kontrol oositlerinin STICS haritaları, yüksek akış hızlarını gösteren renklerle çok sayıda vektör gösterirken, bozulmuş hücre iskeleti kuvvetlerine sahip oosit haritaları, düşük akış hızlarını gösteren renklerle daha az vektör gösterir. Benzer şekilde, kontrol oositlerinde görüntü korelasyonu, hücre iskeleti kuvvetleri bozulmuş oositlere kıyasla çok hızlı kaybolur. Bu, hücre iskeleti kuvvetleri9 bozulmuş oositlere kıyasla kontrol oositleri için eğrinin daha hızlı azalması veya eğri ters çevrildiğinde daha hızlı bir artış11 ile korelasyon eğrilerinde gözlemlenebilir.
Hücre iskeleti kuvvetleri, çekirdeği ve iç organellerini, özellikle nükleer benekler10,11 gibi nükleer yoğunlaşmaları çalkalar. Şekil 4A'da, kontrol oositlerinin çekirdeği, nükleer prob YFP-Rango kullanılarak görülebilen önemli periferik dalgalanmalara maruz kalmaktadır. Hücre iskeleti kuvvetleri bozulmuş oositlerde çekirdek şekli zaman içinde stabildir (Şekil 4C). Nükleer anahat dalgalanmalarının analizi, ajitasyonu kesin olarak ölçmek için anahtardır. Çekirdek sentroidinden çevresine olan mesafenin varyansını belirleyerek, (r-R)2 (Şekil 4B), dalgalanmalar ölçülebilir, bu da nükleer ajitasyonun kontrol oositlerinde bozulmuş hücre iskeleti kuvvetlerine sahip oositlere göre 6 kat daha yüksek olduğunu gösterir10. Şekil 5A-B'de, nükleer benekler (SRSF2-GFP+ damlacıkları), yüksek zamansal çözünürlükte sitoplazmik kuvvetlerin kontrol ve bozulmuş bağlamlarında gösterilmiştir. Kontrollerde, damlacık yüzeyi, Radioak32 eklentisi kullanılarak görselleştirilebilen ve ölçülebilen, bozulmuş sitoplazmik kuvvetlere sahip oositlerdeki damlacık yüzeylerinden önemli ölçüde daha fazla dalgalanır. Görsel olarak, yeşil ve kırmızı renkler (Şekil 5A-B'nin alt görüntülerinde görülen Radioak çıktısı), eklentinin ardışık görüntüler arasında yüzey değişikliklerini algıladığı açıları gösterir ve beyaz, yüzey değişikliklerinin eksikliğini gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65976/65976fig01.jpg"> Şekil 1: Geç fare oogenezi ve erken embriyogenezin gösterimi. Geç oosit büyümesinde meydana gelen çekirdek merkezlenmesinin, oosit bölünmesi sırasında meydana gelen kromozom merkezlenmesinin ve embriyogenezin erken aşamalarının (1 hücreli ve 2 hücreli aşamalar) gösterimi. Dişi genomlar (oosit çekirdeği ve dişi pronükleus) pembe, erkek pronükleus mavi renktedir. Embriyo çekirdekleri (ebeveyn genomlarının füzyonundan sonra) mordur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/65976fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65976/65976fig02.jpg"> Şekil 2: Büyüyen fare oositlerinde ölçekler arasında sitoplazmik ve nükleer yeniden şekillenmenin gösterimi. Bu şekil, 9,10,11'den elde edilen temel bulguları özetlemektedir. Sitoplazmanın aktomiyosin bazlı yeniden modellenmesi, nükleer ajitasyon ve uzay-zamansal ölçeklerde fonksiyonel nükleer biyomoleküler kondensat yeniden şekillenmesinin gösterimi. Nükleer beneklerin ölçek geçişli yeniden şekillenmesi, işlevleriyle ilişkili biyomoleküler reaksiyonları geliştirir (yani, pre-mRNA'nın eklenmesi). Bu protokolün, nükleer ajitasyonun yalnızca uzamsal ölçeklerde değerlendirilmesine izin verdiğini, ancak zamansal ölçeklerde değerlendirilmesine izin vermediğini unutmayın, çünkü tüm görüntüleme, görüntü çerçeveleri arasında 0,5 s'lik aynı zamansal çözünürlükle yapılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/65976fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65976/65976fig03.jpg"> Şekil 3: Tamamen büyümüş oosit ve nükleoplazmanın örnek görüntüleri. (A) Nükleolusu çevreleyen kromatini (camgöbeği) gösteren tamamen büyümüş bir oositin parlak alan görüntüsü. Noktalı beyaz bir daire çekirdeğin ana hatlarını çizer. (B) YFP-Rango eksprese eden canlı oosit çekirdeği; Nükleolde floresan bulunmadığına dikkat edin. (C) Doğru dozlarda cRNA (sol panel) veya yüksek dozlarda cRNA (sağ panel) mikroenjeksiyonundan sonra SRSF2-GFP eksprese eden canlı oosit çekirdeği örneği; Soldaki yoğunlaştırılmış (damlacık) ve çözünmüş fazlara ve sağdaki durumda bulunmadıklarına dikkat edin. (D) Sabit bir oositte nükleer benek immün boyama; C'dekiyle karşılaştırılabilir endojen ekspresyon profiline dikkat edin (sol panel). Ölçek çubukları = 5 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/65976fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65976/65976fig04.jpg"> Şekil 