Name: Yaşlı Dunkin-Hartley Guinea Domuzlarında Eklem İçi Enjeksiyon Sonrası Dizin Mikro Bilgisayarlı Tomografi Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Öğrenin, Dunkin-Hartley guinea pig'lerde eklem içi enjeksiyon ve mikro-bilgisayarlı tomografi ile osteoartrit ilerlemesini analiz etme yöntemini. Bu teknik, tedavi değerlendirmesi için güvenilir veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu el yazmasında özetlenen araştırma, Güney Carolina SmartState® İlaç Keşfi Bağış fonları (PMW), MUSC Laboratuvar Hayvanları Kaynakları Bölümü ve MUSC İlaç Keşif Çekirdeği tarafından desteklenmiştir. Bu yayın aynı zamanda Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Translasyonel Bilimleri Geliştirme Ulusal Merkezi tarafından TL1 TR001451 ve UL1 TR001450 Hibe Numaraları altında ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Diş ve Kraniyofasiyal Araştırma Enstitüsü tarafından R01DE029637 Numaralı Ödül ile desteklenmiştir.

Burada açıklanan tüm yöntemler, Güney Carolina Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Çalışma 3R ilkesini takip etti.
1. Eklem içi enjeksiyon preparatları
<ol><li>Deneye başlamadan önce Dunkin-Hartley kobaylarının en az bir hafta tesise alışmasına izin verin. NOT: 5- (n=2), 9- (n=1) ve 12- (n=2) aylık erkek kobay kullanıldı. Erkekler hızlandırılmış bir gelişim ve daha şiddetli OA fenotipi gösterirler.</li>
	<li>Diz bölgesini elektrikli tıraş bıçağıyla tıraş edin. NOT: Meme uçlarına medial olarak dikkat edin.</li>
	<li>O2 karışımında (akış hızı 2.5 L / dak) %3-5 izofluran veren bir izofluran odasında kobayları uyuşturun ve ardından kobayları tekrar nefes almayan bir anestezi devresine bağlı bir burun konisine aktarın. Enjeksiyon sırasında, tipik olarak 0.5-1 L / dak oksijen akış hızı ve% 1-3 izofluran ile cerrahi anestezi düzlemini korumak için izofluranı ayarlayın. NOT: Eklem içi enjeksiyonlar hafif, anlık ağrıya neden olur. Ağrılı uyaranların algılanmasını önlemek ve enjeksiyon doğruluğunu artırmak için işlem sırasında hayvanlar uyuşturulur. Sunulan çalışmada, steroid olmayan antienflamatuar ilaçlar da dahil olmak üzere analjezik ajanların uygulanması, OA ilerlemesini etkileyecektir21. Anlık ağrı, sağlanan anestezi ve analjeziklerin modeli şaşırtma potansiyeli nedeniyle, hayvanlar enjeksiyondan sonra eklem palpasyonunda topallama ve ağrı belirtileri dahil olmak üzere yan etkiler göstermedikçe analjezikler uygulanmadı. Araştırmacılar rutin enjeksiyonlar için analjezik kullanımını düşünmelidir. Yan etkiler ortaya çıktığında analjezikler önerilir. Analjezik rejimler, çalışmalara başlamadan önce kurumsal veteriner hekim ile tartışılmalı ve IACUC tarafından onaylanmalıdır.</li>
	<li>Ayak parmağı sıkışma tepkisi olmaması nedeniyle kobayın uygun anestezi derinliğinde olduğundan emin olun.</li>
	<li>Kurumayı ve yaralanmayı önlemek için her iki gözünüze de steril oküler kayganlaştırıcı yerleştirin.</li>
	<li>Betadini steril suyla %10'a kadar seyreltin.</li>
	<li>200 geçirmez etanolü steril su ile %70 etanole seyreltin.</li>
	<li>Steriliteyi korumak için bir biyogüvenlik kabininde enjeksiyon için solüsyonlar hazırlayın. Sunulan protokolde, her iki dize enjekte etmek için steril bir araç (1x fosfat tamponlu salin) kullanıldı. Çözümler, araştırma hedeflerine göre değiştirilebilir. NOT: Steriliteyi sağlamak için enjeksiyon seansından hemen önce enjeksiyon için taze solüsyonları seyrelttiğinizden emin olun. Kullanılmayan solüsyonlar her enjeksiyon seansının sonunda atılmalıdır.</li>
	<li>Steril tek kullanımlık insülin şırıngalarını enjeksiyon solüsyonlarıyla doldurun. Eklem boşluğunun hacimle aşırı yüklenmesini önlemek için elde edilebilecek en küçük hacmi kullanmaya özen gösterin. Bu çalışmada 50 μL kullanılmıştır.</li>
	<li>Gine domuzu ve burun konisini, termal destek için bir ısıtma yastığı ve hafifçe yükseltmek için başın altına dolgu ile temiz bir yüzeye yerleştirin.</li>
	<li>Enjeksiyon prosedürünü gerçekleştirirken cerrahi önlük, saç filesi, steril eldiven ve maske giyin.</li>
	<li>Bir pamuğa %10 betadin dökün ve her iki diz bölgesini silin.</li>
	<li>Bir pamuğa %70 etanol dökün ve her iki diz bölgesini silin.</li>
	<li>1.12 ve 1.13'ü iki kez daha tekrarlayın. NOT: Gösterim amacıyla, ilgili videoda diz ve enjeksiyon bölgesinin bir kez %10 betadin ve %70 etanol ile temizlenmesi gösterilmektedir. Enjeksiyon bölgesi daha sonra iki kez daha dairesel hareketler kullanılarak temizlendi ve bu solüsyonlar değiştirildi. Aseptik tekniğe ulaşmak için alternatif ovma solüsyonları ve alkol içeren üç seri ovma önerilir.</li>
</ol>2. Eklem içi enjeksiyon
<ol><li>İşlemin tamamı için kobayları sırtüstü pozisyona getirin.</li>
	<li>Yeni bir çift steril eldiven giyin ve diz eklemini palpe edin. NOT: Sunulan protokol ve videoda otoklavlanmış nitril eldivenler kullanılmıştır. Aseptik teknik için otoklavlanmış nitril eldivenler veya cerrahi eldivenler dahil olmak üzere steril eldivenler kullanılmalıdır.</li>
	<li>Dizinizi manuel olarak 90° esnetin.</li>
	<li>Arka ayağı esneterek ve uzatarak eklem boşluğunun distal yönünün oluğunu bulmak için parmağınızı patellaya distalde hareket ettirin. NOT: Patella, bu pozisyonda doğrudan eklem boşluğunun üzerine yerleştirilmiş küçük, sağlam bir yapı olarak palpe edilebilir. Tibia, patellanın distalinde kemikli bir yapı olarak hissedilebilir. Tibia ve patellanın yeri belirlendikten sonra, oluk olarak hissedilen eklem aralarında, patellanın distalinde ve tibianın proksimalindedir.</li>
	<li>İnsülin iğnesini eklem boşluğu içindeki patellanın distalindeki orta hattın üzerine dikkatlice yerleştirin. Eklem boşluğuna girmek için iğne cildin 1-2 mm altına sokulmalıdır. NOT: Diz bükülürken eklem boşluğu için en büyük erişim penceresi, orta hatta, patellanın doğrudan distalinde, uzvun ön yüzündedir. Orta hatta önden arkaya yönde enjekte edilmesi, kemikli yapılara nüfuz etmeden eklem boşluğuna doğru bir şekilde enjekte edilmesine yardımcı olacaktır. Eklem boşluğuna doğru bir şekilde enjekte edilmesi, özellikle diz büküldüğünde erişim penceresi daha dar olmasına rağmen, lateral-medial bir yaklaşım kullanılarak elde edilebilir.</li>
