Name: Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Öğrenin, domuz pankreasını cerrahi perfüzyonla izole ederek yüksek verimli adacık elde etme yöntemini. Bu protokol, ksenotransplantasyon araştırmaları için güvenilir adacık izolasyonu sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ile domuz adacıklarının saflaştırılması

<ol><li>Gillespie, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes%3A+pathogenesis+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22CMAJ%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes: pathogenesis and prevention.</a> CMAJ. 175 (2), 165-170 (2006).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nat Rev Endocrinol. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Anazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+of+porcine+pancreas+procurement+with+arterial+flush+and+ductal+injection+enhances+islet+isolation+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Improved method of porcine pancreas procurement with arterial flush and ductal injection enhances islet isolation outcome.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2032-2035 (2010).</li>
<li>Dufrane, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+favouring+successful+adult+pig+islet+isolations+for+xenotransplantation+in+pig-to-primate+models%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Parameters favouring successful adult pig islet isolations for xenotransplantation in pig-to-primate models.</a> Xenotransplantation. 13 (3), 204-214 (2006).</li>
<li>Hilling, D. E., Rijkelijkhuizen, J. K., Tons, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+islet+isolation+outcome+is+not+affected+by+the+amount+and+distribution+of+collagen+in+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Porcine islet isolation outcome is not affected by the amount and distribution of collagen in the pancreas.</a> Xenotransplantation. 17 (3), 250-255 (2010).</li>
<li>Lamb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maturation+of+viable+islets+from+partially+digested+young+pig+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">In vitro maturation of viable islets from partially digested young pig pancreas.</a> Cell Transplant. 23 (3), 263-272 (2014).</li>
<li>Otsuka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+with+a+neutrophil+elastase+inhibitor%2C+alvelestat%2C+contributes+to+improvement+of+porcine+islet+isolation+and+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation with a neutrophil elastase inhibitor, alvelestat, contributes to improvement of porcine islet isolation and transplantation.</a> J Clin Med. 11 (15), 4290(2022).</li>
<li>Vanderschelden, R., Sathialingam, M., Alexander, M., Lakey, J. R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+and+scalability+analysis+of+porcine+islet+isolation+for+islet+transplantation%3A+comparison+of+juvenile%2C+neonatal+and+adult+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Cost and scalability analysis of porcine islet isolation for islet transplantation: comparison of juvenile, neonatal and adult pigs.</a> Cell Transplant. 28 (7), 967-972 (2019).</li>
<li>Weegman, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+profiles+of+different+cooling+methods+in+porcine+pancreas+procurement%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Temperature profiles of different cooling methods in porcine pancreas procurement.</a> Xenotransplantation. 21 (6), 574-581 (2014).</li>
<li>Hart, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+an+adequate+perfusion+pressure+for+continuous+dual+vessel+hypothermic+machine+perfusion+of+the+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Determination of an adequate perfusion pressure for continuous dual vessel hypothermic machine perfusion of the rat liver.</a> Transpl Int. 20 (4), 343-352 (2007).</li>
<li>Tullius, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+crystal+deposits+in+abdominal+organs+following+perfusion+with+defrosted+University+of+Wisconsin+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Accumulation of crystal deposits in abdominal organs following perfusion with defrosted University of Wisconsin solutions.</a> Am J Transplant. 2 (7), 627-630 (2002).</li>
<li>Ching, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+for+isolation+of+viable+porcine+islet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">A reliable method for isolation of viable porcine islet cells.</a> Arch Surg. 136 (3), 276-279 (2001).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+pig+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Adult pig islet isolation.</a> J Vis Exp. (176), (2021).</li>
<li>Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+isolation+from+juvenile+porcine+pancreas+after+24-h+hypothermic+machine+perfusion+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation.</a> Cell Transplant. 19 (5), 613-628 (2010).</li>