4: Kontrol ve bozulmuş nükleer anahat dalgalanmalarının eklenti çıktıları. (A) YFP-Rango'yu (üstte) ve Ovocyte_nucleus eklentisi tarafından oluşturulan karşılık gelen ikili maskeyi (altta) eksprese eden bir kontrol oosit çekirdeğinin hızlandırılmış hızı. (B) Nükleer anahat dalgalanmaları ilkesi, ölçümleri zaman içinde ve belirli bir yönde yapar. Yönler, 0° ila 360° arasında 1°'lik artışlarla θ dönme açısı ile tanımlanır. t=0 s (sarı) ve t=135 s (mor) olmak üzere iki temsili şekil temsil edilir. Mavi şekil, zaman içindeki ortalama şekle karşılık gelir. (C) Hem F-aktin (FMN2-mutant fare) hem de mikrotübüllerin (Nokodazol tedavisi;10'da olduğu gibi) bozulması nedeniyle hücre iskeleti kuvvetlerinin azaldığı bir oositteki bir çekirdeğin nükleer anahat dalgalanmaları. Ölçek çubukları = 5 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/65976fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65976/65976fig05.jpg"> Şekil 5: Kontrol ve bozulmuş damlacık yüzey dalgalanmalarının eklenti çıktıları. (A) Çerçeve başına 500 ms'de görüntülenen ve Buz Arama Tablosunda (LUT) (üstte) gösterilen bir kontrol SRSF2-GFP nükleer damlacığının kırpılması; Fiji tarafından üretilen aynı damlacığın ikili maskesi (ortada); ve Radioak eklentisi, damlacığın (altta) yüzey dalgalanmalarının analizinden sonra, eklentinin ardışık görüntüler ile beyaz arasında yüzey değişikliklerini tespit ettiği yeşil ve kırmızı gösterge açılarıyla, yüzey değişikliklerinin eksikliğini gösterir. (B) Hem F-aktin hem de mikrotübüllerin bozulması nedeniyle hücre iskeleti kuvvetlerinin azaldığı oositlerde bir nükleer damlacığın yüzey dalgalanmaları (11'de olduğu gibi). Ölçek çubukları = 5 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/65976fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 1: Ovocyte_nucleus eklenti analizi çıktısı örneği. Şekil 4A'da gösterilenle aynı çekirdek analiz edildi. Teta (θ) derece cinsinden açıdır ve t1 ila t600, zaman içinde dönüştürülebilen çerçeve numarasına karşılık gelir. Yarıçaplar μm cinsindendir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/Table%201_Ovocyte_nucleus%20output%20example.xlsx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 2: Nükleer anahat dalgalanmalarını hesaplamak için kullanılan örnek elektronik tablo. Şekil 4A'da gösterilenle aynı çekirdek analiz edildi. Teta (θ) derece cinsinden açıdır ve t1 ila t600, zaman içinde dönüştürülebilen çerçeve numarasına karşılık gelir. Sekme Ham ve ortalama: Yarıçaplar μm cinsindendir. Sekme r-R: r-R mesafeleri μm cinsindendir. Tablo (r-R)2: Dalgalanma değerleri μm2 cinsindendir. x ve y sekmeleri, Ham ve ortalama sekmesindeki yarıçapların Kartezyen koordinatlarına karşılık gelir. Ortalama şekil sekmesinde çekirdeğin zaman içindeki ortalama şeklini çizmeye izin verirler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/Table%202_Nuclear%20outline%20fluctuations%20analysis%20example_RE.xlsx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 3: Radioak eklenti analiz çıktısı örneği. Şekil 5A'da gösterilenle aynı damlacık analiz edildi. Farklı zaman noktalarında ve açılarda ölçülen yarıçaplar gösterilir. Yarıçaplar μm cinsindendir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/Table%203_%20Radioak%20output%20example.xlsx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Tablo 4: Nükleer damlacık yüzey dalgalanmalarını hesaplamak için kullanılan örnek elektronik tablo. Şekil 5A'da gösterilenle aynı damlacık analiz edildi. Teta (θ) derece cinsinden açıdır ve t1 ila t600, zaman içinde dönüştürülebilen çerçeve numarasına karşılık gelir. Sekme Ham ve ortalama: Yarıçaplar μm cinsindendir. Sekme r-R: r-R mesafeleri μm cinsindendir. Tablo (r-R)2: Dalgalanma değerleri μm2 cinsindendir. x ve y sekmeleri, Ham ve ortalama sekmesindeki yarıçapların Kartezyen koordinatlarına karşılık gelir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65976/Table%204_Droplet%20fluctuations%20analysis%20example_RE.xlsx" target="_blank">Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu protokol, hücre iskeletinin nükleer şekil ve fare oosit sistemindeki iç zarsız organeller üzerindeki fiziksel etkisini belgelemek için deneysel bir çerçeve sağlar. Çerçeve, diğer hücre türlerinde ve bağlamlarında kullanılmak üzere uyarlanabilir.