	<li>Çözeltinin 50 μL'sini eklem içine yavaşça enjekte edin. İğnenin kolayca girdiğinden ve içeriğin direnç göstermeden enjekte edildiğinden emin olun. NOT: Eklem veya kemik hasarına neden olabileceğinden ve istenmeyen iltihaplanma ve/veya ağrıya neden olabileceğinden iğneyi çok derine sokmadığınızdan emin olun. Eklem boşluğuna karşılık gelen oluk bulunamazsa, iğne uyluk kemiği, patella veya kaval kemiğine nüfuz edebilir. Bu nedenle, peri-artiküler enjeksiyonları veya penetran kemiksi yapılarla ilişkili yaralanmaları önlemek için eklem boşluğuna karşılık gelen oluğu güvenle palpe etmek faydalıdır. Derinin altındaki enjeksiyon bölgesinde bir kabarcık oluşursa, enjeksiyon çok sığdır ve sıvı deri altı boşluğuna girmiştir. Kullanılan ajanın özelliklerine bağlı olarak, ilaç difüzyon yoluyla eklem boşluğuna girebilir veya başka bir enjeksiyon denemesine ihtiyaç duyulabilir.</li>
	<li>Bittiğinde, iğneyi keskin nişancı kutusuna atın. NOT: Uygulama ve eğitim amacıyla, benzer büyüklükteki bir kemirgen veya kobayda bir kadavranın eklem boşluğuna bir boya içeren sıvı enjekte edin. Ardından, enjeksiyonun yerini doğrulamak için eklemi inceleyin.</li>
	<li>Eklemi birkaç kez esneterek ve uzatarak dizinize masaj yapın, ilacın eklem boşluğu içinde difüzyonunu teşvik edin.</li>
	<li>1x PBS çözeltisi ile kontralateral uzuv üzerinde 2.1-2.5 adımlarını bir kez tekrarlayın.</li>
</ol>3. Eklem içi enjeksiyondan iyileşme
<ol><li>İzofluranı kapatın ve hayvan bilincini geri kazanana kadar oksijenle% 100 akışı koruyun.</li>
	<li>Hayvanı, ambulatuvar olana kadar termal destek için bir ısıtma yastığına yerleştirin.</li>
	<li>Enjeksiyondan kaynaklanan şişliği azaltmaya yardımcı olmak için bariyer olarak bir kağıt havluyla dizinize 30 saniye boyunca bir buz torbası uygulayın.</li>
	<li>Hayvan yürüyüşünü, onları eve geri göndermeden önce ayaktayken değerlendirin. NOT: Herhangi bir yürüyüş anormalliği belirtilirse, analjezikler ve destekleyici bakım gerekebilir. Normal hareketliliği sağlamak için anesteziden iyileştikten birkaç saat sonra yürüyüşlerini tekrar değerlendirmeniz önerilir.</li>
</ol>4. Mikro bilgisayarlı tomografi (μCT) taraması
<ol><li>Doku hasadı için,% 100 oksijen ve% 5 izofluran karışımı ile cerrahi bir anestezi düzlemi oluşturun.</li>
	<li>Ayak parmağı sıkışma uyaranına yanıt eksikliği olan bir cerrahi anestezi düzlemini onaylayın. Kurumsal politikalara ve onaylanmış hayvan kullanım protokolüne göre intravenöz olarak ≥ 150 mg / kg pentobarbital uygulayarak hayvanı insancıl bir şekilde ötenazi yapın. NOT: Sunulan protokolde, beş kobayın her biri her iki dizine bir enjeksiyon aldı. Hayvanlar enjeksiyondan bir hafta sonra anestezi altına alındı ve insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı.</li>
	<li>Cildi çevredeki kas sisteminden uzaklaştırarak her iki arka ayağı da hasat edin.</li>
	<li>Daha sonra, uyluk kemiğinin orta şaftında ve ayak bileğinin proksimalinde Rongeurs ile arka ayağı ayırın. NOT: Kullanılan tarama yatağı ve numune tutucu, yetişkin bir kobayın tüm arka ayağını barındıramadı. Büyük numune tutucular, daha büyük numune boyutları için ticari olarak temin edilebilir.</li>
	<li>μCT yapmadan önce dokuları fiksasyon için 72 saat boyunca nötr tamponlu formalin çözeltisine yerleştirin.</li>
	<li>μCT tarama yazılımını açın ve görselin içeren numuneyi, görüş alanındaki dokuyu korurken μCT numune klasörüne sığacak uyumlu bir kaba yerleştirin.</li>
	<li>μCT makinesini karanlık alan ve aydınlık alan maruziyetleri için üretici tavsiyelerine göre kalibre edin.</li>
	<li>Numuneyi Al+Cu filtresi ile 18 μm'de tarayın. Ofset kamera ile 360 ° için 0,7 ° döndürme adımını kullanın. NOT: Tarama otomatik olarak kaydeder.</li>
</ol>5. Kemik mikromimari parametrelerinin değerlendirilmesi için görüntü işleme
<ol><li>μCT görüntülerinin rekonstrüksiyonu için μCT rekonstrüksiyon yazılımını indirin ve yükleyin.</li>
	<li>Yazılım klasörünü seçin ve yazılımı açmak için çift tıklayın.</li>
	<li>Bir görüntü dilimine tıklayarak μCT görüntülerinden bir dilim seçin.</li>
	<li>Yeniden yapılandırma dosyası hedefini seçin. Gözat'ı seçin ve Recon adlı yeni bir klasör oluşturun. Seçilen dosya formatı BMP(8) olmalıdır.</li>
	<li>Yanlış hizalama telafisini kontrol edin. NOT: Genellikle, tahmin doğruya yakındır, ancak çakışan görüntüleri kaydırmak için manuel olarak ayarlanabilir, böylece sağ ve sol kenarlar mümkün olduğunca yakın hizalanır.</li>
	<li>Ayarlar'ın altında Yumuşatma, Işın Sertleştirme, CS Döndürme ve Halka Artefaktları algoritmalarını uygulayın. NOT: Yeniden yapılandırmadan önce netliği belirlemek için önizleme görüntüsünü seçmek yararlı olabilir. İnce ayar ayarı, hangi ayarların en iyi olduğunu belirlemek için de yardımcı olabilir.</li>
	<li>Yeniden yapılandırmayı işlemeye başlamak için Başlat'ı seçin.</li>
</ol>6. Yeniden yapılandırılmış görüntülerden mikromimari verilerin toplanması
<ol><li>Dataviewer'ı indirin ve yükleyin.</li>
	<li>VOI'yi seçin ve daha sonra daha kolay analiz için örneği dikey olarak hizalayacak şekilde yönlendirin.</li>
	<li>Düzenlenen VOI'yi yeni bir klasör olarak kaydedin.</li>
	<li>Mikromimari parametrelerin kemik özellik analizi için CTAnalyser'ı indirin ve yükleyin. NOT: CTAnalyser'ın ücretsiz sürümünün işlevselliği sınırlıdır, bu nedenle tam bir lisans almanız önerilir.</li>
	<li>Analizi, ayrı bir görüntü aralığı olarak kaydederek subkondral plaka ve trabeküler kemiğe bölün. NOT: Analizin bölünmesi gerekli değildir, ancak subkondral plak ve trabeküler kemik farklı özelliklere sahip olduğundan, ayrı analizler sağlam ölçümlere ve karşılaştırmaya yardımcı olabilir.</li>
	<li>Başlamak istediğiniz görüntü dilimine tıklayarak subkondral plakadan başlayarak analiz edilecek görüntü aralığını seçin.</li>
	<li>İlgilenilen bölge sekmesine tıklayarak kemiği kapsadığından emin olmak için her görüntü için ilgilenilen bölgeyi seçin.</li>
	<li>İkili Seçim sekmesini seçin. Histogramı, arka plan ve kemik tamamen ayrı olacak şekilde ayarlayın.</li>
	<li>Kemik Mineral Yoğunluğu (BMD) sekmesini seçin. Bu verileri yeni bir analiz verileri klasörüne kaydedin.</li>
	<li>Özel İşleme'yi seçin ve Dahili sekmesine gidin.</li>
	<li>Önce Eşikleme gerçekleştirin ve Otomatik Otsu'yu seçin, ardından Çalıştır'ı seçin.</li>
	<li>Ardından Benek Kaldır'ı seçin ve Siyah benekleri kaldır'ı ve ardından Çalıştır'ı seçin.</li>
	<li>Benek Giderme'yi tekrarlayın ve Beyaz benekleri kaldır'ı seçin, ardından Çalıştır'ı seçin.</li>
	<li>3B analiz'i seçin ve Temel değerler ve Ek değerler'i seçin.</li>
	<li>Trabeküler kemik analizi için görüntüyü sıfırlamak üzere 6.2.2-6.4.5 adımlarını tekrarlayın. NOT: Çıktı dosyasının, BMD verileriyle aynı dosyaya sahip yeni bir klasörde olduğundan emin olun.</li>
</ol>