<li>Iwanaga, Y., Sutherland, D. E., Harmon, J. V., Papas, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+for+pancreas+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation for pancreas and islet transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 13 (4), 445-451 (2008).</li>
<li>Pratschke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+death+and+its+influence+on+donor+organ+quality+and+outcome+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Brain death and its influence on donor organ quality and outcome after transplantation.</a> Transplantation. 67 (3), 343-348 (1999).</li>
<li>vander Windt, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+islet+damage+after+direct+exposure+of+pig+islets+to+blood%3A+has+humoral+immunity+been+underestimated%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early islet damage after direct exposure of pig islets to blood: has humoral immunity been underestimated.</a> Cell Transplant. 21 (8), 1791-1802 (2012).</li>
<li>Wright, M. J., Cavanagh, T. J., Fetterhoff, T. J., Wile, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blood+content+on+porcine+pancreatic+dissociation+and+islet+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of blood content on porcine pancreatic dissociation and islet yield.</a> Transplant Proc. 26 (6), 3442(1994).</li>
<li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+porcine+islets+of+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult porcine islets of Langerhans.</a> Cell Transplant. 9 (3), 297-305 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M NaOH, 100 mL</td><td>Millipore Sigma</td><td>1310-73-2</td><td></td></tr><tr><td>10x HBSS, 500 mL (15 ila 30 &derece; C)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>14065056</td><td></td></tr><tr><td>1x D-PBS, 500 mL</td><td>Thermo Fisher</td><td>14200075</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS, 1 L</td><td>Thermo Fisher</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>250 mL Konik Tüpler</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430236-6EA</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B [50 mg]</td><td></td><td></td> Antiseptik Povidon İyot PHR1662 <td></td></tr><tr>Milipore Sigma<td>%10</td> <td>Millipore Sigma</td><td>25655-41-8</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Gradyan Eski</td><td>BioRad</td><td>395</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür dihidrat</td><td>Thermo Fisher</td><td>10035-04-8</td><td></td></tr><tr><td>COBE Hücre İşlemcisi</td><td>Ebay</td><td>317690 & nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Çürütme devresi rezervuarı, Gibco şişesi, 1 L</td><td>Thermo Fisher</td><td>10341001</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsülfoksit (DMSO)</td><td>Thermo Fisher</td><td>85190</td><td></td></tr><tr><td>Dithizone</td><td>Thermo Fisher</td><td>60-10-6</td><td></td></tr><tr><td>Degrade Eski Bağlantı Kiti</td><td>BioRad</td><td>1652008</td><td></td></tr><tr><td>Heparin [1000 U/mL]</td><td>Acil Tıbbi Ürünler</td><td>0409-2720-01</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Tamponu (1 M), 100 mL</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini %25, 100 mL</td><td>Celprogen</td><td>HSA2001-25-1</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Covetrus</td><td>Ürün #: 11695067772</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Patterson</td><td>Ürün #: 07-894-8462</td><td></td></tr><tr><td>Liberaz (100 mg)</td> <td>Millipore Sigma</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>CANLI / ÖLÜ Canlılık / Sitotoksisite</td><td>Kiti Thermo Fisher</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Lenfolit 1.1 Medya 500 mL</td><td>Cedarlane Labs</td><td>CL5020</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex LS 16 Boru Masterfle</td><td></td><td>96419-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Peristaltik Pompa</td><td>Masterflex</td><td>07522-30</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep (2 mg / mL)</td> <td>Celprogen</td><td>PS-30-002</td><td></td></tr><tr><td>Pulmozim (1 mg / mL, 2.5 mL / flakon</td><td>Dornase Alfa</td><td>8931278</td><td></td></tr><tr><td>Geri Kazanım Ortamı, PIM (R)</td> <td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-R001GMP</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Millipore Sigma</td><td>R8758-1L</td><td></td></tr><tr><td>Standart Kültür Ortamı, PIM (S)</td> <td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-S001GMP</td><td></td></tr><tr><td>Tzed ve ticaret; (Tiletamin ve Zolazepam) Enjeksiyon C</td><td>Patterson</td><td>Ürün #:07-894-6240</td><td></td></tr><tr><td>Wisconsin Üniversitesi (UW) Çözümü, 3 L</td><td>Küresel Nakil Çözümleri</td><td>1000-0046-06</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Sigma Alderich</td><td>CLS6783-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Patterson</td><td>Ürün #:07-891-6165</td><td></td></tr></tbody></table>

adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu

Surgical Perfusion and Isolation of the Porcine Pancreas for Islet Isolation

Ameliyat düzeneği ve orta hat laparotomisi Şekil 1'de gösterilmiştir. Laparotomi insizyonu, ürogenital açıklığı önlemek için kavisli olmalıdır (Şekil 1B). Ekartörü kurarken, Omni veya Bookwalter ekartör direğini masanın sol, alt köşesine takın. İdeal retraksiyonda sağ karın duvarı için iki, sol karın duvarı için iki ve steril bir havluya sarılmış sağ kolon ve ince barsak için 1-2 ekartör bıçağı bulunur (Şekil 1C). Gövde duvarı, splanknik veya dövülebilir ekartör bıçakları, bir asistanın mevcudiyetine ve operatör tercihine bağlı olarak kullanılabilir. Bir Omni veya Bookwalter ekartörü mevcut değilse, her iki taraftaki karın duvarını geri çekmek için 1-2 adet kendinden tutucu Balfour ekartörü kullanılabilir. Bir asistan daha sonra steril bir havluya sarılmış sağ kolon ve ince bağırsağa geri çekilme uygulayabilir.
Şekil 2'de yapılan retroperitoneal diseksiyon künt ve keskin diseksiyon karışımı ile yapılabilir. İnfrarenal IVC ve aortun çevresel kontrolünü sağlamak önemli olmakla birlikte, bu diseksiyonun bifurkasyona kadar devam etmesine gerek yoktur. Prosedürün intratorasik kısmı teknik olarak en zor olanıdır (Şekil 3), çünkü intratorasik veya retrohepatik IVC'nin yaralanması önemli kanamaya neden olabilir ve ameliyat alanını gizleyebilir. İnen torasik aortu tanımlarken, baş parmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak aortu yemek borusundan açıkça ayırın. Küçük interkostal arterlerin avülsiyonunu ve müteakip kanamayı önlemek için, inen torasik aort, bir aort klempini barındırmak için açıkça tanımlanmış bir boşlukla erişilebilir olduğu sürece çevresel kontrol gerekli değildir.
İnfrarenal aort kanülasyonu Seldinger tekniği kullanılarak gerçekleştirilir (Şekil 4). Bu, infrarenal aort proksimal ve distal klemplenerek (Şekil 4A) veya doğrudan klempleme olmadan yapılabilir. İğneyi aortun arka duvarından geçirmemeye dikkat edin. Aort yeterli büyüklükte ise daha büyük bir kılıf da kullanılabilir. IV uzatma borusundan havayı boşaltmak ve IV borusunu UW solüsyonundan 10Fr kılıfa steril bir şekilde bağlamak önemlidir. IV kanalının açık olduğundan emin olun, ancak aort klemplenene kadar akış başlamayacaktır (Şekil 4B). Böbrek altı IVC'de venotomi yapılırken, birincil cerrahın Venotomi bölgesini kaybetmemek ve ameliyat alanına büyük bir kan hacminin dökülmesini önlemek için DeBakey forseps kullanarak IVC'yi güvenli bir şekilde kavraması önemlidir. Pankreastan uzakta bir venotomi, havuz aspirasyonunun hızlı bir şekilde yerleştirilmesiyle birlikte, pankreatektomi için berrak doku düzlemleri ile kansız bir ameliyat alanı sağlar (Şekil 4C). İlk drenaj koyu venöz kan olacaktır, ancak domuz kan kaybedildiğinde ve UW çözeltisi iç organlardan perfüze edildiğinde bu hafifleyecektir. Prosedürün bu kısmı için büyük bir emme kabı kullandığınızdan emin olun.
İç organlar ve özellikle pankreas, UW çözeltisi perfüze edildikçe giderek daha soluklaşacaktır (Şekil 5A). Pankreas kanalı, duodenum lobunun duodenuma doğru seyrini takip ederek tanımlanabilir. Enterik içerikli kontaminasyonu önlemek için kanal iki ipek bağ arasında bölünmelidir (Şekil 5B). Pankreas parankiminin solgun ve kansız görünmesi gerekirken, pankreası çevreleyen kalan bağ dokusu adacık izolasyonundan önce temizlenmelidir (Şekil 5C).