Fare Oosit Çekirdeğinin Hücre İskeleti Tabanlı Ajitasyonunun Uzamsal Ölçeklerde Yakalanması

A major challenge in understanding the causes of female infertility is to elucidate mechanisms governing the development of female germ cells, named ...

Laboratuvar, fare oositleri model sistemini kullanarak cinsel türlerin üremesi için gerekli olan dişi gam miktarının elde edilmesinde yer alan mekanizmaları daha iyi anlamayı amaçlamaktadır. Son zamanlarda, çekirdeğin ve içeriğinin ajitasyonunu teşvik eden ve fare oositlerinde maternal RNA'ların ince regülasyonuna yol açan yeni bir mekanik transdüksiyon süreci tanımladık. Bu protokolde sunulan görüntüleme ve görüntü analizi boru hattı, hücre iskeleti kuvvetlerinin sitoplazmadan çekirdeğe ve fare oositlerindeki nükleer RNA işleme gövdeleri dahil olmak üzere bileşenlerine ölçekler arasında bir süreklilik olarak iletimini vurgulamamızı sağlar.Bu protokol, ilk kez tek bir boru hattında birden fazla hücresel ölçekte ilk iletimi ele almamızı sağlayan basit araçlar sağlar. Biyofiziksel modelleme ile tamamlanan bu protokol, nükleer mekanikteki değişiklikleri ve enerjinin hücresel bölmeler arasında dağılımını ele almak için invaziv olmayan bir teknik oluşturur.

capturing-cytoskeleton-based-agitation-mouse-oocyte-nucleus-across

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Oosit mayotik olgunlaşması sırasında kromozom segregasyon hataları nedeniyle anöploidi yatkındır. Anöploid yumurta, kısırlık, düşüklere veya gelişimsel bozukluklar, Down sendromu gibi neden olabilir. Burada, yumurta ve mayotik olgunlaşma incelemek ve Ploidi değerlendirmek için yöntemler seçim malzemeleri tanıtmak için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Oosit Mikroenjeksiyon, olgunlaşması ve ploidi Değerlendirmesi

Burada, fare oosit mayoz mili montaj ve organizasyon değerlendirmek için immünoflüoresans analizi ile takip özgü siRNA aracılı mRNA tükenmesi için bir protokol mevcut. Bu protokol, transkript in vitro tükenmesi ve farklı mili ve / veya oositlerde MTOC ilişkili faktörler fonksiyonel değerlendirmesi için uygundur.