<ol><li>Callahan, L. F., Cleveland, R. J., Allen, K. D., Golightly, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Racial%2FEthnic%2C+socioeconomic%2C+and+geographic+disparities+in+the+epidemiology+of+knee+and+hip+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Rheum+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Racial/Ethnic, socioeconomic, and geographic disparities in the epidemiology of knee and hip osteoarthritis.</a> Rheum Dis Clin North Am. 47 (1), 1-20 (2021).</li>
<li>Mandl, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis+year+in+review+2018%3A+clinical%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis year in review 2018: clinical.</a> Osteoarthritis Cartilage. 27 (3), 359-364 (2019).</li>
<li>Assirelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+expression+and+activation+in+osteoarthritis+joint+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Complement expression and activation in osteoarthritis joint compartments.</a> Front Immunol. 11, 535010(2020).</li>
<li>Lampropoulou-Adamidou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Useful+animal+models+for+the+research+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Orthop+Surg+Traumatol%22%5BJournal%5D)">Useful animal models for the research of osteoarthritis.</a> Eur J Orthop Surg Traumatol. 24 (3), 263-271 (2014).</li>
<li>Glasson, S. S., Blanchet, T. J., Morris, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surgical+destabilization+of+the+medial+meniscus+%28DMM%29+model+of+osteoarthritis+in+the+129%2FSvEv+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The surgical destabilization of the medial meniscus (DMM) model of osteoarthritis in the 129/SvEv mouse.</a> Osteoarthritis Cartilage. 15 (9), 1061-1069 (2007).</li>
<li>Kuyinu, E. L., Narayanan, G., Nair, L. S., Laurencin, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+osteoarthritis%3A+classification%2C+update%2C+and+measurement+of+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of osteoarthritis: classification, update, and measurement of outcomes.</a> J Orthop Surg Res. 11, 19(2016).</li>
<li>Pitcher, T., Sousa-Valente, J., Malcangio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Monoiodoacetate+Model+of+Osteoarthritis+Pain+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse.</a> J Vis Exp. (111), e53746(2016).</li>
<li>de Araujo, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((morphology+of+the+hind+limbs+in+two+caviomorph+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Histol+Embryol%22%5BJournal%5D)">morphology of the hind limbs in two caviomorph rodents.</a> Anat Histol Embryol. 42 (2), 114-123 (2013).</li>
<li>Veronesi, F., Salamanna, F., Martini, L., Fini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+osteoarthritis+features+and+treatments%3A+systematic+review+on+the+aged+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring osteoarthritis features and treatments: systematic review on the aged guinea pig model.</a> Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).</li>
<li>Kraus, V. B., Huebner, J. L., DeGroot, J., Bendele, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OARSI+histopathology+initiative+-+recommendations+for+histological+assessments+of+osteoarthritis+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the guinea pig.</a> Osteoarthritis Cartilage. 18, Suppl 3 S35-S52 (2010).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteoarthritis+natural+progress+and+changes+in+intraosseous+pressure+of+the+guinea+pig+model+in+different+degeneration+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">The osteoarthritis natural progress and changes in intraosseous pressure of the guinea pig model in different degeneration stages.</a> Orthop Surg. 14 (11), 3036-3046 (2022).</li>
<li>Boyde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bone+cartilage+interface+and+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif+Tissue+Int%22%5BJournal%5D)">The bone cartilage interface and osteoarthritis.</a> Calcif Tissue Int. 109 (3), 303-328 (2021).</li>
<li>Akhter, M. P., Recker, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+imaging+in+bone+tissue+research-review%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">High resolution imaging in bone tissue research-review.</a> Bone. 143, 115620(2021).</li>
<li>Clark, D. P., Badea, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+micro-CT+imaging+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in micro-CT imaging of small animals.</a> Phys Med. 88, 175-192 (2021).</li>
<li>Bouxsein, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+assessment+of+bone+microstructure+in+rodents+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Guidelines for assessment of bone microstructure in rodents using micro-computed tomography.</a> J Bone Miner Res. 25 (7), 1468-1486 (2010).</li>
<li>Yang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+CD147+in+alveolar+bone+remodeling+and+soft+tissue+degradation+in+experimental+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontal+Res%22%5BJournal%5D)">Involvement of CD147 in alveolar bone remodeling and soft tissue degradation in experimental periodontitis.</a> J Periodontal Res. 52 (4), 704-712 (2017).</li>
<li>Ruegsegger, P., Koller, B., Muller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microtomographic+system+for+the+nondestructive+evaluation+of+bone+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif+Tissue+Int%22%5BJournal%5D)">A microtomographic system for the nondestructive evaluation of bone architecture.</a> Calcif Tissue Int. 58 (1), 24-29 (1996).</li>
<li>Boca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+micro-CT+imaging+and+histology+for+approximal+caries+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of micro-CT imaging and histology for approximal caries detection.</a> Sci Rep. 7 (1), 6680(2017).</li>
<li>Ren, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+morphological+abnormalities+of+subchondral+bone+and+their+association+with+cartilage+degeneration+in+spontaneous+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Biochemical and morphological abnormalities of subchondral bone and their association with cartilage degeneration in spontaneous osteoarthritis.</a> Calcified Tissue International. 109 (2), 179-189 (2021).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-specific+and+location-specific+cartilage+calcification+in+osteoarthritis+development%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Stage-specific and location-specific cartilage calcification in osteoarthritis development.</a> Ann Rheum Dis. 82 (3), 393-402 (2023).</li>
<li>Magni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+osteoarthritis%3A+expert+opinion+on+NSAIDs%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Ther%22%5BJournal%5D)">Management of osteoarthritis: expert opinion on NSAIDs.</a> Pain Ther. 10 (2), 783-808 (2021).</li>
<li>Wang, T., Wen, C. Y., Yan, C. H., Lu, W. W., Chiu, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+changes+of+subchondral+bone+proceed+to+microscopic+articular+cartilage+degeneration+in+guinea+pigs+with+spontaneous+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal changes of subchondral bone proceed to microscopic articular cartilage degeneration in guinea pigs with spontaneous osteoarthritis.</a> Osteoarthr Cartil. 21 (4), 574-581 (2013).</li>
<li>Gao, J., Ren, P., Gong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+mechanical+alterations+in+articular+cartilage+and+subchondral+bone+during+spontaneous+hip+osteoarthritis+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Morphological and mechanical alterations in articular cartilage and subchondral bone during spontaneous hip osteoarthritis in guinea pigs.</a> Front Bioeng Biotechnol. 11, 1080241(2023).</li>
<li>Makarczyk, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+models+for+development+of+disease-modifying+osteoarthritis+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Current models for development of disease-modifying osteoarthritis drugs.</a> Tissue Eng Part C Methods. 27 (2), 124-138 (2021).</li>
<li>Hunter, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+therapy+for+osteoarthritis--the+era+of+disease+modification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic therapy for osteoarthritis--the era of disease modification.</a> Nat Rev Rheumatol. 7 (1), 13-22 (2011).</li>
<li>Schuelert, N., McDougall, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grading+of+monosodium+iodoacetate-induced+osteoarthritis+reveals+a+concentration-dependent+sensitization+of+nociceptors+in+the+knee+joint+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Grading of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis reveals a concentration-dependent sensitization of nociceptors in the knee joint of the rat.</a> Neurosci Lett. 465 (2), 184-188 (2009).</li>
<li>Yao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrocyte+ferroptosis+contribute+to+the+progression+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Translat%22%5BJournal%5D)">Chondrocyte ferroptosis contribute to the progression of osteoarthritis.</a> J Orthop Translat. 27, 33-43 (2021).</li>
<li>Huebner, J. L., Hanes, M. A., Beekman, B., TeKoppele, J. M., Kraus, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+analysis+of+bone+and+cartilage+metabolism+in+two+strains+of+guinea-pig+with+varying+degrees+of+naturally+occurring+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">A comparative analysis of bone and cartilage metabolism in two strains of guinea-pig with varying degrees of naturally occurring osteoarthritis.</a> Osteoarthritis Cartilage. 10 (10), 758-767 (2002).</li>
<li>Ringe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL25-Supplemented+hyaluronic+acid+attenuates+cartilage+degeneration+in+a+guinea+pig+model+of+knee+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">CCL25-Supplemented hyaluronic acid attenuates cartilage degeneration in a guinea pig model of knee osteoarthritis.</a> J Orthop Res. 37 (8), 1723-1729 (2019).</li>
<li>Chouhan, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+platelet-rich+plasma+injections+versus+single+platelet-rich+plasma+injection+in+early+osteoarthritis+of+the+knee%3A+An+experimental+study+in+a+guinea+pig+model+of+early+knee+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Multiple platelet-rich plasma injections versus single platelet-rich plasma injection in early osteoarthritis of the knee: An experimental study in a guinea pig model of early knee osteoarthritis.</a> Am J Sports Med. 47 (10), 2300-2307 (2019).</li>
<li>Patel, S., Mishra, N. P., Chouhan, D. K., Nahar, U., Dhillon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroprotective+effects+of+multiple+PRP+injections+in+osteoarthritis+by+apoptosis+regulation+and+increased+aggrecan+synthesis-+Immunohistochemistry+based+Guinea+pig+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Chondroprotective effects of multiple PRP injections in osteoarthritis by apoptosis regulation and increased aggrecan synthesis- Immunohistochemistry based Guinea pig study.</a> J Clin Orthop Trauma. 25, 101762(2022).</li>
<li>Cheng, J., Abdi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+joint%2C+tendon%2C+and+muscle+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Tech+Reg+Anesth+Pain+Manag%22%5BJournal%5D)">Complications of joint, tendon, and muscle injections.</a> Tech Reg Anesth Pain Manag. 11 (3), 141-147 (2007).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+central+role+for+complement+in+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a central role for complement in osteoarthritis.</a> Nat Med. 17 (12), 1674-1679 (2011).</li>
<li>Santangelo, K. S., Kaeding, A. C., Baker, S. A., Bertone, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+gait+analysis+detects+significant+differences+in+movement+between+osteoarthritic+and+nonosteoarthritic+guinea+pig+strains+before+and+after+treatment+with+flunixin+meglumine%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis%22%5BJournal%5D)">Quantitative gait analysis detects significant differences in movement between osteoarthritic and nonosteoarthritic guinea pig strains before and after treatment with flunixin meglumine.</a> Arthritis. 2014, 503519(2014).</li>
<li>McCoy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+osteoarthritis%3A+comparisons+and+key+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Animal models of osteoarthritis: comparisons and key considerations.</a> Vet Pathol. 52 (5), 803-818 (2015).</li>
<li>Thysen, S., Luyten, F. P., Lories, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targets%2C+models+and+challenges+in+osteoarthritis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Targets, models and challenges in osteoarthritis research.</a> Dis Model Mech. 8 (1), 17-30 (2015).</li>
<li>Vazquez-Portalatin, N., Breur, G. J., Panitch, A., Goergen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+ultrasound-guided+intra-articular+injections+in+guinea+pig+knees%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Joint+Res%22%5BJournal%5D)">Accuracy of ultrasound-guided intra-articular injections in guinea pig knees.</a> Bone Joint Res. 4 (1), 1-5 (2015).</li>
<li>Nie, C., Wang, Z., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+depression+on+fracture+healing+and+osteoblast+differentiation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychiatr+Dis+Treat%22%5BJournal%5D)">The effect of depression on fracture healing and osteoblast differentiation in rats.</a> Neuropsychiatr Dis Treat. 14, 1705-1713 (2018).</li>
<li>Jonsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+and+deep+learning%3A+Modern+techniques+and+applications+in+insect+morphology+and+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Micro-CT and deep learning: Modern techniques and applications in insect morphology and neuroscience.</a> Front Insect Sci. 3, (2023).</li>
</ol>