Hasat edilen pankreas daha sonra çok aşamalı bir adacık izolasyonu ve saflaştırma işlemine tabi tutulabilir (Şekil 6). Şekil 7A , adacık izolasyonu ve saflaştırma işleminden sonra temsili adacık boyutu dağılımını göstermektedir. Şekil 7B , parlak alan mikroskobu kullanılarak saflaştırılmış adacıkları ve canlı/ölü boyamadan sonra, sırasıyla canlı ve cansız adacık hücrelerini temsil eden yeşil ve kırmızı boyamayı göstermektedir. Adacık verimi ve saflığı, bir adacık hücresi sayacı kullanılarak değerlendirilebilir. Temsili verimler, üç bağımsız domuz pankreas izolasyonundan sağlanır ve Şekil 7C'de özetlenmiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig01.jpg"> Şekil 1: Operatif kurulum. (A) Domuz, karın steril olarak hazırlanmış olarak sırtüstü pozisyonda konumlandırılmış; (B) Ksifoidden pubise yapılan orta hat laparotomi; (C) Omni ekartör yerinde iken açığa çıkan retroperiton. Ölçek çubukları = 2 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig02.jpg"> Şekil 2: Retroperitoneal diseksiyon. (A) İnfrarenal IVC ve renal venlerin çevresel kontrolü ile tamamlanan retroperitoneum diseksiyonu. Sarı dikdörtgen Şekil 2B'de büyütülmüştür; (B) Kızılötesi IVC ve renal venlerin büyütülmüş görüntüsü; (C) Böbrek damarları bağlanmış. Ölçek çubukları = 2 cm. Kısaltma: IVC = inferior vena kava. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig03.jpg"> Şekil 3: Supraselyak kontrolünün elde edilmesi. (A) Sağ hemidiyafram insizi. Sarı kare Şekil 3B'de büyütülmüştür; (B) İntratorasik IVC ve inen torasik aortu ortaya çıkarmak için sağ hemidiyafram insizyonunun uzatılması; (C) Elde edilen intratorasik IVC'nin çevresel kontrolü. Ölçek çubukları = 2 cm. Kısaltma: IVC = inferior vena kava. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig04.jpg"> Şekil 4: İnfrarenal aort kanülasyonu, viseral izolasyon ve perfüzyon. (A) İnfrarenal aortun proksimal ve distal kontrolü elde edildi; (B) Seldinger tekniği ile infrarenal aorta yerleştirilen 10Fr kılıf; (C) İnfrarenal IVC'de infrarenal aort kılıfı yoluyla viseral perfüzyon ve venotomi ve havuz emici yoluyla drenaj. Ölçek çubukları = 2 cm. Kısaltma: IVC = inferior vena kava. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig05.jpg"> Şekil 5: Total pankreatektomi. (A) Perfüzyon sırasında iç organların soluklaşması; (B) izole edilmiş pankreas kanalı; (C) Ekilen domuz pankreası. Ölçek çubukları = 2 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig06.jpg"> Şekil 6: Adacık izolasyonu ve saflaştırılması. Enzim çözeltisinin infüzyonu, domuz pankreasının sindirimi, doku toplama, Hücre İşlemcisi ile hücre yıkama ve hücre kültürü ve analizinin şematik gösterimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig07.jpg"> Şekil 7: Saflaştırmadan sonra temsili adacık canlılığı ve verimi. (A) Büyütülmüş parlak alan görüntüleme ve canlı/ölü boyamadan sonra domuz adacıkları. Yeşil, canlı hücreleri gösterir; Kırmızı, ölü hücreleri gösterir. Ölçek çubukları = 100μm (B) Saflaştırmayı takiben domuz adacık boyutunun histogram dağılımı. (C) Üç domuz pankreas adacık izolasyonundan adacık saflığını ve verimini gösteren tablo. Kısaltma: IEQ = adacık eşdeğeri, adacık nicelemesi için standart birim. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu

Pancreatic islet transplantation is an emerging treatment for type I diabetes; however, it is limited by donor matching and availability. Porcine islet ...

surgical-perfusion-isolation-porcine-pancreas-for-islet

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

, Yüksek kalite ve insan adacıklar uygun miktarda sağlamak başarılı bir adacık nakli için önemli önkoşullar biridir. Bu video, adım adım tarif insan pankreas adacık izolasyonu için prosedürler: değiştirilmiş bir otomatik yöntemi kullanılarak (bölüm I sindirim ve pankreas dokusu toplanması).

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm I: Sindirim ve Pankreas Doku Koleksiyon

Araştırma için tip 2 diyabetik adacık kaynağı yetersiz. Burada kısmi pankreatektomi geçiren hastalardan izole adacıklar için protokol paylaşın. Bu yaklaşım, tip 2 diyabetik adacıklar elde etmek için eşsiz bir mekan temsil eder ve temel ve klinik çalışmalar için yeterli sayıda non-diyabetik hastalarda klinik olarak uyumlu.

Kısmen Pancreatectomized hastalar İnsan Islets izolasyonu

Langerhans Adacıkları olarak da adlandırılan pankreas adacıkları, glikoz regülasyonu ve diğer önemli biyolojik işlevler için hormonlar üreten bir endokrin hücre kümesidir. Bu protokol, ekzokrin pankreas dokusunu sindirmek için önce Ampulla of Vater yoluyla kollajenaz perfüze ederek pankreas adacıklarını izole etmek için bir yöntemi ve adacıkları farelerden saflaştırmak için basitleştirilmiş bir yoğunluk gradyan santrifüjünü açıklar.

Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

Neonatal farelerden sağlam adacıklar izole edilmesi için bu tarifnamede, bir protokol açıklar. Pancreata kısmen yıkama ve elle toplama ile, ardından kollajenaz ile sindirilir. 20-80 adacık kümeleri birkaç adacık çalışmalar için uygun yeni doğan farelerin, gelen pankreas başına elde edilebilir.

Yenidoğan Fare Pankreas gelen Fonksiyonel Adacık etkili İzolasyonu

Bu adacık izolasyon protokolü ekroz dokuyu sindirmek için kollajenaz enjeksiyonunun yeni bir rotasını ve adacıkları farelerden arındırmak için basitleştirilmiş bir degrade prosedürünü tanımlamıştır. Enzimatik sindirim, degrade ayırma/arıtma ve adacık el toplama içerir. Başarılı yalıtım fare başına 250-350 yüksek kaliteli ve tam işlevsel adacıklar verebilir.

Farelerden Pankreas Adacık İzolasyon için Basit Bir Yüksek Verimlilik Protokolü

Doku mühendisliği tüm pankreasın ekzokrin ve endokrin fonksiyonları nedeniyle bir mücadeledir. Biz sağlam bir domuz pankreas ve deterjanlar Triton X-100 perfüzyon tarafından başarılı decellularization sürecinin, sodyum deoxycholate ve deoksiribonükleaz diseksiyon için bir yöntemi gösterir.

Yalıtım ve bütün domuz pankreas Decellularization

Video makalesi, domuz 3 günlük sağkalım modelinde pankreatektomi ve pankreas allotransplantasyonu tekniğini, yöntemin adım adım açıklanması ve güvencesiz ve hassas domuz viseral anatomisi ile başa çıkmak için cerrahi ipuçları ve püf noktalarına vurgu yaparak özetlemektedir.

Domuz Pankreas Nakli Yapmak için Cerrahi İpuçları ve Püf Noktaları

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Bu çalışma, fare pankreasındaki fonksiyonel birincil adacıqları ve asinar hücreleri verimli bir şekilde çıkaran basitleştirilmiş bir yöntem geliştirdi ve Akut Pankreatit Kaynaklı Diyabetin patogenezinde hücrelerarası iletişimi incelemek için değerli bir araç sağladı.

Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Bu protokol, Lewis sıçan pankreas adacıqlarının cerrahi hasamı, enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanlı arındırması için standartlaştırılmış bir yöntemi tanımlar; böylece doğrudan nakil veya in vitro çalışmalarda kullanılmak üzere yüksek verimli, yüksek saflıkta preparatlar sağlanır.

Lewis Farelerinden Pankreas Adacığı İzolyasyonu ve Arındırma, Enzimatik Sindirim ve Yoğunluk-Gradient Ayrımı Kullanılarak

Öğrenin, domuz pankreasını cerrahi perfüzyonla izole ederek yüksek verimli adacık elde etme yöntemini. Bu protokol, ksenotransplantasyon araştırmaları için güvenilir adacık izolasyonu sağlar.

Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu

Daha fazla video keşfet