SiRNA aracılı susturma Mouse Oositlerinin içinde mayoz Mili Değerlendirmesi

Olgun Drosophila oositlerinin toplanması, hazırlanması ve görüntülenmesi için protokoller sunuyoruz. Bu yöntemler, mayoz bölünme sırasında kromozom davranışının ve iğ montajının ve işlevinin görselleştirilmesine izin verir.

Sabit Görüntüleme prometafaz ve Metafaz Mayoz ve I Teknikleri<em&gt; Drosophila</em&gt; Oositler

Burada, non-invaziv oosit gelişimsel yetkinlik metafaz II sahneye germinal vezikül--dan onların vitro olgunlaşma sırasında gerçekleştirilen değerlendirilmesi için bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem zaman hata görüntüleme partikül imaj velosimetri (PIV) ve neural ağ analizleri ile birleştirir.

Bir Neural ağ tabanlı kimlik gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta

İnsan hastalığı ile ilişkili genetik varyantların ele haline başladığınızda, sistemler ile tanımlanan bu değişik biyolojik önemi hızla değerlendirileceği geliştirmeye giderek önem kazanmaktadır. Bu iletişim kuralı insan gen işlevi kadın mayoz sırasında ben fare yumurta kullanarak değerlendirilmesi yöntemlerini açıklar.

Mayoz sırasında insan gen işlevini değerlendirmek için fare yumurta kullanarak ben

Drosophila'da, oosit çekirdeği oogenez sırasında mikrotübül bağımlı göçe uğrar. Burada, yumurta odaları ex-vivo üzerinde canlı görüntüleme yaparak göçü takip etmek için geliştirilen bir protokolü açıklıyoruz. Prosedürümüz, iplik disk konfokal mikroskopi kullanarak çok konumlu 3D hızlandırılmış filmler elde etmek için yumurta odalarını 12 saat boyunca canlı tutar.

Drosophila Oosyte'de Nükleer Göç

Yakın kızılötesi femtosaniye lazer kullanılarak metafaz I sırasında fare oositlerinde sitoplazmik mikrotübül düzenleme merkezlerinin tükenmesini sağlayan optimize edilmiş bir protokol sunulmaktadır.

Fare Oositlerinde Sitoplazmik Mikrotübül Düzenleme Merkezlerinin Multi-Foton Lazer Ablasyonu

Kromozom ayrışmasında hata, oositlerde yaygın bir özelliktir. Bu nedenle, iş mili montaj kontrol noktasının incelenmesi, sağlıklı yumurta üretmek için gereken mekanizmalar hakkında önemli ipuçları verir. Mevcut protokol, fare oositlerinde iş mili montaj kontrol noktası bütünlüğünü değerlendirmek için üç tamamlayıcı tahlil tanımlamaktadır.

Fare Oositlerinde İş Mili Montaj Kontrol Noktası Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Sinapslardaki mayotik hatalar ve rekombinasyon, memeli oositlerinde yaygındır. Bu süreçlerde yer alan proteinlerin titiz analizi, oogenezin nasıl ve neden sıklıkla yanlış gittiğini anlamak için çok önemlidir. Burada sunulan teknikler, farelerde oosit kalitesini değerlendirmek için rekombinasyon ve sinapsların kapsamlı bir şekilde izlenmesine izin verir.

Sinapsis ve Rekombinasyonun Değerlendirilmesi için Fare Oositlerinden Mayotik Kromozom Yayılımlarının Hazırlanması

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Keşfedin fare oositlerinde hücre iskeleti kuvvetlerinin çekirdek şekli ve RNA dinamikleri üzerindeki etkisini. Gelişmiş görüntüleme teknikleri ile çok ölçekli kuvvet iletimini inceleyin.

Fare Oosit Çekirdeğinin Hücre İskeleti Tabanlı Ajitasyonunun Uzamsal Ölçeklerde Yakalanması

Daha fazla video keşfet