OA'nın semptomatik tedavisindeki son gelişmelere rağmen, OA24'ün başlamasını önleyen veya ilerlemesini geciktiren terapötik ajanlar tamamen eksiktir. Şu anda, şiddetli OA'nın tek tedavisi, maliyetli, invaziv olan ve hasta morbiditesi ve mortalitesi ile sonuçlanabilen eklem replasmanıdır25. Sonuç olarak, OA'nın hayvan modelleri ile devam eden araştırmalara ve yeni terapötiklerin sürekli geliştirilmesine ciddi bir ihtiyaç vardır. OA'nın farklı bileşenlerini incelemek için spontan ve kimyasal veya cerrahi olarak indüklenen modeller dahil olmak üzere çeşitli hayvan modelleri mevcuttur. MIA fare modelinde olduğu gibi kimyasalların enjeksiyonu, ağrıyı incelemek için hayati öneme sahiptir, ancak araştırmacıların OA gelişiminin ilerlemesini takip etmelerine ve hastalığın seyri boyunca istenen zaman noktalarında müdahale etmelerine izin vermez26. Cerrahi yöntemler invaziv prosedürler gerektirir ve insanlarda OA'nın başlangıcını aslına uygun olarak yansıtamaz27. Dunkin-Hartley kobayları doğal olarak OA geliştirir ve bu da onları yaygın olarak bulunan spontan bir OA28 modeli haline getirir. Bu spontan model, mekanik OA gelişimini inceleyen translasyonel araştırmalar için idealdir, çünkü müdahale gerektirmez ve insanlardakileri yansıtan patolojik değişiklikler içerir6. Daha önce yayınlanmış çalışmalarda, Dunkin-Hartley kobaylarında spontan OA'nın ilerlemesi üzerindeki yeni terapötiklerin etkilerini test etmek için eklem içi enjeksiyonlar kullanılmıştır 29,30,31.
Farelerde eklem içi enjeksiyonlar daha önce tanımlanmış olsa da, anatomik farklılıklar kobaylarda bu prosedür için ek zorluklar oluşturmaktadır7. Eklem içi enjeksiyonlar kobay OA çalışmalarının ayrılmaz bir parçası olmasına rağmen, bu prosedür henüz sistematik olarak detaylandırılmamıştır. Açıklanan metodoloji ile, kobaylarda eklem içi enjeksiyonların rafine edilmesi için temel hususları vurguluyor ve böylece prosedürle ilgili komplikasyon potansiyelini azaltıyoruz. İnsanlarda eklem içi enjeksiyonları takiben sık görülen yan etkiler arasında ağrı, şişme, septik artrit ve nöropati bulunur ve bunlar kobaylarda enjeksiyon yapılırken potansiyel komplikasyonlar olarak düşünülmelidir32. Deneyimlerimize göre, eklem palpasyonunda topallama ve ağrı gibi yan etkiler, iğne eklem boşluğuna çok derine sokulduğunda ve/veya enjeksiyon sırasında kemikli bir yapıya temas ettiğinde ortaya çıkabilir. Enjeksiyonlarımızı canlı hayvanlar üzerinde gerçekleştirmeden önce uygulamak için kadavralara sahip olmak, enjeksiyonların daha doğru yapılmasına yardımcı oldu. Sığ bir enjeksiyon derinliği sağlamak için tekniğimizi geliştirirken, eklem içi diz enjeksiyonlarını takiben hiçbir yan etki gözlemlemedik. Bu nedenle, uygun enjeksiyon tekniği, özellikle aylarca süren çoklu enjeksiyon gerektiren çalışmalar için, hayvan refahını sağlamak için çok önemlidir. Prosedürdeki temel adımlar arasında aseptik tekniğin kullanılması; hayatta kalma prosedürlerini gerçekleştirmeden önce yeterli eğitim; enjeksiyon sırasında ağrı algısını ve hareketini önlemek için cerrahi bir anestezi düzlemi elde etmek; ve bileşiğin tekrar uygulanmasını gerektirebilecek kemik distal ve peri-artiküler enjeksiyonlarla teması önlemek için uygun enjeksiyon derinliğinin sağlanması.
OA ile ilgili değişiklikleri sistematik olarak değerlendirmek için, etkilenen dokunun görselleştirilmesine, segmentasyonuna, etiketlenmesine ve objektif ölçümlerine olanak tanıyan 3D görüntü yorumlamaları da dahil olmak üzere μCT analizlerini açıklıyoruz. Açıklanan yöntemler, zaman içindeki OA eklem ve kemik değişikliklerini sistematik olarak değerlendirmede etkili ve verimli olmuştur. μCT sonuçlarımız, 12 aylık Dunkin-Hartley kobaylarının, artan kemik mineral yoğunluğu ve artan trabeküler kalınlık ile gösterildiği gibi, 5 aylık kobaylardan daha şiddetli OA'ya sahip olduğunu göstermektedir. Bu, zaman içinde OA'nın kötüleştiğini, kemik mineral yoğunluğunu ve trabeküler kalınlığı13 değerlendiren μCT analizleri de dahil olmak üzere bu OA modelinde daha önce yayınlanmış sonuçlarla uyumlu hale getirdi. Önceki çalışmalar ve sunulan temsili sonuçlar, μCT22,23 ile ölçüldüğü gibi zaman içinde KMY ve trabeküler kalınlıkta artış olduğunu ve arttığını göstermektedir. Ayrıca dizlerin histolojik olarak iki boyutlu olarak değerlendirilmesi μBT verilerinin geçerliliğini desteklemektedir. Histolojik olarak, 9 ve 12 aylık kobaylarda OA belirtileri 5 aylık hayvanlara göre daha belirgindir. OA ile ilişkili histolojik değişiklikler proteoglikan kaybı, fissürler ve hiposelülariteyi içerir. 10 Bu özelliklerin her biri yaşlı kobaylarda görülebilir. Ek olarak, daha yaşlı kobaylar, OA şiddeti10'u değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan ve doğrulanmış bir yöntem olan daha yüksek Modifiye Mankin skorlarına sahiptir. Histolojik analizlerimiz beklenen OA değişikliklerini gösterirken, μCT bir veya birkaç doku kesiti yerine tüm numuneyi taradığı için histolojik incelemeden daha derinlemesine bir OA değişiklikleri değerlendirmesi sağlar18. Ayrıca, hem 2 hem de 3 boyutta kemik lezyonlarının kapsamının daha objektif ölçümlerini sağlar18. Araştırmacılar, histolojik OA değişikliklerini puanlarken, Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası histolojik değerlendirme kılavuzları10 gibi mevcut kılavuzlara başvurmalıdır. Araştırmacılar, OA gelişiminin derinlemesine karakterizasyonu için yürüyüş analizleri de dahil olmak üzere ek yardımcı testleri düşünmelidir34. Yürüme analizleri zaman içinde fonksiyonel değişiklikleri ortaya çıkarabilse de, OA lezyonları topallık başlamadan çok önce gelişir ve μBT'yi hastalığın erken evrelerinde OA ile ilişkili değişikliklerin daha hassas bir ölçüsü haline getirir.
Dunkin-Hartley kobayları, OA ilerlemesini ve yeni terapötiklerin etkilerini incelemek için sağlam bir model sağlarken, bu modelin sınırlamaları vardır. Spontan modeller tipik olarak, cerrahi veya kimyasal olarak indüklenen OA35'i takiben değişikliklerin hızlı gelişimine kıyasla daha uzun bir çalışma süresi gerektirir. Bu, maliyetin ve çalışma süresinin artmasına neden olabilir. Daha önce açıklandığı gibi, OA'nın başlangıcı aynı yaştaki hayvanlar arasında farklılık gösterir ve bu da OA ile ilgili değişikliklerin seri olarak değerlendirilmesini gerektirebilir36. Bu varyasyona rağmen, araştırmacılar tüm Dunkin-Hartley kobaylarının 3 aydan başlayarak OA geliştirmesini, subkondral ve trabeküler kemikte değişiklikler göstermesini ve ardından hayvan10,19 yaşlandıkça ilerleyici OA değişiklikleri göstermesini bekleyebilirler. Araştırmacılar, her hayvanda bir uzuvya tedavi uygulayarak hayvanlar arası değişkenliğin etkisini azaltabilir ve karşı uzvun bir iç kontrol görevi görmesine izin verebilir. Sunulan metodolojinin kapsamı dışında olmasına rağmen, ultrason kılavuzluğunda enjeksiyonlar, enjeksiyon doğruluğunu daha da iyileştirmeye yardımcı olabilir ve kobaylarda kullanılmıştır37. Burada önerilen çalışma, bu alanda yaygın olarak kullanılan bir teknik olan bu görüntüleme yöntemini kullanmadan palpasyon kılavuzluğunda enjeksiyonun fizibilitesini açıklamaktadır37. μCT, patolojiyi ve kemik yapısını analiz etmek için güçlü bir araç olsa da, kapsamlı analitik özellikleri destekleyen yazılımların mevcudiyeti, analizlerde kullanıcılar arası değişkenliğe neden olabilir38. Bu çalışmada, μCT tarama yatağının çapı 6.35 cm idi ve bu nedenle tüm kobay veya eklemin yerinde görüntülenmesi engellendi. Tüm hayvan görüntülemeyi kolaylaştırabilecek daha büyük yatak ataşmanları ticari olarak mevcuttur. Yazılım genellikle kullanıcı dostu olmasına ve önerilen birkaç ayar sunmasına rağmen, daha yüksek çözünürlük ve doğruluk için ayarları manuel olarak düzenlemek faydalı olabilir. Makine öğrenimi de dahil olmak üzere otomatik teknikler gelişmeye devam ettikçe, bu manuel ayarlamalar, standardizasyonu geliştirmek için yeni, otomatik yazılım teknikleriyle değiştirilebilir39. Sunulan el yazması, kullanılan μCT ve ilgili yazılım için adım adım talimatları açıklarken, aynı analizler diğer markalar ve yazılımlarla da gerçekleştirilebilir; Araştırmacılar, farklı makineler ve/veya yazılımlar kullanırken görüntü analizlerini optimize etmek ve standartlaştırmak için ilgili kullanım kılavuzlarına başvurmalıdır. Değişkenliği azaltmak için, tüm numunelerde aynı ayarların korunması önemlidir. Görüntü analizlerinin öznelliği, birden fazla, kör deneyci tarafından yapılan analizlerin tekrarlanmasıyla daha da azaltılabilir.
Bu protokolün birincil amacı, kobaylarda teknik olarak zorlu bir prosedürün gerçekleştirilmesi ve ilişkili OA değişikliklerinin müteakip μCT analizleri hakkında ayrıntılı rehberlik sağlamaktır. Teknik ve veri analizlerinin standardizasyonu, maliyetin en aza indirilmesine ve verimliliğin artırılmasına yardımcı olacaktır.

Osteoartrit (OA) 32,5 milyon ABD'li yetişkini etkilemektedir. Eklem kıkırdağının ilerleyici kaybı, eklem içindeki ve çevresindeki dokuların hafif iltihaplanması, osteofit ve kemik kistlerinin oluşumu ile oluşur 1,2. Semptomlar tipik olarak hastalığın sonraki aşamalarında ortaya çıkar ve mevcut tedaviler sadece palyatif rahatlama sağlamanın yanı sıra sistemik yan etkilere sahiptir. Hastalık modifiye edici ilaçların eksikliği, hastalığın altında yatan mekanizmaların yeterince anlaşılmamasından kaynaklanmaktadır3. Sonuç olarak, OA'yı tedavi etmek için geliştirilmiş ajanlara yönelik kritik ve devam eden bir tıbbi ihtiyaç vardır.
Hastalık süreçlerinin farklı bileşenlerini inceleyen çeşitli OA hayvan modelleri mevcuttur4. Ön çapraz bağın transeksiyonu ve medial menisküsün destabilizasyonu dahil olmak üzere çeşitli cerrahi modeller mevcut olsa da, bunlar invazivdir ve yüksek düzeyde teknik beceri gerektirir5. Kimyasal olarak indüklenen modeller, tipik olarak OA ağrı mekanizmalarını incelemek için kullanılan nispeten daha az invaziv prosedürlerdir6. Bu tür yaygın olarak kullanılan bir fare modeli, eklem içi diz içi monosodyum iyodoasetat (MIA) enjeksiyonu ile OA indüksiyonunu içerir. Bu model, MIA dozu7 değiştirilerek derecelendirilebilen tekrarlanabilir, sağlam ve hızlı ağrı benzeri bir fenotip üretir. Bu modelin indüklenmesine ilişkin teknik detaylar daha önce açıklanmıştır7. Bu tekniğin kobay gibi daha büyük kemirgenlere çevrilmesi, anatomik farklılıkları nedeniyle zordur. Bazı farklılıklar arasında, farelerde görülen distal füzyona kıyasla kobayda bitişik kemikleri ve eklem boşluğunu çevreleyen artmış kas sistemi ve eklemli bir fibula ve tibia bulunur8. Yaygın olarak bulunan bir kobay türü olan Dunkin-Hartley kobayları, bu hastalığı doğal olarak geliştirdikleri için yerleşik bir OA hayvan modelidir ve bu nedenle eklem içi enjeksiyonla uygulanan yeni terapötiklerin hastalığın ilerlemesi üzerindeki etkilerini araştırmak için sağlam bir model sunar9. Dunkin-Hartley kobayları üç ayda OA geliştirmeye başlar, erkekler hızlandırılmış bir gelişim ve daha şiddetli fenotip10 gösterir. Gine domuzlarında, OA yaşla birlikte ilerler ve 12 ayda, ilişkili patoloji görüntülemedebelirgindir 11. Dunkin-Hartley modeli gibi spontan OA modelleri, OA'yı indüklemek için herhangi bir müdahale gerektirmez ve böylece insanlarda hastalık fenotipinin gelişimini ve ilerlemesini özetler, böylece güçlü bir translasyonel modelsağlar 10. Ayrıca, OA'nın spontan gelişimi, yeni terapötikler belirli bir hayvanın tek bir dizinde tek taraflı olarak uygulandığında iç kontrole izin verir. Bu dahili kontrol, verileri analiz ederken hayvanlar arası değişkenliklerin etkilerini en aza indirir ve genel hayvan sayısını azaltmaya yardımcı olabilir. 
X-ışını Mikro Bilgisayarlı Tomografi (μBT) analizi, OA şiddeti12'nin kantitatif değerlendirmesine olanak tanıyan güçlü bir araçtır. μCT, dönen bir numuneden veya dönen bir X-ışını kaynağından ve dedektörden elde edilen çoklu, yüksek çözünürlüklü X-ışını görüntülerinin taranmasını içerir13. Daha sonra, üç boyutlu (3D) hacimsel veriler, yığılmış görüntü dilimleri14 şeklinde yeniden yapılandırılır. Mineralize kemik μCT'de mükemmel kontrasta sahip olduğundan, bu modalite 3D özellikleri değerlendirmek ve OA15,16,17 ile ilişkili değişikliklerin kantitatif analizlerini yapmak için kullanılabilir. μCT, histopatoloji ve yürüme analizleri dahil olmak üzere daha yaygın olarak kullanılan araçlara göre çeşitli avantajlar sunar. Dokuların bir veya birkaç bölümünün histolojik değerlendirmesinin aksine, μBT tüm eklemi tarar ve OA lezyonlarının daha bütünsel bir değerlendirmesini sunar18. Yürüme analizi, zaman içinde eklem fonksiyonundaki semptomatik değişiklikleri ayırt edebilirken, eklem değişiklikleri OA ile ilişkili fonksiyonel değişikliklerden çok önce gelişir. μCT, topallık başlamadan önce OA gelişiminin daha hassas bir ölçümünü sağlayabilir. Özellikle ilgili iki kantitatif ölçüm, her ikisi de OA 19,20'nin ilerlemesi boyunca arttığı için kemik mineral yoğunluğu ve trabeküler kalınlığı içerir. Daha sağlam ölçümler ve karşılaştırmalar elde etmek için analizi, farklı özelliklere sahip oldukları için subkondral plaka ve trabeküler kemiğe bölmek yardımcı olabilir.
Bu yöntemin genel amacı, araştırmacıların kobaylar üzerinde eklem içi enjeksiyonları başarılı bir şekilde gerçekleştirmelerine yardımcı olmaktır. Sunulan protokolde beş (n=2), dokuz (n=1) ve 12 (n=2) aylık bozulmamış, erkek Dunkin-Hartley kobayları; Prosedürler, eklem içi diz enjeksiyonları gerektiren diğer kobay suşlarına ve yaşlarına göre tahmin edilebilir. Dunkin-Hartley modeli gibi spontan OA modellerinde, hastalığın ilerlemesi ve seri tedaviye yanıt genellikle haftalar ila aylar arasında değişen uzun süreler boyunca izlenir9. Bu genişletilmiş protokol, birden fazla eklem içi enjeksiyonla sonuçlanır ve bu nedenle, ağrı, topallık veya enfeksiyonlar dahil olmak üzere advers olayları önlemek için uygun enjeksiyon tekniğine sahip olmak önemlidir, bunların tümü hayvan refahını etkileyebilir ve çalışma sonuçlarını karıştırırken ek hayvanlar gerektirir. Sunulan protokol, kobaylarda eklem içi enjeksiyonların metodolojisini ve ardından μCT verilerinin analizini açıklamaktadır.

<table><tbody><tr><td>200 Korumalı Etanol</td><td>Decon Laboratuvarları</td><td>2701</td><td>sterilizasyon maddesi</td></tr><tr><td>3D. SUITE yazılımı</td><td>Bruker</td><td></td> <td>& mu; -CT analiz yazılımı</td></tr><tr><td>Betadine Surgical Scrub</td><td>Avrio Health</td><td>67618-151-16</td><td>sterilizasyon ajanı</td></tr><tr><td>İğneli insülin şırıngası</td><td>Enjeksiyonları gerçekleştirmek için</td><td>Ulticare</td><td>91008</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal</td><td>803249</td><td>anestezi hayvanı</td></tr><tr><td>Nötr Tamponlu Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-427098</td><td>Doku</td></tr><tr><td>Nrecon Yazılımı</td><td>Bruker</td><td></td> <td>& mu; -CT rekonstrüksiyon yazılımı</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Cytiva</td><td>SH30258.01</td><td>kontrol ve seyreltme ajanı</td></tr><tr><td>SkyScan 1176</td><td>Bruker</td><td></td><td>örnekleri taramak için&nbsp;</td></tr></tbody></table>

yaşlı dunkin-hartley guinea domuzlarında eklem İçi enjeksiyon sonrası dizin mikro bilgisayarlı tomografi analizi

Micro-Computed Tomography Analysis of the Knee in Aged Dunkin-Hartley Guinea Pigs after Intra Articular Injection

Bu protokolün amacı, kobaylarda palpasyon kılavuzluğunda eklem içi diz enjeksiyonu tekniğinin uygulanmasında ve mikro bilgisayarlı tomografi kullanılarak değerlendirmede araştırmacılara rehberlik etmektir. Dunkin-Hartley kobayları, dizlerinde kendiliğinden osteoartrit geliştirdikleri için osteoartrit araştırmaları için sağlam modellerdir. Eklem içi ilaç dağıtımı, araştırma amaçlı bir ilacın in vivo etkilerini incelemek için yaygın bir yöntemdir. İnsanlarda, eklem içi enjeksiyon yoluyla uygulanan terapötik ajanlar ağrıyı hafifletebilir ve osteoartritin daha da ilerlemesini geciktirebilir. Herhangi bir türde olduğu gibi, bir iğnenin bir eklem boşluğuna sokulması, ağrı, topallık veya enfeksiyonla sonuçlanabilecek yaralanmaya neden olma potansiyeline sahiptir. Bu tür advers olaylar hayvan refahını tehlikeye atabilir, çalışma sonuçlarını karıştırabilir ve çalışma hedeflerine ulaşmak için ek hayvanlar gerektirebilir. Bu nedenle, özellikle çoklu, tekrarlanan eklem içi enjeksiyonlar gerektiren uzunlamasına çalışmalarda komplikasyonları önlemek için uygun enjeksiyon tekniklerinin geliştirilmesi zorunludur. Sunulan metodoloji kullanılarak, beş kobay genel anestezi altında bilateral diz enjeksiyonları yapıldı. Enjeksiyondan yedi gün sonra, osteoartrit şiddetinin analizi için hayvanlara insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı. Anestezi veya diz enjeksiyonlarını takiben topallama, ağrı veya enfeksiyon dahil olmak üzere hiçbir olumsuz olay meydana gelmedi. Dizin X-ışını mikro bilgisayarlı tomografi analizi, osteoartrit ile ilişkili patolojik değişiklikleri tespit edebilir. Mikro bilgisayarlı tomografi verileri, yaşla birlikte artan kemik mineral yoğunluğu ve trabeküler kalınlık ile gösterildiği gibi, osteoartritin yaşlı hayvanlarda daha şiddetli olduğunu göstermektedir. Bu sonuçlar, aynı hayvanlarda artrit şiddetini değerlendirmek için yerleşik ve yaygın olarak kullanılan bir puanlama sistemi olan histolojik değişiklikler ve Modifiye Mankin skorları ile tutarlıdır. Bu protokol, kobaylarda eklem içi enjeksiyonları rafine etmek için kullanılabilir.

Canlı hayvanlara eklem içi enjeksiyonlar yapılmadan önce, doğru enjeksiyon yerini sağlamak için yukarıdaki protokol üç sıçan kadavrası üzerinde uygulandı. Uygulama seansları sırasında, yukarıda açıklanan metodoloji kullanılarak her iki diz eklemine 50 μL p yeni metilen mavisi boya enjekte edildi. Bu, altı uygulama enjeksiyonuna eşittir. Enjeksiyonlardan sonra diz eklemi, eklem boşluğunun kraniyal yönünden, patellanın distalinden ve patellar ligament yoluyla kesilerek eklem boşluğunu görselleştirmek ve boya birikiminin yerini doğrulamak için diseke edildi. Yeni metilen mavisi boyası parlak mavi bir çözelti olduğundan, boya birikiminin yeri büyük ölçüde görselleştirilebilir. Kadavra enjeksiyonlarından elde edilen temsili görüntüler Şekil 1'de yer almaktadır. Şekil 1A, enjeksiyon işleminin doğru yerinin ve tekniğinin göstergesi olan eklem boşluğu içinde boyanın varlığını göstermektedir. Bu uygulama seansları sırasında diz eklemi altı denemenin hepsinde başarılı bir şekilde enjekte edildi (% 100 başarı oranı). Gösterim amacıyla, yanlış enjeksiyon yeri örnekleri Şekil 1B-C'de yer almaktadır. Enjeksiyon deri altı boşluğuna uygulanırsa, Şekil 1B'de görüldüğü gibi cilt altında bir kanamaya neden olan sıvı birikecektir. Eklem boşluğuna enjekte edilmezse, Şekil 1C'de görüldüğü gibi diz eklemi içinde boya bulunmayacaktır.
5 kobayın her birine, enjeksiyonun fizibilitesini ve yaşa bağlı OA değişikliklerinin müteakip μCT analizlerini sağlamak için bir pilot deneyin parçası olarak 1x fosfat tamponlu salin ile tek bir bilateral diz enjeksiyon prosedürü uygulandı. Hayvanlar, genel sağlık ve advers olaylar açısından prosedürü takiben günde en az bir kez görsel olarak değerlendirildi. Bu hayvanların hiçbiri (% 0) ağrı, topallık veya enfeksiyon dahil olmak üzere enjeksiyonla ilişkili advers olaylar yaşamamıştır. Enjeksiyondan yedi gün sonra, hayvanlar cerrahi bir anestezi düzlemine yerleştirildi ve diz hasadı ve müteakip μCT analizleri için insancıl bir şekilde ötenazi yapıldı.
Daha önce yayınlandığı gibi, μCT analizi, zaman içinde OA şiddeti ile ilişkili kantitatif değişiklikleri ölçme yeteneği de dahil olmak üzere, kobaylarda diz değişikliklerini değerlendirmek için kullanılabilir22,23. Sunulan çalışmada, farklı yaşlardaki kobaylarda OA değişikliklerini doğrulamak için μCT kullanıldı. Bu sonuçlar, OA ilerlemesini geciktirmeyi amaçlayan yeni tedavileri değerlendiren gelecekteki çalışmalar için temel veri olarak kullanılabilir. Yukarıda açıklanan metodoloji, gelecekteki çalışmalarda μCT analizlerinin standardizasyonuna izin verecektir. Subkondral plak (Şekil 2A) ve trabeküler kemik (Şekil 2B) büyük ölçüde farklı kemik özelliklerine sahiptir. Bu nedenle, enjeksiyondan bir hafta sonra daha sağlam bir sonuç elde etmek için bu bölgeler ayrı ayrı analiz edilir.
Kemik mineral yoğunluğu (KMY) 12 aylık kobaylarda 5 ve 9 aylık kobaylara göre daha fazladır (Şekil 3). Ortalama subkondral plaka KMY'si 12, 9 ve 5 aylık kobaylarda sırasıyla 0.898 g/cm3, 0.952 g/cm3 ve 0.588 g/cm3 idi. Bu, 12 aylık kobaylar için 5 aylık olana kıyasla subkondral KMY'de 1.53 kat artış olduğunu göstermektedir. Ortalama trabeküler kemik KMY'si 12, 9 ve 5 aylık kobaylarda sırasıyla 0.825 g/cm3, 0.839 g/cm3, 0.427 g/cm3 idi. Bu, 12 aylık kobaylar için 5 aylık olana kıyasla trabeküler KMY'de 1.93 kat artışı temsil etmektedir. Genel olarak, Dunkin-Hartley kobaylarında 5 aylıktan 12 aya kadar yaşlandıkça BMD artar (Şekil 3).
Çeşitli yaşlardaki kobaylar arasında trabeküler kalınlık açısından da farklılıklar vardı (Şekil 4). Ortalama trabeküler kalınlık için, 12 aylık (0.558 mm) için 9 aylık (0.403 mm) ile karşılaştırıldığında 1.38 kat, 12 aylık (0.558 mm) 5 aylık (0.225 mm) kobaylara kıyasla 2.48 kat artış vardır. Bu nedenle, Dunkin-Hartley kobaylarında trabeküler kalınlığın ortalaması 5 ila 12 ay arasında yaşlandıkça artar.
Histolojik değişiklikler ve 2D'deki OA değişikliklerini değerlendirmek için doğrulanmış ve yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım olan Modifiye Makin skorları μBT bulgularını desteklemektedir (Şekil 5). Modifiye Mankin skorları kobayların yaşlanmasıyla artmıştır (Şekil 5A). Histolojik olarak, proteoglikan kaybı, hiposelülarite ve fissürler dahil olmak üzere OA belirtileri, kobaylar 5 ila 12 aylıkken yaşlandıkça prevalansı artar (Şekil 5B-D).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66053/66053fig01.jpg"> Şekil 1: Doğru ve yanlış enjeksiyon yerlerinin temsili görüntüleri. (A) Eklem boşluğunda yeni metilen mavisi boyası varlığı ile disseke sıçan dizi. Referans için dizin soluna dahil edilen ölçek. (B) Sığ bir enjeksiyon gösteren diz, deri altı boşlukta bir kabarcık oluşumuna neden olur. (C) Panel B'den diz diseke edildi, bu da eklem boşluğunda yeni metilen mavisi boyası eksikliğini doğruluyor. Referans için dizin sağına ölçek dahildir. Tüm görüntülerde, kafatası görüntünün üst kısmında, kaudal ise alt kısımdadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66053/66053fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66053/66053fig02.jpg"> Şekil 2: Trabeküler kemik ölçüm alanlarına karşı subkondral plak için segmentasyon. Subkondral plak, trabeküler kemikten farklı özelliklere sahiptir. Bu bölgelerin ayrı ayrı analiz edilmesi, AE ilerlemesi boyunca farklı bölgeler arasında karşılaştırmalar yapılmasına olanak tanır. Bölge A (kırmızı), analiz için kullanılan subkondral plaka segmentinin bölgesi için koronal görünümü gösterir. Bölge B (yeşil), analiz için kullanılan trabeküler kemik segmenti için koronal görünümü gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66053/66053fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66053/66053fig03.jpg"> Şekil 3: Yaşlanan Dunkin-Hartley kobaylarında Kemik Mineral Yoğunluğundaki Değişiklikler. Kemik mineral yoğunluğu (KMY) kobaylarda 5 (n=2), 9 (n=1) ve 12 (n=2) aylıkken değerlendirildi. İki farklı ölçüm için subkondral plaktan ve trabeküler kemikten ölçümler alındı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66053/66053fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66053/66053fig04.jpg"> Şekil 4: Yaşlanan Dunkin-Hartley kobaylarında trabeküler kalınlıktaki değişiklikler. Trabeküler kalınlık ölçümleri 5 (n=2), 9 (n=1) ve 12 (n=2) aylık kobaylardan alındı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66053/66053fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66053/66053fig05.jpg"> Şekil 5: Dunkin-Hartley kobaylarında OA değişikliklerinin histolojik analizi. (A) 5- (n=2), 9- (n=1) ve 12- (n=2) aylık kobaylardan alınan histolojik örnekler için modifiye Mankin skorları. Modifiye Mankin skoru, kıkırdak yapısı, hücresellik, gelgit işareti ve osteofit oluşumunun bireysel skorları bir araya getirilerek hesaplandı. (B) 5 aylık bir kobaydan alınan toluidin mavisi ile boyanmış temsili histoloji görüntüsü. (C) 9 aylık bir kobaydan alınan toluidin mavisi ile boyanmış temsili histoloji görüntüsü. Siyah *= proteoglikan kaybı. D. 12 aylık bir kobaydan alınan toluidin mavisi ile boyanmış temsili histoloji görüntüsü. siyah *= çatlaklar; beyaz *= hiposelülarite. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66053/66053fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Dunkin-Hartley kobayları, osteoartrit araştırmaları için yerleşik bir hayvan modelidir. Bu tür çalışmalar, yeni ajanların araştırılması veya hastalıkların tedavisi de dahil olmak üzere çeşitli nedenlerle eklem içi enjeksiyonlardan fayda sağlayabilir. Gine domuzlarında eklem içi diz enjeksiyonları için bir metodoloji ve ardından artrit ile ilişkili diz değişikliklerini değerlendiren mikro bilgisayarlı tomografi analizi hakkında bir metodoloji açıklıyoruz.

Yaşlı Dunkin-Hartley Guinea Domuzlarında Eklem İçi Enjeksiyon Sonrası Dizin Mikro Bilgisayarlı Tomografi Analizi

The purpose of this protocol is to guide researchers in performing a palpation-guided technique of intra-articular knee injection in guinea pigs and ...

Osteoartrit veya OA, 32,5 milyon ABD'li yetişkini etkileyen dejeneratif bir eklem hastalığıdır. Genellikle, OA semptomları sadece hastalık şiddetli hale geldikten sonra ortaya çıkar. Hastalık modifiye edici ilaçların eksikliği, hastalığı başlatan ve yönlendiren mekanizmaların yeterince anlaşılmamasından kaynaklanmaktadır.Sonuç olarak, OA tedavisi için geliştirilmiş ajanlara yönelik kritik ve devam eden bir tıbbi ihtiyaç vardır. Dunkin-Hartley kobayları, bu hastalığı doğal olarak geliştirdikleri için yerleşik bir OA hayvan modelidir ve eklem içi enjeksiyon yoluyla uygulanan yeni terapötiklerin hastalığın ilerlemesi üzerindeki etkilerini araştırmak için sağlam bir model sunar. Mineralize kemik, mikro-BT'de mükemmel kontrasta sahip olduğundan, bu modalite 3D özelliklerini değerlendirmek ve OA ile ilişkili değişikliklerin kantitatif analizlerini yapmak için kullanılabilir. Özellikle ilgili iki kantitatif ölçüm, her ikisi de hastalığın ilerlemesi boyunca arttığı için kemik mineral yoğunluğu ve trabeküler kalınlığı içerir. Gine domuzlarında eklem içi enjeksiyonların açıklanan metodolojisi ve ardından mikro-BT verilerinin analizi, çalışma değişkenliğini azaltmaya ve veri analizlerinin verimliliğini artırmaya yardımcı olacaktır.Dizinizi elektrikli tıraş bıçağıyla tıraş edin. Hayvanı uyuşturun ve ayak parmağı sıkışma tepkisi olmadan yeterli anestezi derinliğini doğrulayın. Kurumayı ve yaralanmayı önlemek için steril oküler kayganlaştırıcıyı her iki gözünüze de yerleştirin.Enjeksiyon bölgesini dairesel bir hareketle üç kez temizleyin ve seyreltilmiş ovma ve alkol solüsyonlarını kullanarak dönüşümlü olarak temizleyin. Steril eldiven kullanılmalıdır. Bu videoda otoklav nitro eldiven kullanımı yer almaktadır.İşlem boyunca aseptik teknik kullanılmalıdır. Dizinizi 90 dereceye kadar esnetin, arka ayağı esneterek ve uzatarak eklem boşluğunun distal yönünün oluğunu bulmak için parmağınızı patellaya distal olarak hareket ettirin. Tibia, patellanın distalindeki kemikli yapı olarak hissedilebilir.Tibia ve patellanın yeri belirlendikten sonra, eklem aralarındadır. İnsülin iğnesini eklem boşluğu içindeki patellanın distalindeki orta hatta dikkatlice yerleştirin. İğne cildin bir ila iki milimetre altına sokulmalıdır.Hacmi yavaşça enjekte edin. İlacın düzgün dağılımını sağlamak için eklemi birkaç kez esneterek ve uzatarak dizinize masaj yapın. Formalin içeren numuneleri uyumlu bir kaba koyun.Mikro CT makinesini üretici tavsiyelerine göre karanlık alan ve aydınlık alan maruziyetleri için kalibre edin. Numuneyi alüminyum bakır filtre ile 18 mikronda tarayın. Ofset kamera ile 360 derece için 0,7 derece döndürme adımını kullanın.Mikro-CT görüntülerinden bir kesit seçin. Yanlış hizalama telafisini kontrol edin. Ayarlar altında, yumuşatma, ışın sertleştirme, CS döndürme ve halka artefaktı uygulayın.Yeniden yapılandırmaya başlamak için Başlat'ı seçin. VOI'yi seçin ve daha sonra daha kolay analiz için örneği dikey olarak hizalayacak şekilde yönlendirin. Düzenlenen VOI'yi yeni bir klasör olarak kaydedin.Subkondral plakadan başlayarak analiz edilecek görüntü aralığını seçin. Trabeküler kemikte subkondral plakların analizinin bölünmesi, farklı kemik özelliklerine sahip oldukları için önerilir. Kemiği kapsadığından emin olmak için her görüntü için ilgilenilen bölgeyi seçin.İkili seçimi seçin. Histogramı, kemikteki arka plan tamamen ayrı olacak şekilde ayarlayın. Kemik mineral yoğunluğu sekmesini seçin.Bu verileri yeni bir analiz verileri klasörüne kaydedin. Özel işleme'yi seçin. İlk olarak, eşikleme gerçekleştirin ve Otomatik'i ve ardından çalıştır'ı seçin.Ardından Benek Kaldır'ı seçin ve Siyah benekleri kaldır'ı seçin. Benek Giderme işlemini tekrarlayın ve Beyaz benekleri kaldır'ı seçin. 3D analizi seçin ve temel değerleri ve ek değerleri seçin.A, eklem boşluğu içinde metilen mavisi boya bulunan disseke bir diz gösterir ve doğru enjeksiyonu gösterir. B, deri altı boşlukta bir kabarcık oluşumuna neden olan sığ bir enjeksiyondur. C, eklem boşluğunda metilen mavisi boyasının eksikliğini gösterir ve yanlış enjeksiyonu gösterir.A'da gösterilen subkondral plak ve B'de gösterilen trabeküler kemik için analizi ayırmak yardımcı olabilir, çünkü bazen farklı kemik analizi için farklı parametrelere sahiptirler. Kemik mineral yoğunluğu için, 12 aylık kobayların ortalamasında beş aylık kobaylara kıyasla bir artış olduğunu görüyoruz ve bu, trabeküler kemikte olduğu kadar subkondral plaka için de geçerlidir, bu da kemik mineral yoğunluğunun zamanla arttığını gösterir. Trabeküler kalınlığa ek olarak, 12 aylık kobay ile dokuz aylık kobay ve beş aylık kobay arasında milimetre cinsinden kalınlık artışı olduğunu görüyoruz ki bu da trabeküler kalınlığın zamanla arttığını gösteriyor.Şekil A'da görüldüğü gibi, kobaylar yaşlandıkça modifiye Mankin skorları artar. B beş aylık bir kobay, C dokuz aylık bir kobay ve D 12 aylık bir kobaydır. Şekil C'deki siyah yıldız proteoglikan kaybını gösterirken, şekil D'deki siyah yıldız işareti çatlakları ve şekil D'deki beyaz yıldız hiposelülariteyi göstermektedir.Şu anda şiddetli OA'nın tek tedavisi, maliyetli, invaziv olan ve hasta morbiditesi ve mortalitesi ile sonuçlanabilen replasmandır. Sonuç olarak, OA'nın hayvan modelleri ile araştırmaya devam etmek ve yeni terapötikler üzerinde sürekli gelişme sağlamak için ciddi bir ihtiyaç vardır. Eklem içi enjeksiyonlar kobay OA çalışmalarının ayrılmaz bir parçası olmasına rağmen, bu prosedür henüz sistematik olarak detaylandırılmamıştır.Uygun enjeksiyon prosedürleri, özellikle aylarca süren çoklu enjeksiyon gerektiren çalışmalar için, hayvan refahını sağlamak ve genel hayvan sayısını azaltmak için çok önemlidir. OA ile ilgili değişiklikleri sistematik olarak değerlendirmek için mikro-BT analizlerini açıklıyoruz. Mikro-BT, OA değişikliklerinin bir veya birkaç doku kesiti yerine tüm numunedeki taramaların histolojik incelemesinden daha derinlemesine bir değerlendirmesini sağlar.Dunkin-Hartley kobayları, OA ilerlemesini ve yeni terapötiklerin etkilerini incelemek için sağlam bir model sağlarken, bu modelin sınırlamaları vardır. Spontan modeller tipik olarak, cerrahi veya kimyasal olarak indüklenen OA'yı takiben değişikliklerin hızlı gelişimine kıyasla daha uzun bir çalışma süresi gerektirir. Ayrıca, araştırmacılar, her hayvanda bir uzuvya tedavi uygulayarak hayvanlar arası değişkenliğin etkisini azaltabilir ve kontralateral uzvun bir iç kontrol görevi görmesine izin verebilir.

micro-computed-tomography-analysis-knee-aged-dunkin-hartley-guinea

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz makrofaj MR görüntüleme sağlayan, septik artrit ultrasmall süperparamanyetik kontrast madde (USPIO) kullanarak gerçekleştirmek için nasıl göstermek bir ilk ve...

Septik Artrit Boyuna değerlendirilmesi için MR Hedefli Kontrast Ajan kullanarak in vivo Makrofaj Görüntüleme

Biz farelerde medial menisküs (DMM) modeli, osteoartrit (OA) araştırma için etkili bir araç istikrarı bozacak bir protokol açıklar. Buna ek olarak, progranulin OA patogenezinde koruyucu bir rol oynadığını gösteren, bu model kullanılarak progranulincan fahiş OA gelişimi ve ilerlemesinde bu eksikliği göstermiştir.

Osteoartrit Progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için Farelerde bir Cerrahi kaynaklı Modeli Kurulması

Bu metodoloji makalesi, murine osteoartrit diz eklemlerinde ve normal diz eklemlerinde histolojik subkondral kemik kalınlığını kontrol olarak ölçmek için yazılım destekli nicel ölçüm protokolü sürmektedir. Bu protokol ince kalınlaşmaya karşı oldukça hassastır ve erken osteoartrit subkondral kemik değişikliklerini tespit etmek için uygundur.

Osteoartrit Subkondral Kemik Kalınlığının Yazılım Destekli Nicel Ölçümü

Mevcut protokol, medial miniskotibial ligamenti keserek fare dizinin dengesini bozduktan sonra eklem kıkırdağının yüzeyindeki kontrollü mikrobıçak çiziklerini tanımlamaktadır. Bu hayvan modeli, osteofit oluşumunu, osteosklerozu ve erken evre ağrıyı incelemek için uygun hızlandırılmış bir osteoartrit (OA) formu sunar.

Hızlandırılmış Osteoartritin Medial Menisküs ve Kıkırdak Çizik Murin Modelinin Destabilizasyonu

Non-invaziv ÖÇB yaralanması, farelerde travma sonrası osteoartriti (PTOA) başlatmak için güvenilir ve klinik olarak anlamlı bir yöntemdir. Bu yaralanma yöntemi aynı zamanda, proteazla aktive edilebilen yakın kızılötesi problar ve floresan yansıma görüntüleme kullanılarak yaralanma sonrası erken zaman noktalarında eklemdeki proteaz aktivitesinin in vivo olarak ölçülmesine izin verir.

Non-İnvaziv Kompresyona Bağlı Ön Çapraz Bağ (ACL) Yaralanması ve Farelerde Proteaz Aktivitesinin İn vivo Görüntülenmesi

Burada, kemirgenlerde diz osteoartritini indüklemek için güvenilir bir model olarak ön çapraz bağı (ÖÇB) kesmek için cerrahi bir yöntem ve diz sinovyal sıvısının toplanması, diz ödeminin ölçülmesi ve osteoartrit şiddetinin değerlendirilmesi için metodolojiler açıklanmaktadır.

Eklem iltihabı ve travma sonrası osteoartriti incelemek için bir kemirgen modelinde ön çapraz bağ transeksiyonu ve sinovyal sıvı lavajı

Otomatik eklem alanı algılama iş akışının geliştirilmesi, vahşi tipli hayvanlarda farklı fare arka pence kemiklerinin yüksek verimli segmentasyonunu %&gt;98 doğrulukla mümkün kıldı. İltihap-erozivli artritli ön patiler ve patilere esnek uygulama sağlandı, ancak performans düşük olup, kamuya açık veriler kullanılarak gelecekteki çalışmalarda daha fazla optimizasyon yapılmasını gerektiriyor.

Otomatik Eklem Alanı Tespiti Kemik Segmentasyon Hassasiyetini Artırır

Koroner damarların görüntülenmesi kardiyovasküler hastalıkların bizim anlayışın geliştirilmesi için çok önemlidir. Burada mikro-Bilgisayarlı Tomografi (μCT) görüntüleme için hazırlık, bir radyoopak silikon kauçuk (Microfil) ile sıçan koroner damar perfüze için bir yöntem açıklanmaktadır.

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için hazırlık olarak retrograd perfüzyon ve Fare Koroner damarları doldurulması

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Yağ grefti, yumuşak doku açıklarının yeniden yapılandırılması için önemli bir tekniktir. Bununla birlikte, değişken greft sağkalımı ile karakterize öngörülemeyen bir prosedür olmaya devam etmektedir.  Amacımız, farklı yağ grefti hazırlama ve uygulama teknikleri arasındaki hacim tutulmasını karşılaştırmak için yeni bir görüntüleme yöntemi kullanan bir fare modeli tasarlamaktı.

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi ile Çıplak Fareler içine İnsan Yağ Enjeksiyonu Canlılığına Değerlendirilmesi

Öğrenin, Dunkin-Hartley guinea pig'lerde eklem içi enjeksiyon ve mikro-bilgisayarlı tomografi ile osteoartrit ilerlemesini analiz etme yöntemini. Bu teknik, tedavi değerlendirmesi için güvenilir veri sağlar.

Yaşlı Dunkin-Hartley Guinea Domuzlarında Eklem İçi Enjeksiyon Sonrası Dizin Mikro Bilgisayarlı Tomografi Analizi

Daha fazla video keşfet